钩吻素子对脓毒症小鼠急性肝损伤的治疗作用及机制研究

目的:观察钩吻素子(koumine,KM)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠脓毒症及其所致急性肝损伤的治疗作用,并探究可能的作用机制。方法:48只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、10 mg·kg^(-1)MCC950组和KM 7.5,15,30 mg·kg^(-1)剂量组,每组8只。各组小鼠一次性腹腔注射相应药物或溶剂(生理盐水),给药1 h后,对照组小鼠给予等体积生理盐水,其余各组小鼠给予LPS 1 mg·kg^(-1)腹腔注射,诱导建立小鼠脓毒症模型。LPS干预4 h后,采用全自动生化分析仪检测血清谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)和谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)活性;HE染色法观察肝脏组织病理学;ELISA法检测血清和腹腔灌洗液白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平;RT-qPCR法检测肝脏组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(nucleotide binding oligomerization domain like receptor protein 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1前体(cysteine aspartic protease-1 precursor,pro-caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、IL-1β前体(interleukin-1βprecursor,pro-IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)mRNA水平。结果:KM显著降低脓毒症小鼠血清中AST和ALT水平,显著降低小鼠血清及腹腔灌洗液中IL-1β水平;肝脏病理切片显示KM治疗后小鼠组织受损程度较模型组稍有减轻;RT-qPCR研究结果证实,KM显著降低炎性因子TNF-α和IL-6 mRNA的表达水平,并能显著下调模型小鼠肝脏组织NLRP3,pro-caspase-1,ASC和pro-IL-1βmRNA的表达水平。结论:KM对脓毒症致小鼠急性肝损伤有治疗作用,其机制可能与抑制NLRP3炎症小体的活化及相关促炎细胞因子的释放有关。

大鼠胶原诱导关节炎模型的建立及评价

目的建立Ⅱ型胶原诱导关节炎(CIA)大鼠模型及评价方法。方法大鼠皮内注射鸡Ⅱ型胶原(CⅡ)与完全弗氏佐剂及不完全弗氏佐剂建立模型,监测动物体重、后足容积、关节炎指数(AI)以及热刺激缩足反射潜伏期(PWTL)和机械痛阈(MWT),免疫后第四十二天行影像学检查并取材进行组织病理学检查;酶联免疫吸附法(ELISA)检测动物血清抗CⅡ抗体、IL-1β及TNF-α水平。结果 CIA大鼠体重增长缓慢,后足红肿明显,后足容积显著高于对照组,AI呈上升趋势,后足PWTL及MWT均显著降低,影像学检查发现关节腔狭窄,关节结构模糊,组织病理学检查可观察到明显炎症细胞浸润、关节结构的破坏及滑膜增生,ELISA结果显示CIA大鼠血清抗CⅡ抗体、IL-1β及TNF-α水平显著升高。结论本文成功建立了CIA大鼠模型及模型评价方法。

钩吻素子对佐剂诱导关节炎大鼠T辅助细胞因子平衡偏移的调节作用

目的观察钩吻素子对大鼠佐剂诱导关节炎(AIA)的治疗效应及其对模型大鼠T辅助(Th)细胞因子平衡偏移的调节作用。方法在Lewis大鼠AIA模型上,分别以注射足和对侧后足容积、机械痛阈(MWT)以及四肢关节炎指数(AI)评分为指标评价模型大鼠关节炎进展,并以ProcartaPlex多因子免疫检测及酶联免疫吸附实验(ELISA)观察各组大鼠血清Th细胞因子水平。大鼠分为对照组、AIA模型组以及钩吻素子处理组(0.6,3.0和15.0 mg·kg-1)、阳性对照药吲哚美辛组(2.5 mg·kg-1),每组10只。建模后第14天开始灌胃给药,每天1次,连续10 d,分别在建模前、给药前及给药后不同时间进行观察指标的测定,在建模前、给药前以及末次给药后1 h行眼球后静脉丛采血进行细胞因子水平检测。结果大鼠免疫后出现明显的注射足肿胀、红斑和机械痛敏,并随模型进展逐渐蔓延至对侧足。连续ig给予钩吻素子可缓解模型大鼠注射足和对侧足机械痛敏,并降低AI评分;细胞因子检测结果显示,AIA大鼠免疫后第12天起即出现显著的Th1/Th2和Th17/Treg细胞因子平衡的偏移,钩吻素子可降低模型大鼠IL-1β,IFN-γ和IL-17A水平并抑制IFN-γ/IL-4,IFN-γ/IL-10和IL-17A/TGF-β比值的升高,提示钩吻素子对AIA大鼠Th1/Th2和Th17/Treg细胞因子平衡的偏移具有调节作用,可恢复Th细胞亚群及细胞因子网络系统的平衡状态。结论钩吻素子对大鼠AIA具有显著治疗作用,并可调节模型大鼠Th细胞因子平衡的偏移,可能是其发挥抗类风湿关节炎的重要作用方式之一。

