小凹蛋白1可能参与血管紧张素转化酶2介导的病毒感染

小凹是细胞信号在细胞膜区域的枢纽结构,为细胞内外信号转导发生、募集、串联、级联、交汇(cross-talk)的集散单元。其表面标志蛋白是小凹蛋白。小凹蛋白基因家族的结构与功能在进化中从蠕虫到人都是非常相似与保守的,其生物学功能研究是近年的热点研究领域之一。本文就小凹/小凹蛋白在介导血管紧张素转化酶2介导的病毒感染作用提出一些新思路。

弓形虫微线体蛋白1部分基因原核表达重组质粒pWR450-1-MIC1的构建、鉴定及测序

目的 构建弓形虫ZS2分离株pWR45 0 - 1 -MIC1原核表达重组质粒 ,为进一步表达及免疫做准备。方法 用PCGENE软件分析MIC1基因可能的TB抗原表位 ,自行设计引物 ,用聚合酶链反应(PCR)技术从弓形虫ZS2分离株的基因组DNA中扩增编码微线体蛋白 1 (MIC1 )的基因片段 ,经酶切、连接、重组入pWR45 0 - 1原核表达载体 ,再经含氨苄培养基筛选、酶切、PCR鉴定和测序。结果 从ZS2分离株基因组DNA中扩增出特异的MIC1基因片段 ,克隆成功pWR45 0 - 1 -MIC1重组质粒。测序表明MIC1这部分基因与RH株相应碱基序列完全一致 ,高度保守。为下一步表达及免疫奠定基础。

低氘水可选择性抑制鼻咽癌细胞增殖

目的比较不同氘体积浓度对多种鼻咽癌细胞株及正常细胞增殖的作用,初步探讨低氘水抗肿瘤的可能机制。方法 MTT法、平皿克隆实验、transwell小室检测低氘水(DDW)对鼻咽癌细胞及正常细胞的增殖、侵袭转移能力;Western blot检测PCNA蛋白表达差异,流式细胞仪分析细胞周期。结果随着培养基中氘含量下降,多种鼻咽癌细胞增殖显著被抑制(P<0.05),克隆生成和游走侵袭能力显著下降(P<0.01),Western blot检测结果显示PCNA蛋白表达水平下调,流式细胞仪检测显示,低氘水能诱导鼻咽癌细胞生长周期阻滞:S期减少,G1期细胞显著增加(P<0.05)。但DDW对正常细胞生长有促进作用。结论 DDW具有选择性抑制鼻咽癌细胞增殖的靶向生物效应,因此其可作为新型无毒副作用抗癌辅助治疗剂,在肿瘤治疗中具有重要应用前景。

pcDNA3.1/NT-GFP小凹蛋白1及突变体表达载体的构建及功能分析

目的构建pcDNA3.1/NTGFP小凹蛋白1及对突变体表达载体及表达蛋白生物活性进行分析。方法采用硫化修饰引物与Pfu酶结合的高度保真性聚合酶链反应体系,自行设计多对引物,分别扩增带His标签的小凹蛋白1全长目的片段、小凹蛋白1(缺失81～101位氨基酸)突变体1片段及小凹蛋白1(缺失143～156位氨基酸)突变体2片段;分别亚克隆入pcDNA3.1/NTGFPTOPO真核表达载体,转化TOP10E.coli大肠杆菌,在含氨苄的固体LB培养基上随机挑取6个克隆,分别提取质粒后,用PCR法筛选含正确插入阅读框的阳性克隆子并测序鉴定。用脂质体介导法瞬时转染入HepG2细胞,用MTT法、Westernblot法初步鉴定GFPHis小凹蛋白1及突变体重组融合蛋白的生物学活性。结果筛选得到正确pcDNA3.1/NTGFPHis小凹蛋白1及突变体表达载体,测序结果无碱基突变及阅读框移码,GFPHis小凹蛋白1及突变体重组融合蛋白具有天然表达蛋白相似的生物学活性。结论成功构建具有生物学活性的pcDNA3.1/NTGFP小凹蛋白1及突变体表达载体,为小凹蛋白1的功能研究奠定基础。

Caveolae/Caveolins与病毒感染

Caveolae是直径为 5 0～ 10 0nm的细胞表面特异性内陷结构 ,Caveolins是它的主要标志蛋白。Caveolae/Caveolins在许多生理、病理活动中起重要作用。近年来还发现 ,Caveolae/Caveolins介导了许多病毒的感染 ,参与了病毒的吸附、穿入、转运、生物合成、组装及出泡等环节。这一病毒感染途径的发现 ,有助于抗病毒新药的开发和肿瘤治疗新领域的开辟。

