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高表达Twist基因促进人乳腺癌细胞MCF-7干细胞样细胞富集和迁移 被引量:5
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作者 周明莉 杨佳佳 +5 位作者 唐石伏 杨丽 张海龙 杜燕娥 文思阳 柳满然 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第20期2083-2086,共4页
目的探讨人乳腺癌细胞系MCF-7中高表达Twist基因对MCF-7干细胞特性细胞的影响。方法构建重组质粒pBABE-puro-myc-Twist,HEK293T细胞包装逆转录病毒,并感染MCF-7细胞,通过筛选获得成功转入Twist的MCF-7/Twist细胞和MCF-7/Vector对照细胞... 目的探讨人乳腺癌细胞系MCF-7中高表达Twist基因对MCF-7干细胞特性细胞的影响。方法构建重组质粒pBABE-puro-myc-Twist,HEK293T细胞包装逆转录病毒,并感染MCF-7细胞,通过筛选获得成功转入Twist的MCF-7/Twist细胞和MCF-7/Vector对照细胞,再通过长程无血清悬浮培养方法富集具有干细胞特性的乳腺细胞小球(Mammosphere),并通过Western blot法检测myc-Twist及Twist诱导后富集的Mammosphere相关CSC蛋白标记的表达,Transwell法检测细胞的迁移能力。结果成功构建逆转录病毒质粒pBABE-puro-myc-Twist;Twist基因在靶细胞内稳定表达;长程无血清悬浮培养富集出具有干细胞特性的Mammosphere;MCF-7/Twist细胞肿瘤干细胞样细胞富集能力增强(P<0.05);myc-Twist、Twist及SOX2、OCT4蛋白在MCF-7/Twist Mammosphere细胞中表达上调;MCF-7/Twist Mammosphere细胞迁移能力增加(P<0.05)。结论 Twist促进MCF-7肿瘤干细胞样细胞富集能力增强,并促进其迁移。 展开更多
关键词 TWIST 乳腺细胞小球 人乳腺癌细胞MCF-7
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Drosha水平与胃腺癌恶性程度及侵袭呈负相关 被引量:4
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作者 张海龙 徐丽云 +3 位作者 周明莉 杜燕娥 文思阳 柳满然 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1519-1522,1527,共5页
目的研究Drosha蛋白在胃腺癌发展进程中的意义及与患者预后的相关性,探究Drosha对胃癌细胞SGC-7901侵袭能力的影响。方法免疫组织化学染色及Image-Pro Plus软件检测组织芯片889例胃腺癌组织样本中Drosha的表达量,统计分析Drosha与各临... 目的研究Drosha蛋白在胃腺癌发展进程中的意义及与患者预后的相关性,探究Drosha对胃癌细胞SGC-7901侵袭能力的影响。方法免疫组织化学染色及Image-Pro Plus软件检测组织芯片889例胃腺癌组织样本中Drosha的表达量,统计分析Drosha与各临床参数及309例胃腺癌患者预后的关系;小干扰RNA(siRNA)干扰人胃腺癌细胞株SGC-7901中Drosha的表达,TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果 Drosha在高分化胃腺癌组织中高表达(吸光度值中位值为0.4195),在中分化胃腺癌中表达降低、在低分化腺癌中低表达;Drosha的表达与肿瘤大小、Lauren分型、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、肿瘤病理分级及病理分期相关;生存分析显示Drosha高表达的患者拥有更高的生存率;敲低SGC-7901细胞的Drosha水平后,细胞侵袭能力显著增强。结论 Drosha蛋白水平随胃腺癌分化程度降低而逐渐降低,敲低Drosha水平可促进胃癌细胞的侵袭。 展开更多
关键词 DROSHA 胃腺癌 免疫组织化学技术 侵袭能力
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慢性乙型肝炎患者色氨酸和犬尿氨酸的检测及意义 被引量:3
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作者 胥飚 杜燕娥 +1 位作者 曾乾娜 张莉萍 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期248-249,共2页
