病原微生物实验室风险应对及关注问题的探讨

生物安全作为国家安全的重要组成部分,直接关系到广大人民群众的安全和社会的稳定,确保实验室生物安全已成为社会关注焦点,高度重视实验室生物安全的理念日益深入人心。《中华人民共和国生物安全法》的颁布实施,为生物安全领域相关活动的开展提供了法律依据。虽然在实验室生物安全领域陆续出台了各项法律、法规、部门规章、规范性文件、标准等生物安全监管依据,用于指导实验室生物安全工作,但由于相关法规规章、规范性文件的宏观性、普适性特点,不会对生物安全实验室的各项活动都进行具体规定,对实践中遇到的很多具体问题也未直接给出答案,往往导致不同实验室甚至同一实验室的不同实验人员在实验活动中采取不同甚至矛盾的处理方法,实验室认可及实验活动监督评审中的不同专家针对一个问题也经常出现不同的意见。

2011～2015年吉林省食品中单增李斯特菌的监测数据分析

目的掌握吉林省市售食品中单增李斯特菌污染情况,为预防食源性疾病及保障食品安全工作提供科学研究数据。方法根据GB 4789.30-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》及《2013年国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》进行不同地区、不同类别及不同采样地点的食品中单增李斯特菌的风险监控。结果 2011~2015年在5093件11大类食品中共检出单增李斯特菌294株,总检出率为5.77%。9个监测地区中,白山、长春及四平的食品污染高于其他地区。肉与肉制品、速冻米面制品和动物性水产品的阳性检出率偏高,分别为12.43%、5.88%和5.43%。相对餐饮服务环节,流通环节污染率更高。散装与预包装食品检出率无显著性差别。结论吉林省各地区市售食品存在单增李斯特菌不同程度的污染,需要对存在高污染风险食物的生产加工、运输销售及餐饮服务多个环节加强监督监管。

长白山区莱姆病调查与实验室分析

目的 :了解长白山区莱姆病传播媒介 -全沟硬蜱的地理位置、分布及其病原携带情况。方法 :用酶联免疫吸附试验、间接免疫荧光试验检测莱姆病特异IgG抗体。 结果 :长白山区抓捕的 6 2 0只硬蜱 ,全沟硬蜱为5 93只 ,占总数的 95 .80 % ,用BSK培养基 33℃培养 ,分纯后共获得纯阳性伯氏疏螺旋体培养物 2 43株 ,用兔抗美国B31特异性多克隆抗体和针对莱姆病螺旋体种属特异单克隆抗体 ,间接免疫荧光抗体试验进行鉴定 ,证明其单克隆抗体反应与美国菌株稍有差异 ,与国内分离株M7相同。血检 82 6人 ,IgG、IgM≥ 1∶12 8(抗体滴度 )有 49例 ,阳性率为 5 .93% ;IgG、IgM≥ 1∶6 4(抗体滴度 )有 82例 ;二项合计为15 .85 %。结论 :长白山区是莱姆病重要疫源地 ,人群中有莱姆病感染存在 。

2002-2007年吉林省食品中食源性致病菌监测结果分析

目的:了解吉林省食品中沙门菌、单增李斯特菌、肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、空肠弯曲菌的污染状况,确定可能污染上述致病菌的高危食品,为食源性疾病监测提供科学依据。方法:依据国标方法,并采用显色培养基,对样品分别进行沙门菌、单增李斯特菌、EHEC O157:H7、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、空肠弯曲菌分离、生化及血清学鉴定。结果:检测生猪肉、生牛肉、生羊肉、生鸡肉、熟肉制品、动物性水产品、生食蔬菜、乳及乳制品、速冻面米食品、非发酵豆制品10类样品共2625件,检出致病菌592株,总检出率22.55%。其中单增李斯特菌检出275株,检出率最高10.48%;其次为沙门菌检出260株,检出率9.90%;金黄色葡萄球菌检出22株,检出率2.45%;副溶血弧菌检出8株,检出率2.16%;EHEC O157:H7检出27株,检出率1.03%;未检出空肠弯曲菌。10类样品中致病菌阳性率最高的为生猪肉,占48.80%;其次为生鸡肉,占46.65%;速冻面米食品,占24.15%;生牛肉,占23.72%;生羊肉,占21.98%;动物性水产品,占14.32%;生食蔬菜,占12.42%;非发酵豆制品,占12.06%;熟肉制品,占11.91%;乳及乳制品,占1.18%。结论:吉林省居民主要消费食品存在食源性致病菌污染,其中生猪肉、生鸡肉、速冻面米食品是主要受污染的食品品种。建议政府加大对动物宰杀行业及食品销售渠道的严格管理,尽量减少食源性致病菌的交叉污染,同时做好卫生知识的宣传教育工作,防止食源性疾病的发生。

