一株人血源猪链球菌的分离鉴定与毒力基因检测

目的对北京某医院就诊的一例疑似人感染猪链球菌病患者的血液来源菌株进行鉴定与毒力因子检测分析。方法将患者血液分离菌株接种哥伦比亚血琼脂平板,经革兰氏染色镜检、血清凝集试验、VITEK 2Compact微生物分析仪以及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测后,再用PCR技术检测猪链球菌种特异性基因(16S rRNA)和猪链球菌2型特异性荚膜多糖编码基因(cps2J)以及多个毒力基因:溶菌酶释放相关蛋白(mrp)、溶血素(sly)、细胞外蛋白因子(ef)、谷氨酸脱氢酶(gdh)、纤粘连蛋白结合蛋白(fbps)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh)的编码基因和毒力相关基因orf2。结果传统细菌鉴定方法和蛋白质谱技术以及核酸检测方法将这株患者血源性细菌分离株鉴定为猪链球菌2型,该菌株的毒力基因cps2J、sly、ef、gdh、fbps、gapdh和orf2的PCR检测均为阳性,mrp基因为阴性。结论该株人血源细菌分离株为猪链球菌2型sly+/ef+/mrp强毒株。

2015年北京市手足口病流行特征分析

目的对2015年北京市手足口病病例流行病学特征进行分析，为手足口病防控措施调整提供科学依据。方法利用中国疾病预防控制系统及北京市手足口病监测数据对手足口病例流行病学特征进行分析。各组间的率与构成比的比较采用卡方检验。结果2015年北京市累计报告手足口病例28677例，发病率为133．28／10^5，低于前三年的平均水平。病例发病时间主要集中在5—8月，共21325例，占全年报告病例数的74．36％。全市发病率较前一年下降40．58％。发病率前三位的区为平谷区（249．49／10^5，1171例）、顺义区（215．72／10^5，2171例）和大兴区（213．01／10^5，3259例）。发病率性别比为1．43：1（男：女）。患者以0～5岁病例居多（87．77％）。病例主要为散居儿童（53．88％）和托幼儿童（37．34％）。结论应在夏季针对人口密度大的地区中5岁及以下儿童、散居儿童等进行综合干预，以防控手足口病的传播。

北京市2013-2017年手足口病聚集性疫情流行病学特征分析

目的对2013-2017年北京市手足口病进行流行病学和病原学分析，为手足口病防控提供科学依据。方法利用北京市手足口病疫情监测数据和病原学数据对聚集性疫情做流行病学分析。结果2013-2017年共报告手足口病聚集性疫情4813起，平均每年（962．6±247．9）起。疫情报告数呈隔年升高的周期性，每年在5—7月出现高峰、9-11月出现次高峰。疫情报告数居前3位的分别为朝阳区（184．6±83．8）起、大兴区（100．8±43．7）起和丰台区（91．2±22．2）起。疫情发生场所以托幼机构为主（75．25％，3662／4813），其次为家庭内疫情（17．16％，826／4813）、学校内疫情（6．17％，297／4813）和其他场所（1．58％，76／4813）。托幼机构内的疫情罹患率（10．00％）高于学校内疫情（7．10％），差异有统计学意义（Z=10．540，P〈0．01）。疫情的肠道病毒阳性率为67．17％（3281／4813），其中CoxA16所引起的疫情构成比最高（36．39％，1194／3218），其次为其他肠道病毒（32．92％，1080／3218）、EV71（28．68％，941／3218）和CoxA6（15．57％，511／3218），有13．23％（434／3218）的疫情由2种及以上病毒混合感染所致。结论疾病预防控制部门应在夏季到来前、秋季开学初，在疫情高发地区对托幼机构和学校的学生、教师进行卫生宣教，对教学和生活环境的卫生进行指导。在疫情发生时，应尽早采集患者标本，检测病原体、确定疫情性质，以及时采取有效的控制措施、控制疫情规模。