永州市孕妇弓形虫感染血清学调查

应用ＩＨＡ方法对永州市４１２名孕妇进行弓形虫抗体的检测。试验提示，永州市孕妇弓形虫感染率为１０．９２％，城区孕妇感染率６．８９％低于郊区孕妇感染率１４．８３％，有明显异产史孕妇感染率３４．５２％，明显高于无异产史孕妇４．８８％。调查显示，异产的发生与孕妇是否受弓形虫感染有十分密切的关系。

术前短期化疗对脊柱结核手术安全性的实验研究

目的通过巢式聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)动态检测脊柱结核患者围手术期外周血的MTB-DNA的IS6110基因的含量,评估术前短期化疗对脊柱结核患者的手术安全性。方法根据IS6110基因设计两对特异性硫化修饰引物,结合高效保真聚合酶建立的巢式PCR,动态检测25例术前短期化疗的脊柱结核患者术前1天、术后1天、术后7天、术后14天外周血MTB-DNA的IS6110基因的含量变化,对外周血扩增产物IS6110基因含量进行比较分析。结果脊柱结核患者围手术期外周血IS6110基因含量变化的两种趋势:(1)15例患者伴随术后结核病灶的清除,外周血中的结核杆菌IS6110基因的从术后1天就开始逐渐减少;(2)10例患者术后1天时外周血中结核杆菌IS6110基因有短暂回升,但与术前1天外周血中结核杆菌IS6110基因含量比较无显著性差异(P>0.05),随着术后持续抗痨治疗,结核杆菌IS6110基因含量在术后1～2周均减少,均未发生结核杆菌血行播散并发症。结论如果脊柱结核患者一般情况好,术前短期化痨后行手术治疗安全有效。

白藜芦醇抗肿瘤作用机制的研究进展

白藜芦醇是一种天然存在的植物抗毒素,广泛存在于多种植物中,是防治肿瘤的绿色抗癌药物。体内外实验表明,白藜芦醇对大多数肿瘤的起始、增殖、发展3个主要阶段均有抑制乃至逆转作用。其抗肿瘤机制可以通过抗氧化、阻滞细胞周期、促进肿瘤细胞凋亡、诱导肿瘤细胞分化、抑制环氧化物酶和细胞色素酶P450的活性、干扰相关信号转导通路、抑制肿瘤血管生成等发挥作用。

低氘水抗肿瘤作用的研究进展及其可能机制

饮用低氘水可以预防疾病、延缓衰老、活化机体免疫细胞,特别是对某些癌症等疾病的辅助治疗,是近年国外核医学领域和水生理学领域对低氘水研究的重大突破。目前,抗癌化疗药物仍是肿瘤的重要治疗手段,但其毒副作用强,易导致多药耐药的产生,而低氘水使用方便,无毒副作用,且可能对肿瘤的多药耐药逆转有巨大作用。其抗癌机制极其复杂,故本文对低氘水抗肿瘤作用的研究进展及其可能机制做一综述。

低氘水对肝癌HepG2细胞增殖和侵袭能力的抑制作用

目的探讨低氘水(deuterium-depleted water,DDW)对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭能力的抑制作用。方法 HepG2细胞及正常肝细胞LO2用50、75、100、150ppm DDW(纯净水对照组)处理,用MTT法、平皿克隆实验检测细胞增殖、侵袭转移能力,Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结果 100ppm DDW处理24h对LO2细胞、72h对HepG2增殖抑制无影响(P>0.05)。HepG2在50、75ppm DDW中细胞克隆数均低于对照组,而LO2细胞克隆数高于对照组(P<0.01)。50、75、100ppm DDW处理后HepG2细胞PCNA表达明显低于对照组(P<0.01)。结论 DDW可抑制HepG2细胞增殖和侵袭能力,但促进正常细胞LO2生长,这可能与PCNA表达下调有关。

乳腺癌钼靶X线特征表现与C-erbB-2表达相关性的研究

目的研究乳腺癌钼靶X线特征表现与C-erbB-2表达的相关性。方法回顾分析91例术后病理诊断为乳腺癌患者的乳腺X线摄影胶片,按照ACR创立并推荐的BI-RADS,将X线所见分肿块(形状、边缘)、局限致密浸润影、恶性钙化进行描述,并与C-erbB-2表达进行对照,分析其相关性。结果乳腺癌恶性钙化灶与CerbB-2的表达有显著相关性(P<0.05)。结论乳腺癌钼靶X线特征表现与C-erbB-2表达有一定关联性,可初步判断C-erbB-2表达情况,并为判断肿瘤生物学行为及患者预后提供一定参考价值。