钩吻素子对小鼠佐剂性关节炎的治疗作用

目的观察钩吻素子对小鼠佐剂性关节炎的治疗作用。方法筛选成功建立佐剂性关节炎模型的小鼠,随机分为模型组、钩吻素子高(20mg/kg)、中(4mg/kg)、低(0.8mg/kg)剂量及阳性对照药吲哚美辛处理组(10mg/kg),每组12只,另设置12只未免疫正常小鼠为对照组。建模后第8天起,以灌胃方式给药,每天1次,连续10d。以小鼠体质量、注射足厚度、热辐射痛阈热缩足反射潜伏期(PWTL)以及组织病理学变化等为指标,观察钩吻素子的治疗作用。结果小鼠建模后出现显著的体质量减轻、注射足厚度增加、热辐射痛阈下降,苏木精-伊红(H-E)染色显示关节结构破坏、滑膜增生以及炎症细胞浸润。钩吻素子灌胃后,小鼠体质量增加,显著高于模型组,注射足厚度显著小于模型组,PWTL显著高于模型组,作用呈剂量依赖性。H-E染色显示钩吻素子处理组小鼠踝关节的炎性细胞浸润及滑膜增生、骨质破坏等得到改善。结论钩吻素子对小鼠的佐剂性关节炎具有治疗作用。

乳糖诱导人胰岛素样生长因子-1在大肠杆菌中的表达

目的以含有人源性胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因的大肠杆菌DH5α为研究对象,研究以乳糖作为诱导剂时目的融合蛋白的表达规律。方法利用可表达hIGF-1的工程菌,研究乳糖代替IPTG诱导大肠杆菌在不同条件下表达目的蛋白的一般规律,并优化表达条件,表达结果借助SDS-PAGE等方法进行分析。结果乳糖可诱导hIGF-1在大肠杆菌中的表达,最优表达条件为37℃下重组菌株生长至OD600值为0.7时加入诱导浓度为0.8%的乳糖继续诱导4h。诱导的目的融合蛋白相对表达量能够达到占总蛋白的40-60%水平,接近IPTG的诱导表达水平。结论乳糖能够代替IPTG作为诱导剂成功诱导hIGF-1在大肠杆菌中的表达。

周围神经损伤的药物治疗进展

临床上周围神经损伤极为常见,修复困难,致残严重,是当今临床医疗面临的严重挑战之一。近年来周围神经损伤的显微外科修复技术取得长足进步,但药物治疗仍然是其主要的治疗手段之一,有无手术适应证的患者均需进行药物治疗。寻找既能促进损伤神经快速修复与生长又能保证其再生纤维功能的有效药物,一直是神经修复基础与临床研究的热点。本文就周围神经损伤的药物治疗现状以及研究进展做一综述。

