医务人员艾滋病职业暴露防护现状的调查分析及对策

目的了解北京市某医院医务人员艾滋病职业暴露防护及防护意识现状。方法采用问卷调查法,向31个临床/医技科室发放"医务人员艾滋病职业暴露防护状况调查问卷",于次日收回,对有效问卷进行分析。结果医务人员中有48.92%的人知晓艾滋病窗口期持续时间,87.29%的人知晓窗口期具有传染性,51.10%的人在工作中没有达到普遍性防护原则的标准。在接触血液及体液时需要戴手套的问题中,检验员佩戴手套的比例最高,达93.17%。在脱掉手套后进行手部消毒,检验员执行比例最高,达87.5%。这两项均显著高于医生、护士的执行比例,差异有显著意义(P<0.05)。对污染的针头回套针帽,比例最高的是医生,占52.18%,其次为护士,占42.61%。有38.67%的工作人员知晓发生职业暴露后进行上报,其中检验科知晓率最高,达93%。结论医务人员普遍性防护原则意识偏低,临床操作中存在不良习惯性操作,职业暴露后上报意识淡薄。应针对医务人员职业暴露薄弱环节等进行指导。

143例首诊发现的中国艾滋病患者临床特征分析

目的分析人类免疫缺陷病毒(HIV)感染及获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者的临床特征,提高HIV/AIDS患者的早期诊断水平。方法回顾性分析了1988年1月～2006年4月在我院首诊发现并有完整病史资料的143例HIV/AIDS患者的临床资料。结果143例患者中,57例无临床症状,经常规检查发现;86例有临床症状,全身症状中发热50例、消瘦18例,系统症状中呼吸系统34例、皮肤黏膜17例、消化系统16例。合并的常见机会感染包括卡氏肺孢子菌肺炎(PCP)27例(34.2%),口腔念珠菌感染16例(20.2%),结核感染15例(19.0%),巨细胞病毒(CMV)感染9例(11.4%)。所有患者多种机会感染均发生在CD4+T淋巴细胞计数小于200/mm3时,而合并CMV感染及隐球菌脑膜炎时该计数多小于100/mm3。血浆病毒载量与CD4+T淋巴细胞计数呈负相关(r=-0.420,P=0.001)。结论HIV/AIDS患者全身症状以发热、气短、消瘦最为明显。机会感染多侵及呼吸系统、皮肤黏膜、消化系统,并以PCP最常见。真菌是引起机会感染最多的病原。机会感染的发生与CD4+T淋巴细胞计数有一定相关性。

APA-BCC微胶囊蛛网膜下植入对癌痛病人的镇痛效应

目的:观察脊髓蛛网膜下腔植入APA-BCC镇痛微胶囊对癌痛病人的镇痛效应及不良反应.方法 :将不同剂量的海藻酸钙-聚赖氨酸-海藻酸钙微胶囊包裹的牛肾上腺嗜铬细胞(APA-BCC微胶囊)按常规腰穿的方法注入100例中、重度癌痛患者的腰段脊髓蛛网膜下腔内.按数字分级法(NRS)评定疼痛程度的变化并记录止痛药使用情况;按WHO分级法评价不良反应;按孙燕等指标评价生活质量.结果: (1)APA-BCC注射后0.5～5天,在停用、减量和/或降级使用其它镇痛药的情况下,其镇痛的有效率(CR+PR)为84%、总有效率(CR+PR+MR)为96%,镇痛程度显著优于药物组.(2)1至2次使用后镇痛持续时间为9～220天,明显长于现有镇痛药.(3)APA-BCC治疗后,癌痛病人的生活质量及满意度显著提高.(4)APA-BCC注射后,除部分病人出现与常规蛛网膜下腔注射相近的轻度不良反应外,未观察到严重不良反应,患者的心率、血压、呼吸、肝肾功能、外周血象和免疫功能无明显变化.但单次使用1.5剂量时,2例患者出现了难以耐受的下肢震颤和背部沉重压迫感等重度不良反应.结论: APA-BCC微胶囊植入脑脊液内对癌痛病人具有明确的长效镇痛作用.