一种可消除非特异性条带高精度、多用途的PCR方法

目的 建立一种可消除RT-PCR反应中非特异条带生成，提高PCR反应的精确度的PCR体系。方法 比较普通RT-PCR反应与硫化修饰引物结合不同校正活性聚合酶对非特异性扩增的抑制能力。结果 引物3′末端硫化修饰结合具有校正活性的聚合酶可特异性关闭PCR反应中引物3′末端与模板非特异结合而引起的非特异性扩增，只允许引物3′末端与模板完全匹配的延伸反应得以进行。结论 利用校正聚合酶是严格模板依赖型校正活性酶的特点，将引物3′末端硫化修饰后，由于校正聚合酶在PCR延伸开始之前首先会依据模板检查引物是否完全与模板匹配，如果不匹配则将根据模板先将引物修改得和模板一致后才允许延伸的特性，而引物3′端引入抗酶切的硫化修饰后，引物与模板非特异结合将由于校正活性聚合酶长期停留在试图纠正引物与模板不一致状态而得不到有效延伸，从而只允许引物与模板完全匹配的延伸得以扩增，大大提高了PCR反应的特异性。

低氘水抗肿瘤作用的研究进展

目的 氘是致癌的重要诱发因素之一，通过采用先进的制造技术去除天然水中的氘，降低氘含量可制得贫氘水，又称低氘水、超轻水或无氘水。有研究表明，水中氘浓度体积分数减少65%能够抑制肿瘤生长，国外临床实验证实服用低氘水（10-20 ppm）的肿瘤患者能使肿瘤停止生长，显著提高患者的生存时间和生活质量。目前，抗癌化疗药物种类繁多，但都存在一定局限性，而低氘水使用方便，没有毒副作用。基于低氘水的显著优势，本文主要对低氘水的抗癌作用的研究进展作一综述。

微小RNA与肿瘤发生和多药耐药的关系研究进展

非编码小RNA是非编码小分子单链RNA分子,与靶mRNA的3′非翻译区结合,抑制mRNA的翻译,促进其降解。而这种调控机制与很多肿瘤的发生有着密切的联系。肿瘤的多药耐药是临床化疗失败的主要原因。近年来研究表明,非编码小RNA的表达与肿瘤的多药耐药有着紧密的关系。现介绍非编码小RNA的生物学特性,并重点对其与肿瘤的发生和多药耐药的关系予以综述。

白藜芦醇对鼻咽癌细胞ATP酶抑制作用研究

目的检测30μmol/L白藜芦醇对鼻咽癌细胞ATP酶活力及蛋白表达抑制作用。方法超微量ATP酶试剂盒检测白藜芦醇对鼻咽癌细胞膜的Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶和T-ATP酶活力的变化;Western-blot检测白藜芦醇对鼻咽癌细胞ATP酶蛋白表达差异。结果 RES能显著抑制多种鼻咽癌细胞Na+-K+-ATP酶活力(P<0.01)、Ca2+-Mg2+-ATP酶活力(P<0.01)和T-ATP酶活力(P<0.001),Western-blot检测结果显示白藜芦醇能浓度依赖性下调ATP的表达(P<0.05)。结论白藜芦醇抑制鼻咽癌细胞株ATP酶活力,显著下调ATP酶蛋白表达,可能是抑制鼻咽癌细胞株增殖的分子机制之一。

表达序列标签法寻找日本血吸虫新基因

目的 运用表达序列标签(expressed sequence tag，EST)技术，从日本血吸虫成虫eDNA文库中筛选和鉴定日本血吸虫新基因，为寻找日本血吸虫新的候选疫苗奠定基础。方法 转化日本血吸虫成虫eDNA文库，随机挑取重组阳性克隆进行测序，获得Esr；用NCBI站点的GenBank对所获得的新基因序列进行同源性检索；利用BLASTP程序对同源性高的基因进行核苷酸和氨基酸水平的同源性比较。结果 发现xzw000008克隆的eDNA序列为日本血吸虫新基因并获得GenBank登录号。该eDNA序列与曼氏血吸虫polyubiquitin基因高度同源，核苷酸水平的同一性为87％；氨基酸水平的同一性为98％。结论 用EST寻找日本血吸虫新基因是一种可行的方法，所筛选到的日本血吸虫新基因长575bp，编码191个氨基酸，与曼氏血吸虫polyubiquifin基因高度同源，为进一步研究该基因的全序列及功能作准备。

