脑源性神经营养因子在牦牛与黄牛端脑不同区域的表达与分布

目的探讨高原牦牛与平原黄牛端脑中脑源性神经营养因子(BDNF)表达与分布,探讨BDNF功能发挥与高原低氧适应性之间的关联。方法选取牦牛和黄牛各5只,应用Real-time PCR、Western blotting及免疫组织化学技术对BDNF在牦牛和黄牛端脑的额叶、颞叶、顶叶、枕叶、大脑白质以及海马中的含量与分布进行了定量与定性分析。结果Real-time PCR结果表明,在牦牛与黄牛端脑中,BDNF mRNA均在颞叶皮质中的表达量最高,海马次之,其后依序为顶叶皮质,枕叶皮质和额叶皮质,在大脑白质中的表达量最低。Western blotting结果表明,BDNF蛋白在牦牛颞叶皮质中含量最高,海马次之,其他组织含量由高到低依次为顶叶皮质、额叶皮质、大脑白质,枕叶皮质中含量最低。BDNF蛋白在黄牛端脑颞叶皮质中含量最高,海马次之,其余组织含量由高及低依次为顶叶皮质、枕叶皮质、额叶皮质,大脑白质中蛋白含量最低。免疫组织化学结果表明,BDNF蛋白在牦牛和黄牛端脑中的阳性表达情况基本相似,主要分布在额叶皮质、颞叶皮质、顶叶皮质、枕叶皮质的颗粒细胞和神经胶质细胞,大脑白质的神经胶质细胞以及海马的锥体细胞层和多形细胞层,在端脑皮质区的马丁诺提细胞和海马的分子细胞层中有少量分布。结论BDNF mRNA和蛋白在牦牛和黄牛端脑不同区域中均有表达,但表达量存在差异,推测与端脑不同分区的特定功能密切相关。牦牛端脑中的表达水平除枕叶皮质外,均高于黄牛,推测与其生存的高原低氧环境有关,BDNF在动物机体适应低氧环境过程中可能发挥着增强低氧耐受性和保护机体内环境稳态等重要功能。

牦牛小脑不同区域神经营养素-4及其受体的表达特征与定位研究

神经营养素-4(NT-4)及其神经营养性酪氨酸激酶受体2(NTRK2)在小脑神经元存活、生长以及功能方面发挥着重要作用。为探讨NT-4和NTRK2在牦牛高原低氧适应中的作用,本研究以高原牦牛(Bos grunniens)和平原黄牛(Bos taurus)小脑为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹技术(WB)、苏木精-伊红染色(HE)和免疫组织化学(IHC)对NT-4和NTRK2在牦牛与黄牛小脑不同区域中的表达分布进行分析。qRT-PCR和WB结果表明,NT-4基因和蛋白在牦牛小脑半球皮质中表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05);NTRK2基因和蛋白在牦牛小脑蚓部皮质中表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05)。与黄牛相比,牦牛NT-4蛋白在小脑各区域中的表达均显著高于黄牛(P<0.05);牦牛NTRK2蛋白在蚓部髓质和小脑半球髓质中的表达量低于黄牛或无差异,其余区域均显著高于黄牛(P<0.05)。IHC结果显示,NT-4和NTRK2蛋白阳性表达特征基本一致,皮质区主要分布于分子层的篮状细胞、浦肯野细胞层以及颗粒细胞层,而髓质区则散在分布于神经胶质细胞以及神经纤维中。由上述结果可知,NT-4和NTRK2在小脑各区域的表达差异可能与其参与脑组织生理功能以及适应高原低氧环境有关。在低氧环境下,NT-4和NTRK2通过上调激活相关通路以发挥内源性神经保护作用,进而保护脑组织免受低氧损伤。本研究结果可为探究牦牛脑组织低氧适应机制提供基础。