吉林省耐多药结核分枝杆菌异烟肼耐药基因KatG突变特征分析

采用DNA测序技术对吉林省287株耐多药结核分枝杆菌进行KatG基因序列检测，以H37Rv标准株KatG基因DNA序列为参比序列，分析检测菌株KatG基因突变特征。结果显示，239株耐多药结核分枝杆菌KatG基因发生突变，突变率为83．28％（239／287）；共涉及13个突变位点，最常见点突变位点为KatG315，突变率为58．18％（167／287）。

应用Spoligotyping技术对吉林省结核分枝杆菌基因分型的研究

目的使用间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)对吉林省333株结核分枝杆菌临床分离株进行基因分型。方法收集吉林省内结核分枝杆菌临床分离株,应用Spoligotyping方法进行基因分型研究。基因聚类分析采用BioNumerics软件。结果共在吉林省内收集到333株结核分枝杆菌临床分离株,可分为2个基因群,即北京家族(Beijing family)或称北京基因型(Beijing genotype),非北京家族(non-Beijing family),分别占89.5%(298/333)和10.5%(35/333),29种基因型。其中22株为独特类型,余311株分为7簇。北京家族菌株中,95.0%(283/298)为典型北京家族,非北京家族菌株表现为高度的基因多态性,可分为19个基因型,16株为独特的基因型。结论吉林省结核分枝杆菌存在明显的基因多态性。

吉林省莱姆病病原学实验室研究

目的:对吉林省9个地区的媒介蜱、野鼠、家犬进行伯氏疏病原体分离与检测。方法:应用BSK培养基、直接免疫荧光抗体染色法(DFA)进行蜱、动物螺旋体培养、检测。结果:媒介蜱株螺旋体带菌率为35.80%(1278/3570)。黑线姬鼠带菌率为21.91(64/292)、褐家属18.90(31/164)、黑线仓鼠13.44(34/253),3种鼠共检测了709只,平均带菌率为15.92(107/709)。其它棕背鼠、小家鼠等110只,平均带菌率为12.73(14/110)。家犬检出率为8.46%(23/272)。结论:检验结果显示:吉林省9个地区媒介蜱带菌率均有显著性差异。动物感染率:牛山区与半山区、家犬山区与平原P值<0.05均有显著性差异。其他均无显著性差异。

含氯复方消毒剂杀灭结核杆菌效果的试验观察

采用载体定量杀菌试验，检测含二氯异氰尿酸钠、十二烷基苯磷酸钠的复方消毒剂对结核杆菌的杀灭效果。结果，以含７５０ ｍｇ／Ｌ有效氯的该复方消毒剂溶液作用１５ ｍｉｎ，或以含５００ ｍｇ／Ｌ有效氯者作用 ２０ ｍｉｎ，对布片上无有机物保护的结核杆菌的杀灭率均达 １００％。

9274份肉及肉制品食源性致病菌监测结果分析

目的了解吉林省9274份肉及肉制品食源性致病菌污染情况,为防控食源性疾病提供科学依据。方法从吉林省9个地市级行政区采集市售6类肉及肉制品样品共9274份,包括生畜肉、生禽肉、熟肉制品、调理肉制品、冷冻肉糜制品和动物血液及制品。按照国家标准方法检测10种食源性致病菌。结果全部9274份样本食源性致病菌总阳性检出率为3.9%(366/9274)。检出率最高为调理肉制品(13.0%,63/483),其次是生禽肉(5.6%,107/1900)和生畜肉(5.0%,71/1428)。检出的主要致病菌为单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌和沙门菌。生禽肉中弯曲菌检出率(7.5%,31/411)和产气荚膜梭菌检出率(3.9%,7/180)均高于沙门菌检出率(3.5%,8/231)。生禽肉、生畜肉中未检出小肠结肠炎耶尔森菌。动物血液及制品未检出单细胞增生李斯特菌、弯曲菌和小肠结肠炎耶尔森菌。冷冻肉糜制品未检出沙门氏菌。熟肉制品未检出大肠埃希氏菌O157、志贺菌和蜡样芽胞杆菌。熟肉制品各年度检出率范围为1.3%~4.4%。结论吉林省市售的肉及肉制品较长时间受到不同程度的食源性致病菌污染,存在食源性疾病发生的风险。

吉林省2011～2015年食品中蜡样芽胞杆菌污染监测数据分析

目的监测吉林省市售食品中蜡样芽胞杆菌的污染情况,为预防食源性疾病及保障食品安全工作提供科学研究数据。方法根据GB/T 4789.14-2003《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验》中的方法,对2011~2015年吉林省不同地区各流通环节的1693份样品进行蜡样芽孢杆菌检测。结果 1693份样品中,共检出蜡样芽胞杆菌557株,总检出率为32.90%。其中,2015年的阳性检出率最高。9个地区中,白山市检出率最高,达到64.48%。在各食品类别中,乳与乳制品的蜡样芽孢杆菌污染最为严重,检出率为39.45%;其次为餐饮食品和婴幼儿配方食品,其检出率分别为31.49%和31.09%。餐饮服务环节与流通环节、散装与预包装等因素对检出率无显著性影响。结论 2011~2015年吉林省食品中蜡样芽胞杆菌污染严重,相关部门应加强重视,加大监管力度,预防食源性疾病的发生。

