激光衍射法测定西格列他钠粒径分布

目的建立西格列他钠的粒径分布测定方法,为药物粒径测定的方法开发和质量控制提供参考。方法采用MALVERN Mastersizer 3000激光衍射粒度仪和AEROS干法进样器建立西格列他钠的粒径分布方法。背景测量持续时间7 s;样品测量持续时间7 s;遮光度0.5%~5%;样品分散气压0.4 MPa;进样速度60%;文丘里管类型为高能文丘里管;料斗间隙2.5 mm。结果3批样品粒径分布特征值d(0.1)在1.02~1.17μm,d(0.5)在5.94~6.69μm,d(0.9)在20.70~22.40μm,平均标准偏差(RSD)均小于1%。结论建立了西格列他钠的粒度测定方法,可为其他易引湿药物的干法粒径测定方法开发提供参考。

重组人生长激素胰肽图谱分析

本文采用ＲＰ－ＨＰＬＣ法检测国内外重组人生长激素经胰蛋白酶裂解的肽片段，并与天然人生长激素对比，肽图谱分析的结果表明，重组人生长激素与其天然产物的分子结构具有同一性，国内各批产品的蛋白质一级结构具有一致性。ＨＰＬＣ胰肽图谱分析为基因工程多肽药物的质量控制提供了一种有效手段。

电位滴定法测定胰激肽释放酶活力测试条件探讨

本文用ＦＩＰ推荐的方法，以具有国际单位的参照品为标样，滴定液为０．０１ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ标准溶液，考查了以ＢＡＥＥ为底物的电位滴定法测定胰激肽释放酶活力的实验条件，通过正交试验得出直观和方差分析的结果，依据酶活力单位高、ＳＤ和ＲＳＤ％较小的原则，求出酶活力测定的最适条件是：酶反应温度为２５℃；缓冲液为０．００１５ｍｏｌ／ＬＮａ２Ｂ４Ｏ７－０．２５ｍｏｌ／ＬＮａＣＬ－２×１０（－４）ｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ，ｐＨ为８．００；反应液中酶浓度为０．４８ＩＵ／ｍｌ；底物浓度为５×１０（－３）ｍｏｌ／Ｌ；胰蛋白酶抑制剂浓度为１２５μｇ／ｍｌ。胰激肽释放酶活力测定的实验数据的相对标准偏差小于５％。

重组人胰岛素类似物的HPLC分析

目的 :探讨HPLC分析在重组人胰岛素类似物鉴别和杂质检测中的适用性。方法 :采用反相色谱柱(C18) ,以硫酸钠 -磷酸缓冲液 (0 2mol·L-1,pH 2 3)和乙腈为流动相 ,流速 0 8或 1 0mL·min-1,柱温40℃ ,检测波长 2 14nm ;用分子筛柱 (ZorbaxGF2 5 0 )以磷酸铵缓冲液 (0 1mol·L-1,pH 7 5 )和乙腈为流动相 ,流速 0 5mL·min-1,检测波长 2 14nm ;检测重组人胰岛素类似物及其酶解片段。结果 :获得胰岛素及其类似物的RP -HPLC图谱 ,肽图谱和高效体积排阻色谱 (HPSEC)图。结论 :本文方法能够有效地区别和检测胰岛素类似物及有关物质 ,为该类药物的质控提供了科学依据。

首批重组人组织纤溶酶原激活剂国家标准品的研制

目的 :建立rht-PA效价测定用国家标准品。方法 :用UV法测定蛋白含量 ;HPSEC法分析纯度 ;体外凝块裂解气泡上升法测定效价 ;用t-PA国际标准品 (86 /6 70 )对国家标准品的效价进行标定。结果 :标准品的效价为每支 30 0 0 0IU ,RSD =3 34% (n =10 )。结论 :建立的rht

生化药品检定用标准物质的研究现状与思考

生化药品标准物质是其质量控制体系的重要组成部分,也是当前药品质控研究的热点和重点之一。通过介绍国内外生化药品标准物质的现状,分析存在的实际问题,并对如何使生化药品标准物质满足计量的要求提出建议,为生化类药品标准物质研制的进一步科学化、规范化提供参考。

激素类药物研究现状与展望(上)