目的探讨血浆中色氨酸(Trp)和犬尿氨酸(Kyn)的定量检测在乙型肝炎(乙肝)中的临床意义。方法采用高效液相色谱法(HPLC)测定60例慢性乙肝患者(乙肝患者组)和41例正常人(正常对照组)血浆中色氨酸和犬尿氨酸含量,并对两组数据进行比较。结... 目的探讨血浆中色氨酸(Trp)和犬尿氨酸(Kyn)的定量检测在乙型肝炎(乙肝)中的临床意义。方法采用高效液相色谱法(HPLC)测定60例慢性乙肝患者(乙肝患者组)和41例正常人(正常对照组)血浆中色氨酸和犬尿氨酸含量,并对两组数据进行比较。结果正常对照组Trp含量为(76.99±10.88)μmol/L,Kyn含量为(2.16±0.32)μmol/L,Kyn/Trp为0.028±0.003;乙肝患者组Trp含量为(68.04±8.52)μmol/L,Kyn含量为(2.18±0.26)μmol/L,Kyn/Trp为0.032±0.004。乙肝患者组血浆Trp含量明显低于正常对照组(P<0.01),Kyn/Trp明显高于正常对照组(P<0.01),两组Kyn含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢性乙肝患者色氨酸代谢发生异常,检测患者血浆中Trp和Kyn有重要的临床意义。 展开更多
关键词 色谱法 高效液相 色氨酸 犬尿氨酸 肝炎 乙型
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低氧诱导乳腺癌癌相关成纤维细胞能量代谢重塑细胞模型的构建 被引量:2
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作者 唐石伏 周明莉 +13 位作者 孙一帆 王林春 刘春明 杨丽 唐曦 张海龙 高超 黄光明 渠海洋 杜燕娥 徐丽云 文思阳 郎磊 柳满然 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1084-1089,共6页
目的:构建低氧诱导的乳腺癌癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAF)能量代谢重塑(energy metabolism reprogramming,EMR)细胞模型,为其后续分子机制和生物学功能研究奠定基础。方法:以成对的永生化的乳腺癌癌旁组织来源... 目的:构建低氧诱导的乳腺癌癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAF)能量代谢重塑(energy metabolism reprogramming,EMR)细胞模型,为其后续分子机制和生物学功能研究奠定基础。方法:以成对的永生化的乳腺癌癌旁组织来源正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NF)和CAF为处理对象,根据[O2]不同,NF和CAF细胞各分为常氧处理组和低氧处理组。不同氧浓度分别处理NF和CAF细胞0、1、3、6、12 h和24 h。葡萄糖消耗实验和乳酸生成实验检测细胞糖酵解水平;线粒体活性检测实验评估细胞氧化磷酸化(oxidative phosphorylation,OP)活性;Western blot实验检测细胞能量代谢相关蛋白包括单羧酸转运子4(monocarboxylate transporters 4,MCT4)、细胞色素氧化酶Ⅳ亚基(cytochrome oxidaseⅣsubunit,COXⅣ)和低氧诱导因子1α亚基(hypoxia inducible factor 1αsubunit,HIF1α)的蛋白表达量。结果:低氧与CAF细胞EMR呈剂量效应和时间效应关系,1%[O2]作用24 h为最佳低氧处理条件。与NF常氧组相比,低氧处理(1%[O2]作用24 h)使CAF葡萄糖吸收和乳酸产生能力分别增强2倍和3.1倍,明显抑制其氧化磷酸化活性,使CAF细胞中MCT4和HIF1α蛋白表达量分别上升3.1倍和3.9倍及COXⅣ下调90%。结论:低氧(1%[O2]作用24 h)使CAF具有典型的EMR表型。本研究成功构建低氧诱导的乳腺癌CAF细胞EMR模型。 展开更多
关键词 乳腺癌 癌相关成纤维细胞 低氧 能量代谢重塑 细胞模型
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高表达ITGB1促进人乳腺上皮MCF10A细胞EMT及迁移 被引量:2
5
作者 郎磊 周明莉 +3 位作者 杨佳佳 杜燕娥 文思阳 柳满然 《基础医学与临床》 CSCD 2016年第11期1511-1516,共6页