2011～2015年吉林省食品中金黄色葡萄球菌的监测数据分析

目的了解吉林省市售食品中金黄色葡萄球菌污染现况,为食源性疾病的预防控制提供科学研究数据。方法 2011~2015年间在吉林省9个地区共采集17大类样品8203件,参照GB 4789.10-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》进行金黄色葡萄球菌的测定。结果分离金黄色葡萄球菌258株,总检出率为3.15%。2014和2015检出率显著增高。通化市、白山市、四平市阳性检出率较高,分别为5.69%、4.68%和4.42%。肉与肉制品、乳与乳制品和蛋与蛋制品三类食品检出率较高,分别为6.54%、5.77%和3.47%。餐饮服务环节与流通环节检出率无显著性差别。散装食品污染率显著高于预包装食品。结论吉林省各地区市售食品存在金黄色葡萄球菌不同程度的污染,需要对存在高污染风险食物的生产加工、运输销售及餐饮服务多个环节加强监管。

2011~2019年吉林省米面制品中食源性致病菌监测分析

目的了解2011~2019年吉林省米面制品中食源性致病菌的污染情况。方法根据《国家食源性疾病监测工作手册》对2011~2019年吉林省9个地(市)所采集到的米面制品食品样本中蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌进行检测。结果2011~2019年共检测米面制品3967份,其中阳性菌株313株,总检出率为7.89%,2015年检出率最高(14.68%)。蜡样芽孢杆菌在白山市检出率最高(44.44%),金黄色葡萄球菌在白城市检出率最高(7.89%),单增李斯特菌在白山市检出率最高(6.21%)。餐饮服务环节总阳性检出率为9.72%,流通环节总阳性检出率为5.38%。蜡样芽孢杆菌在炒的米面制品中检出率最高(43.42%),金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌均在速冻面米生制品中检出率最高,检出率分别为7.61%和14.29%。结论吉林省各地市米面食品污染的情况普遍存在,白山市最严重,但是近年来污染情况正在逐步好转。餐饮服务环节需加强管理,小吃店、零售加工店和百货商场应该给予更严格的把控。速冻米面生制品污染相对严重,需给予重视。

吉林省莱姆病病原调查和基因分型研究

目的为进一步了解吉林省莱姆病的病原学,为莱姆病的预防和控制提供科学依据。方法采用布旗法捕获蜱;采用BSKⅡ培养基对蜱进行莱姆病螺旋体的分离培养,并对分离到的病原体进行单克隆抗体鉴定及5S^23SrRNA基因间隔区PCR-RFLP分析。结果2004年从吉林省11个地区捕蜱1308只,其中全沟硬蜱1250只,占95.6%;血蜱58只,占4.4%。从全沟硬蜱中分离到7株螺旋体,经单克隆抗体鉴定均为莱姆病螺旋体。5S^23S rRNA基因间隔区PCR-RFLP基因分型结果表明,6株菌为Borrelia garinii基因型,1株菌为Borrelia afzelii基因型。结论吉林省11个地区莱姆病的主要传播媒介为全沟硬蜱,至少存在2个致病基因型,即B.garinii和B.afzelii,以B.garinii基因型为主。因此应加强这些地区莱姆病的防控工作。

吉林省野鼠家畜感染伯氏疏螺旋体的检查

目的 对 1999～ 2 0 0 2年吉林省有代表性的 5个地区野鼠、家畜进行了莱姆病感染调查。方法 采用血清流行病学和病原学研究方法 ,应用间接酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测动物血清中的IgG抗体 ,对鼠类肾脏和膀胱经研磨接种BSKⅡ培养基 ,常规 33℃培养后镜检 ,同时用直接免疫荧光抗体染色法带菌检测。结果 对野鼠、牛、马、狗、羊进行的血清学调查 ,表明其感染率分别为 :2 2 2 4 %、2 7 4 8%、16 6 7%、2 2 0 3%、16 6 6 % ;病原学培养发现 5种鼠类脏器带菌率平均分别为 :黑线姬鼠 16 35 %、黑线仓鼠 6 78%、褐家鼠 7 6 9%、小家鼠 2 2 3%、大仓鼠 6 6 7% ,从黑线姬鼠的鼠胎盘分离出一株莱姆病螺旋体。结论 实验证实莱姆病可通过野外鼠类胎盘垂直传播 ,莱姆病疫源地在吉林省广泛存在。