2020~2022年度上海及其他省市临床实验室HPV6与HPV11型核酸检测室间质量评价结果分析

目的 通过开展人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)6型、11型核酸检测室间质量评价(external quality assessment,EQA)计划,来评估实验室检测能力,分析其存在问题,提高检测质量。方法 EQA计划一年两次,样本盘含阳性样本4支,包括HPV6,HPV11强阳性、弱阳性各1支,由具有尖锐湿疣(condyloma acuminata,CA)临床表现,HPV6或HPV11阳性患者的宫颈分泌物(上海市第一妇婴保健院提供)制成。阴性样本1支,由C-33A细胞株(中科院购入)培养制成。样本冷链寄送至各参评实验室,要求其在规定时间内检测并上传结果。上海市临床检验中心(以下简称中心)依据回报结果计算各实验室的成绩。结果 6轮EQA活动共计发出样本盘163份,收到有效报告140份。实验室合格率96.43%(135/140),样本符合率97.86%(685/700)。假阴性13个,假阳性2个,弱阳性样本占假阴性结果的76.92%(10/13)。结论 实验室HPV6/11型核酸检测准确率比较高,个别实验室弱阳性样本的检出能力有待提高,通过参加EQA计划可及时发现问题并提高检测质量。

上海市及其他地区临床实验室B族链球菌核酸检测室间质量评价分析

目的通过开展B族链球菌(group B Streptococcus,GBS)核酸检测室间质量评价计划(简称室间质评),评价参评实验室检测能力,分析存在的问题,提高检测质量。方法2021年GBS核酸检测室间质评计划为一年两次,每次质评计划样本盘包含4支由灭活的GBS培养液稀释而成的不同浓度阳性样本和1支阴性样本。样本冷链寄送至各参评实验室,并要求其在规定时间内按要求检测并回报结果,依据回报结果计算各实验室成绩,汇总不同样本的总体符合率。结果2021年两次室间质评分别有33家实验室报名参加,收到有效报告31份和32份。所有实验室室间质评成绩均合格,两次结果完全正确的实验室分别有87.10%(27/31)和96.88%(31/32),样本的总体符合率为97.42%(151/155)和99.38%(159/160)。结果汇总中共出现检测错误5例,错误类型集中表现为假阴性。结论各参评实验室GBS核酸检测能力总体较高,个别实验室检测能力尤其是弱阳性样本检测能力有待提高。通过参加室间质评计划能帮助实验室及时发现问题并持续改进以提高检测质量。

环介导等温扩增技术快速检测沙眼衣原体

目的建立一种新的简单、快速检测沙眼衣原体(CT)的环介导等温扩增(LAMP)技术。方法采用Primer Explorer V4软件,针对CT隐蔽性质粒基因保守区域设计4重引物(2重内游引物,2重外游引物),并对LAMP反应体系和反应条件进行优化,评价其敏感性和特异性,将其与实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)对临床样本的检测结果进行比较。结果建立的LAMP技术特异性高,与其他常见菌株检测无交叉反应;敏感性高(100拷贝/μL)。用建立的LAMP技术与实时荧光定量PCR对90例临床样本进行检测,检测结果为阳性40例、阴性50例,二者符合率为100%。结论成功建立了检测CT隐蔽性质粒基因的LAMP技术,为CT的快速检测提供了新的手段。

上海地区氯吡格雷药物代谢基因检测室间质量评价

目的通过开展氯吡格雷药物代谢基因——细胞色素P450 2C19(CYP2C19)*2、*3、*17位点检测室间质量评价(简称室间质评)项目,评估参评临床实验室的检测能力及存在的问题。方法 2015年2次室间质评样本盘均分为2组,每组各包含5支样本。要求参评实验室收到样本后在规定时间内检测样本并网上上报检测结果。依据回报结果计算各实验室成绩,汇总不同位点的总体符合率,并分析检测方法和试剂的符合率。结果 2015年2次室间质评分别收到16份和17份有效回报结果,成绩满分的实验室分别占93.75%和88.24%,CYP2C19*2、*3和*17检测总符合率分别为95.00%、95.00%、100.00%和98.82%、98.82%、95.00%。2次室间质评中,使用自配试剂进行检测的实验室分别占37.5%和35.3%,满分实验室占83.33%和83.33%。使用注册试剂检测实验室成绩为满分的分别占100%和90.91%。结论各实验室在CYP2C19基因各位点检测总体准确率很高,但个别实验室检测能力有待提高。临床实验室的质量控制对于保证检测结果准确性具有十分重要的作用。