目的探讨ITGB1基因过表达对人乳腺上皮MCF10A细胞迁移和侵袭的影响。方法构建重组质粒p BABEpuro-myc-ITGB1,在人胚肾上皮细胞系293T细胞中包装反转录病毒,转染人乳腺上皮MCF10A细胞系,构建ITGB1基因过表达的稳定细胞系;实验设空白对照... 目的探讨ITGB1基因过表达对人乳腺上皮MCF10A细胞迁移和侵袭的影响。方法构建重组质粒p BABEpuro-myc-ITGB1,在人胚肾上皮细胞系293T细胞中包装反转录病毒,转染人乳腺上皮MCF10A细胞系,构建ITGB1基因过表达的稳定细胞系;实验设空白对照组(MCF10A)、阴性对照组(MCF10A-vector)和ITGB1基因过表达组(MCF10A-ITGB1);经嘌呤霉素筛选后,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测ITGB1 mRNA及蛋白的表达;Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞株迁移和侵袭能力;蛋白质印迹法进一步检测上皮间质转换(EMT)相关蛋白E-cadherin、vimentin、fibronectin、N-cadherin以及ITGB1下游ILK、p-FAK和FAK蛋白的表达。结果成功构建ITGB1基因稳定过表达人乳腺上皮MCF10A细胞系;ITGB1基因过表达组(MCF10A-ITGB1)与空白对照组(MCF10A)和阴性对照组(MCF10A-vector)细胞相比,迁移能力(P<0.05)和侵袭能力(P<0.01)显著增强;EMT相关蛋白E-cadherin显著下调(P<0.05),vimentin、fibronectin、N-cadherin以及ITGB1下游ILK,p-FAK蛋白显著上调(P<0.05)。结论在人乳腺上皮MCF10A细胞中,过表达ITGB1基因诱导细胞EMT并促进其迁移和侵袭。 展开更多
关键词 ITGB1 上皮间质转换 细胞迁移 细胞侵袭
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下调Drosha基因表达促进MGC-803胃癌细胞对表阿霉素的敏感性 被引量:1
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作者 徐丽云 陈燕林 +3 位作者 文思阳 杜燕娥 唐曦 柳满然 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1207-1211,共5页
目的构建Drosha基因稳定沉默的胃癌细胞株并探讨其对表阿霉素敏感性的影响。方法将靶向干扰Drosha的序列重组到慢病毒载体并感染MGC-803细胞;采用实时定量PCR检测Drosha mRNA水平、Western blot法检测Drosha蛋白水平;MTT法检测野生型MGC... 目的构建Drosha基因稳定沉默的胃癌细胞株并探讨其对表阿霉素敏感性的影响。方法将靶向干扰Drosha的序列重组到慢病毒载体并感染MGC-803细胞;采用实时定量PCR检测Drosha mRNA水平、Western blot法检测Drosha蛋白水平;MTT法检测野生型MGC-803细胞对表阿霉素的半数抑制剂量(IC50);流式细胞术检测用IC50的表阿霉素处理后各组细胞的凋亡率,Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2的蛋白水平。结果成功构建稳定Drosha基因沉默的MGC-803细胞株;下调Drosha后,经0.5 mg/L(IC50)表阿霉素处理,MGC-803细胞凋亡率明显增加,MGC-803细胞caspase-3、caspase-9、Bax表达上调,Bcl-2表达降低。结论沉默细胞中Drosha表达能提高胃癌细胞对表阿霉素的敏感性。 展开更多
关键词 DROSHA MGC-803胃癌细胞 表阿霉素
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肝硬化相关血清学指标与Child-Pugh分级的关系 被引量:36
7
作者 李丹丹 杜燕娥 +3 位作者 段亮 李朴 麦力 王玎 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期336-339,共4页
目的:探究肝硬化相关血清学指标与肝硬化Child-Pugh分级之间的关系和临床意义。方法:收集重庆医科大学附属第二医院感染科2016年7月至2017年4月间肝硬化患者血清235例,其中Child-Pugh A组55例,B组90例,C组90例,以及同期健康体检人群35例... 目的:探究肝硬化相关血清学指标与肝硬化Child-Pugh分级之间的关系和临床意义。方法:收集重庆医科大学附属第二医院感染科2016年7月至2017年4月间肝硬化患者血清235例,其中Child-Pugh A组55例,B组90例,C组90例,以及同期健康体检人群35例,分别检测肝功能、肝纤维化、血小板计数等指标并分析其特征。