神经生长因子及其受体在高原牦牛与平原黄牛端脑中的比较分析

为探究神经生长因子(NGF)及其高亲和力受体酪氨酸蛋白激酶A(TrkA)在高原牦牛(Bos grunniens)与平原黄牛(Bos taurus)端脑组织中表达与分布的差异,本研究采集不同海拔地区的成年牦牛与黄牛端脑不同组织(n=5),利用免疫组织化学技术(IHC)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)以及蛋白免疫印迹技术(WB)对NGF和TrkA在牦牛与黄牛端脑各区中的定位特征及表达水平进行比较。IHC结果显示,两种因子在牦牛与黄牛端脑各区中的分布与定位特征基本一致,主要在神经元胞质、神经胶质细胞及血管内壁中表达,其蛋白免疫阳性反应强度整体表现为牦牛高于黄牛。qRT-PCR结果显示,牦牛的NGF基因表达量在额叶皮质、大脑白质及枕叶皮质中低于黄牛或无差异,在其余区域中显著高于黄牛(P<0.05);TrkA基因表达量仅在大脑白质中与黄牛无显著差异,其余区域中显著高于黄牛(P<0.05)。WB结果显示,牦牛的NGF蛋白表达量仅在大脑白质中低于黄牛,其余区域均显著高于黄牛(P<0.05);牦牛的TrkA蛋白表达量在额叶皮质、大脑白质及枕叶皮质中低于黄牛或无差异,其余区域中显著高于黄牛(P<0.05)。综上,两种因子在牦牛端脑部分组织表达上调可能与低氧刺激有关,推测二者在低氧条件下协同发挥内源性神经保护作用,以维持动物机体正常的生理活动。本研究结果为进一步探究NGF和TrkA在牦牛低氧适应性方面发挥作用提供了理论依据。

四川泡菜中降解亚硝酸盐乳酸菌的筛选鉴定及其应用

从四川传统泡菜中分离疑似乳酸菌170株,通过溶钙力测定获得33株产酸力较强的菌株,然后对其进行亚硝酸盐降解力初筛试验,得到5株具有较强降解亚硝酸盐能力的菌株,再采用控制pH值的方法从中筛选出1株酶降解亚硝酸盐作用明显的菌株N2,该菌株按0.1%(v/v)接种量接种于含125 mg/L NaNO2、pH 6.4和添加有2%CaCO3(w/v)的MRS培养基中,于30℃、120 r/min振荡培养72 h,对NaNO2的降解率达90.81%。菌株N2经形态学、生理生化特征及16S rDNA序列分析被鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。接种菌株N2发酵泡菜,测定发酵过程中泡菜pH值、亚硝酸盐含量,与自然发酵泡菜比较,菌株N2应用于发酵泡菜中降解亚硝酸盐的效果显著。

植物乳杆菌纯种半固态发酵泡菜工艺条件的研究

对产细菌素植物乳杆菌P158纯种半固态发酵泡菜工艺条件进行了研究。采用正交试验设计,并应用模糊数学综合评判法进行感官评价,确定泡菜产品的最佳工艺参数。结果表明,产细菌素植物乳杆菌纯种半固态发酵泡菜的最佳工艺参数为:盐4%、糖3%、接种量0.1%、发酵温度34℃。在该工艺条件下,制备的泡菜产品口味纯正,品质良好,为泡菜发酵生产探索了一条新路。

辣椒优良自交系间遗传差异的分子分析

作物自交系间遗传差异的分析与评价是杂种优势育种和杂交育种成功的基础。鲜食尖椒类(Capsicum an-nuumvar.longum)品种是我国辣椒生产的主要品种类型之一。针对我国鲜食尖椒的育种目标,以国内外10份尖椒优良自交系为材料,利用相关序列扩增多态性(SRAP)和简单序列重复(SSR)标记技术对其进行了遗传差异分析。结果显示:SRAP技术具有较高的位点和多态性检测能力,平均每次检测的位点数和多态性位点数分别为34个和10个,是SSR的10倍和5倍;辣椒自交系间基于SRAP标记的遗传距离和基于SSR标记的遗传距离之间的相关程度较低(r=0.144);基于SRAP标记和SSR标记联合数据计算的遗传距离,10个尖椒自交系被分为3大类,这种分类结果与辣椒杂种优势育种实践相一致。本研究结果表明,SRAP具有较高的遗传分析效力;基于不同分子标记遗传分析结果的差异与标记间共享位点的多少有关;10个尖椒自交系的分类结果可用于指导育种实践。

一种安全有效的合成芳基异氰酸酯的方法

将伯芳胺或其溶液滴加到双 (三氯甲基 )碳酸酯溶液中 ,经回流反应合成了相应的芳基异氰酸酯。与光气法相比 ,该法是一种安全、方便、环境友好、收率 (87.6 %～ 98.2 % )及纯度 (93.6 %～99.1% )

非硫光气法合成一些难合成的芳基异硫氰酸酯

在三乙烯二胺存在下,芳胺与二硫化碳反应先生成芳胺基二硫代甲酸盐,然后与双(三氯甲基)碳酸酯(BTC)反应,可用于制备苯环上连接了硝基、三氟甲基或者两个以上卤素等吸电子基团的难合成芳基异硫氰酸酯,收率达到71%～95%。

