外泌体MicroRNA在抗病毒免疫中的功能分析

外泌体是一种细胞外囊泡,内含有多种蛋白质和细胞调节因子,参与细胞间的信息传递并调控细胞的生长和生理过程。由于外泌体的功能差异性与分泌其细胞的类型和状态密切相关,因此在细胞水平的免疫研究中,外泌体可在一定程度上反映细胞的基因表达水平。病毒个体微小、结构简单,在感染宿主细胞,完成自身复制以及逃逸宿主免疫等过程中涉及到复杂的免疫调控网络,其中外泌体作为信息交流的新兴关注点,在这一免疫调控网络中的“使者”作用值得关注。MicroRNA在细胞间信息交流中也具有重要的调控作用,作为外泌体装载的货物,被选择性的分选到外泌体后,外泌体microRNA能够更加稳定的靶向调节生物功能,参与调控病毒免疫。本文介绍了外泌体的组成、发生机制以及内容物的成分,并以其中研究范围较广,研究内容较多的外泌体miRNA为出发点,重点阐述其在病毒免疫中的双重作用,通过了解外泌体miRNA在同种病毒或不同病毒中的调控作用,对进一步解析病毒入侵宿主的机理具有重要意义。

细胞焦亡分子机制及其调控

与基因相关的细胞死亡途径统称为细胞程序性死亡,细胞焦亡是一种新近发现的依赖炎性半胱天冬氨酸酶,并且伴随炎症反应的细胞程序性死亡方式。细胞焦亡的生物学特征、发生与调控机制都区别于其他细胞死亡方式。简要概述了细胞焦亡的研究历史,并从非编码RNA、细胞应激、受体蛋白和化学物质4个方面详细介绍了细胞焦亡的影响因素和调控机制,以期明确细胞焦亡在先天免疫中的角色。

水稻叶绿体表达体系的建立及抗PPT叶绿体转化植株的获得

【目的】建立外源基因在水稻叶绿体中的表达体系。【方法】通过分析已公布的水稻叶绿体基因组全序列及其基因分布特点,选择ndhF与trnL的基因间序列作为除草剂PPT抗性基因bar定点整合的位点。以水稻叶绿体基因组DNA为模板,采用PCR方法克隆了两个适于水稻叶绿体基因组遗传转化的同源片段,构建了含水稻叶绿体16S高效表达启动子、外源基因bar、psbA基因的3′序列(终止子)以及两个同源片段的水稻叶绿体特异表达载体pRB。【结果】采用基因枪法转化水稻品种中花10号幼穗诱导的愈伤组织,并再生植株,获得转化体后代种子。对转化植株进行的分子检测结果表明,外源基因bar可能被整合到水稻叶绿体基因组中。后代种子的遗传学分析显示,外源基因bar可正常表达并遗传。【结论】利用所建立的水稻叶绿体外源基因表达体系,外源基因bar既可在水稻叶绿体基因组中正常表达,还可作为转化体筛选时的除草剂抗性选择标记。

丙型肝炎病毒融合抗原基因NS3CE对番茄的遗传转化

丙型肝炎病毒是危害人类健康重要的病源之一 ,研制安全、经济、有效和易于推广使用的抗病毒疫苗是预防和控制 HCV的有效手段。本实验用 PCR方法克隆了 HCV中能够产生中和性抗体、具有很好免疫原性的非结构 N S3区基因片段及核心抗原 CE基因片段 ,并在两段基因之间加入连接肽 SPGS的密码子序列 ,构建成融合抗原基因 N S3- CE。将该融合基因连接到载体 p BI12 1上 ,构建植物表达载体 p BINS3CE。通过根癌农杆菌 EHA10 5介导获得转基因番茄。并进行了 PCR扩增、Southern杂交及 RT- PCR等分子检测 ,结果证明外源基因已整合到转基因番茄的基因组中 ,并在转录水平得到表达。

转基因植物基因工程疫苗

对转基因植物生产疫苗的方法进行了介绍 ,概括了转基因植物疫苗的主要优点和存在的问题 ,总结了 10年来转基因植物疫苗的研究进展 ,并对未来的发展方向进行了讨论。

叶绿体遗传转化研究中的选择标记

与核遗传转化相同,叶绿体遗传转化研究需要有合适的选择标记作为辅助手段。多种选择标记已经在叶绿体转化中得到应用,但由于叶绿体自身的结构与遗传特点,选择标记的选择与使用与核遗传转化明显不同,所以正确的选择合适的选择标记对于成功的叶绿体遗传转化是非常重要的。目前叶绿体转化中常用的选择标记大多为抗生素选择标记,对人类存在潜在的威胁,如何摆脱对抗生素选择标记的依赖是当前研究的热点。综述了国内外叶绿体转化研究中主要使用的选择标记,并着重介绍了非抗生素选择标记——甜菜碱醛脱氢酶和选择标记的删除体系。