结果:透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层粘连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型胶原蛋白(typeⅢcollagen,PC-Ⅲ)、Ⅳ型胶原蛋白(typeⅣcollagen,Ⅳ-C)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酰氨基转移酶(alanyl aminotransferase,ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶与血小板计数比(aspartate aminotransferase to platelet ratio index,APRI)指数之间差异均具有统计学意义(P<0.05)。HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C、LN和AST指标对预测肝硬化的曲线下面积(AUC)分别为0.910、0.804、0.833、0.753、0.730。HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C与Child-Pugh分级呈高度正相关(r>0.7,P<0.01),APRI与分级呈显著性正相关(0.4<r<0.7,P<0.05)。结论:HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C、APRI可作为Child-Pugh分级的潜在临床指标,这将有助于临床更好地制定诊疗方案及预后评估。 展开更多
关键词 肝硬化 血清学指标 CHILD-PUGH分级
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爱情的殿堂 梁祝文化公园
8
作者 杜燕娥 《风景名胜》 1999年第3期36-37,共2页
梁山伯与祝英台,这个民间传说,在我们中国可谓是家喻户晓,被西方人称之为东方的"罗密欧与朱丽叶"。为了演绎、追思梁山伯和祝英台的千古英灵,顺应广大民众的美好夙愿,梁祝故事的发源地,
关键词 文化公园 梁山伯与祝英台 梁祝故事 罗密欧与朱丽叶 爱情主题 民间传说 梁祝传说 园林艺术 殿堂 西方人
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“澳门”名称的由来与妈祖文化
9
作者 杜燕娥 《风景名胜》 1999年第2期39-40,共2页
继1997年7月1日香港回归祖国的两年之后,澳门不久亦于今年12月20日即将回到中华民族的怀抱。抚今忆昔,追溯"澳门"一词的产生,颇觉有一番穿凿屈史的:早在16世纪明嘉靖三十二年(公元1553年),葡萄牙人借口船只遭飓风触礁破裂需... 继1997年7月1日香港回归祖国的两年之后,澳门不久亦于今年12月20日即将回到中华民族的怀抱。抚今忆昔,追溯"澳门"一词的产生,颇觉有一番穿凿屈史的:早在16世纪明嘉靖三十二年(公元1553年),葡萄牙人借口船只遭飓风触礁破裂需要修缮,船上打湿的货什物品需要曝晒水渍为由头,并耍弄贿赂地方官吏等手段,软硬兼施,而强行登涉了陆岛。上得岸时。 展开更多
关键词 妈祖文化 澳门 葡萄牙人 中华民族 回归祖国 香港 公元 渔民 破裂 贿赂
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我国古代的微缩景观——闽南宋城
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作者 陈述 杜燕娥 《风景名胜》 1999年第2期25-25,共1页
被称为闽南宋城的赵家堡,位于福建省漳浦县湖西区畲族乡。它是我国历史上宋代皇族赵氏后裔于宋亡后隐居时建造的一座古城堡。因其布局、规制处处都仿照宋都汴京,所以被人们称为宋城。据当地志书记载,公元1279年2月6日,元朝军队向南宋小... 被称为闽南宋城的赵家堡,位于福建省漳浦县湖西区畲族乡。它是我国历史上宋代皇族赵氏后裔于宋亡后隐居时建造的一座古城堡。因其布局、规制处处都仿照宋都汴京,所以被人们称为宋城。据当地志书记载,公元1279年2月6日,元朝军队向南宋小朝廷最后一个据点——广东崖山发动了进攻。文天祥率部奋力抵抗,但终因双方兵力众寡悬殊,崖山最后为元军攻陷。宋军全军覆没,主帅文天祥被俘。 展开更多
关键词 南宋 景观 文天祥 漳浦县 规制 众寡悬殊 城堡 宋代 微缩 我国古代
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他莫昔芬通过GPR30介导CAF外分泌CXCL16促进乳腺癌MCF-7细胞迁移及侵袭 被引量:5
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作者 吴晓安 郭林英 +2 位作者 杜燕娥 柳满然 涂刚 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期272-279,共8页
