基于NOD2介导的AMPK/mTOR信号通路探讨宫颈癌细胞恶性行为的机制

目的 基于核苷酸结合寡聚化结构域受体2(NOD2)介导的AMP活化蛋白激酶(AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路探讨宫颈癌(CC)细胞恶性行为的机制。方法 生物信息学分析确定NOD2在CC组织中的表达。将靶向NOD2(shNOD2)、shRNAs阴性对照(shNC)以及NOD2过表达(NOD2)质粒和载体(Vec)转染CC细胞。通过CCK-8测定、集落形成和Transwell细胞侵袭测定来确定NOD2对CC细胞生长的影响。通过高通量RNA测序(RNA-Seq)进行转录组分析。Western blot试验检测细胞系中NOD2、AMPK/mTOR信号通路和自噬蛋白的表达。24只雌性BALB/c裸鼠随机分为4组,每组6只:载体组(Vec组)、NOD2过表达组(NOD2组)、shNC组和shNOD2组。构建小鼠远处转移模型,监测肺转移的荧光强度,计数肺转移结节的数量。结果 在线数据库分析显示,NOD2在CC组织中表达明显高于正常组织,并且不同分期的CC中NOD2的mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。此外,NOD2的高表达与较差的总生存期和无病生存期相关(P<0.05)。NOD2过表达对CC细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭具有促进作用,而NOD2敲低则相反。与体外结果一致,在转移的小鼠尾静脉注射模型中,NOD2组CC细胞的肺定殖、肺转移灶较Vec组增加(P<0.05),而shNOD2组CC细胞的肺定殖、肺转移灶较shNC组减少(P<0.05)。RNA-Seq结果显示NOD2表达与AMPK信号激活、mTOR信号抑制、自噬调节途径激活和自噬体形成显著相关。与shNC组相比,shNOD2组磷酸化AMPK、LC3蛋白表达水平减少(P<0.05),磷酸化mTOR、p62蛋白表达水平增加(P<0.05);与Vec组相比,NOD2组LC3、AMPK蛋白表达水平增加(P<0.05),磷酸化mTOR、p62蛋白表达水平减少(P<0.05)。与shNC组相比,shNOD2组GFP-mRFP-LC3的点积累减少(P<0.05);与Vec组相比,GFP-mRFP-LC3的点积累增加(P<0.05)。结论 NOD2可能通过AMPK/mTOR信号促进CC增殖、迁移和侵袭,其作用机制部分涉及自噬激活。

丹参酮ⅡA抗肿瘤作用的研究进展

丹参酮ⅡA(TanⅡA)是唇形科鼠尾草属植物丹参的主要有效成分,具有抗炎、抗氧化作用,目前主要用于治疗心血管疾病。TanⅡA对多种肿瘤细胞有直接杀伤作用,并可诱导肿瘤细胞分化和凋亡,抑制肿瘤细胞的侵袭和转移,因此TanⅡA作为抗肿瘤药物具有较好的临床应用前景。其抗肿瘤作用机制与抑制DNA合成、抑制端粒酶活性、影响凋亡相关基因、干扰有丝分裂相关蛋白、改变肿瘤细胞表面蛋白的表达等因素有关。

饲喂益生菌Lactobacillus casei Zhang对高脂日粮大鼠肝脏脂质代谢的作用

【目的】研究不同剂量益生菌L.casei Zhang(2.0×1010CFU/d、2.0×109CFU/d和2.0×108CFU/d)及其发酵乳饮料(2.0×108CFU/mL/d)对高胆固醇血症大鼠肝脏脂质的治疗作用。【方法】采用高脂饲料诱导高脂血症,采用相应试剂盒测定肝脏总胆固醇水平(TC)和甘油三酯(TG)水平、粪便总胆汁酸水平与胆固醇水平以及血清载脂蛋白ApoAⅠ与ApoB水平。【结果】益生菌各剂量组和发酵饮料组与高脂模型组相比,肝脏总胆固醇水平(TC)和甘油三酯(TG)水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。各试验组均可显著增加高血脂大鼠粪便总胆汁酸水平和血清载脂蛋白ApoAⅠ水平以及显著降低血清载脂蛋白ApoB水平(P<0.01),但对粪便胆固醇水平影响不明显(P>0.05)。【结论】益生菌L.casei Zhang主要通过增加总胆汁酸的排出和调节载脂蛋白水平来改善高血脂大鼠肝脏脂质水平。

