橡胶树CRISPR/Cas9编辑植株出现预期表型的突变阈值

本课题组前期在橡胶树原生质体中分别实现了基于CRISPR/Cas9-RNP及质粒介导的瞬时转化基因编辑,并以HbPDS基因为靶标,在橡胶树愈伤组织中实现了农杆菌介导的稳定转化基因编辑,并获得了出现白化表型的愈伤组织,但由于橡胶树愈伤诱导体胚的技术还不稳定,导致未能获得基因编辑植株。为了获得橡胶树基因编辑幼苗,本研究继续以HbPDS基因为靶标,改用橡胶树体胚为侵染受体,开展农杆菌介导的遗传转化,经潮霉素抗性筛选获得增殖的T_0代抗性体胚,通过Cas9基因分子检测共挑选出116个阳性转化体胚,通过对靶点处的测序检测发现有5个胚块发生了基因编辑,编辑效率为4.3%。通过植株再生程序,获得了2株再生植株,表型观测均是嵌合体,表现为同一编辑植株上同时存在绿色及白化叶片。同时取白化叶片和绿色叶片进行高通量测序,发现二者均已发生了基因编辑,除了1个白化叶片发生了纯合双等位突变之外,其余叶片均为嵌合突变。其中,白化叶片编辑细胞的占比介于86%~100%之间,而绿色部位编辑细胞所占比例介于66%~69%之间,说明橡胶树CRISPR/Cas9编辑植株出现预期表型的突变阈值高于69%,介于70%~85%之间,为今后创制有表型的橡胶树基因编辑幼苗提供理论指导。同时,本研究证明了T_0代转化体胚及其获得的再生植株嵌合比例太高,不宜作为植株再生的材料,为今后通过对T_0代阳性体胚进行继代获得T_1代纯合体胚,并以T_1代体胚为转化受体获得纯合基因编辑植株提供思路。本研究首次公开报道获得了橡胶树基因编辑植株,尽管是嵌合植株,但也增进了对CRISPR/Cas9在橡胶树中作用的理解,为下一步在橡胶树中改进并应用基因编辑技术奠定基础。

橡胶树不同发育时期花药愈伤生长发育对低温的响应

橡胶树花药再生体系是我国最早建立的橡胶树体胚植株再生技术体系,其产生的再生植株为自根幼态无性系,兼具实生苗生长迅速、抗逆性强和芽接苗遗传同质的优点,同时因发育时期从老态恢复至幼态,产量提升20%以上。然而每年花蕾采集期约为60d,无法全年供应由花药壁细胞脱分化形成的愈伤组织,造成依托于该材料的研究无法持续进行。本研究以橡胶树品种热研73397雄蕊为材料,研究不同发育时期的花药愈伤(0、7、14、21、28、35、42 d)在15、20℃两个低温下保存15 d其愈伤诱导和体细胞胚发生发育的情况。结果表明:15℃和20℃两个温度对低温保存后愈伤诱导、体细胞胚发生各阶段除胚性愈伤数显著低于对照组外,其余无显著影响;发育时期对低温保存后愈伤诱导、体细胞胚发生各阶段均有显著影响(P<0.05),对子叶胚形成阶段影响最大,其中21d和35d花药愈伤组织经低温保存后其子叶胚数量分别显著高于和低于对照组子叶胚(P<0.05);15℃和20℃低温保存15 d后不同发育时期花药愈伤组织与对照组相比,可延长花药初代愈伤供应时间15~60 d,初代子叶胚供应时间27~95 d。最优方案为发育时期21 d的花药愈伤在15℃低温下保存15 d,可延长花药愈伤和初代子叶胚供应60 d和60~95 d,该处理虽降低了46.61%愈伤数,但促进了子叶胚形成,子叶胚数提高了27.18%。本研究实现了橡胶树花药愈伤的短期保存,有效解决了因花期短导致遗传转化受体来源不足的困难,全年3个花季可开展实验时间由60 d延长至240 d,有助于加快橡胶树花药愈伤遗传转化体系优化研究。

正念减压疗法在临床护士职业倦怠干预中的应用——基于文献资料的研究

目的分析正念减压疗法(MBSR)在临床护士职业倦怠干预中应用的相关文献,旨在为临床护士的职业倦怠干预实践和相关研究提供有价值的参考。方法运用范围综述研究方法,全面搜索多个权威数据库,并根据纳入、排除标准筛选文献,对纳入文献进行汇总和分析。结果共纳入16篇实证文献。正念减压疗法干预包括多种实践方法,如专注呼吸的练习、全身觉知的身体扫描、深度放松的正念冥想以及身心合一的正念瑜伽等。干预的形式主要分为线下培训、线上培训及混合方式培训;正念减压干预培训的频率和时长多为8周,每周1次,1~2 h/次;结局指标包括应用效果指标、可行性指标及反馈性指标。结论正念减压疗法对改善临床护士职业倦怠具有积极作用。未来的研究应着力制订针对性、个性化的正念减压疗法干预方案,并利用现代信息技术持续优化干预措施与策略,进一步完善评价指标,同时开展更高质量的研究以验证其长期效果。