北京市入托体检健康儿童肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型感染状况及就诊行为调查

目的：了解北京市入托儿童肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（Cox A16）感染状况及其相关的就诊率，为估算手足口病疾病负担参考。方法2013年8月20－31日对北京市东城区、朝阳区和怀柔区进行入托体检的健康儿童开展血清学调查，采用ELISA方法检测血清中EV71和Cox A16的IgG和IgM抗体。结果共调查813名儿童，平均年龄为（3.5＆#177;1.0）岁。Cox A16 IgG阳性率为61.9%，IgM阳性率为4.4%；EV71 IgG阳性率为9.3%，IgM阳性率为1.1%；各种抗体阳性率在不同性别中的分布差异无统计学意义（P＞0.05），在不同年龄组中的分布差异有统计学意义（P＜0.05）。Cox A16抗体阳性者中7.8%有皮疹，EV71抗体阳性者中10.7%有皮疹。Cox A16或EV71抗体阳性者中，仅7.1%在父母陪伴下到医院就诊，而有皮疹的抗体阳性病例中，80.5%去医院就诊。结论北京市健康入托儿童中，既往感染Cox A16的比例较大，EV71抗体阳性率明显低于Cox A16，提示托幼儿童对EV71普遍易感，应是手足口病防控重点人群。

2016年北京市疱疹性咽峡炎流行情况及病原体构成分析

目的 了解北京市疱疹性咽峡炎的流行情况及病原体构成,为该病的预防与控制提供参考.方法 收集2016年北京市15个区监测医院中首次就诊的10岁以下疱疹性咽峡炎和手足口病病例基本信息及临床表现,并采集咽拭子进行病原体检测.结果 本研究共纳入符合条件的疱疹性咽峡炎病例744例,其中5岁及以下病例占86.83%,性别比（男：女）为1.23：1;手足口病病例1935例,5岁及以下病例占88.94%,性别比为1.40：1.两类病例的标本采集高峰都集中在5—7月.疱疹性咽峡炎的发病至诊断时间间隔为（1.08±1.32）d,手足口病的发病至诊断时间间隔为（1.12±1.33）d,差异无统计学意义（t=0.614,P=0.336）.疱疹性咽峡炎和手足口病病例中发热的比例分别为67.20%和45.94%（χ^2=96.158,P〈0.001）.诊断为疱疹性咽峡炎的病例全部为轻症,而手足口病病例有21例（1.09%）发展为重症.肠道病毒核酸阳性病例分别为401例（53.90%）和1362例（70.39%）（χ^2=64.640,P〈0.001）.疱疹性咽峡炎的病原体主要为其他肠道病毒（62.59%）,而手足口病的病原体主要为CA16（44.93%）.结论 疱疹性咽峡炎与手足口病发病人群近似,均为5岁以下的儿童,男性略高于女性,发病高峰均为5—7月.引起两者发病的病原体构成不同,临床症状也有所区别,疱疹性咽峡炎的预后较好.EV71、CA16、CA6和其他肠道病毒等都可引起疱疹性咽峡炎和手足口病,所以应重视疱疹性咽峡炎,并参考手足口病进行病例隔离和环境消毒.

北京市2014年手足口病流行病学特征分析

目的 对2014年北京市手足口病进行流行病学和病原学分析,为北京市手足口病防控提供科学依据.方法 利用中国疾病预防控制信息系统及北京市手足口病监测数据对手足口病进行流行病学分析.各组间的率与构成比的比较采用卡方检验.结果 2014年共报告手足口病病例47 440例,发病率为224.32/105,达到2008年以来报告病例数最高峰.病例发病时间集中在4-7月,共35 126例,占全年报告病例数的74.04％.全市发病率较前一年上升37.43％.发病率居前三位的区县为大兴区（405.75/105,6 100例）、通州区（355.60/105,4 544例）和顺义区（306.56/105,2895例）.发病率性别比为1.35∶1（男∶女）.患者以0～5岁病例居多（88.47％）.病例主要为托幼儿童（42.09％）与散居儿童（50.00％）.结论 在北京市夏季流动人口较多地区,5岁及以下儿童为手足口病高危人群,应针对该人群采取综合防治措施,降低手足口病发病率.