上海地区表皮生长因子受体基因突变检测室间质量评价

目的分析上海地区临床实验室表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测项目室间质量评价(EQA)的总体情况,对存在问题进行分析,以确保检测质量。方法 2016年2次EQA样本盘各包含5份样本,要求各参评实验室在规定时间内将检测结果上传至上海市临床检验中心数据库。依据回报结果计算各实验室的EQA成绩和样本符合率,并汇总阳性样本和阴性样本的总体符合率。结果 2016年2次EQA分别收到25和30份有效回报结果,分别有20(80%)和26(87%)家实验室检测结果完全正确,分别有0(0%)和1(3%)家实验室EQA成绩<80分;10份样本的符合率最高为100%,最低为88%;阳性样本和阴性样本的总体符合率分别为95.76%和97.27%;复合突变漏检是样本不符合的主要原因,达50%(5/10)。结论上海地区临床实验室EGFR基因突变检测总体符合率较高,但仍存在问题,复合突变漏检是主要原因;临床实验室应加强质量控制以保证检测结果的准确性。

CYP3A5基因检测质控品制备及其应用研究

目的通过构建体外质粒DNA作为质控样品开展他克莫司代谢基因——细胞色素P450 3A5(CYP3A5)基因检测室间质量评价计划(简称室间质评),评估参评实验室检测能力及存在的问题,提高临床实验室CYP3A5基因的检测质量。方法利用基因工程技术体外构建含CYP3A5*3(rs776746)位点上、下游序列的重组质粒,筛选CYP3A5*3 AA和GG基因型分别作为野生型和突变型样品,两者等比例混合后作为杂合突变型样品,并制备质控样品盘开展室间质量评价。依据回报结果计算各实验室成绩,汇总不同样品的总体符合率,并分析不同检测方法的符合率和检测错误类型。结果体外构建的重组质粒经Sanger测序验证分别含CYP3A5*3位点野生型和突变型序列。2017年两次室间质评中成绩满分的实验室分别为93.33%(14/15)和100%(17/17)。两次室间质评中,样品检测的总体符合率分别为96%(72/75)和100%(85/85)。荧光分子杂交法检测的样品符合率均为100%; Sanger测序法检测样品符合率为90%(27/30)和100%(40/40)。结论制备的质控样品能够有效监测试剂检测性能,具有良好的适用性。各实验室在CYP3A5*3基因位点检测总体准确率较高,但个别实验室检测能力有待提高。室间质评计划能帮助实验室发现检测中存在的问题,提高检测质量。

上海地区遗传性耳聋基因检测室间质量评价

目的通过开展遗传性耳聋基因检测室间质量评价(EQA),评估上海地区临床实验室遗传性耳聋基因检测能力,以提高检测质量。方法 2017年EQA共涉及4个耳聋相关基因的9个突变位点,样本盘包含5个样本,样本类型为干血斑。要求参评实验室收到样本后在规定时间内检测并上报检测结果。计算各实验室成绩、不同样本的总体符合率及不同检测方法的符合率,统计检测错误类型。结果共收到18份有效回报结果。77.78%的实验室回报结果完全正确,5.56%的实验室出现错误结果但总成绩合格,16.67%的实验室成绩不合格。阴性样本(野生型样本)的检测符合率为100%,阳性样本(突变型样本)的检测符合率为93.59%。共出现检测错误10个,错误类型集中表现为假阴性。结论上海地区临床实验室遗传性耳聋基因检测总体准确率较高,质量控制对于保证检测结果的准确性具有十分重要的作用。