目的 :探讨他莫昔芬(tamoxifen,TAM)通过雌激素G蛋白偶联受体30(estrogen G-protein-coupled receptor 30,GPR30)介导肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated i broblast,CAF)外分泌CXC型趋化因子配体16(CXCchemokine ligand 16,CXCL16)... 目的 :探讨他莫昔芬(tamoxifen,TAM)通过雌激素G蛋白偶联受体30(estrogen G-protein-coupled receptor 30,GPR30)介导肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated i broblast,CAF)外分泌CXC型趋化因子配体16(CXCchemokine ligand 16,CXCL16)对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的影响。方法 :TAM和TAM联合GPR30特异性抑制剂G15分别处理CAF后,通过基因芯片检测2组细胞差异表达的基因,并从中挑选出CXCL16,应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法进行验证,应用ELISA法检测细胞上清液中CXCL16的浓度。用TAM和TAM联合G15处理后的CAF上清液、不做任何处理的CAF上清液、添加CXCL16或CXCL16中和抗体的培养液分别培养MCF-7细胞,采用MTT法、划痕愈合实验和Transwell小室法检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果 :与TAM联合G15处理组相比,TAM处理组CAF中2 358个基因表达上调,2 178个基因表达下调;TAM处理组CAF中CXCL16 m RNA和蛋白的表达水平及上清液中CXCL16的浓度均显著上调(P值均<0.01),且该效应可被G15阻断(P值均<0.01)。TAM处理组CAF上清液和添加CXCL16培养液培养的MCF-7细胞,其迁移和侵袭能力均增强(P值均<0.05),而增殖能力则无显著变化(P值均>0.05)。结论 :CAF经TAM处理后CXCL16分泌增多,该效应由GPR30介导,而外分泌的CXCL16可促进乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭能力。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 他莫昔芬 受体 趋化因子 细胞迁移分析 肿瘤相关成纤维细胞
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TGF-β信号通路调控Twist高表达型乳腺肿瘤细胞微球体的形成及迁移 被引量:4
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作者 郎磊 周明莉 +3 位作者 徐丽云 杜燕娥 文思阳 柳满然 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1083-1089,1097,共8页
目的 :探讨转化生长因子β(transforming growth factor-beta,TGF-β)信号通路对Twist高表达型乳腺癌细胞微球体形成及微球体细胞迁移的影响。方法:应用蛋白质印迹法和微球体形成实验分别检测正常乳腺上皮MCF10A细胞及乳腺癌MCF7和BT54... 目的 :探讨转化生长因子β(transforming growth factor-beta,TGF-β)信号通路对Twist高表达型乳腺癌细胞微球体形成及微球体细胞迁移的影响。方法:应用蛋白质印迹法和微球体形成实验分别检测正常乳腺上皮MCF10A细胞及乳腺癌MCF7和BT549细胞中Twist的表达水平及微球体形成能力。蛋白质印迹法检测MCF10A、MCF7和BT549微球体细胞中TGF-β、SMAD3和磷酸化SMAD3(phospho-SMAD3,p-SMAD3)的表达水平。在微球体形成实验的基础上,加入TGF-β信号通路特异性抑制剂LY2109761,应用微球体形成实验和蛋白质印迹法分别检测乳腺癌BT549微球体细胞的形成能力和p-SMAD3蛋白、肿瘤干细胞相关标志物性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2,SOX2)和八聚体绑定转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,OCT4)的表达水平,Transwell法检测乳腺癌BT549来源的微球体细胞的迁移能力。结果:乳腺癌BT549细胞中Twist的表达水平明显高于MCF10A细胞和MCF7细胞(P值均<0.05),BT549细胞微球体形成能力显著高于MCF10A和MCF7细胞(P值均<0.05)。BT549微球体细胞中TGF-β、p-SMAD3和SMAD3蛋白的表达水平均显著高于MCF10A和MCF7微球体细胞(P值均<0.05)。LY2109761可显著抑制乳腺癌BT549细胞的微球体形成能力(P<0.05),下调乳腺癌BT549微球体细胞中p-SMAD3及干细胞相关蛋白SOX2和OCT4的表达(P值均<0.05),抑制乳腺癌BT549微球体细胞的迁移(P<0.05)。结论 :TGF-β信号通路特异性抑制剂LY2109761可抑制Twist高表达乳腺癌细胞微球体的形成及微球体细胞的迁移。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 转化生长因子 细胞迁移分析 微球体 信号通路 Twsit
