基于非靶向代谢组学和肠道菌群探究经典名方泻白散对过敏性哮喘大鼠的保护作用

目的本研究拟从宿主-肠道菌群-代谢的角度探讨泻白散保护过敏性哮喘大鼠可能的微观机制。方法将SPF级SD大鼠分为正常对照组(NC组)、过敏性哮喘模型组(M组)和泻白散组(Xiebaisan组)。通过卵清白蛋白(OVA)诱导建立大鼠过敏性哮喘模型;HE染色观察大鼠肺组织病理学变化;取结肠内容物进行16S rDNA高通量测序,观察肠道菌群结构与功能的变化;采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱法(UHPLC-Q-TOF/MS)分别进行血清样本和肺组织样本非靶向代谢组学检测。结果HE染色显示:与NC组相比,Xiebaisan组可以在一定程度上改善哮喘大鼠肺部组织形态结构;16S rDNA高通量测序结果显示:M组肠道菌群多样性降低,与M组相比,Xiebaisan组肠道菌群多样性增加,肠道微生态得以改善;血清非靶向代谢组学检测结果显示:Xiebaisan组能够调节氨基酸代谢、mTOR等通路,且部分回调M组引起的差异代谢物表达;肺组织样本非靶向代谢组学检测结果显示,Xiebaisan组能够调节碳代谢、血管平滑肌收缩信号通路和cAMP等信号通路,且部分回调M组引起的差异代谢物表达。结论泻白散可能通过改善肺组织形态结构、肠道菌群的多样性以及调控mTOR通路、血管平滑肌收缩信号通路和cAMP等信号通路影响氨基酸代谢、碳代谢等途径发挥对过敏性哮喘大鼠的保护作用。

复方丹皮酚纳米乳对A549裸鼠移植瘤生长的影响

目的研究复方丹皮酚纳米乳对人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法建立A549细胞裸鼠移植瘤模型,将小鼠随机分为模型组,康莱特注射液组(1400 mg/kg),复方丹皮酚纳米乳低、中、高剂量组(48、96、192 mg/kg)。从给药当天开始,每5 d测量移植瘤最长径和最短径,计算肿瘤体积,绘制生长曲线。给药结束后取肿瘤组织,HE染色观察其细胞形态变化,免疫组化法检测Bax、Bcl-2、COX-2蛋白表达。结果与模型组比较,复方丹皮酚纳米乳高剂量组能抑制肿瘤体积的增长;中、高剂量组肿瘤细胞核分裂相减少,细胞坏死和凋亡增多,Bax蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-2、COX-2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论复方丹皮酚纳米乳能促进A549裸鼠移植瘤细胞坏死和凋亡,抑制细胞生长,其作用机制可能是促进Bax蛋白表达,抑制COX-2、Bcl-2蛋白表达。

基于肠道菌群和短链脂肪酸代谢探讨不同饮食条件下高脂血症大鼠发病机制

目的 本研究拟对比两种不同高脂饮食方式诱导的高脂血症大鼠肠道菌群变化与短链脂肪酸代谢特征,以宿主-肠道菌群-代谢角度探讨高脂血症可能的微观机制。方法 SPF级SD大鼠分为:正常饮食组(CG组):饲喂大鼠维持饲料;高脂饮食组(HFD1组):每天足量饲喂高脂饲料;限饲高脂饮食组(HFD2组):每天限量饲喂高脂饲料80 g,不限量饲喂维持饲料。8周后检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肝组织和肾周脂肪病理学变化;取结肠内容物进行16S rDNA高通量测序,观察肠道菌群结构与功能的变化,并检测结肠内容物中短链脂肪酸的含量。结果 与CG组相比,HFD1组和HFD2组大鼠摄食量下降,体重升高;血清中TC、TG、LDL-C均显著升高;肝组织发生明显脂肪变性,肾周脂肪出现炎性病变;高脂干预后大鼠肠道菌群相对丰度显著变化,其中乳杆菌属相对丰度明显降低,菌群结构和功能变化明显,总短链脂肪酸、乙酸、丁酸、异丁酸下降显著。结论 两种高脂饮食方式均能引起大鼠高脂血症,且发病机制基本一致,均与脂质代谢以及肠道菌群紊乱有关。每日限制一定的高脂饲料饲喂量不仅能够降低高脂饲料对大鼠食欲的影响,还能提高大鼠高脂血症模型制备的稳定性,是一种值得推广应用的大鼠高脂模型制备方法。