北京市2011-2015年手足口病经济负担的探索性研究

目的估算北京市因手足口病造成的经济负担。方法利用北京市2011-2015年手足口病监测报告的轻症病例数、重症病例数和死亡病例数，结合既往文献发表的不同类型病例因手足口病而造成的人均经济损失，采用乘法模型，估算每年北京市因手足口病而导致的经济损失。结果2011-2015年，平均每年因手足口病而导致的经济损失合计为5014．3万元，其中直接损失为2829．0万元，间接损失为2185．2万元。轻症病例造成的经济损失为1341．3元／例，其中直接成本为739．8元／例，间接成本为601．5元／例；重症／死亡病例造成的经济损失为12023．7元／例，其中直接成本为9928．1元／例，间接成本为2095．6元／例。结论手足口病对家庭和社会的经济负担均较重，不容忽视，应探索合适的免疫策略和医疗保险策略，以降低其对家庭和社会的经济负担。

北京地区不同人群柯萨奇病毒A16型和肠道病毒71型感染状况调查

目的了解北京地区不同人群柯萨奇病毒A16型（coxsachievirus A16,Cox A16）和肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）感染状况。方法 2012年对北京9区进行整群随机抽样,采集血样,开展血清流行病学调查。用酶联免疫吸附实验检测血清中抗Cox A16和抗EV71免疫球蛋白G（immunoglobulin G,Ig G）和免疫球蛋白M（immunoglobulin M,Ig M）抗体。结果 2 140名被研究人群中,抗EV71 Ig G和Ig M阳性率分别为27.0%和1.6%,抗Cox A16 Ig G和Ig M的阳性率分别为48.5%和4.2%,抗EV71 Ig M与抗Cox A16 Ig M同时阳性阳性率为0.7%,抗EV71 Ig G与抗Cox A16 Ig G同时阳性阳性率为17.2%。各年龄组抗EV71 Ig M、Ig G阳性率、抗Cox A16 Ig M、Ig G阳性率、抗EV71 Ig M和抗Cox A16 Ig M同时阳性的阳性率、抗EV71 Ig G和抗Cox A16 Ig G同时阳性阳性率差异均有统计学意义（均有P〈0.05）。1~岁组抗EV71 Ig M阳性率最高,5~岁组抗Cox A16 Ig M阳性率最高,10~岁组抗EV71Ig G和20~岁组抗Cox A16 Ig G阳性率最高。女性抗Cox A16 Ig G阳性率高于男性。结论低龄组儿童是手足口病防控的重点人群,手足口病防控措施制定应考虑地域分布因素。

牡蛎中诺如病毒检测的前处理方法比较及应用

目的 对牡蛎中诺如病毒检测的三种前处理方法进行比较并探讨应用策略.方法 2014年8月-2015年3月采集160只市售牡蛎,每组5只,共32组样品,取其肠腺组织采用直接处理法（M1）、PEG 8000沉淀法（M2）和蛋白酶K消化-PEG 8000沉淀法（M3）三种方法进行前处理,提取核酸后荧光定量RT-PCR检测诺如病毒核酸.应用串并联法对三种前处理方法的样品阳性率进行分析,利用x2检验比较不同方法的阳性率差异,应用一致性检验比较不同方法的一致性,对荧光RT-PCR所得到的Ct值进行ANOVA检验.结果 M1、M2、M3三种前处理方法诺如病毒阳性率依次为15.63％（5/32）、34.38％ （11/32）和37.50％ （12/32）;M1/M2/M3并联使用的阳性率最高,为50.00％ （16/32）;其次为M2/M3并联法,阳性率为46.88％ （15/32）;M1＋ M3串联或M1＋ M2＋ M3串联的阳性率最低,均为9.38％ （3/32）.M2/M3与M1/M2/M3的阳性率经x2检验比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,两种方法经一致性检验,kappa=0.931（P＜0.05）,一致性较高.M1、M2、M3三种方法检测阳性样品的Ct值依次为33.44±0.66、33.70±1.88和33.42±2.44.经ANOVA检验,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 常规监测时推荐使用M2或M3,暴发疫情溯源时可考虑使用M2/M3并联法.