上海地区乙型肝炎病毒DNA检测正确度验证结果分析

目的分析上海地区2017年乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)正确度验证结果,了解上海地区HBV DNA的检测质量。方法收集临床实验室检验剩余样本,制备低、高2个浓度样本。要求临床实验室在3个不同工作日检测,每批次重复检测3次,通过网络回报结果。采用国家二级标准物质对调查样本进行赋值,分析不同试剂组的组内变异系数(CV)和偏移以及各临床实验室的室内CV和偏移。结果通过赋值,2个正确度样本的定值分别为5.96×10^3IU/mL和4.34×10^5IU/mL。2个样本不同试剂组组内CV为4.49%~8.87%和2.64%~4.55%,检测结果与靶值的偏移为-5.52%^-18.06%和-2.19%^-7.79%。2个样本室内CV为1.28%~7.59%和0.53%~4.09%;偏移为-1.88%^-26.66%和0.02%^-11.21%。2个样本的符合率分别为37.93%(11/29)和65.52%(19/29)。结论上海地区临床实验室HBV DNA检测重复性较好,但正确度水平还需改进。

乙型肝炎病毒YMDD突变室间质量评价调查品制备及应用

目的制备乙型肝炎病毒(HBV)YMDD突变室间质量评价(EQA)调查品,评估上海地区临床实验室检测HBV YMDD突变的能力。方法筛选HBV DNA>5×104 IU/ML的临床样本,经稀释制成含HBV YMDD不同突变类型的样本盘。采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)、高温连接酶反应(LDR)和测序法筛选EQA候选样本,并采用PCR评估样本均匀性和稳定性。2017年2次EQA各制备5份样本,要求参评实验室在规定时间内检测样本并上报检测结果。对回报结果进行分析。结果 2017年2次EQA分别收到12份和10份有效回报结果,66.67%的实验室检测结果完全正确。HBV YIDD、YVDD、YIDD+YVDD和YMDD不同突变样本的检测符合率分别为90.63%、86.36%、77.27%和88.24%。结论制备的调查品均匀、稳定,可用于EQA;部分临床实验室HBV YMDD突变检测能力尚需提高,应加强质量控制以保证检测结果的准确性。

上海地区临床实验室HCV RNA检测正确度验证结果分析

目的分析上海地区临床实验室2018年丙型肝炎病毒核糖核酸(HCVRNA)正确度验证结果,了解上海地区HCVRNA检测质量。方法收集临床实验室检验剩余样本,制备低、高2个浓度样本。要求临床实验室在3个不同工作日对样本分别重复检测3次,通过网络回报结果。采用国家二级标准物质对样本进行赋值,分析不同试剂组的组内变异系数(CV)和偏移以及各临床实验室的室内CV和偏移。结果通过赋值2个正确度样本的定值分别为3.02×10^4和3.39×10^5IU/ml。此次调查共有16家实验室上报结果,低、高2个浓度样本不同试剂组组内CV为0.78%~8.53%和0.94%~6.21%,检测结果与靶值的偏移为-4.69%~13.17%和-3.44%~6.51%。2个样本实验室室内CV为0.47%~8.53%和0.58%~6.21%;偏移为-0.89%~13.17%和-4.88%~6.51%。2个样本的符合率分别为87.50%(14/16)和100%(16/16)。结论上海地区大部分临床实验室HCVRNA检测重复性较好,正确度水平符合要求。

上海地区NRAS基因突变检测室间质量评价分析

目的通过开展神经母细胞瘤病毒癌基因RAS同源物(NRAS)基因突变检测室间质量评价(EQA)项目,评估上海地区实验室的检测能力及存在问题。方法选取含有特定NRAS基因突变位点的经甲醛溶液固定、石蜡包埋的细胞作为EQA标本,对其均匀性和稳定性进行评价。分别于2019年和2020年将标本随机编号后发至参评实验室,要求实验室在规定时间内检测并回报结果,上海市临床检验中心对结果进行评价分析。结果标本均匀性和稳定性均符合要求,2019年和2020年分别收到26份和24份有效回报结果,结果总体合格的实验室分别占84.62%、95.83%,结果完全正确的实验室分别占80.77%、79.17%;标本的整体符合率分别为93.08%、93.33%;在错误结果类型中,假阳性率分别为33.33%、25.00%,假阴性率分别为66.67%、75.00%。结论上海地区实验室NRAS基因突变检测能力整体较好,2020年实验室的检测能力较2019年有所提升;假阴性是主要错误类型,部分实验室检测能力尚有待提高;实验室通过参加EQA等方式加强实验室质量管理,可及时发现问题并持续改进以提高其检测能力。