温通贴处方工艺优化及其体外透皮特性研究

目的:优化温通贴处方工艺,并考察其体外透皮特性。方法:在Plackett-Burman设计基础上,以聚丙烯酸钠-700(NP-700)、甘油、甘羟铝用量为影响因素,巴布膏外观性状、初黏力、持黏力、剥离强度为关键质量属性,Box-Behnken响应面法优化处方工艺,获得温通贴基质处方设计空间。采用改良Franz扩散池法,以延胡索乙素等5种药效成分累积渗透量为指标,考察不同用量氮酮对温通贴体外透皮的影响。结果:关键工艺参数的操作空间为:NP-700用量4.5~4.7 g,甘油用量32.00~35.33 g,甘羟铝用量0.386~0.434 g。以氮酮为透皮促渗剂可显著提高延胡索乙素等5种药效成分的体外透皮速率,且3%氮酮的促透作用优于5%氮酮。结论:基于“质量源于设计”理念建立的温通贴巴布剂处方工艺设计空间可降低产品质量可变性,有利于实际生产。温通贴药效成分体外透皮速度平缓恒定,具有骨架型缓释制剂的特性,便于减少给药次数。氮酮可作为温通贴促透剂,加速药效成分透皮吸收。

临床病死犬细菌分离鉴定及耐药性分析

为更全面地掌握犬源细菌的流行及抗生素耐药情况,本试验对2012-2015年采集自某规模化养殖场的60余份病死犬样本进行细菌分离鉴定,并参考CLSI推荐的纸片扩散法检测了部分分离菌对21种抗菌药物的敏感性。结果显示,3年共计分离鉴定出28株病原菌和条件致病菌,混合感染为犬细菌感染的主要形式;分离菌普遍呈多重耐药,以大肠杆菌耐药性最为严重。犬的细菌感染应在临床引起足够的重视,临床治疗应合理有效用药。

淋必通颗粒对慢性非细菌性前列腺炎大鼠的影响

目的 研究淋必通颗粒对慢性非细菌性前列腺炎大鼠的影响。方法 64只大鼠随机取12只作为假手术组,其余52只采用前列腺背叶注射消痔灵方法建立慢性非细菌性前列腺炎模型,造模成功后随机分为模型组、普乐安片组及淋必通颗粒低、中、高剂量组。1个月后,检测大鼠体质量、前列腺质量,ELISA法检测前列腺组织IL-6、IL-10水平,HE染色观察前列腺组织的病理形态学变化。结果 与模型组比较,淋必通颗粒中、高剂量组及普乐安片组大鼠前列腺指数、IL-6水平降低(P<0.05,P<0.01),IL-10水平升高(P<0.05),大鼠前列腺组织无菌性炎症病变程度明显改善。结论 淋必通颗粒能有效改善慢性非细菌性前列腺炎大鼠前列腺损伤,其机制可能与降低IL-6水平、升高IL-10水平有关。

犬链球菌和犬源巴氏链球菌的分离鉴定

为确诊4例送检的表现为咳嗽吐血、猝死犬的病因,采集严重病变的肺脏通过PCR检测犬细小病毒、犬瘟热、犬副流感病毒以及犬腺病毒4种常见病毒;并进行细菌分离,对分离菌进行形态特征观察、染色镜检、生化试验、药敏试验以及16S rRNA基因序列分析。结果显示:病毒检测结果均为阴性,分离到2株犬链球菌及2株巴氏链球菌,2种细菌通过小鼠分别进行人工发病试验,复制出与病死犬相似的病理变化,且从小鼠体内再次分离到这2种细菌,由此确定犬链球菌和巴氏链球菌分离物均为致病菌。养殖场结合药敏试验成功对该病进行了控制。

高效液相色谱指纹图谱评价泻白散及其3种单味药内在质量

建立高效液相色谱指纹图谱评价泻白散及其炒桑白皮、地骨皮、炙甘草3种单味药内在质量的方法。采用C_(18)色谱柱(250 nm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,柱温为30℃,流量为1 mL/min,检测波长为254 nm,进样体积为5μL,分析时间为120 min,采用二级管阵列检测器进行测定,用高效液相色谱(HPLC)进行指纹图谱研究。结果表明,市售桑白皮饮片13个批次之间的相似度为0.024~0.975;市售地骨皮饮片13个批次之间的相似度为0.061~0.983,不同批次间差别较大;炙甘草饮片13个批次之间的相似度为0.978~0.998,相似度非常高。对14批泻白散组方的水煎液进行HPLC指纹图谱分析发现,有9个共有峰,可指认其中的地骨皮乙素、异甘草苷、甘草酸3个峰。该方法能够反映市售泻白散及其3种单味药的内在质量,为泻白散经典名方的质量标准制定及临床用药提供参考。