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共济失调毛细血管扩张突变基因沉默可抑制人乳腺癌细胞的迁移和侵袭 被引量:2
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作者 郎磊 杜燕娥 +5 位作者 席磊 周明莉 孙可馨 阴嘉莉 陈燕林 柳满然 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1090-1097,共8页
目的 :探讨共济失调毛细血管扩张突变(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)基因沉默对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 :将携带ATM-sh RNA及其阴性对照序列(作为阴性对照组)的重组慢病毒载体分别感染人三阴... 目的 :探讨共济失调毛细血管扩张突变(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)基因沉默对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 :将携带ATM-sh RNA及其阴性对照序列(作为阴性对照组)的重组慢病毒载体分别感染人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,获得ATM基因稳定沉默及其对照细胞株;同时,设置未经病毒感染的空白对照组细胞。经嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下观察各组细胞的感染效率,并采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测ATM mRNA及蛋白的表达水平。采用MTT法、FCM法、细胞划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测ATM基因沉默对MDA-MB-231细胞增殖、周期分布、迁移和侵袭能力的影响。结果:成功构建了稳定沉默ATM基因的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株。与空白对照组和阴性对照组相比,ATM基因沉默组细胞的增殖能力和细胞周期分布均无明显变化(P值均>0.05),但细胞迁移和侵袭能力均明显减弱(P值均<0.05)。结论:在人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞中,ATM表达下调可明显抑制细胞的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 共济失调毛细血管扩张突变蛋白质类 细胞增殖 细胞迁移分析 肿瘤浸润
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稳定干扰ITGB3基因可促进人乳腺癌BT549细胞的增殖 被引量:2
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作者 文思阳 徐丽云 +8 位作者 杜燕娥 郎磊 孙可馨 阴嘉莉 付立新 席磊 陈燕林 杨丹 柳满然 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期538-544,共7页
目的 :探讨稳定干扰整合素β3(integrinβ3,ITGB3)基因对人乳腺癌BT549细胞增殖的影响。方法:采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测乳腺癌BT549、MCF-7和MDA-MB-453细胞中ITGB3 m RNA和蛋白的表达。将干扰ITGB3表达的LV-ITGB3-sh RN... 目的 :探讨稳定干扰整合素β3(integrinβ3,ITGB3)基因对人乳腺癌BT549细胞增殖的影响。方法:采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测乳腺癌BT549、MCF-7和MDA-MB-453细胞中ITGB3 m RNA和蛋白的表达。