人脐静脉内皮细胞Caveolin-1基因沉默模型的建立

目的:利用小干扰RNA(siRNA)技术建立人脐静脉内皮细胞(ECV304)小凹蛋白(Caveolin-1)基因沉默模型,为研究Cave-olin-1基因在人脐静脉内皮细胞中的作用。方法:通过Ambion专用软件对Caveolin-1基因编码区分析,设计合成短发夹RNA(shRNA)单链。通过T4连接酶将退火反应合成的shRNA双链克隆入含RNA PolIII聚合酶表达元件的pENTRTM/U6入门载体,并利用Gateway技术构建相应的慢病毒RNA干扰(RNAi)表达载体。用REAL-TIME RT-PCR、蛋白印迹法分析沉默效率。结果:测序结果显示pEN-TRTM/U6载体插入的Cavelin-1基因shRNA序列大小及阅读框架正确。LR重组反应后成功构建了针对Caveolin-1基因的RNAi慢病毒表达系统。转染ECV-304细胞获得对Caveolin-1的沉默效率大于85%。结论:成功地构建了针对Caveolin-1基因的RNAi慢病毒表达系统,获得了长期稳定的基因剔除效应。人脐静脉内皮细胞Caveolin-1基因沉默模型能长期保种及传代,为进一步研究Cav-eolin-1基因的功能奠定了基础。

低氘水抑制宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭能力的研究

目的探讨培养基中氘浓度的下降对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭能力的影响。方法用含不同氘浓度的培养基培养Hela细胞,分为150×10-6、100×10-6、75×10-6和50×10-6共4组,其中,氘浓度为150×10-6的培养基为对照组,其他为实验组;用四甲基噻唑蓝(MTT)法、划痕实验检测随着培养基中氘浓度下降,Hela细胞增殖和迁移侵袭力的变化;流式细胞术检测含不同氘浓度的培养基对Hela细胞周期的影响;蛋白免疫印迹和免疫组化实验检测含不同氘浓度的培养基对Hela细胞肿瘤相关蛋白p21、Na+/K+-ATPase表达的影响。结果 MTT实验结果显示,随着培养基中氘浓度的降低Hela细胞增殖得到明显的抑制,其中氘浓度为50×10-6的培养基抑制效果最明显,相同条件下与对照组相比在72 h抑制率达到39.54%(P<0.01);划痕实验可观察到Hela细胞在氘浓度为75×10-6、50×10-6的培养基中细胞迁移能力得到明显抑制(P<0.05);Hela细胞在氘浓度为75×10-6、50×10-6的培养基中培养24 h后,流式细胞术检测S期明显低于对照组(P<0.01);Hela细胞肿瘤相关蛋白p21在氘浓度为100×10-6、75×10-6和50×10-6的培养基中的表达与对照组比较,差异均有高度统计学意义(P<0.01)。结论培养基中氘浓度的下降对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭能力有明显的抑制作用。

Caveolin-1在肿瘤发生发展及耐药机制中的作用

Caveolin-1是细胞膜微囊(caveolae)的重要组成结构,在大多数正常的细胞中表达丰富。通过其脚手架区域,在多种信号分子向胞内传递信息的过程中发挥着重要作用,其功能研究是生物学研究的热点。而近来研究表明caveolin-1在大多数肿瘤细胞中表达下降甚至缺如,过表达caveolin-1能抑制其恶性生长性状。近来的癌细胞转化及基因敲除等实验结果倾向于caveolin-1就是7q31位点的肿瘤抑制基因。但在少数肿瘤如前列腺癌、乳腺癌患者的细胞中检测到caveolin-1高表达。在纤维原细胞和上皮细胞的凋亡中起促进作用。Caveolin-1与多种肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭、转移以及凋亡关系密切,且可能是肿瘤细胞多药耐药逆转的一个新靶点,以类似于介导胆固醇流出途径的方式将药物排出细胞导致细胞耐药性增强。

精准医学领域肺纤维化的新兴治疗策略

肺纤维化(PF)是一种严重危害人体健康的慢性进行性肺部疾病。其主要特征是肺组织异常纤维化和瘢痕化,导致肺泡逐渐被纤维组织替代,最终引发呼吸衰竭,给人体健康带来严重威胁。迄今为止,PF的治疗一直是一项艰巨的挑战。然而,近年来随着精准医学理念和新兴疗法的兴起,对PF的认识和治疗策略也在不断进步。该文从分子生物学和遗传学的角度全面回顾PF在精准医学领域内新兴治疗策略的最新研究进展,揭示了利用高通量生物信息技术与分析等分子生物学手段挖掘新兴治疗策略的潜在可能性。深入了解这些进展有助于临床医师更好地理解PF的病理生理过程,并为未来的临床实践提供新的思路和策略,以改善患者的预后和生活质量。