2012—2013年我国部分地区猪伪狂犬病流行病学调查

[目的]了解我国主要生猪养殖地区猪群中猪伪狂犬病毒感染情况。[方法]分别采用PCR和gEELISA检测方法,对2012-2013年采集/送检的1127份发病猪群组织样品、14801份猪血清样品进行了病原学、血清学检测。[结果]检出PRV野毒感染病原学样品98份,总体检出率8.69%,猪场的PCR检出率为22.49%;共检测14801份血清样品,野毒感染抗体阳性样品2388份,总体阳性率为16.13%,场的阳性率为44.02%。对检测数据进行分类统计,发现华东、华中等生猪主产区猪群中均存在不同程度的PRV野毒感染,感染率呈逐年上升趋势;分析不同日龄猪群的野毒感染抗体检测数据,发现种猪的感染率较高,其次是哺乳仔猪、育肥猪。[结论]猪伪狂犬病在我国主要生猪养殖地区仍不同程度存在,提示应进一步提升猪伪狂犬病的免疫预防水平,定期进行病原学、血清学检测,做好综合防治工作。

畜禽养殖业中磺胺类药物对农田土壤的影响及降解措施研究进展

磺胺类药物在畜禽养殖业被广泛使用,大部分以原型药物或代谢物的形式随尿液和粪便排到体外,并随着粪污加工成的肥料进入农田土壤中。磺胺类药物可在农田土壤中长期存在,发生迁移和转化,对土壤中的微生物、植物等造成影响。此外,土壤中残留的磺胺类药物增加了对细菌和耐药基因的选择压力,导致耐药性细菌和耐药基因的富集与扩散,威胁公共卫生安全。目前利用生物降解法、高级氧化工艺法、人工湿地法、生物电化学系统法和膜生物反应器法等可实现对畜禽粪污中磺胺类药物的有效降解。笔者简要概述了磺胺类药物对农田土壤环境造成的影响,以及粪污中磺胺类药物的降解方法研究进展,以期为今后畜禽粪污磺胺类药物降解提供理论依据。

猪圆环病毒2型抗体间接ELISA检测方法的建立

为了更加快速灵敏地检测血清中猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)抗体的水平,我们通过优化反应条件建立了快速检测猪圆环病毒2型抗体的间接ELISA方法。结果显示,本研究研制的试剂盒检测3份PCV2抗体阳性血清的阳性滴度为1∶12 800～1∶25 600,而韩国JBT PCV2试剂盒检测的阳性滴度为1∶3200～1∶6400;对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪口蹄疫病毒等10种其他病原体的20份阳性血清的检测结果均为阴性,表明本研究研制的试剂盒具有良好的特异性;批内重复性试验变异系数(C.V%)为2.26%～7.60%,批间重复试验的变异系数(C.V%)为1.67%～6.41%,变异系数均小于10%,呈现良好的可重复性。因此,我们成功建立了敏感性高、特异性强及重复性好的猪圆环病毒2型抗体间接ELISA检测方法。

鸡γ-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其抗病毒活性研究

将克隆的鸡γ-干扰素(Ch IFNγ)基因亚克隆至酵母表达载体p PICZα-A中,构建重组质粒p PIC-Ch IFNγ。将鉴定正确的质粒p PIC-Ch IFNγ线性化,通过电转化整合到毕赤酵母菌株X-33基因组中,得到阳性菌株。经1%甲醇连续诱导4 d,表达产物经SDS-PAGE检测,结果表明Ch IFNγ在酵母中获得了分泌型表达,表达产物分子量约为20 ku。表达产物粗提后以细胞病变抑制法检测其活性,效价为107.69U/m L;在鸡胚中能有效抑制H9N2亚型禽流感病毒的增殖;动物攻毒保护试验结果显示,表达的蛋白具有较好的抗病毒活性。

附红细胞体病研究进展

根据国内外文献及临床实践,综述了附红细胞体病的病原学、流行病学、发病机理、临床症状、病理变化、诊断和防治等方面研究现状,为今后的研究提供参考。

2012年—2015年我国部分地区禽偏肺病毒的分子流行病学分析

为了调查鸡群中禽偏肺病毒（aMPV）的流行情况,本研究从江苏、辽宁、河南、山东、河北等地有肿头症状的鸡群中取其鼻甲骨和鼻黏液进行RT-PCR检测,随机选取9株PCR阳性产物对其F基因进行序列测定与遗传进化分析。结果表明,280份病料中检出阳性样品142份,阳性检出率达50.7%;9个试验毒株之间F基因同源性为99.4%～100%,与B型aMPV代表株的同源性为97.7%～99.9%,而与A型、C型和D型aMPV代表株的同源性为71.9%～79.4%;由遗传进化树可见,这9株aMPV均属于B型分支。说明我国鸡群中目前存在aMPV感染,B型毒株是优势流行基因型,从而为禽偏肺病毒疫苗的开发提供了流行病学资料。