APA微囊对免疫细胞和细胞因子隔离效应的研究

测定海藻酸钠 多聚赖氨酸 海藻酸钠 (APA)微囊对免疫细胞和细胞因子的隔离效应。方法 :将NK细胞和IL 2、TNF α的活性测定方法用于微囊免疫隔离效果的评价。结果 :NK细胞对微囊化K5 6 2靶细胞的细胞毒实验表明 ,微囊可有效地保护囊内细胞不受NK细胞的杀伤作用 ;IL 2 (15 .4kD)和TNF α (5 1kD)可通过微囊膜进入囊内 ,并分别支持囊内IL 2依赖细胞的生存以及对微囊内的L92 9靶细胞发挥杀伤作用。结论 :APA微囊可有效地隔离细胞免疫排斥反应 ,但某些细胞因子可通过微囊膜 ,成为影响微囊化细胞在宿主体内生存的可能因素。

有效抑制HIV复制下AIDS患者CD4+T淋巴细胞的动态变化

目的研究强效抗逆转录病毒治疗（HAART）持续有效抑制HIV复制下AIDS患者的T淋巴细胞免疫动态变化。方法45例AIDs患者予以2年以上HAART治疗，在治疗前（D0），治疗第3、6、12、18和24个月（M3、M6、M12、M18和M24）时用bDNA病毒定量检测仪检测血浆病毒载量，流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群，分析CD4＋、CD8＋ T淋巴细胞及其相关亚群的动态变化。结果45例患者中有24例（53．3％）在治疗6个月后血浆病毒载量持续低于500copies／ml，按M24时（与D0相比）CD4＋T淋巴细胞计数的增量分为A组（〈100／mm^3）、B组（100—200／mm^3）和C组（〉200／mm^3）。与D0时相比，所有患者M3、M6、M12、M18和M24时的CD4＋T淋巴细胞计数、CD4＋纯真细胞计数和CD4＋CD28＋亚群的比例均有不同程度升高，CD8＋CD38＋激活亚群的比例则下降。3组相比，C组变化最显著，其D0时血浆病毒载量最高而CD4＋T淋巴细胞计数最低，经过24个月治疗后，不仅CD4＋T淋巴细胞数量增加最明显，CD4＋纯真细胞数量和CD4＋CD28＋功能亚群比例的增加也明显高于A组和B组（P〈0．05）。结论HAART能有效地重建AIDS患者的T淋巴细胞免疫。CD4＋CD28＋和Naive CD4＋亚群的不同动态变化可能对CD4＋T淋巴细胞数量和功能上的恢复有重要作用。

大规模猪肝细胞低温保存方法的建立

目的 建立大规模猪肝细胞的低温保存方法以满足生物型人工肝治疗的需要。方法 用酶法从中国实验用小型猪肝脏分离出猪肝细胞 ;加入本实验室配制的含有 10 %二甲基亚砜 (dimethylsulfoxide,DMSO)的营养液中 ;分别采用两种降温方法使 (12 )× 10 10 猪肝细胞保存在 - 196℃液氮中 ;1个月后复温 ,观察在同一条件下培养不同时间后猪肝细胞形态、存活率和白蛋白、尿素、葡萄糖合成功能及对利多卡因的转化功能。结果 用两种降温方法保存的肝细胞 ,复温后细胞的存活率均较高 (梯度降温组和程控降温组存活率分别较冻存前降低了 4 7%和 8 6 %) ,其中前者肝细胞的尿素、葡萄糖合成功能较后者高。结论 所建立的冻存方法简单易行 ,可保存大量的猪肝细胞。

T细胞第二信号受体-CD28分子在HIV/AIDS患者中的异常改变

目的研究T细胞第二信号受体-CD28分子在人类免疫缺陷病毒(HIV)感染/获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者中的异常改变,探讨其临床意义。方法采用流式细胞术检测HIV/AIDS患者外周血CD4+T细胞表面CD28分子的表达,对278例未接受过高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的患者进行横断面研究,对其中59例接受规律HAART的患者于开始治疗前,治疗后第1、3、6、9、12月末进行随访。以56例健康献血员作为正常对照。结果HIV/AIDS患者外周血CD4+T细胞表面CD28分子表达显著下调(P<0.001),且CD28分子表达比例与其CD4+T细胞计数呈正相关(r=0.484,P<0.001),与血浆病毒载量呈负相关(r=-0.300,P<0.001)。给予HAART1个月后CD4+T细胞的CD28表达比例中位数由75%快速恢复至90%(P<0.001)。HAART期间6个时间点的CD28表达比例中位数与病毒载量中位数呈负相关(r=-0.829,P=0.042),与CD4+T细胞计数中位数之间未发现显著相关性。结论HIV/AIDS患者外周血CD4+T细胞表面CD28分子表达明显减少,HAART可有效重建CD4+T细胞功能亚群(CD4+CD28+T)的数量,HAART后CD28表达上调可能与病毒载量的控制密切相关。