SARIMA模型在北京市手足口病发病预测中的应用

目的探讨应用时间序列SARIMA模型预测北京市手足口病发病情况。方法利用中国疾病预防控制信息系统中北京市2010年至2017年手足口病报告发病率资料，使用SPSS19．0统计软件建立SARIMA模型，对2018年的发病率进行外推预测。结果北京市手足口病每年4月至8月为发病高峰，9月至10月为次高峰，2010年至2017年的年均报告发病率为166．83／10万。SARIMA（1，0，1）（0，1，1），：模型能较好地拟合既往时间段手足口病发病率，平稳R2为0．705，MAPE为33．217，BIC为2．862，Ljung—Box检验显示残差为白噪声。应用此模型预计2018年手足口病总发病率为120．19／10万，高于2017年，尤其是4月至8月的发病高峰，较2017年同期有明显升高。结论SARIMA模型能较好地拟合北京市手足口病发病率数据，可为提前制定防控策略提供科学依据。

北京市市售带壳牡蛎致病性弧菌污染状况调查

目的 了解北京市市售带壳牡蛎致病性弧菌污染状况。方法 2014年2~11月每月在某水产品批发市场的摊位抽样200只带壳牡蛎,共80份样品（其中腮和肠样品分别为40份）。用常规培养方法检测牡蛎腮和肠（含便）中致病性弧菌,对副溶血性弧菌进行血清学分型,荧光定量PCR检测副溶血性弧菌毒力基因tdh、trh和tlh。结果 80份牡蛎样品中,致病性弧菌阳性样品检出率为62.50%（50/80）,副溶血性弧菌阳性菌株检出率为33.75%（27/80）,溶藻弧菌阳性菌株检出率为31.25%（25/80）;各牡蛎腮和肠样品中,致病性弧菌阳性检出率为67.50%（27/40）和57.50%（23/40）;27株副溶血性弧菌共9种血清型;毒力基因检测结果表示,tlh均为阳性,tdh和trh均为阴性。结论 北京市市售带壳牡蛎中致病性弧菌污染严重,以副溶血性弧菌和溶藻弧菌检出为主。

一种快检试剂对不同基因型诺如病毒的检测评价

目的评价一种快检试剂对不同基因型诺如病毒的检测效果。方法收集2011年4月到2015年5月诺如病毒核酸阳性的腹泻患者粪便标本101份，用荧光定量RT—PCR检测GI／GII组诺如病毒核酸。用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增衣壳蛋白区基因，测序、进化分析确定基因型。以荧光定量RT．PCR检测和基因型分型结果为参照，对德国拜发公司免疫层析法快速检测试剂（RIDA QUICKNorovirus）进行评价。结果101份标本中，荧光定量RT—PCR检测出8份GI，93份GⅡ。RIDA QUICK检出1份GI，57份GII，符合率57．4％。RIDA QUICK可检出GI．9、GII．3、GII．4、GⅡ．6、GⅡ7、GII．13、GII．17、GII．21和GⅡN，不能检出GI．2、GI．6、GI．N和GⅡ．2。RIDA QUICK对GII．4型诺如病毒的检出率较高（77．8％，28／36），但对新的GII．17变异株检出率较低（38．1％，8／21）。RIDA QUICK阳性的条带深浅度与荧光定量RT—PCR平均Ct值存在相关性（rs=-0．498）。结论RIDAQUICK能检出G11组诺如病毒的常见基因型，但对新出现的GⅡ-17变异株检出效果较差。