优质陈山红心杉产业化开发的探讨

陈山红心杉种质基因资源质量面临日益退化趋势。在对陈山红心杉种质资源保护、保存的同时 ,必须对其进行产业化开发 ,满足社会需求 。

化学需氧量(COD)测定法的现状及最新进展

化学需氧量（ＣＯＤ）是水质监测的一个重要参数。本文对化学需氧量的测定现状和最新进展作了简要评述。

橡胶树红根病菌具有差异化的营养需求

将分离自云南、海南两地的9株橡胶树红根病菌,分别在面粉培养基,MS培养基及二者各一半混合而成的培养基(1/2 MS)上培养,结果发现,其中7个菌株在1/2 MS上生长最佳,2个菌株在面粉培养基上生长最佳。同时,5个菌株在MS培养基上生长最慢,3个菌株在面粉培养基上生长最慢,一个菌株在1/2 MS培养基上生长较慢,这说明橡胶树红根病菌具有差异化的营养需求,而1/2 MS可以作为最有利于红根病菌生长的培养基。另外,病原菌在3种培养基上具有不同的形态特征,而且在1/2 MS培养基上最早出现黄化色变。

AgNO_3对橡胶树花药愈伤组织形态及体胚发生的影响

橡胶树的花药愈伤组织在长期继代过程中,胚性易下降甚至丧失;而AgNO_3作为乙烯活性抑制剂,被广泛应用于植物组织培养中。该研究以继代培养4 a以上的热研7-33-97花药愈伤组织为材料,在继代培养基中添加2.5 mg·L^(-1)AgNO_3预培养35 d后,观察预培养前后愈伤组织表形及其细胞形态的变化,并设计不同浓度AgNO_3及不同处理时间对其进行体胚诱导,90 d后分别统计胚状体总数和正常胚数。结果表明:浅黄色质地柔软的愈伤组织在含AgNO_3的培养基上预培养后能转变成鲜黄色易碎愈伤组织,在倒置显微镜下前者大多表现为不规则多边形,细胞内含物较稀薄;而后者则呈圆形或椭圆形,细胞内含物丰富,属于典型的胚性细胞。在体胚诱导的第1个月添加5 mg·L^(-1)AgNO_3能显著促进体胚的发生,AgNO_3浓度升至10 mg·L^(-1)时体胚发生受到抑制,且畸形胚的形成率显著增加;在含5 mg·L^(-1)AgNO_3的培养基中培养2个月以上,体胚发育明显受阻,大部分形成畸形胚。该研究结果在一定程度上恢复了橡胶树长期继代花药愈伤组织的胚性能力,并提高了其体胚发生频率,为橡胶树花药胚性愈伤组织长期继代培养过程中胚性的保持提供了参考。

内源激素对橡胶树花药体细胞胚发生的影响

以巴西橡胶树花药为外植体,对巴西橡胶树再生过程中不同类型愈伤组织的内源激素含量及比值进行测定。结果表明:过高或过低的内源激素含量和不同内源激素含量比,大多会导致橡胶树外植体在分化过程中出现非胚性愈伤和畸形胚,因此橡胶树花药体细胞胚再生过程与其内源激素密切相关。

安徽省公立医院编制周转池制度改革实践与思考——以某市级三甲公立医院为例

本文以皖北某市级三甲公立医院编制周转池改革实践为例,介绍安徽省编制周转池改革的背景、具体做法、实际效果及思考建议,以期为我国公立医院编制制度改革工作提供参考意见。

陈山红心杉材性变异及其基因资源利用的研究

比较分析了安福种源 (陈山红心杉 )同全国公选 5个优良杉木种源 (广西融水、贵州锦屏、湖南会同、福建建瓯、江西铜鼓 )的木材材性 ,得出 :在木材的纤维长度、晚材率、基本密度三方面 ,陈山红心杉与其它 5个优良种源无差异 ,材性优良 ;木材的红心比率在 6个种源间差异显著 ,其中以陈山红心杉红心比率最大 ,红心比率变异系数最小。研究了陈山红心杉材性遗传变异规律 ,认为安福陈山红心杉引种外地不会导致材性变异 ,可在杉木主产区推广应用。此外 ,在陈山红心杉基因资源利用上 。