TECA生物型人工肝支持系统替代衰竭肝脏功能机制的实验研究

分析中国实验用小型猪肝细胞型生物人工肝支持系统 (BALSS)替代衰竭肝功能的可能机制。使少肝急性肝衰 (ALF)犬血液或 16 40培养液循环流经BALSS中空纤维管的内腔 ,与培养于中空纤维管外腔中的猪肝细胞营养液进行物质交换。测定 16 40液中利多卡因浓度、白蛋白和尿素浓度的变化 ;用蛋白电泳法测定 16 40液和猪肝细胞营养液中蛋白成分的变化 ;用透射电镜观察治疗ALF犬时BALSS中猪肝细胞超微结构的变化。结果显示BALSS循环 6h时 ,16 40液中利多卡因浓度明显降低 ;白蛋白和尿素浓度明显升高 ;分子量小于 10 0kD的蛋白质成分明显增多。BALSS治疗ALF犬 6h时 ,猪肝细胞的超微结构出现明显的损伤。提示此型BALSS的猪肝细胞通过透析膜可较好地发挥肝细胞的生物转化及合成代谢等功能 ,以此达到暂时替代衰竭肝脏功能的效应。

培养微囊化牛肾上腺嗜铬细胞分泌镇痛物质能力的实验研究

目的:了解培养的海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(BCCs)的儿茶酚胺(CA)和亮氨酸脑啡肽(L-EK)的分泌状态。方法:在非囊化BCCs与囊化BCCs(APA-BCCs)的孵育液中加或不加尼古丁,用高效液相色谱-电化学法检测孵育液中去甲肾上腺素和肾上腺素的含量、用放射免疫法检测孵育液中L-EK的含量。结果:培养1,3,5,7,9和11d时,在非刺激条件下,APA-BCCs与BCCs均能稳定地分泌CA和L-EK;尼古丁刺激时可显著增加BCCs和APA-BCCs分泌CA和L-EK的水平(P<0.05);APA-BCCs与BCCs的基础及刺激分泌水平差异无显著性意义。结论:体外培养的BCCs及APA微囊化BCCs均具有儿茶酚胺类和脑啡肽类的基础及刺激分泌功能。

APA微囊移植免疫隔离效果的研究

目的 :探讨海藻酸钠 多聚赖氨酸 海藻酸钠 (APA)微囊在宿主体内的免疫隔离作用。方法 :分别将APA空微囊、牛嗜铬细胞 (BCCs)和APA微囊化BCCs(APA BCCs)移植到绵羊的蛛网膜下腔中 ,观察宿主细胞免疫指标和组织形态学的变化。结果 :各组移植后血中淋巴细胞数量无明显变化 ;APA微囊包裹可明显阻止BCCs移植引起的血中CD4 + T淋巴细胞比例、CD4 + CD8+ 值和脑脊液中淋巴细胞数量的增加 ;APA微囊包裹可减轻羊移植区组织反应 ,延长移植物的存活。结论 :APA微囊具有免疫隔离效果 ,可有效地阻止细胞免疫排斥反应。

APA-BCC镇痛微囊在癌痛患者脑脊液中的生物学变化

了解海藻酸钙多聚赖氨酸海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(APABCC微囊)植入癌痛患者脑脊液中的形态、活率及亮氨酸脑啡肽(LEK)分泌的变化。将APABCC微囊按常规腰穿方法植入癌痛患者蛛网膜下腔。7或8天时采取脑脊液,观察APABCC的形态、细胞活率,用放射免疫法测定脑脊液中LEK的含量。移植7天后,患者视觉模拟疼痛评分(VAS)均值由移植前的8.8降为2.4;脑脊液中APABCC微囊形态无明显变化;细胞活率由平均91.2%降为89.1%;LEK含量较移植前增加了1.65倍。将APABCC微囊植入癌痛病人脑脊液中能够保持细胞存活、分泌亮啡肽,并产生镇痛效应。