复方丹皮酚纳米乳对裸鼠体内人源肺癌A_(549)的影响

目的研究复方丹皮酚纳米乳对裸鼠体内人源肺癌A549的影响及部分机制研究。方法建立裸鼠人源肺癌A_(549)移植瘤模型,灌胃给予不同剂量的复方丹皮酚纳米乳(48、96和192 mg·kg^(-1)),观察其对A_(549)移植瘤的治疗作用,每5 d使用游标卡尺测量裸鼠移植瘤的最长径和最短径,动态观察裸鼠移植瘤的生长情况,并计算其体积,以此绘出裸鼠移植瘤生长曲线。通过酶联免疫吸附法测定血清中白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,初步探讨其作用机制。结果所有治疗组均对裸鼠A549移植瘤肿瘤体积、肿瘤体积增长率有一定的抑制作用,且随剂量的增加,抑制作用更强;与荷瘤对照组比较,复方丹皮酚纳米乳高剂量组和康莱特注射液组血清白细胞介素2表达明显升高(P<0.01、P<0.01),复方丹皮酚纳米乳中、高剂量组和康莱特注射液组肿瘤坏死因子α表达水平明显升高(P<0.05、P<0.01、P<0.01)。结论复方丹皮酚纳米乳对人源肺癌A_(549)裸鼠移植瘤具有一定的抑制作用,其作用机制可能与促进细胞因子白细胞介素2和肿瘤坏死因子α的表达有关。

泻白散大鼠体内入血成分研究

目的研究泻白散的体内入血成分。方法采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱技术进行分析。将SD大鼠随机分为空白组和给药组,每组10只。空白组大鼠灌胃水,给药组大鼠灌胃2 g/mL(以生药量计)泻白散溶液,给药体积均为11.3 mL/kg,每日2次,连续3 d。末次给药1.5 h后,各组大鼠腹主动脉取血,将血清处理后取上清液进样分析;采集正、负离子模式下的相关数据,利用自建二级质谱数据库并查阅相关文献对泻白散入血成分进行分析鉴定。结果共鉴定出17种泻白散入血成分,其中6种来源于君药桑白皮,7种来源于臣药地骨皮,12种来源于佐使药甘草,分别为地骨皮甲素、绿原酸、tachiogroside B、astringin、新甘草苷、甘草素、壬二酸、异甘草苷、glycyroside、芒柄花苷、癸二酸、parthenolide、刺芒柄花素、18β-甘草次酸、6-姜酚、棕榈酰胺、芥酸酰胺,这些化合物主要是黄酮类、生物碱类和有机酸类成分。结论本研究初步确定了泻白散的17种入血成分,这些成分与泻白散的作用相一致,可能是泻白散的药效物质。

猪6种常见病毒多重PCR检测方法的建立及应用

旨在建立一种可同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪细小病毒(PPV)和猪巨细胞病毒(PCMV)的多重PCR检测方法。参考相关文献及序列比对结果设计6对特异性引物,建立了可同时检测以上6种病毒的多重PCR方法并应用此方法对临床病例进行了检测。结果表明,所建立的多重PCR方法灵敏度高,对6种病毒的最低核酸检测量分别为12.8pg(PRRSV)、46pg(CSFV)、16pg(PRV)、23.5pg(PCV-2)、72pg(PPV)、8.6pg(PCMV),对猪流感病毒(SIV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)无特异性扩增。应用该方法对临床145份样品进行检测,总阳性率为83.45%,2种以上病毒混合感染阳性率为69.66%。说明所建立的多重PCR检测方法敏感,可用于猪群中上述6种猪病病原的单一感染或混合感染的鉴别诊断。

以青蒿素类化合物为基础的抗疟联合疗法研究进展

疟疾是一种严重危及生命的传染病,对人类生活产生着深远影响。青蒿素至今仍是世界卫生组织推荐的临床抗疟一线用药,其抗疟活性主要体现在过氧桥结构上。以青蒿素类化合物为基础的联合疗法(ACT)是多国治疗疟疾的一线方法,主要包括蒿甲醚-本芴醇、青蒿琥酯-阿莫地喹和双氢青蒿素-哌喹等。相较于青蒿素单一疗法,ACT具有缩短患者住院时间、加快寄生虫清除速度、节约经济成本等优势,但目前存在耐药性等问题。本文对近年来国内外有关ACT的应用现状及优缺点作一综述,以期为后续筛选ACT中的长效辅助抗疟药物、解决耐药性问题提供思路。

犬输血疗法与输血反应

1输血疗法国内外现状输血疗法是利用输入正常血液或血液成分进行补血、止血、解毒的有效治疗措施,在治疗一些危重病例时具有重要作用。目前,国外兽医临床上更多地利用成分血制剂替代全血制剂,不但节约了血液资源,还降低了输血风险。同时宠物血站的建设已十分完善,从供血犬的筛选、血液采集、血液制剂的制备、储存、运输直至使用都做出了详细的要求。