腹腔镜下卵巢囊肿剔除术中电凝和缝合止血对卵巢储备功能的影响

目的探讨腹腔镜下卵巢囊肿剔除术中电凝和缝合止血对卵巢储备功能的影响。方法选取2018年1月—2020年11月青海省人民医院收治的卵巢囊肿患者200例作为研究对象,随机分为电凝组和缝合组,每组100例。比较两组患者手术前后抗缪勒管激素(AMH)、雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平,并分析其相关性。结果电凝组与缝合组手术时间、术中出血量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。术后1个月,两组窦卵泡数、卵巢动脉收缩期峰值血流速度少或慢低于术前(P<0.05);且缝合组多或快于电凝组(P<0.05)。两组血清AMH、E2水平均低于术前(P<0.05),且缝合组高于电凝组(P<0.05)。两组血清FSH、LH水平均高于术前(P<0.05);且缝合组低于电凝组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,术后血清AMH与E2水平呈正相关(r=0.553,P<0.05),与FSH、FSH/LH呈负相关(r=-0.614和-0.482,均P<0.05),与LH无相关性(r=0.115,P>0.05)。结论相较电凝止血,腹腔镜下卵巢囊肿剔除术中应用缝合止血更有利于保护卵巢储备功能。患者术后血清AMH水平与E2、FSH、FSH/LH相关,AMH检测可作为辅助手段评价患者术后卵巢储备功能。

益生菌Lactobacillus casei Zhang冻干粉对小鼠急性毒性的研究

通过研究益生菌Lactobacillus casei Zhang冻干粉对小鼠急性毒性作用,为该菌株的安全应用提供依据。连续14d对小鼠灌胃不同剂量的L.casei Zhang冻干粉,各剂量组小鼠的一般体征、肝脏功能、脏器指数以及肝、肾、脾形态学的观察结果与对照组相比无显著差异(P>0.05)。急性毒性试验及相关指标检测结果显示L.casei Zhang冻干粉无毒副作用。

丹参酮ⅡA诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡及机制的研究

目的:观察中药丹参有效提取成分之一丹参酮ⅡA(TanⅡA)对人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖和凋亡的诱导作用,及对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其可能的抗肿瘤作用机制。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞,随机分组,实验组给予不同浓度TanⅡA处理细胞,倒置显微镜及四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法观察实验组与对照组细胞增殖抑制情况;流式细胞术检测凋亡率及细胞周期变化;免疫荧光细胞化学法检测细胞MMP-2、VEGF蛋白表达改变;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测MMP-2、VEGFmRNA表达水平。结果:TanⅡA对人卵巢癌SKOV3细胞的增殖具有抑制作用,呈时间-剂量依赖性;实验组较对照组G0/G1期细胞数量增多,而S期细胞数量减少;MMP-2、VEGF蛋白表达及基因表达明显下调,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TanⅡA对卵巢癌SKOV3细胞有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用;TanⅡA可下调细胞MMP-2、VEGF的表达,这可能是其抗肿瘤作用机制之一。

益生菌在冰淇淋中的稳定性研究

本文主要研究了4株益生菌(嗜酸乳杆菌La14、干酪乳杆菌Lc11、婴儿双歧杆菌BI07、两歧双歧杆菌BB02)在冰淇淋生产的各个工艺过程以及冰淇淋配料中的存活率。结果表明:4株菌中,La14和Lc11的加工耐受性及贮藏稳定性较好。通过对冰淇淋配料进行单因素试验以及L9(34)正交实验,最终得出当益生菌冰淇的配方:白砂糖16%,全脂奶粉11%,植物油10%,菊粉0.5%(均为质量分数),维生素C为50mg/L(质量浓度),其益生菌的存活率达到77%。

动态微波辅助技术在粮食真菌毒素和农药残留识别中的应用

为了解决国标方法对粮食中真菌毒素和农药残留识别技术复杂、耗时长的问题,本文通过将动态微波辅助萃取技术与QuEChERS净化技术相结合,研究了不同微波功率对真菌毒素和农药残留回收率的影响,并与国标方法进行实验对比,制定了高效可靠的真菌毒素和农药残留识别方法。