冷冻猪肝细胞在生物型人工肝系统中的生存状态研究

目的 研究冷冻复温后猪肝细胞在生物型人工肝支持系统(BALSS)中的生存状态。方法 用酶法从中国实验用小型猪肝脏分离出猪肝细胞;将1×10 1 0 猪肝细胞冷冻保存在-196℃液氮中;1个月后复温,将等量的冷冻和新鲜猪肝细胞分别培养在BALSS中,比较其形态、存活率和白蛋白、尿素、葡萄糖合成功能及对利多卡因的转化功能。结果 冷冻保存的猪肝细胞,复温后其存活率较高;在培养于BALSS时其生化功能、利多卡因转化功能及超微结构与新鲜肝细胞类似。结论 用该冻存方法保存的猪肝细胞可试用于BALSS系统。

APA-3T3细胞微囊的深低温保存

目的:通过优选冻存液的成份和浓度,建立低温保存APA微囊化小鼠成纤维细胞(3T3细胞)的方法。方法:用海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊(APA)包裹3T3细胞制成APA-3T3细胞微囊。以高糖DMEM培养液为基础冻存液,分别加入不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)或牛血清白蛋白(BSA)。分别将不同的冻存液加入APA-3T3中。按程序控制降温梯度,置于液氮中保存。快速复温后,光镜下观察APA-3T3的形态、细胞活率及膜通透性。结果:①10%DMSO组的微囊内细胞活率降低最少,细胞活率达(75.68±1.54)%,P<0.01。微囊完好率达到(94.48±0.90)%,P<0.01。②与其它组相比,4%BSA组的微囊内细胞活率降低程度最小,活率达(73±1.26)%,P<0.01。微囊完好率最高,为(85.1±0.82)%,P<0.01。③加入不同成份和浓度的冻存液对微囊的通透性没有明显影响。结论:在冻存液中加入10%DMSO和4%BSA,可在低温保存的过程中较好地保护细胞的存活及微囊的完整性。

骨形态发生蛋白4对胎鼠脑神经元胆碱能表达上调的效应

目的观察了骨形态发生蛋白4(BMP4)对原代分离培养的大鼠脑海马和大脑皮质的神经元胆碱能表达的调节效应。方法将从胎龄2周内大鼠脑海马和大脑皮质分离的细胞培养于含AraC的DMEM/F12培养液中,在光镜下观察细胞的形态特征,并行微管相关蛋白(MAP2)细胞化学染色鉴定。AraC作用96h后,改换成含有BMP4的培养液,继续培养10天,行胆碱乙酰转移酶(ChAT)免疫细胞化学染色和流式细胞术检测。结果从胎龄大鼠海马和大脑皮质分离出的细胞具有典型神经元形态学特征和免疫学标志;加入BMP4组的ChAT阳性细胞比率显著高于未加BMP4的对照组(13.3%±1.37%,6.44%±0.81%,P<0.01)。流式细胞术也测得BMP4组的ChAT阳性细胞比率高于未加BMP4的对照组(11.48%、4.92%)。结论BMP4可体外上调胎鼠海马及大脑皮质神经元的胆碱能表达。

微囊化大鼠胰岛细胞移植治疗糖尿病小鼠的实验研究

观察微囊化和未囊化大鼠胰岛细胞移植治疗糖尿病小鼠的疗效。选用SD大鼠经胆总管原位灌注胶原酶液，分离消化胰腺组织，用淋巴细胞分离液（Histopaque-1077）纯化胰岛细胞，将微囊化和未囊化大鼠胰岛细胞移植于糖尿病小鼠腹腔。分离的胰岛细胞对刺激反应良好，微囊化和未囊化胰岛细胞移植后均可纠正糖尿病小鼠的高血糖状态，但未囊化胰岛细胞移植组只能维持血糖正常2～3d，而微囊化胰岛细胞移植组可持续降低血糖30d以上。微囊化胰岛细胞移植治疗糖尿病小鼠具有良好的效果，微囊具有较好的免疫隔离作用。