不同体型比格犬血清肿瘤标志物含量调查

本试验拟对大、中、小体型3个品系的健康成年比格犬血清肿瘤标志物AFP、CEA、CA125、CA153、CA199进行检测,用犬肿瘤标志物AFP、CEA、CA125、CA153、CA199 ELISA试剂盒,对97只健康成年大体型比格犬、228只中体型比格犬、63只小体型比格犬的血清进行相关肿瘤标志物浓度测定,为比格犬肿瘤模型筛选提供参考。试验结果表明,小体型比格犬血清中AFP、CA125、CA153、CEA的浓度明显低于其他两个品系犬(P<0.05);而CA199的浓度明显高于中体型比格犬(P<0.05)。大体型比格犬血清中AFP、CEA、CA125、CA153的浓度最高,小体型比格犬血清中CA199最高,推测认为大体型比格犬患消化系统和生殖系统肿瘤的风险较高,小体型比格犬患腺癌的风险较高。

10种猪常见病毒基因芯片检测方法的建立及初步应用

旨在建立一种可同步检测猪10种常见疫病病毒,猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)、猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)、猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)、猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)、猪巨细胞病毒(porcine cytomegalovirus,PCMV)和口蹄疫病毒(food-and-mouth disease virus,FMDV)的基因芯片检测技术,为临床病料的初步诊断及流行病学调查提供一个新的可靠方法。对10种病毒基因的序列进行分析,设计引物对靶基因进行PCR扩增,将纯化后的靶基因点制成芯片,通过Cy3标记特异性引物扩增病毒得到具有荧光标记的探针,然后与芯片进行杂交,扫描分析结果,建立其基因芯片检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和稳定性进行检测。应用建立的基因芯片检测方法和普通PCR/RT-PCR方法对1 006份样品进行符合检测。试验结果表明,基因芯片检测10种病毒特异性好、灵敏度高,最低检测限度可达10^(5 )copies·μL^(-1),检测中,基因芯片与普通PCR/RT-PCR对1 006份临床样品的检测符合率为96.79%以上。初步研究表明,该基因芯片技术可同时同步检测10种猪疫病病毒,可应用于临床病料的初步诊断。

无菌接产培育SPF级比格犬

为了培育无特定病原(SPF)级比格犬,通过无菌接产加隔离饲养的方式对SPF级比格犬培育条件进行探索,分3批次共选择24只遗传背景明确、无不良生产记录、经检测不携带特定病原的种母犬进行配种。在预产期前5天将母犬全身消毒并转移至屏障环境中,无菌接产后立即将仔犬转移至无菌隔离器中饲养。用全价配方奶粉及高压灭菌后的全价颗粒犬粮饲喂仔犬。对国标规定的15种病原及犬冠状病毒、犬疱疹病毒、犬副流感病毒、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、绿脓杆菌、肺炎链球菌、支气管败血波氏杆菌,共24种病原进行检测。结果显示,无菌接产共获得仔犬141只,1月龄仔犬成活率90.78%,24种病原检测结果均为阴性。结果表明通过无菌接产和隔离饲养方式,可成功培育出SPF级比格犬。

何首乌的现代药理作用及机制研究进展

何首乌是临床治疗和预防保健上被广泛应用的中药,生用何首乌,它具有解毒、抗疟疾、润肠通便的作用;炮制之后,则能够补肝肾、补益精血.通过查阅知网、万方等数据库,综合阐述了何首乌的抗衰老、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗氧化、抗炎、保肝、抗肿瘤、提高记忆力、提高免疫力、保护肾脏、抗骨质疏松、增强造血功能等药理作用及其机制,为何首乌的进一步开发和临床安全用药提供理论基础,同时也为后续的药学工作者们提供丰富的文献依据和研究思路.

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的甘草大鼠体内入血成分分析

目的:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(ultra performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry, UPLC-Q-TOF-MS/MS)法分析灌胃给药后甘草提取液在大鼠体内的入血成分。方法:大鼠灌胃给予甘草提取液后,腹主动脉取血,分离血清。采用UPLC BEH C色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.7μm)分析,0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾离子源,正、负离子模式下对甘草提取液、给药血清和空白血清进行数据采集。结果:根据色谱峰保留时间及质谱碎片裂解规律,结合文献相关信息,共鉴定出13个入血原型成分,依次为Tachiogroside B、夏佛托苷、7,4′-二羟基黄酮、6″-O-乙酰甘草苷、芒柄花苷、甘草查尔酮B、金圣草(黄)素、异甘草素、芒柄花黄素、皂皮酸、黄宝石羽扇豆素、甘草酸、半甘草异黄酮B,主要为黄酮类、有机酸类、苷类和香豆素类。结论:该研究通过UPLC-Q-TOF-MS/MS分析技术,明确了甘草提取物中含有的13种入血原型成分,为其药效物质基础的研究提供了科学依据。