基于荧光探针技术检测粮油储运中的赭曲霉毒素A

为实现粮油储运中真菌毒素的快速检测,本文建立基于荧光探针技术检测赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的荧光传感方法。通过制备硫化铜纳米颗粒(Copper Sulfide Nanoparticles,CuS NPs)以及在CuS NPs上修饰OTA单体克隆抗体(Antibody,Ab)形成硫化铜纳米颗粒-OTA单克隆抗体免疫信号标记物(CuS-Ab NPs)进行荧光检测,采用外标法定量。结果显示,OTA浓度在0.1~200.0 ng·mL^(-1)线性关系良好,方法检出限为0.01 ng·mL^(-1),加标回收率为93.89%~109.96%,相对标准偏差为2.37%~5.12%。该方法检测灵敏度及准确性高、特异性好,适用于粮油储运中OTA的检测。

METTL14介导ERα的m6A修饰调控子宫内膜癌转移的机制研究

背景与目的:甲基转移酶样因子14(methyltransferase-like factor 14,METTL14)失调引起的异常N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰在多种癌症的进展中发挥重要作用,目前尚不清楚其是否参与子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)的进展。本研究旨在探讨METTL14失调引起的异常m6A修饰在EC侵袭和转移中的作用。方法:收集96例2017—2021年在青海省人民医院接受治疗性手术的EC患者。从冷冻组织中分离RNA(70对)或蛋白质(10对),用于实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)或免疫印迹分析,以评估METTL14在EC中的表达。评估METTL14的表达及其与EC临床病理学特征的相关性。在体外和体内测定METTL14在EC中的生物学效应。将甲基化RNA免疫沉淀测序(methylated RNA immunoprecipitation sequencing,MeRIP-seq)与RNA测序(RNA sequencing,RNA-seq)相结合,并在m6A斑点印迹后,采用MeRIP-RTFQ-PCR、RIP-RTFQ-PCR或双荧光素酶报告基因分析来筛选和验证METTL14的候选靶标。结果:与匹配的相邻组织相比,EC中METTL14的mRNA表达和蛋白质水平显著下调。与METTL14高表达组相比,METTL14低表达组国际妇产科联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期、浸入深度、淋巴管血管侵犯、淋巴结转移及肿瘤转移例数显著增加(P<0.05)。在功能上,METTL14在体外和体内抑制EC细胞的增殖和侵袭能力。从机制上讲,METTL14介导的m6A去甲基化导致雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)转录后抑制。此外,与METTL14相比,ERα诱导肿瘤的致癌行为。结论:METTL14通过m6A依赖性方式在EC细胞中减弱ERα的表达,进而抑制肿瘤转移和侵袭。

胸骨结核的手术体会

目的:总结胸骨结核的外科治疗经验,提高胸骨结核的外科治疗水平。方法:回顾我院2005～2009年间实施的22例胸骨结核手术患者,进行临床分析,总结其经验教训。结果:手术一期治愈19例,占86.36%;术后切口原位结核复发3例,经换药治愈。结论:术前术后规则抗结核治疗,术中彻底清灶残腔肌瓣填充,术后充分引流和加压包扎是治疗胸骨结核的关键。

单侧结核性毁损肺的外科治疗体会

目的：探讨全肺切除术治疗单侧毁损肺的临床疗效。方法：回顾分析我院25例毁损肺患者的临床资料,并对其麻醉和手术方法进行总结。结果：25例患者术后拔除胸腔调压管时间为4~9 d,平均5 d;其中术前8例痰菌阳性者术后痰菌全部阴转。术后3个月内发生脓胸1例,3个月后发生1例脓胸支气管残端瘘,均行胸腔闭式引流术;1例发生术后出血,经2次开胸止血后治愈;全组无死亡病例。结论：全肺切除治疗单侧毁损肺安全可行、疗效可靠,但应积极防止并发症的发生。

外科治疗慢性结核性脓胸的临床分析

目的:探讨手术治疗慢性结核性脓胸的方法和疗效。方法:回顾分析我院2008年9月~2010年3月90例患者的临床资料和手术方法。结果:90例手术时间平均3.2 h,术中出血平均320 ml,术后胸腔引流管留置时间平均8 d。所有患者均临床治愈,脓腔消失,瘘口闭合,肺内结核病灶稳定,无呼吸衰竭和切口感染发生。结论:手术是治疗慢性结核性脓胸的有效方法,疗效满意。