北京市2010-2013年急性出血性结膜炎的病原学分析

目的 确定北京市急性出血性结膜炎的病原学及流行病学特征.方法 2010-2013年7月至10月在北京地区所有区县监测点收集急性结膜炎患者眼拭子标本,通过RT-PCR分别鉴定柯萨奇病毒A24变种（CVA24v）和肠道病毒70（EV70）.分析急性出血性结膜炎的时间分布、患者性别、年龄及临床症状特征,利用系统发育树分析CA24v的VP1区、3Cpro区基因特征.结果 随机抽取的1144件急性结膜炎样本中,4.5％（52/1144）为CVA24v阳性,未检测到EV70.CVA24v相关急性出血性结膜炎在9月达到高峰.各年龄组发病差异有统计学意义,10-19岁年龄组发病率最高.CA24v和非CA24v急性结膜炎的症状构成比无统计学差异.北京市2007-2012年分离的CA24v株VP1、3Cpro的核苷酸序列同源性分别为95.2％-100％和92.8％-100％.结论 2010-2013年CVA24v是引起北京市急性出血性结膜炎的最主要病原体.

基于肠道病毒A71型基因组研究其毒力相关位点

目的基于肠道病毒A71型（EV-A71）基因组探索研究其毒力相关位点。方法计算来源于轻症、死亡病例的EV-A71各段基因的遗传距离，分析基因同源性；对轻症、死亡病例来源的EV-A71的5′UTR区核苷酸、结构蛋白编码区和非结构蛋白编码区氨基酸进行比对，分析与EV-A71毒力相关的位点。结果来源于轻症和死亡病例的2株EV-A71均属C4a基因型，基因组同源性为96.2%～97.5%、5′UTR的第ⅴ结构域核苷酸相同，结构一致；结合从GenBank上下载的C4a型EV-A71的全基因组序列开展分析，结果显示在EV-A71蛋白编码区共发现4个氨基酸位点与病毒毒力相关，是潜在毒力位点，分别为非结构蛋白编码区的2 A区R68M、2C区K41R、3 A区T/V47A及3C区I158V。结论死亡病例和轻症病例来源的EV-A71非结构蛋白编码区部分氨基酸位点的变异可能与病毒毒力相关。

不同类型样本对黄热病实验室检测的意义

目的探讨不同类型的样本对黄热病实验室检测的意义。方法采用实时荧光RT-PCR法检测5例黄热病病例不同时间采集的不同类型样本中黄热病毒的核酸。 结果5例病例中，1例患者在病程≤6 d时采集的样本中，仅在血清中检测到病毒核酸；另外4例患者在病程≥6 d时采集的样本中，仅在尿液中检测到病毒核酸。 结论黄热病感染早期，病毒核酸检测为快速灵敏的实验室检测方法，血清样本为病毒核酸检测的适宜临床样本，随着病程的推移，尿液样本逐渐成为病毒核酸检测的适宜临床样本。

黄热病毒实验诊断过程中的风险及其控制

目的将黄热病毒实验诊断过程中的生物安全和生物安保风险降到最低。方法识别可疑黄热病病例样本在检测前、检测中及检测后的生物危害风险,依据风险分析和评估结果制定并采取风险防控措施。结果在检测前进行风险识别和分析,优化病原检测所需场所、仪器、材料及人员,确定操作规程及人员防护措施;对检测中样本开启、处理、分装、暂存及检测后废弃物处理、实验环境消毒、样本保藏及上送等各阶段开展风险识别及风险再评估,持续优化、完善防控措施。结论本研究为黄热病及其他蚊媒传播传染病的风险评估和应对措施制定提供了参考和依据。

北京某幼儿园一起集中发热疫情的病原学分析

目的 对北京市某幼儿园集中发热疫情中的病例进行病因研究,分析其病原学特征.方法 采集该幼儿园13位发热患者的咽拭子标本,利用RT-PCR扩增肠道病毒VP1区基因序列,测序分析病原分子特征.结果 8名病例为肠道病毒核酸通用阳性,测序分析发现其中3名病例为CoxA4病原体阳性.其他5名病例为肠道病毒核酸通用引物扩增阴性.结论 引起此次集中发热疫情的病原体主要为肠道病毒CoxA4,分析VP1区序列它们为同一基因型病原,分别与中国北京2012年序列KJ818321、中国深圳2009年序列HQ728260,还有中国上海2010年序列KJ541164高度一致.