MTHFR 677C／T基因检测室问调查品制备及其应用研究

目的通过构建体外质粒DNA作为质控样本开展MTHFR677基因检测室间质量评价计划（简称室间质评），评估参评实验室检测能力及存在的问题，提高临床实验室MTHFR基因检测质量。方法利用基因工程技术体外构建含有MTHFR677位点野生型？上下游序列的重组质粒，并采用定点突变技术得到该位点的突变型（T），分别作为野生型和突变型样本，两者等比例混合后作为杂合突变型样本，并制备质控样本盘开展室间质量评价。2016年和2017年室间质评计划为一年两次，样本盘包含5支样本，覆盖MTHFR 677位点各种基因型别。要求参评实验室收到样本后在规定时间内检测样本并网上上报位点基因型检测结果。4次室间质评分别收到26份、28份、52份和56份有效汇报结果。依据回报结果计算各实验室成绩，使用Microsoft Excel软件进行统计分析，汇总各样本的总体符合率，并分析不同检测方法的符合率和检测错误类型。结果体外构建的重组质粒经Sanger测序验证分别含有MTHFR 677位点野生型？和突变型（T）序列，作为质控品在4次室间质评中并无出现检测失败的样本。2016年和2017年4次室间质评中成绩满分的实验室分别为96.15%（25/26），100%（28/28），96.15%（50/52）和98.21%（55/56）。4次室间质评中，样本检测的总体符合率分别为99.23%（129/130），100%（140/140），96.92%（252/260）和98.93%（277/280）。荧光分子杂交和芯片杂交法检测的样本符合率均为100%；荧光PCR法检测的样本符合率为97.5%（39/40），100%（45/45），94.29%（66/70）和100%（95/95）；Sanger测序法样本符合率为100%（20/20），100%（15/15），90%（36/40）和92.5%（37/40）。结论本研究所制备的质控样本能够有效监测试剂检测性能，具有良好的适用性。各实验室在MTHFR 677基因位点检测总体准确率很高，但个别实验室检测能力有待提高。临床实验室的质量控制对于保证检测结果准确性具有十分重要的作用。

上海地区BRAF基因突变检测室间质量评价

目的通过开展B-rapidly accelerated fibrosarcoma(BRAF)基因突变检测项目室间质量评价(external quality assessment,EQA),分析和探讨临床实验室存在的问题,并提出改进措施。方法上海市临床检验中心(以下简称"中心")2017年发送两次EQA样品盘至45家实验室,每次均包含5份样本,要求各参评实验室在1周内将检测结果上传至中心数据库。然后,中心依据回报结果汇总各实验室EQA成绩,并计算每份检测样本的符合率。结果 2017年两次BRAF基因突变检测EQA活动分别收到42和41家实验室的有效回报结果,两次10份样本检测总符合率为76.2%~100%,其中:野生型、p.V600K、p.V600R和p.V600E样本符合率分别为99.2%(123/124份),79.8%(67/84份),87.8%(36/41份)和95.2%(119/125份)。分别有73.8%(31/42家)和75.6%(31/41家)的实验室检测结果完全正确;其中:使用注册试剂检测结果完全正确的实验室分别为79.8%(27/34家)和81.3%(26/32家),使用实验室自建方法(laboratory-developed tests,LDTs)结果完全正确的实验室分别为50%(4/8家)和55.6%(5/9家)。结论上海市临床实验室BRAF基因突变检测项目EQA总符合率较高,商品化试剂检测结果符合率高于LDTs;部分实验室检测能力有待提高,应加强BRAF基因突变检测项目质量控制,以确保检测结果的准确性。