RNA扩增的研究进展

RNA扩增是伴随着基因芯片技术的应用而发展起来的一项技术,但不仅仅应用于芯片杂交。文章对RNA扩增的技术方法进行了综述,重点介绍了mRNA的线性扩增、指数扩增以及两者相结合的扩增方法以及优缺点,对microRNA的扩增方法也作了介绍,并对将来的发展作了展望。

应用抗保幼激素SM-Ⅰ诱导二眠蚕生产超细纤度茧丝的试验初报

超细纤度茧丝可用于生产高档丝绸产品和特殊用途丝制品。将三眠蚕品种按常规的饲养方法饲养至2龄起蚕或3龄起蚕后添食不同浓度的抗保幼激素SM-Ⅰ,结果将三眠蚕品种的2龄起蚕或3龄起蚕全部诱导成为二眠蚕。二眠蚕的蚕茧可以缫制出平均纤度为0.7～0.9 dtex的极细蚕丝,最细纤度可达到0.4 dtex,蚕丝的横截面直径小于10μm。初步试验表明,用800 mg/L SM-Ⅰ的给药浓度连续添食2 d为最佳诱导二眠蚕的方法,其诱导率可达100%。

花生乐对花生的增产效果

花生乐对花生的增产效果李轶女封海胜张思苏谭翠英（山东省花生研究所，莱西２６６６０１）（莱阳农学院中心实验室）在肥水条件较好的花生高产田及气温较高、降雨量较多的年份和地区，往往引起花生徒长倒伏，造成减产。以往多采取叶面喷施Ｂ９、ＰＰ３３３等植物生长调...

水稻巯基蛋白酶抑制剂基因在烟草叶绿体中的表达

将水稻巯基蛋白酶抑制剂 (Oryzacystatin,OC) c DNA基因克隆、测序分析后 ,与烟草 (N icotiana tabacum L .)叶绿体 16 S r DNA基因启动子和 T393终止子构建表达盒 ,与抗壮观霉素选择标记基因 aad A表达盒相连 ,以烟草叶绿体基因组同源片段 rbc L和 ORF5 12一起构建成叶绿体转化载体 p ZOC。通过基因枪轰击烟草幼苗叶片 ,壮观霉素筛选 ,获得转化再生植株。经 Southern、 Western检测及子代遗传学分析实验证明 OC基因已整合到烟草叶绿体中 ,并且可以遵循非孟德尔的母性遗传规律稳定遗传给后代。

猪瘟病毒E2基因在百脉根叶绿体基因组中定点整合载体的构建

【目的】构建猪瘟病毒主要抗原E2基因在百脉根叶绿体基因组中定点转化载体,为百脉根叶绿体的转化及用叶绿体生产动物可直接食用疫苗奠定基础。【方法】通过用BLAST、DNAMAN等分子生物学分析软件对百脉根叶绿体基因组序列进行分析选定同源重组片段,采用PCR、分子克隆技术进行载体构建和鉴定。【结果】在百脉根叶绿体基因组中选择合适的外源基因整合位点,设计引物用PCR扩增叶绿体同源片段,将同源片段克隆后,构建百脉根特异的叶绿体转化载体;构建的百脉根叶绿体定点转化载体pAKE2以扩增的1.35kbpsbA和1.5kbtrnK两段相邻叶绿体DNA为定点整合外源基因的同源重组片段,包含以叶绿体基因特异强启动子Prrn和终止子TpsbA为调控序列的E2基因表达盒和aadA壮观霉素抗性基因表达盒。【结论】经PCR和酶切验证,所构建的转化载体符合预期设计。叶绿体转化及后续工作目前正在进行之中。

水稻叶绿体16S启动子克隆改造、载体构建及转化研究

利用PCR方法从水稻叶绿体基因组DNA中分离 1 6S启动子 ,并在其下游加入rbcL基因SD序列 ,以增强该启动子的翻译能力 ;序列分析表明 ,除加入的SD序列外 ,扩增片段与水稻 (Oryzasativa)叶绿体基因组DNA序列 1 6S启动子相应区域同源性为 1 0 0 %。将 1 6S启动子与bar基因和gfp基因的融合基因连接 ,以psbA基因的 3′序列为终止子 ,并以烟草叶绿体trnH_psbA和trnK为同源片段构建了烟草叶绿体表达载体pR1 6S。用基因枪转化烟草 ,转化植株经Southern、Northern检测及后代遗传学分析 ,发现1 6S启动子具有启动活性 。

Cu/Zn-SOD基因植物表达载体的构建及其在烟草中的表达

为研究Cu/Zn-SOD基因在提高转基因植物抗逆性方面的作用,从一株地热芽孢杆菌(Geobacillus)中克隆得到Cu/Zn-SOD基因,以pZP211质粒为表达载体,构建了植物表达载体pZP211-Cu/ZnSOD,并通过农杆菌介导对烟草进行遗传转化。经PCR检测证明已获得转Cu/Zn-SOD基因的烟草。进而测定转基因烟草的SOD活力,结果表明Cu/Zn-SOD基因在烟草中高效表达。对转基因烟草进行耐盐性检测,证明Cu/Zn-SOD基因确实能够提高烟草对盐胁迫的耐受性。