将干扰ITGB3表达的LV-ITGB3-sh RNA慢病毒感染BT549细胞后,应用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测BT549细胞中ITGB3 m RNA和蛋白的表达水平,MTT法和FCM法检测BT549细胞的增殖能力和细胞周期,蛋白质印迹法检测BT549细胞中c-Myc和cyclin D1蛋白的表达情况。结果:乳腺癌BT549细胞中ITGB3 m RNA和蛋白的表达水平高于MCF-7和MDA-MB-453细胞(P值均<0.05)。LV-ITGB3-sh RNA慢病毒感染后,BT549细胞中ITGB3 m RNA和蛋白的表达水平低于阴性对照组(LV-NCsh RNA感染BT549细胞)和空白对照组(BT549细胞未进行感染)(P值均<0.01),细胞增殖能力增强(P<0.01),S期细胞所占百分比上升(P<0.01),c-Myc和cyclin D1蛋白的表达水平上调(P值均<0.05)。结论:稳定干扰BT549细胞中ITGB3表达后,可能通过上调c-Myc和cyclin D1蛋白的表达而促进细胞增殖。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 整合素Β3 慢病毒属 RNA干扰 细胞增殖
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稳定干扰癌相关成纤维细胞中YAP1表达可抑制乳腺癌MDAMB-231细胞迁移和侵袭 被引量:2
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作者 杜燕娥 李跟友 +5 位作者 段亮 丁小娟 王玎 文思阳 赵茂嘉 侯懿烜 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期863-873,896,共12页
目的 :探讨稳定干扰癌相关成纤维细胞(cancer-associatedbroblast,CAF)中Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)表达对乳腺癌MDAMB-231细胞迁移和侵袭的影响。方法 :用生物信息学方法分析乳腺原代CAF与对应正常成纤维细胞(normal... 目的 :探讨稳定干扰癌相关成纤维细胞(cancer-associatedbroblast,CAF)中Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)表达对乳腺癌MDAMB-231细胞迁移和侵袭的影响。方法 :用生物信息学方法分析乳腺原代CAF与对应正常成纤维细胞(normal broblast,NF)的m RNA芯片数据中YAP1的表达,并采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测乳腺原代及永生化CAF与NF细胞中YAP1m RNA和蛋白的表达水平,以验证芯片结果的真实性和准确性。用NF与CAF条件培养液分别培养乳腺癌MDA-MB-231细胞,然后采用Transwell小室法比较NF与CAF对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。构建靶向YAP1基因的sh RNA重组质粒并转染入CAF,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测CAF细胞中YAP1 m RNA和蛋白的表达水平,然后采用划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测干扰YAP1表达后的CAF条件培养液对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响。用Hippo通路抑制剂XMU-MP-1处理CAF,采用蛋白质印迹法检测CAF细胞中YAP1总蛋白和磷酸化蛋白水平,Transwell小室法检测XMU-MP-1处理后的CAF条件培养液对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响。采用实时荧光定量PCR法检测干扰YAP1表达后的CAF细胞中YAP1下游与迁移和侵袭密切相关的转化因子β1(transforminggrowthfactor-beta1,TGF-β1)和白细胞介素6(interleukin 6,IL6)的表达,并采用CollagenⅠ胶原凝胶收缩实验检测干扰YAP1表达对细胞外基质重塑的影响。结果 :m RNA芯片检测发现,与正常对照NF相比,乳腺原代CAF中YAP1高表达(P <0.05)。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测证实原代及永生化CAF中YAP1 m RNA(P <0.05)和蛋白(P <0.01)水平均明显高于NF。与NF相比较,CAF条件培养液可明显促进乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭(P <0.01)。成功构建YAP1sh RNA稳定转染的CAF细胞株,其中YAP1 m RNA和蛋白表达水平均明显下调(P值均<0.01)。