TECA型组合型人工肝系统治疗肝功能衰竭患者的初步临床观察

目的 :观察TECA型组合型人工肝支持系统 (HALSS)治疗急性肝功能衰竭 (ALF)患者的有效性和安全性。方法 :分离中国实验用小型猪肝细胞并培养于BALSS的生物反应器中。患者的血浆先经碳吸附或血浆置换后 ,循环流经BALSS的中空纤维管。每次治疗持续 6～ 7h。观察治疗前、后患者生理和血液生化指标的变化。结果 :从每只小型猪的肝脏平均可得到 (1.0～ 3.0 )× 10 10 个猪肝细胞 ,存活率 >85 %。TECA -HALSS治疗结束后 ,患者的血NH3、ALT、AST、TB、DB等水平明显降低 ;PTA水平升高 ;患者的神志由嗜睡或昏迷转为清醒。治疗中患者生命体征平稳、血电解质水平无明显改变。结论 :TECA -HALSS是一种能迅速、安全。

长期体外培养条件下海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞的变化

目的:了解在体外长期培养的条件下,海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞的形态及其细胞活率的变化。方法:实验于2003-09/2004-05在解放军总医院老年医学研究所细胞生物学室完成。①材料:细胞为牛肾上腺嗜铬细胞;海藻酸钠和多聚赖氨酸由SIGMA公司提供;DMEM-H培养液由GIBCO公司提供;加强型小牛血清由HYCLONE公司提供。②方法:用海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微胶囊包裹牛肾上腺嗜铬细胞,以含有体积分数为0.1的小牛血清的DMEM-H培养基培养于CO2孵箱中,定期换液。③观察指标:在光学显微镜下观察微囊及囊内细胞的形态;以锥虫蓝染色法计数囊内细胞的数量和存活率,观察时间为8个月以上。结果:①微囊包裹后1d时,光镜下见微囊呈圆形,囊膜完整,表面光滑;囊内为单个细胞,均匀散在分布。体外培养35d时,微囊仍呈圆形,囊膜完整,表面光滑;囊内细胞聚集成体积较小的团块。体外培养240d时,微囊形态无明显变化;囊内大部分细胞已聚集成多个体积较大的团块,少数微囊内的细胞聚集成一个大的细胞团。②随着培养时间的延长,囊内细胞数量逐渐减少,从最初的(54±10)个/囊减少到培养243d时的(35±7)个/囊,但差异无显著性意义(P>0.05);囊内细胞的活率无明显改变,开始为95%,到培养243d时仍有93%的细胞存活。结论:在体外培养条件下,海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞可较长时间地保持良好状态。

APA微胶囊免疫隔离生物膜制备中的质量控制

为了优化制备条件, 简化工艺, 控制质量, 本文观测了APA(海藻酸盐 聚赖氨酸 海藻酸盐)微胶囊免疫隔离生物膜制备过程中部分物理因素和化学因素与质量的关系。结果表明: 微囊的粒径与静电微囊发生仪脉冲频率呈负相关; 与推进泵速度呈正相关; 与针头内径呈正相关。随着聚赖氨酸浓度的增加, 膜厚度显著增加。微囊的粒径不随聚赖氨酸成膜反应时间延长而改变, 但影响膜的厚度。柠檬酸钠的液化时间对微囊的粒径与厚度均无明显影响。通过优化制备条件, APA微胶囊免疫隔离生物膜将具有更好的通透性、柔韧性、生物相容性和强度。

APA微囊免疫隔离效应的体外测定

目的 :在体外了解海藻酸钙 多聚赖氨酸 海藻酸钙微胶囊 (APA)的免疫隔离效应。方法 :用下列方法测定APA微囊的免疫隔离效应 ,用激光共聚焦显微镜测定荧光素标记的IgG微囊膜的扩散 ;NK细胞对裸露或微囊化K5 6 2细胞的杀伤作用 ;BCCs刺激小鼠脾淋巴细胞增殖的保护效应 ;IL 2及TNF α对共培养的细胞或微囊化细胞的杀伤作用。结果 :微囊具有阻断IgG免疫球蛋白扩散作用 ;并且有效地保护囊内K5 6 2细胞不受NK细胞的杀伤 ;防止BCCs刺激小鼠脾淋巴细胞增殖反应 ;IL 2TNF α均可通过APA微囊膜 ,支持IL 2依赖细胞CTLL 2的生存 ;及对囊内的L92 9靶细胞产生杀伤作用。结论