橡胶树叶片原生质体分离条件的优化

分别以橡胶树GT1种子实生苗古铜期、变色期、淡绿期和稳定期4个不同发育阶段的叶片为材料进行原生质体的酶解分离研究,同时分析比较不同酶组合、酶解时间和甘露醇浓度等主要因素对橡胶树叶片原生质体产量和活力的影响,建立高效稳定的橡胶树叶片原生质体分离体系,为进行橡胶树外源基因瞬时表达及CRISPR基因编辑等研究快速提供高产优质的原生质体。结果表明:在同等条件下,变色期叶片的原生质体产量和活力最高,分别为14.8×10~7个/g FW和97.3%;其次为古铜期叶片,可达到8.6×10~7个/g FW和95.2%;淡绿期和稳定期叶片原生质体的产量非常低,活力也相对较低,分别仅有3.4×10~5个/g FW和89.5%、7.2×104个/g FW和80.6%。单因素实验结果表明,最适合变色期叶片原生质体分离的条件为:酶组合为2%纤维素酶+0.6%离析酶、酶解时间为6 h、甘露醇浓度为0.6 mol/L,此时橡胶树叶肉原生质体的产量可高达19.7×10~7个/g FW,活力约为97.6%。

糖尿病合并低血糖症临床分析46例

目的分析探讨糖尿病合并低血糖症的临床症状及救治措施。方法回顾性分析齐齐哈尔市北钢集团公司职工医院2007年1月至2009年12月收治的糖尿病合并低血糖症46例患者的临床资料。结果糖尿病合并低血糖症的临床表现复杂,合并多脏器病变易误诊。结论要充分认识糖尿病低血糖症的临床特点及变化规律。为防止糖尿病并发症的发生发展,应督促患者监测血糖,力求个体化用药,高度重视糖尿病低血糖症的发生。

发展商品林 首选红心杉

陈山红心杉木是江西具有地方特色的杉木优良种源,随着国家林业六大重点工程建设,对发展红心杉前景进行了预测,并提出发展红心杉商品林的措施。

低效林人工改造技术浅议

从低效林概念、类型和特征分析入手,对低效林人工改造的基本原则和技术方法进行了论证。并介绍了几种成功的改造模式。

86例慢性心力衰竭诊治体会

目的探讨慢性心力衰竭患者的病因和药物治疗效果。方法选择86例慢性心力衰竭患者临床资料进行回顾性分析。结果引起心衰的病因主要是冠心病、风湿性心瓣膜病及高血压病。经强心、利尿、扩血管等综合治疗及β受体阻滞剂和血管紧张素转换酶抑制剂的应用,明显改善22例,好转49例,总有效率为82.6%。结论慢性心力衰竭病人的主要病因为冠心病,综合治疗能有效控制心衰症状,提高患者生存质量,延长患者生命。

赣南红壤侵蚀区植被退化和恢复演替的初步研究

在对赣南典型红壤侵蚀区进行调查的基础上,结合有关资料论述了赣南红壤侵蚀区植被退化和恢复演替的基本规律,并结合退化和恢复过程提出了重建植被的措施。

PLC在交流伺服控制系统中的应用

目的为了满足工业生产对控制设备安全可靠性要求;方法通过分析PLC在自由端口模式通信方式下的工作原理,针对西门子S7-200型PLC与ACU串行通信中的难点,以利用其I/O端子采集状态信号进行天线交流控制系统应用为例;结果给出相关的程序设计流程图;结论提出一种有效可行的解决方案,获得良好的经济和运行效益。

中国上市公司独立董事制度的现状分析

通过调查,分析了上市公司独立董事制度在“二元”制组织体系中的发展现状。

糖尿病足35例诊治体会

目的探讨糖尿病足的临床治疗效果。方法 35例糖尿病足患者采用控制高血糖、扩张血管抗凝、改善血粘度、营养神经、控制感染、局部换药等治疗。结果经过上述综合治疗,痊愈出院10例(28.6%),好转出院17例(48.6%),无效4例(11.4%),放弃治疗自动出院3例(8.6%),死亡1例(2.8%)。结论加强糖尿病足相关知识教育,及时有效地控制血糖水平,预防危险因素,争取早期诊断,糖尿病足如果预防和治疗得当,大部分的糖尿病足可以通过保守治疗而愈合。

星点设计-效应面法优化显齿蛇葡萄提取工艺

目的:采用星点设计-效应面法优化显齿蛇葡萄中总黄酮、二氢杨梅素、杨梅苷、杨梅素的超声提取工艺。方法:采用单因素和星点设计进行实验,以乙醇体积分数、溶媒比、提取时间为自变量,总黄酮、二氢杨梅素、杨梅苷、杨梅素得率为因变量,对各水平进行多元线性回归及二项式拟合,通过效应面法优化工艺参数,并对预测值和实际值进行比较分析。结果:确定最优提取工艺为30倍量65%乙醇提取1次,每次30 min。结论:星点设计效应面法可用于显齿蛇葡萄提取工艺的优化,模型预测性良好,提取条件稳定,实验设计方法有较高的可靠性。