高密度球形Ni(OH)_2的表面修饰

为提高镍电极的导电性 ,在电极制作过程中需添加一定量的导电剂 ,通过混合添加的导电剂 ,受工艺条件的限制 ,其均匀性和利用率不是十分理想。通过化学方法 ,利用动态积分进料工艺在Ni(OH ) 2 的表面包覆上了一层钴的化合物 ,经SEM分析观察 ,包覆层分布均匀 ,与基体结合牢固、稳定。采用包覆钴化合物的Ni(OH ) 2 制备的镍电极 ,经 0 .3C及 1.0C充放电测试表明 ,其充电电压低 ,放电平台高 ,比容量大 ,大电流充放电效率及活性材料的利用率得到了明显的改进。

辣椒抗疫病的遗传与育种

辣椒疫病是在世界范围内严重危害辣椒的重要病害之一。几十年来 ,许多辣椒生产国开展了抗疫病育种和包括抗病性遗传分析在内的相关研究。笔者对近年来有关辣椒疫病病原、辣椒对疫病的抗性、抗病性的生理生化机制、抗病性的遗传、抗病基因的 QTL定位与克隆、抗病性鉴定和抗病育种方面的研究进展进行了综述 。

月季品种资源的分类与评价

以引进的13个月季品种资源为试材,采用方差分析和系统聚类法对其进行了分类与评价。结果表明:13个月季品种在花色、叶片大小等性状上存在显著差异,反映出所调查资源丰富的遗传多样性;基于8个数量性状的聚类分析,在遗传距离2.91处,将13月季个品种分为4组,其中1号品种单独为一组,5、13、6号品种聚为一组,3、7、12号品种聚为一组,2、8、9、10、11、4号品种为一组。1号月季品种蔓生、低矮,花小,花繁密,是良好的地被资源;5、6、13号株高较高,花大,枝条数目中等,是良好的切花品种资源;其余品种可用于道路美化或花坛应用。

两种凤仙花多倍体的诱导

以凤仙花和茶花凤仙为试材,研究秋水仙素处理质量分数和时间对2种试材的多倍体诱变效应,通过植株形态特征、气孔数量及大小、染色体数目的观察进行倍性鉴定。结果表明,用w=0.5%的秋水仙素处理72~96 h的植株材料变异率较高,其中以0.5%秋水仙素处理96 h凤仙花的变异率最高,达29%。染色体压片检查表明,四倍体染色体数为2n=4x=28,二倍体对照为2n=2x=14。四倍体叶片长、宽、厚均增大,气孔密度减小,气孔保卫细胞增大,花径增加、花瓣增多,单朵花观赏价值显著提高。

双峰驼胸膜下肺微血管构筑的扫描电镜观察

目的探讨双峰驼胸膜下肺微血管的构筑特征及其功能意义,为哺乳动物肺微血管构筑学研究积累资料。方法铸型扫描电镜技术。结果双峰驼胸膜下肺微血管根据其连续分支可以识别出4级血管:微动脉、终末微动脉、毛细血管前微动脉和毛细血管,胸膜下肺毛细血管通常由该部的毛细血管前微动脉发出,也可由终末微动脉直接发出,并最终相互吻合成胸膜下肺毛细血管网。胸膜下肺毛细血管网粗疏,网孔孔径一般大于毛细血管管径,网孔多呈六边形和五边形。胸膜下肺微动脉、终末微动脉和毛细血管前微动脉的铸型表面均显示有清晰的、环状排列的平滑肌压迹,毛细血管铸型表面可见卵圆形内皮细胞核的压痕。肺间质毛细血管与胸膜下肺微血管之间存在有广泛的、不同水平上的吻合。结论双峰驼胸膜下肺微血管构筑特征与其他哺乳动物比较,并无显著差异。

基于RSAP和SSR的辣椒优良自交系间遗传距离的估计与比较

作物F1代的杂种优势表现与亲本间的遗传距离直接相关,对自交系间遗传距离的估计可被用来预测杂种优势。针对我国鲜食尖椒的育种目标,利用RSAP和SSR标记系统,对来自国内外的10份尖椒优良自交系间的遗传距离进行估计,并比较了2种标记的结果和效力。结果显示,RSAP标记具有较高的位点和多态性检测能力,平均每次可检测51个位点和13个多态性条带,分别是SSR的17倍和6.5倍;基于RSAP的遗传距离和基于SSR的遗传距离相关性较高(r=0.542 9);2种标记系统的聚类结果基本一致,均将10份尖椒分为3大类,这种分类结果不但反映了果实形状在辣椒分类上的重要地位,而且与辣椒杂种优势育种实践相一致。