重组人胰岛素样生长因子-1工程菌发酵培养基的优化

在摇瓶条件下,以M9培养基为基础,采用单因素实验和正交实验,对适合于表达重组人胰岛素样生长因子-1工程菌生长的高密度发酵培养基进行了优化。确定最佳培养基配方为:葡萄糖0.4%、甘油1.5%、酵母粉3%、胰蛋白胨3%、Na2HPO41.2%、KH2PO40.6%、NH4Cl 0.1%、NaCl 0.20%、MgSO40.048%,在此优化培养基中培养14h,工程菌菌体密度OD600达7.5。

药理学教学团队的建设与思考

文章阐述了药理学教学团队近年来在目标制定、结构优化以及教研活动的开展和教学改革的深入等方面进行团队建设的举措,并针对团队教学与科研关系、青年教师导师制的实行等问题进行思考,为提升教师队伍的整体教学水平,提高教育教学质量提供参考借鉴。

药理学教师参与药学专业本科生导师制工作的实践与体会

本科生导师制是推进医学生素质教育、培养创新能力的一种新型教育模式。文章从药理学系教师视角出发,阐述药学专业本科生导师制实施的基本情况以及成效等,并结合近年来实施导师制的实践分析了本科生导师制目前存在的一些问题,提出了自身的体会与思考,为进一步完善本科生导师制度提供经验与参考借鉴。

沉积物中古DNA在古生态、古环境和古气候研究中的应用

随着分子生物学技术的发展,DNA技术的应用逐渐从生物学研究拓展到进化、环境和气候变化等研究领域。因为DNA容易受到水解、氧化、紫外辐射、酶解等过程的破坏,所以人们认为DNA很容易降解,保存时间不长,但是近年来的研究成果显示,古生物和古人类的化石或骨骼、冻土、湖泊海洋沉积物等样品中包含已保存数千年甚至长达数百万年以来的古DNA。古DNA作为重要的信息载体,可以诠释人类、动植物和微生物进化和迁移过程及它们对环境和气候变化的响应。反过来,古DNA在古环境、古气候重建方面也起着重要作用,沉积物样品的古DNA往往保存了历史时期的水体和水体周围环境以及气候变化等信息。通过对沉积物中古DNA的研究,可以获得历史时期的水生生物(包括藻类、水生动植物等)的群落演化,和水体周围岸基生活的动植物群落(植物落叶、动物毛发冲带到水体并沉积下来)演替,进而反演水体和水体周围气候环境以及气候变化信息。通过研究古人类和动物化石中保存的DNA,可以探讨人类的迁徙和进化过程,溯源家畜的驯化历史。本文将介绍环境古DNA的保存和可靠性评价,重点探讨古DNA在古生态以及古环境、古气候重建研究中的优势及应用,并展望古DNA在生物进化和环境研究等领域的应用前景。

钩吻素子在大鼠体内的药物代谢动力学及组织分布

目的建立HPLC测定大鼠血液和组织钩吻素子含量的方法,进而研究单次灌胃给予钩吻素子的大鼠体内药动学以及组织分布。方法采用萃取法预处理大鼠的血液和组织样品;建立HPLC-紫外检测法测定生物样品的钩吻素子含量。大鼠单次灌胃给予钩吻素子15mg/kg后,于不同时间点收集血液和组织样本,HPLC法测定大鼠血浆和组织中的钩吻素子含量,计算药代动力学参数。结果建立的HPLC测定血液和组织钩吻素子含量的方法,专属性好,线性范围分别为0.06～10.00μg/mL和0.08～5.00μg/mL,日内和日间RSD均<9%,提取回收率分别为80.03%～83.55%和64.20%～76.82%,方法回收率分别为99.21%～110.36%和91.87%～109.25%。雄性SD大鼠单次灌胃给予15mg/kg钩吻素子,达峰时间为(19.95±0.53)min,消除半衰期为(234.11±17.37)min,表观分布容积为(10.45±0.36)L/kg,曲线下面积为(142.35±5.86)mg·min·L-1。给药5min后,待检组织均检出钩吻素子,且多数组织浓度已达峰,组织浓度在胃、体脂、肝、肾、脾、小肠较高;随后,多数组织中的药物含量随时间推移而下降,但肝脏和小肠含量在给药后15min最高;给药60min后多数组织药物含量较低,其中骨骼肌和睾丸已低于检测限。结论本HPLC测定生物样品钩吻素子含量的方法操作简便,准确灵敏,可用于钩吻素子体内药动学研究;钩吻素子在大鼠体内的药代动力学符合二室模型;钩吻素子在大鼠体内分布迅速广泛,以消化道浓度为高,可透过血脑屏障,消除速度快。