肉鸡呼肠孤病毒的分离鉴定及致病性研究

【目的】从临床发病的疑似感染鸡呼肠孤病毒的白羽肉鸡病料中分离鉴定获得1株鸡源呼肠孤病毒SD18,对SD18株进行致病性及传播特性研究,为该病毒的深入研究和综合防治奠定基础。【方法】无菌采集疑似感染鸡呼肠孤病毒发病鸡跗关节处的肌腱和渗出物,分离病原物,在LMH细胞上培养,并连续盲传3代,经无菌生理盐水倍比稀释,采用Reed-Muench法测定病毒鸡胚半数致死量(ELD 50)和组织细胞半数感染量(TCID 50);对分离毒株进行理化特性和血凝特性测定;利用设计的鸡呼肠孤病毒L1和S1基因特异性引物,对提取的病毒总RNA进行RT-PCR扩增,经PCR鉴定为阳性的菌落进行基因测序以及核苷酸同源性比对和系统遗传进化分析;用该分离株病毒对SPF鸡和白羽肉鸡进行动物回归试验,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定攻毒后的SPF鸡血清中呼肠孤病毒抗体滴度。【结果】从疑似感染鸡呼肠孤病毒发病鸡跗关节处的肌腱和渗出物中分离获得1株鸡源呼肠孤病毒SD18,其ELD 50为10-6.5/0.1 mL,TCID 50为10-7.36/0.1 mL。RT-PCR结果显示,目的基因片段长度分别为1100,750,265 bp,依次为鸡呼肠孤病毒的S1、σC和L1基因片段。核苷酸同源性比对结果显示,该分离株SD18与Ⅴ群鸡源呼肠孤病毒TW-918(台湾株)的S1基因序列同源性达92.7%,与Ⅰ群鸡病毒性关节炎疫苗S1133株的同源性仅为59.0%。核酸序列遗传进化分析表明,该分离株SD18与Ⅴ群鸡源呼肠孤病毒TW-918(台湾株)处于同一进化分支上,与Ⅰ群鸡源呼肠孤病毒S1133株处于不同的进化分支上,说明新分离的肉鸡呼肠孤病毒SD18株属于基因Ⅴ群,可能是Ⅰ群经典鸡源呼肠孤病毒S1133株的变异毒株。SPF鸡和白羽肉鸡回归试验表明,SD18株病毒能够引起鸡病毒性关节炎,与临床发病一致,并能水平传播。接种试验表明,病毒SD18能致死鸡胚,打开死亡鸡胚可见其绒毛尿囊膜增厚、尿酸盐沉积、胚体出血等症状,符合呼肠孤病毒的致病特点。【结论】该分离株SD18为新型肉鸡呼肠孤病毒,能够引起鸡发生病毒性关节炎。

猪细小病毒PCR检测方法的建立与应用

参考Gen Bank中发表的猪细小病毒(PPV)VP2基因序列,应用Primer5.0软件设计了一对引物,预期目的条带约591 bp。对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了试验,建立了PPV的PCR检测方法。符合性实验结果表明,该PCR方法优于HA、VI以及IHA。使用该方法对215份病料进行了检测,检出阳性样品25份,检出率为11.63%。结果表明,该方法可用于PPV的诊断及流行病学监测。

2012—2018年山东省部分地区猪瘟分子流行病学研究

为了解山东省不同地区猪群中猪瘟病毒(CSFV)分子流行病学特点,采用RT-PCR方法,对2012—2018年收集到的79份临床疑似猪瘟病例组织样品,进行E2基因主要抗原区域扩增与序列测定,对获取的59个CSFVE2基因主要抗原区域序列进行遗传演化分析,并构建了遗传发育进化树。结果显示:7株CSFV属1.1亚型,其中有3个毒株的E2基因与疫苗株E2基因几乎一致,提示这7个毒株可能来自疫苗毒或为类疫苗毒株;SDJZ-15株归属2.1b亚型,其E2基因推导氨基酸仅A51(丙氨酸)突变为V51(缬氨酸);其他51个毒株属2.1d亚型,与2型CSFV的E2基因主要抗原区(28~90aa)氨基酸序列相比发生了4处突变,总体保持稳定。研究结果表明,2.1亚群中的2.1d分支CSFV是山东省当前的优势流行毒株。