一种新型DNA标记技术——限制性位点扩增多态性(RSAP)的建立与优化

了避开基于限制性酶切位点分子标记技术的DNA酶切环节，简化其复杂的程序，试验以辣椒为材料，建立了一种新型DNA标记技术——限制性位点扩增多态性（RSAP），并对其反应体系进行了优化，对RSAP适用性、重复性进行了检验。结果显示，RSAP技术的引物为2条长度均为18bp的引物，引物的3’端为4～6个碱基的限制性酶切位点序列，接着是12～14个碱基的随机序列，2条引物的限制性位点和随机序列不同；PCR扩增的前5个循环采用35C的退火温度，随后的35个循环采用48℃的退火温度；在25μL反应体系中，模板DNA用量为20ng，Mg^2＋浓度为2．5mmol／L，dNTPs浓度为0．2mmol／L，TaqDNA聚合酶用量为1．5U，2条引物浓度均为600nmol／L;RSAP技术重复性好，适用性广泛，是一种操作简便、产率中等、稳定可靠的DNA标记技术。

层次分析法在三色堇观赏性评价中的应用

以33份三色堇种质为试材,采用层次分析法对其观赏性进行综合评价。三色堇观赏性评价的层次分析模型分为:目标层(综合观赏性)、准则层(株形,花,叶)和方案层(分枝数,株幅,株高,花期,花斑,花色,花数,花径,叶面积,叶长和叶宽)。在准则层中,花的权重最大,其次为株形;在花的方案层中,花径的权重最大,其次为花数。构建的模型完整、合理、符合实际,适用于三色堇资源观赏性评价。33份三色堇材料观赏性评价结果表明,材料可分为3个等级,其中CYS-H3、229.11、229.19、EWO、HSY4-1观赏价值高,可优先选择利用。

目标区域扩增多态性(TRAP):一种新的植物基因型标记技术

TRAP是一种新的基于PCR的植物基因型标记技术,具有简单、稳定、效率高的特点。借助日益增长的庞大的生物序列信息,TRAP利用生物信息工具和EST数据库信息,产生目标候选基因区多态性标记。TRAP技术采用两个18核苷酸引物产生标记。一个为固定引物,依据EST序列设计;另一个为随机引物,针对外显子和内含子的特点,设计为分别富含GC或AT核心区的任意序列。PCR扩增前5个循环采用35℃的退火温度,后35个循环采用50℃的退火温度。对不同的植物种类,每一个PCR反应可产生多达50个可统计DNA片段。本文在阐述了TRAP的原理与流程后,对该技术的优势和应用情况进行了总结,并对其前景做了展望。

南瓜前期农艺性状的主成分分析

以50份南瓜自交系为试材,对其8个前期农艺性状(叶长、叶宽、叶面积、茎长、茎粗、节间长、第1雄花节位、第1雌花节位)进行了调查和分析。相关分析结果表明,南瓜8个前期农艺性状间存在着不同程度的相关性,其中叶长、叶宽、叶面积3者两两之间存在高度相关。方差分析表明,8个性状在50个自交系上差异极显著,存在广泛变异。主成分分析将这些变异可转化为4个主成分,分别为生长势因子、早熟因子、壮苗因子和徒长因子,其对变异的累计贡献率达89.12%,可用于南瓜自交系前期的综合评价。

三色堇观赏性状的主成分分析

以33个三色堇品种为试材,采用性状相关及主成分分析方法对其8个主要观赏性状进行分析,同时对品种的观赏性进行评价。结果表明,三色堇的花数与分枝数之间,适中株高与冠幅/株高之间呈较高的正相关性,而花径与花数、分枝数之间呈较高的负相关性。主成分分析可将原8个性状综合为4个主成分,可称为覆花因子、株型因子、花比例因子和花色因子,其累计贡献率可达89.1%。以4个主成分的贡献率为权重建立观赏性评价模型,可将33个品种分成4个等级,其中9、10、33号品种最优。

三色堇不同品种观赏性状的比较与评价

对三色堇品种观赏性状的比较和评价是其合理利用的基础。在对12个三色堇品种8个观赏性状调查的基础上,分别对不同品种在各观赏性状上的差异进行了比较和评价,最后采用百分制评比法对各品种进行了综合评价。结果表明:7、6、12、3号品种为双色和三色花,花色观赏性高;3、2、1、11、9号花径最大,大花优势明显;12、7、10号的花数最多,多花优势明显;10、7号冠幅大、分枝性强,丰满度好;开花指数以9号最高,其次为3、2、1号;8、10、7、4号株高适中;11、7、10号冠幅/株高大,株型较为理想。将12个品种总体评价依次分为:优(7号和10号)、良(12、9、3、2、1号)、中(8、6、5、4、11号)3级。