目的:阐述肽与蛋白质激素类药物的质量标准与质控,以及国内外研究进展,为肽与蛋白质激素类药物新产品的研制,老产品的质量提高提供参考。方法:阅读国内外相关的文献资料,进行整理,分析归纳和综合评价。结果:激素类药物临床主要用于治疗糖尿病,侏儒症,低血糖症,心力衰竭,骨质疏松症,高血钙症,自身免疫性疾病,以及性功能不全引起的各种病症等等。各国药典收载的肽与蛋白质激素类原料药标准有32个,制剂标准有30个。结论:提取的天然激素的质控重点是生物效价与常规安全性;化学和生物合成的激素类药物的质控重点是理化性质鉴别、纯度分析、杂质及外源污染物检查、含量测定或生物活性分析。我国的激素类药物应着眼于提高产品质量,降低生产成本,瞄准国际市场,研制和开发具有竞争力的品种。

重组人生长激素中宿主蛋白的点─免疫结合测定法

本文应用碱性磷酸酶免疫斑点法，检测重组人生长激素中Ｅ．ｃｏｌｉ蛋白质。该法的最低检出量为１．９ｎｇ；线性范围为２．５～０．０３９μｇ／ｍｌ；平均回收率为１１５．２％，ＲＳＤ＝６．９９％（ｎ＝８）。并具有灵敏、特异、操作简便等特点。

激素类药物研究现状与展望(下)

2肽与蛋白质激素类药物的临床应用 通过使用激素类药物来治疗生理或病理性的激素缺乏症早已成为现代医学的一个重要组成部分。按其对疾病的防治可分为以下几个方面。

重组人甲状旁腺激素的质量研究

目的:建立重组人甲状旁腺激素rh—PTH(1—34)的质控方法和标准规范,为质量标准的制定提供科学依据。方法:用UMR-106-01细胞株/RIA法测定人甲状旁腺激素的生物学活性,RP—HPLC法测定含量;胰酶消化及RP—HPLC法测定肽图;IEF凝胶电泳测定等电点;用质谱及还原型SDS—PAGE电泳测定相对分子质量;分别用非还原型SDS—PAGE和RPHPLC法测定样品的纯度;用ELISA法测定产品的肠激酶(EK)残留。结果:6批rh—PTH(1—34)产品原液比活性分别为:1.2×10~4,1.2×10~4,9.2×10~3,1.2×10~4,9.2×10~3,1.1×10~4IU·mg^(-1)蛋白;其蛋白含量分别为:0.734,0.685,0.597,0.970,0.960,0.920 mg·mL^(-1);6批成品效价分别为标示量的:119%,115%,95%,100%,100%,96%。RP—HPLC胰肽图显示4个肽段,6批样品图谱均一致;N-末端15个氨基酸序列与理论值一致;其等电点范围为8.0-9.0。SDS—PAGE和RP—HPLC纯度均大于95.0%。结论:建立的质控方法可有效控制重组人甲状旁腺激素rh—PTH(1—34)产品的质量。

聚乙二醇化重组人生长激素长效作用及在体生物活性研究

目的:观察聚乙二醇化重组人生长激素(PEGGH)在去脑垂体大鼠体内的(invivo)促进生长的生物活性功能和长效药理作用。方法:以摘除脑垂体的大白鼠为动物模型,PEGGHd1一次给药;rhGH(国家标准品)作为阳性对照,每天给药一次,连续6d,使总剂量与PEGGH一致。同时设模型组(去脑垂体大鼠),只给予0.1%牛血清白蛋白的生理盐水,d7处死大鼠,检测指标为:体重增加、尾长增长、胫骨骨骺板宽度和肝脏重量。结果:实验结果显示,与模型组比,PEGGH一次给药各剂量组体重显著增加(P<0.01),尾长也显著增长(P<0.01),胫骨骨骺板宽度显著增宽(P<0.01),中、高剂量组肝脏重量增加(P<0.01),并都具有量效关系;其促进动物生长的生物活性与每天给药的rhGH比没有差别(P>0.05),具有长效的作用,其中4.3、8.6IU·kg-1所至生物活性大于多次给药的普通rhGH8.6IU·kg-1效果;本批供试品测得生物效价为5.0IU·mg-1,比普通rhGH高1倍。结论:本批供试品PEGGH用药次数少、药效持续时间长,比普通rhGH具有更高的促进动物机体生长的生物活性。

RP-HPLC法测定注射用溶剂中苯甲醇含量

目的:建立反相高效液相色谱法测定苯甲醇含量。方法:用Vaydac PROTEIN&PEPTIDE C18(250 mm ×4.6 mm,5μm) 色谱柱,流动相为50%乙腈;流速为0.5 mL·min-1;柱温为40℃,检测波长为220 nm。结果:苯甲醇在0.18-2.7μg范围内呈良好的线性关系,r=0.9990,平均回收率为100.9%(n=9)。结论:本法简便、快速、准确,重复性好。