五株鸡传染性支气管炎病毒流行株的分离鉴定

2012年1月-2014年8月,从全国多地出现传染性支气管炎发病养鸡场(户)中采集病(死)鸡气管、肾脏和腺胃进行流行病学调查。根据各地分离株与YB160株S1基因分子进化树分析,筛选出5个代表性的毒株,在SPF鸡胚中传至第5代,分别进行毒价测定、无菌检验及对SPF鸡的致病力研究。结果,所筛选出的5个流行株在SPF鸡胚传至第5代时,毒价均大于或等于106.1EID50/0.1 m L,菌检阴性,人工感染试验接种1日龄SPF鸡,可引起试验鸡出现典型传染性支气管炎症状。

山东省青岛市猫病毒性鼻气管炎流行情况调查

为了解山东省青岛市猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)的流行情况,2019年6月至2021年6月共采集猫眼鼻拭子样本218份,提取样本DNA后利用PCR方法进行FHV-1核酸检测,共检出阳性样本22份,阳性率为10.1%(22/218)。宠物救助站猫的FHV-1阳性率(16.7%)略高于其他来源猫,2~6月龄幼猫的FHV-1阳性率(13.6%)略高于成年猫(7.0%),成年公猫阳性率(7.3%)稍高于成年母猫(6.7%),但各组间均无显著性差异(P>0.05)。对2021年3月采集的60份猫血清进行了FHV-1中和抗体检测,共检出阳性样本40份,抗体阳性率为66.7%。结果表明,青岛市猫群中存在一定的FHV-1流行,抗体保护水平不高,应加快国产FHV-1相关疫苗的研制,及时对猫进行免疫预防。

小电流接地系统单相接地故障点查找方法

1问题的提出 中压（6kV～35kV）电力系统通常采用小电流接地系统（非有效接地系统）运行方式，即系统的中性点采用不接地或经消弧接地的方式运行。它的优点是在系统发生单相接地后可运行2h，从而提高供电可靠性；但在人口密集地区（如华东地区），电力线路断线接地故障或其他设备绝缘故障可能导致故障点周围人员伤亡事故。

鸡新城疫疫苗研究及应用概况

介绍了鸡新城疫病的流行情况及疫苗的应用现状,概述了灭活疫苗、活疫苗及基因工程苗等主要的鸡新城疫疫苗研究及应用现状,旨为鸡新城疫疫苗的研制和应用提供一定的参考依据。

鸭肝炎病毒的分离与鉴定

1999-2008年从山东、河南、浙江、江苏、广西、山西、江西、广东、福建和辽宁等地有典型鸭病毒性肝炎症状的病死雏鸭中共分离得到22株病毒。用鸭肝炎病毒（DHV）Ⅰ型（DHV-1）抗血清和新型DHV （N-DHV）抗血清对分离的22株病毒进行血清中和试验；对22株病毒的抗原相关VP1基因进行RT-PCR扩增和测序，然后对VP1基因的核苷酸与推导的氨基酸序列进行分析。结果表明，目前我国存在DHV-1和N-DHV两种血清型。其中分离到的12株为DHV-1，10株为N-DHV。依据VP1基因序列同源性进行的血清型分型结果与根据抗原性鉴定进行的血清型分型结果一致。12株DHV-1的氨基酸序列同源性为95%左右，10株N-DHV的氨基酸同源性为98%左右；DHV-1分离株与N-DHV分离株间氨基酸同源性为72%-77%。同血清型病毒株间的VP1基因变异很小，表明DHV的抗原性稳定。

鸡α干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其抗病毒活性的测定

将克隆的鸡α干扰素(ChIFNα)基因亚克隆至酵母表达载体pPICZα-A中,构建重组质粒pPIC-ChIFNα,线性化后电转化整合到毕赤酵母菌株X-33基因组中,得到阳性菌株。经1%甲醇连续诱导4 d,SDS-PAGE检测结果表明鸡α干扰素在酵母中获得了分泌型表达,表达产物分子质量约为18 ku。细胞病变抑制法检测其效价为1×10^(7.69)U/mL;在鸡胚中能有效抑制禽流感病毒H9N2的增殖。针对Ⅰ群4型禽腺病毒YBAV-4株强毒的动物攻毒保护试验结果显示,表达的蛋白具有较好的抗病毒活性。