人胰岛素样生长因子-l的原核表达和纯化

目的构建高表达、易纯化的人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)工程菌。方法采用pET32a(+)质粒构建带羟胺裂解部位的表达载体,转入大肠杆菌DH5α进行诱导表达。表达产物经镍离子-亲和柱色谱分离后进行羟胺裂解。裂解产物纯化后用MALDI-TOF-MS法测定相对分子质量(Mr)。结果重组质粒序列完全正确。工程菌可表达预计Mr的融合蛋白,经Western blot证实有hIGF-1抗原活性。经镍离子-亲和柱色谱分离、羟胺裂解后得到的肽的Mr为7 640,和理论值相符。结论成功构建了表达hIGF-1的工程菌,为开发hIGF-1奠定了基础。

钩吻素子抗外周神经损伤致神经病理性疼痛中自发痛的效应

目的观察钩吻素子抗外周神经损伤致神经病理性疼痛(NPP)中自发痛的效应。方法在大鼠坐骨神经慢性束缚损伤(CCI)NPP模型上,以术侧自发性抬足时间和足姿势评分为指标,观察单次(7.0,1.4,0.28mg/kg)、连续多次(7.0,0.28mg/kg,每日2次,连续7d)皮下注射给予钩吻素子对NPP中自发痛的效应。结果单次皮下注射给予钩吻素子剂量依赖性减少自发性抬足时间,其中7.0mg/kg组与对照组比较差别有统计学意义(P<0.01);单次皮下注射给予钩吻素子剂量依赖性降低足姿势评分,其中1.4,7.0mg/kg组与对照组比较差别有统计学意义(P<0.05和P<0.01)。连续多次给予钩吻素子减少自发性抬足时间,7.0mg/kg组在术后第3,5,7,9d自发性抬足时间均低于对照组(P<0.01);连续多次给予钩吻素子降低足姿势评分,7.0mg/kg组在术后第3,5,7,9d评分均低于对照组(P<0.05或P<0.01),到术后第9d疗效最强。结论钩吻素子具有抗外周神经损伤致NPP中自发痛的效应。

钩吻生物碱化合物体外抗消化系统肿瘤的活性

目的探讨钩吻生物碱化合物抗消化系统肿瘤的活性,并初步探索其构效关系。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT法)比色法,观察钩吻生物碱化合物对人肝肿瘤细胞HepG2、人胃癌细胞MGC80-3、人食管癌细胞TE-11和人结肠癌细胞SW480增殖的抑制作用。结果钩吻素子、钩吻素甲、钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱对SW480细胞和MGC80-3细胞增殖具有显著的抑制作用,作用呈剂量依赖性,对SW480细胞半数抑制浓度(IC50)分别为0.45±0.10,0.76±0.28,0.52±0.22和1.41±0.06mmol.L-1。对MGC80-3细胞IC50分别为0.82±0.19,1.20±0.33,1.14±0.23和1.22±0.11mmol.L-1。钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己对TE-11细胞和HepG2细胞的增殖也有一定的抑制作用,作用呈剂量依赖性,对TE-11细胞半数抑制浓度(IC50)分别为0.74±0.05,1.94±0.30和1.73±0.35mmol.L-1。对细胞HepG2的IC50分别为1.26±0.32,1.82±0.35和1.79±0.54mmol.L-1。结论钩吻生物碱化合物具有抗消化系统肿瘤活性,并存在一定的构效关系。

地质微生物——地球环境中的“协调员”

简单介绍了微生物-地球环境的相互作用,并从微生物矿物相互作用、微生物环境修复、极端环境地质微生物学和古微生物生态重建等四个方面介绍了微生物-地球环境协调发展的意义。