38例难治性女性盆腔结核的手术结果分析

目的:难治性女性盆腔结核在临床中相对少见,容易被误诊。方法:收集我院2005~2009年期间,术前诊断为难治性盆腔结核的手术患者38例,分析其术后诊断、手术方法,总结经验教训。结果:术前临床误诊率为31.58%。结论:内科规律抗结核治疗疗效差的难治性女性盆腔结核,建议及时行手术探查。

大量咯血的肺切除手术治疗32例临床分析

目的 探讨肺切除治疗大咯血手术的适应证及手术时机。方法 对 1 985～ 2 0 0 0年 3 2例肺切除治疗大咯血病人的手术效果进行回顾分析。结果 大咯血病人施行肺切除 3 2例 ,治愈率 87.5 % ,并发症 1 2 .5 %。结论 手术适应证趋于积极 ,即非手术治疗效果不佳 ,出血部位确定 ,肺功能 ,全身状况良好 ,尽早施行手术 ,当患者出现窒息或低血压时应抓紧手术时机。因并发症和死亡率仍高于常规肺切除 。

肺癌外科治疗后预后的影响因素分析

目的从多因素综合角度分析NSCLC患者外科治疗后预后影响因素。方法回顾性分析76例NSCLC患者资料,并进行5年随访,应用统计学方法分析其预后影响因素。结果本研究76例患者5年生存率为31.58%;吸烟、TNM分期、原发肿瘤大小、术后并发症和局部淋巴结转移是影响NSCLC患者外科治疗后与后预后的影响因素。结论做好NSCLC的健康宣教工作和戒烟是预防NSCLC的重要措施。

包裹性胸腔积液诊疗误区的术后分析

目的：分析包裹性胸腔积液常见病因，总结误诊原因、治疗误区和经验教训。方法：对我院2002年1月～2004年12月期间，经外科诊治的115例包裹性胸腔积液病例，对其在临床表现、辅助检查、术中情况及术后病理结果等方面进行分析。结果：与术后诊断相比，包裹性胸腔积液性质的误诊率为28．70％。结论：对于可疑包裹性胸腔积液患者的诊断应慎重，有时需依赖于手术确诊，同时治疗方法的选择甚为重要。

干酪乳杆菌Zhang对小鼠肠道免疫功能的影响

目的研究干酪乳杆菌Zhang(Lactobacillus casei Zhang,LcZhang)活菌制剂对小鼠肠粘膜免疫功能的影响。方法将分离自酸马奶的干酪乳杆菌Zhang,以活菌制剂的形式分三个剂量灌服小鼠11d,观察小鼠肠道局部免疫组织一派伊尔氏结(Payer’s Patches,PP)的数量及小肠粘膜CD3+、IgA+细胞数量及其阳性信号平均光密度值。结果干酪乳杆菌Zhang可使小鼠肠道粘膜相关淋巴组织中派伊尔氏结计数、计分值显著提高,并可显著提高肠粘膜内CD3+、IgA+细胞数量及表达强度。结论干酪乳杆菌Zhang对小鼠肠道粘膜免疫具有明显的促进作用。

丹参酮ⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3增殖与凋亡的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对人卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制和诱导凋亡作用及其可能机制。方法:培养人卵巢癌细胞SKOV3,经TanⅡA作用后,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定丹参酮ⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR检测Survivin与Smac/DIABLO mRNA表达水平;免疫荧光细胞化学检测Survivin蛋白及Smac/DIABLO蛋白的表达。结果:1.0～10.0μg/ml TanⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3具有生长抑制作用,并具有时间-剂量依赖性。实验组较对照组G1/G2期细胞数量增多,而S期细胞数量减少(P<0.05)。随着TanⅡA干预浓度的增加和作用时间的延长,Survivin mRNA的表达受到明显抑制(P<0.05),而Smac/DIABLO mRNA的表达明显上调(P<0.05)。Survivin蛋白及Smac/DIABLO蛋白均表达于SKOV3细胞,其表达多定位于细胞质中,偶见于细胞核。结论:TanⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3具有生长抑制和诱导凋亡作用,其作用机制可能是通过抑制人卵巢癌细胞SKOV3 Survivin和促进Smac/DIABLO的表达而实现的。