杆状病毒表达系统及其应用进展

杆状病毒是节肢动物门的专性寄生病毒,20世纪80年代被开发为表达载体以来,由于其真核表达环境等优点,受到了广泛的重视和研究,短短不到30年的时间里,杆状病毒表达体系的重组载体构建技术,筛选技术得到了很大程度的改进和简化,成为与大肠杆菌、酵母、哺乳动物相并列的四大表达体系之一。在表面展示,类病毒颗粒表达,哺乳动物基因转移,RNA干扰等方面取得了重要的成果。就杆状病毒表达系统的发展及其应用作一个综述。

来源于Pyrococcus furiosus的耐高温α-淀粉酶基因在衣藻叶绿体中的表达

来源于Pyrococcusfuriosus的耐高温α-淀粉酶是一种重要的酒精工业用酶,在植物中表达耐高温α-淀粉酶可以大大降低用植物秸秆生产酒精的成本。选择衣藻叶绿体基因组同源片段clpP-trnL-petB-chlL-rpl23-rpl2和壮观霉素抗性基因,构建了来源于Pyrococcusfuriosus的耐高温α-淀粉酶基因的衣藻叶绿体表达载体p64A。通过基因枪将其导入衣藻叶绿体中,经壮观霉素抗性(100mg/L)筛选,获得了9个抗性衣藻转化子。转化子经过抗性继代筛选后,经PCR、Southernblot检测分析及暗培养,证实耐高温α-淀粉酶基因已整合到衣藻叶绿体基因组中并得到表达。酶活性检测表明,转基因衣藻表达产物具有耐高温α-淀粉酶活性,每克鲜重衣藻最高达77.5u。实验结果证明在植物叶绿体中表达工业酶制剂是可行的。

解除花生连作障碍的对策研究Ⅲ．微生物调节剂的增产效果

３年盆栽试验表明，微生物调节剂是减轻或解除花生连作障碍的一项经济有效的对策，可以显著促进连作花生的植株生育，使连作花生的主要农艺性状达到或超过轮作花生，使连作花生的生物产量提高３３．０２％，荚果产量增产１９．８％～５５．４％，平均增产３２．２％。

叶绿体转化体系研究进展

叶绿体转化具有表达效率高,安全性高,遗传稳定,以及多基因可以同时转化等特点。真核或原核的外源基因都能在叶绿体中进行成功表达,至少有20种植物成功的进行了叶绿体转化。叶绿体作为生物反应器具有广阔的应用前景。

斜纹夜蛾核型多角体病毒基因ⅡORF13的克隆、表达与启动子活性分析

【目的】研究新发现的斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ株基因ORF13的结构与功能。【方法】根据SpltMNPV Ⅱ ORF13基因序列设计引物,经PCR扩增并克隆ORF13。在生物信息学分析基础上进行启动子活性分析和转录时相分析。构建ORF13片段的原核表达载体,表达并纯化融合蛋白后制备多克隆抗体。【结果】核苷酸序列分析表明,起始密码子上游-84bp处发现杆状病毒晚期启动子基序ATAAG,没有发现明显的早期启动子基序。启动子活性分析和转录时相分析证实,ORF13是一个早期和晚期都表达的基因,在病毒感染2 h就开始转录,18 h达到最高峰,24 h以后转录水平有所下降,但基本维持恒定。pET-28a-ORF13原核表达的融合蛋白经纯化后制备的多克隆抗体特异性高,效价可达1:3200以上。【结论】SpltMNPV Ⅱ ORF13是一个早期和晚期都表达的病毒组成型结构蛋白基因。ORF13编码的蛋白可能是一种BV的膜蛋白,与细胞跨膜转运有关,制备的多克隆抗体可用于深入研究该蛋白的生物学特性与功能。

解除花生连作障碍的对策研究

通过３年盆栽和小区试验，证明山东省花生研究所连作课题组研制的连作花生专用肥配方２可以显著减轻花生的连作障碍，使连作花生的生物产量增加１５．３３％～２７．０５％，平均增加２０．８５％，荚果产量增加１５．１７％～３１．７４％，平均增产２４．０３％。

解除花生连作障碍的对策研究I．模拟轮作的增产效果

采用盆栽试验，研究了小麦、水萝卜、油菜、菠菜等３科４种作物与连作花生实行模拟轮作对连作花生的影响。结果表明，小麦、水萝卜与连作花生模拟轮作，可以显著减轻或解除花生的连作障碍。小麦与连作花生模拟轮作，花生的生物产量和荚果产量较未处理的连作对照分别增产２３．９８％和２５．１０％，较轮作对照分别增产７．９％和１５．０％。