荧光光度法测定重组人生长激素注射液中聚山梨醇酯20的含量

目的:建立荧光光度法测定重组人生长激素注射液中聚山梨醇酯20的含量。方法:利用 N-苯基-1-萘胺(NPN)能摄取溶液中的聚山梨醇酯20并产生荧光,以其荧光强度与浓度正相关的特性来测定聚山梨醇酯20的含量。同时考察该方法的影响因素,确定了最佳实验条件。结果:根据影响因素与荧光强度的关系确定了35℃、0.05%NPN 浓度反应5 min 的试验条件,该法的平均仪器精密度、方法精密度和板间精密度分别为2.0%,4.0%,5.0%,平均加样回收率为102.6%。本法测定的2批生长激素注射液结果,与企业采用的方法结果一致。结论:本法快速、简便、准确,可用于测定重组人生长激素注射液中聚山梨醇酯20的含量。

重组甘精胰岛素相关杂质的结构确认及质量分析

目的结合国际通用标准,通过对甘精胰岛素主要相关杂质的定性研究和来源分析,促进国内同类产品的质量提高。方法首先将提纯冻干的杂质回加到对照品中进行液相色谱定位,继而分析HPLC肽图,结合激光辅助基质解吸附飞行时间质谱测定的分子量及肽质量指纹图谱初步定性,再以小分子电泳、N-端测序及二级质谱进一步验证。结果主要相关杂质均为甘精胰岛素的类似物,是在酶切过程中产生的副产物,即为可预期的工艺相关杂质。结论该方法可对甘精胰岛素的主要相关杂质快速、经济、准确的定性,本实验对预期杂质的来源分析可为同类产品的杂质研究提供新颖的参考思路。

重组人甲状旁腺激素效价测定方法的研究

采用酶标法、放免法、化学发光法对 rh PTH效价进行测定,并进行了比较性研究。结果表明,三种方法间无显著性差异。酶标法简单快捷、安全,更适合作为常规重组人甲状旁腺激素生物学活性的测定。

降纤酶研究进展

降纤酶(Defibrase)是从尖吻蝮蛇Agkistrodon acutus和长白山白眉蝮蛇Agkistrodon halys ussuriensis蛇毒中提取分离得到的一种类凝血酶。具有显著的去纤、降粘、溶栓等作用,广泛地应用于临床治疗和预防心脑血管血栓性疾病。对降纤酶的生化性质与结构、生产制备、药理作用与临床应用以及质量分析与控制等方面的研究进行了综述。

重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白质量标准研究

目的:建立重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白(TNHH)的质控方法和质量标准。方法:采用抗凝血酶活性试验和抗白细胞黏附试验测定活性;通过胰蛋白酶消化分析该蛋白还原型肽图;利用RP-HPLC法和SEC-HPLC法分别测定有关物质和高分子蛋白质含量;其余检测项目均按《中华人民共和国药典》2005版三部相关规定进行。结果:用建立的方法分别对一批TNHH原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和现版《中华人民共和国药典》的要求。结论:建立的质控方法可有效地控制TNHH产品质量,并可用于TNHH原液及成品的常规检定。

快速液相色谱在重组人胰岛素肽图分析中的应用

目的:探讨快速 HPLC 分析方法在重组人胰岛素肽图测定中的应用。方法:采用 Shimadzu Pack XR—ODS(3.0 mm×75mm,2.2 μm)色谱柱;流动相 A 为0.2 mol·L^(-1)硫酸盐缓冲液(pH 2.3)-乙腈(90:10),流动相 B 为乙腈-水(50:50),进行梯度洗脱。检测波长为214 nm;柱温50℃;流速0.8 mL·min^(-1)。结果:人胰岛素酶解样品的各个片段能够很好地分离,分析时间显著缩短。结论:本法简便、快速,经济,灵敏度高。可应用于重组人胰岛素肽图的测定。

重组促胰岛素分泌素生物学活性测定方法的研究

目的:建立重组促胰岛素分泌素生物活性测定方法,并对工作参考品进行效价标定。方法:体外细胞测定法—酶标法。结果:经统计学验证,回归方程的相关系数 r 的检验结果具有显著性意义,FL(AU·mL^(-1))为3546～4576;实验重现性较好,符合生物制品质量控制分析技术的要求;重组促胰岛素分泌素生物活性工作参考品效价为4000 AU·mL^(-1),待检样品成品效价为标示量的102.5%;原液效价为3.9×10~5AU·mL^(-1)。结论:该标定结果可靠,方法简单快捷、安全,可作为常规重组促胰岛素分泌素生物学活性测定的方法。