骨髓间充质干细胞外泌体调节哮喘小鼠Foxp3^＋ Treg/Th17的平衡

背景:Th1/Th2失衡是哮喘的基本的病理生理表现,但近来的研究表明哮喘还与调节T细胞(Foxp3^+Treg)/Th17的失衡有关。许多研究表明间充质干细胞的免疫调节作用与其分泌的外泌体相关。目的:观察骨髓间充质干细胞外泌体注射对哮喘小鼠气道炎症及Foxp3^+Treg细胞、Th17细胞及支气管肺泡灌洗液中细胞因子的影响。方法:将27只SPF级BALB/c小鼠分为3组:正常对照组、哮喘模型组、外泌体处理组。除正常对照组外,其他两组以卵白蛋白致敏和激发的方法建立哮喘动物模型,外泌体处理组在第21天激发的同时尾静脉注射外泌体。最后1次激发后24 h,检测各组小鼠脾中Foxp3^+Treg及Th17占淋巴细胞的比例,检测Foxp3^+Treg中CTLA-4及PD-1表达,检测CD4^+T细胞中p27^(kip1)表达,支气管肺泡灌洗液中炎症细胞总数及分类计数,肺泡灌洗液中白细胞介素4,5,13,10,17及干扰素γ表达,并进行肺组织病理观察。结果与结论:(1)小鼠脾组织中Foxp3^+Treg占淋巴细胞比例及Foxp3^+Treg上CTLA-4和PD-1表达:外泌体处理组高于哮喘模型组(P<0.01);(2)脾组织中Th17细胞占淋巴细胞的比例:哮喘模型组>外泌体处理组>正常对照组(P<0.01);(3)支气管肺泡灌洗液中炎症细胞总数及分类计数:外泌体处理组炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞计数,单核巨噬细胞计数显著低于哮喘模型组(P<0.01);(4)肺组织病理变化:正常对照组气道无明显炎症细胞浸润,哮喘模型组气道炎症显著,外泌体组气道炎症明显减轻;(5)支气管肺泡灌洗液中细胞因子水平检测:与哮喘模型组相比,外泌体处理组白细胞介素13和Th17相关的白细胞介素17水平降低(P<0.05,P<0.01),Foxp3^+Treg相关的白细胞介素10水平升高(P<0.01);(6)CD4^+T细胞中p27^(kip1)的表达:外泌体处理组p27^(kip1)的表达高于哮喘模型组;(7)结果表明:骨髓间充质干细胞外泌体可以抑制哮喘小鼠气道炎症反应,逆转哮喘小鼠Foxp3^+Treg/Th17失衡。

间充质干细胞对去除CD4^+CD25^+调节性T细胞哮喘小鼠气道炎症的影响

背景:间充质干细胞具有免疫调节作用,可抑制哮喘小鼠气道炎症,但其机制尚不明确。前期研究表明,间充质干细胞可上调哮喘小鼠外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞(Treg)。目的:观察骨髓间充质干细胞移植对去除CD4^+CD25^+Treg哮喘小鼠气道炎症的影响。方法:将40只BALB/c小鼠随机分为5组:正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、去除Treg细胞哮喘模型组(C组)、MSCs处理组(D组)、去除Treg细胞哮喘模型MSCs处理组(E组)。除A组外,其余各组以卵白蛋白致敏和激发的方法建立哮喘动物模型;C组和E组在激发前1 d及激发实验第3天经尾静脉注射大鼠抗小鼠CD25^+单克隆抗体,以去除CD4^+CD25^+Treg;D组、E组于诱导哮喘的第10天尾静脉注射0.2 mL骨髓间充质干细胞(1×109 L-1)。最后1次激发后24 h,检测各组小鼠外周血CD4^+CD25^+Treg占淋巴细胞的比例,支气管肺泡灌洗液中炎症细胞总数及分类计数,并进行肺组织病理观察。结果与结论:(1)外周血CD4^+CD25^+Treg占淋巴细胞比例:B组、D组低于A组(P<0.01),D组高于B组(P<0.01);(2)支气管肺泡灌洗液中炎症细胞计数:B组﹑C组﹑D组炎症细胞总数﹑嗜酸性粒细胞计数均显著高于A组(P<0.01),C组炎症细胞总数﹑嗜酸性粒细胞计数显著高于B组(P<0.01),D组炎症细胞总数、酸性粒细胞计数显著低于B组(P<0.01),E组炎症细胞总数﹑嗜酸性粒细胞计数显著低于C组(P<0.01);(3)肺组织病理:间充质干细胞可显著抑制哮喘小鼠气道炎症;去除Treg细胞可加重哮喘小鼠气道炎症,但间充质干细胞仍能显著抑制去除外周血CD4^+CD25^+Treg哮喘小鼠的气道炎症;(4)结果表明:间充质干细胞可显著抑制去除CD4^+CD25^+Treg哮喘小鼠的气道炎症反应。

Caveolin-3在白藜芦醇改善高脂诱导骨骼肌胰岛素抵抗中的作用

【目的】在高脂诱导的胰岛素抵抗大鼠模型上,探讨微囊蛋白3(CAV-3)在白藜芦醇改善骨骼肌胰岛素抵抗中的作用及机制。【方法】实验大鼠分3组:正常饮食组(NORM),高脂饮食组(HFD),高脂饮食加白藜芦醇干预组(HFD+RSV)。通过空腹血糖、胰岛素浓度、计算胰岛素敏感指数、腹腔葡萄糖耐量试验以及2-脱氧-[3H]葡萄糖的摄取,从整体上探讨白藜芦醇对胰岛素抵抗的保护作用。再通过免疫印迹检验微囊蛋白3(CAV-3)与葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)在以上过程中的表达情况。【结果】HFD能显著诱导胰岛素抵抗,补充RSV能抑制高脂的诱导作用。离体骨骼肌实验证实,RSV的保护作用与其促进胰岛素诱导的葡萄糖摄取有关。免疫印迹证实RSV能够增加骨骼肌CAV-3蛋白表达,促进GLUT4向细胞膜的转运。【结论】白藜芦醇能改善高脂诱导的胰岛素抵抗,其保护作用与其上调CAV-3蛋白表达,促进GLUT4向细胞膜转运,改善骨骼肌葡萄糖的摄取有关。

头孢哌酮舒巴坦致肾功能不全患者维生素K缺乏性严重凝血障碍

目的:分析头孢哌酮舒巴坦诱发凝血障碍的高危因素及应对策略。方法:分析总结使用头孢哌酮舒巴坦后出现维生素K缺乏性严重凝血障碍的病例特点。结果:52例中有4例(7.7%)发生了显著凝血障碍。4例患者的中位年龄为68岁,基线肾功能不全,使用头孢哌酮舒巴坦至出现凝血异常或出血的中位时间为10.5 d,出血表现包括皮下出血、消化道出血、血尿、可疑颅内出血等。Naranjo药物不良反应评分中位得分4.5分。高龄、肾功能不全、低白蛋白血症、合并用药复杂、进食不足是高危因素。维生素K依赖的凝血因子活性显著低下,及时补充维生素K1及凝血因子有效纠正凝血异常。结论:头孢哌酮舒巴坦可诱发肾功能不全患者维生素K缺乏性严重凝血障碍并导致致命性出血。临床使用应个体化,加强对出血症状、凝血功能及头孢哌酮血药浓度的监测,必要时补充维生素K1及凝血因子。