渗透压冲击预处理提高金属螯合亲和色谱纯化IGF-1融合蛋白的效率

目的采用渗透压冲击预处理细菌以提高重组IGF-1融合蛋白纯化中金属螯合亲和色谱的效率。方法采用20%的蔗糖-EDTA缓冲液预处理经诱导表达的大肠杆菌,然后将表达产物经Ni-NTA-琼脂糖亲和色谱柱进行分离,观察蔗糖溶液处理对纯化效果的影响。结果经蔗糖-EDTA缓冲液预处理后Ni-NTA-琼脂糖色谱柱纯化蛋白的产量可以提高约2倍。结论渗透压冲击预处理可以有效提高金属螯合亲和色谱的效率。

重组人胰岛素样生长因子-1对坐骨神经损伤的修复作用

目的在大鼠坐骨神经钳夹损伤模型上,探讨重组人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)融合蛋白的治疗作用。方法 40只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组及hIGF-1融合蛋白高(0.02mg)、低(0.002mg)剂量处理组,建立大鼠坐骨神经钳夹损伤模型;以大鼠行为学、坐骨神经功能指数(SFI)、坐骨神经-腓肠肌诱发电位、组织形态学变化为指标,综合考察hIGF-1融合蛋白对损伤坐骨神经的影响。结果术后20~32d,各测定时间点hIGF-1融合蛋白高、低剂量组大鼠SFI值及SFI恢复率显著高于模型组(P<0.05),作用呈剂量依赖性。术后35d,hIGF-1融合蛋白高、低剂量组大鼠坐骨神经-腓肠肌诱发电位振幅显著高于模型组(P<0.01),作用随剂量增大而增强。H-E染色显示,hIGF-1融合蛋白高、低剂量组大鼠坐骨神经损伤区再生神经排列较模型组规则,有髓神经纤维增多,髓鞘较厚且完整。结论重组hIGF-1融合蛋白能促进大鼠坐骨神经损伤的修复。

胰岛素样生长因子-1和阿尔茨海默病的关系研究进展

胰岛素样生长因子-1(IGF-1)是一种与机体组织分化、增殖和成熟有关的重要细胞因子。IGF-1具有保护神经细胞、抑制其凋亡的作用。近年来的研究证明IGF-1和阿尔茨海默病的发生、发展有关,IGF-1有可能作为神经保护剂用于阿尔茨海默病的治疗。

重组人胰岛素样生长因子-1大肠杆菌高密度发酵研究

目的建立重组人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)在大肠杆菌高密度发酵中表达的工艺。方法以工程菌DH5α/pET32a(IGF-1)为对象,通过分批发酵培养优化溶解氧浓度、pH及温度等发酵条件,在此基础上以甘油为限制性基质进行分批补料发酵,考察不同补料方式对发酵的影响。结果适合重组hIGF-1在工程菌高密度发酵中表达的条件:在菌株活化与初始培养后,诱导时控制发酵系统溶解氧浓度为20%,温度为30℃,pH为7.2并以恒定pH反馈补料,发酵12h菌体密度OD600达44.53,得菌体干质量17.49g/L,平均生产强度为1.458g.L-1.h-1,其中重组hIGF-1的相对表达量为32.5%。结论研究为工业化生产hIGF-1奠定了基础。

微课在药理学教学中的应用

目的运用微课开展药理学教学改革,提升课程教学质量。方法药理学课程教学内容中总论、传出神经系统药物药理的部分采用基于微课的线上线下混合式教学模式,紧接的神经系统药物药理部分采用传统授课模式,在各模式授课结束后,进行阶段考试。以学生阶段考试成绩和学生满意度为指标,比较这两种授课模式对教学效果的影响。结果采用基于微课教学的阶段考试成绩显著高于传统教学的成绩(P<0.05),同时学生对基于微课的教学满意度高。结论基于微课的教学模式,有益于提升学生的多元能力培养,提高课程教学质量。