与未干扰YAP1表达的CAF对照组相比,经稳定干扰YAP1的CAF条件培养液处理后,乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移(P <0.05)和侵袭(P <0.01)能力均明显减弱。用Hippo通路抑制剂XMU-MP-1处理后,CAF细胞中YAP1磷酸化蛋白水平明显降低(P <0.01),经该CAF条件培养液处理后MDA-MB-231细胞的侵袭能力明显增强(P <0.05)。干扰YAP1表达后的CAF细胞中TGF-β1和IL6m RNA表达水平均明显下调(P值均<0.05),且细胞外基质的胶原凝胶收缩能力明显减弱(P <0.05)。结论 :稳定干扰CAF细胞中YAP1表达可能通过下调细胞因子TGF-β1和IL6的表达,以及重塑细胞外基质,抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 癌相关成纤维细胞 RNA 小分子干扰 细胞外基质 肿瘤侵润 细胞迁移分析 Yes相关蛋白1
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S100A9参与乙型肝炎病毒X蛋白介导的HepG2细胞增殖与迁移
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作者 张秀瑜 王玎 +2 位作者 杜燕娥 武睿 段亮 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期108-114,共7页
目的:探讨S100A9在乙型肝炎病毒X(HBx)介导的HepG2细胞增殖及迁移中的作用。方法:用表达HBx蛋白的重组腺病毒AdHBx感染HepG2细胞后,用CCK-8实验检测细胞增殖能力及划痕愈合实验检测细胞迁移能力;在HepG2/AdHBx细胞中转染S100A9-siRN... 目的:探讨S100A9在乙型肝炎病毒X(HBx)介导的HepG2细胞增殖及迁移中的作用。方法:用表达HBx蛋白的重组腺病毒AdHBx感染HepG2细胞后,用CCK-8实验检测细胞增殖能力及划痕愈合实验检测细胞迁移能力;在HepG2/AdHBx细胞中转染S100A9-siRNA及其对照si RNA后,检测HepG2细胞增殖及迁移能力;在HepG2/AdHBx和对照组HepG2/Ad GFP细胞中,采用Real-time PCR及Western Blot检测S100A9基因及蛋白的表达情况;在HepG2/AdHBx细胞中,加入不同剂量的NF-κB抑制剂BAY11-7082后,检测各组中S100A9的基因及蛋白表达情况。结果:HBx促进HepG2细胞的增殖与迁移; S100A9-siRNA抑制S100A9的表达后,HBx促进HepG2细胞的增殖与迁移的作用降低,HBx介导的HepG2细胞的增殖与迁移部分依赖于S100A9; S100A9基因及蛋白表达在HepG2/AdHBx中较对照组HepG2/Ad GFP显著升高,HBx可致S100A9表达增加;抑制NF-κB转录活性后,AdHBx+BAY11-7082组S100A9基因及蛋白表达较对照组显著降低,阻断NF-κB转录活性可部分抑制HBx调控的S100A9表达。结论:HBx可调控S100A9的表达且与NF-κB活化有关,S100A9参与HBx介导的HepG2细胞的增殖与迁移。 展开更多
关键词 S100A9 HEPG2细胞 乙型肝炎病毒X蛋白 NF-κB
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导师制下检验医学实习生自主学习能力评价
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作者 周小兰 袁源 +4 位作者 陈天怡 王波 杜燕娥 陈维贤 李朴 《南方医学教育》 2020年第2期35-37,共3页
目的评价导师制教学模式下检验医学本科实习生自主学习能力。方法观察组选取重庆医科大学附属第二医院检验科2018级和2019级32名实习生,按照导师制教学模式带教实习;对照组选取重庆医科大学附属第二医院检验科2016级和2017级32名实习生... 目的评价导师制教学模式下检验医学本科实习生自主学习能力。方法观察组选取重庆医科大学附属第二医院检验科2018级和2019级32名实习生,按照导师制教学模式带教实习;对照组选取重庆医科大学附属第二医院检验科2016级和2017级32名实习生,按照传统教学模式带教实习。比较两组出科考核成绩、自主学习能力以及教学方式满意度。结果观察组出科考试成绩,自主学习能力以及教学满意度均明显高于对照组(P<0.001)。结论导师制教学模式在医学检验临床实习教学中对学生自主学习能力培养具有一定价值,也能提高教学满意度。 展开更多
关键词 导师制 自主学习能力 检验医学实习生
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