转基因RNAi技术在番茄研究中的应用

RNAi(RNA interference)技术是一项基因沉默技术,能够阻断特定基因的表达,从而为探索未知基因的功能提供了一个很好的反向遗传学研究平台。番茄作为一种重要的蔬菜作物和模式作物,RNAi技术在其遗传改良进程中已得到了广泛应用。本文对RNAi技术在番茄基因功能、品质性状的遗传改良、抗病研究中的应用进展及其应用前景进行了综述。

抗番茄黄化曲叶病基因Ty-2的SSR新标记

采用集合分离分析法(Bulked segregant analysis,BSA),结合SSR分子标记技术筛选与抗病基因Ty-2连锁的标记。将感病材料TMXA48-4-0与含有Ty-2的抗病材料CLN2777A杂交,获得F2分离群体。利用前人初步定位的结果及构建的番茄SSR遗传图谱,选择11号染色体上TG36与TG393标记之间的SSR标记对构建的抗感池进行筛选分析,结果得到1个与Ty-2紧密连锁的呈共显性的分子标记TES0344,遗传距离为6.7 cM。利用F2分离群体和10份同源材料进一步验证了SSR标记TES0344的可靠性和稳定性,因此该标记可用于今后抗番茄黄化曲叶病毒病育种的辅助选择。

樱桃番茄新品种金陵美玉秋延后高效栽培技术

金陵美玉樱桃番茄系江苏省农业科学院蔬菜研究所最新选育的品种,具有丰产、稳产、优质等特点。详细介绍了金陵美玉樱桃番茄的特征特性及秋延后高效栽培技术。

樱桃番茄新品种金陵甜玉高效设施栽培技术

金陵甜玉樱桃番茄系江苏省农业科学院蔬菜研究所以TY-07-5为母本,以TY-07-4为父本组配的樱桃番茄一代杂种,表现中早熟,高抗番茄黄化曲叶病毒病。文章介绍了它的特征特性、春提早栽培和秋延后栽培技术要点。

RNAi和GroEL介导的双价转基因番茄对TYLCV的抗性

本研究将已构建的SUC2-GroEL和pBI121-AC1-AC2植物表达载体共转化番茄,共获得19株卡那霉素抗性再生植株。经过PCR和RT-PCR检测,初步获得转SUC2-GroEL载体的阳性植株5株,转pBI121-AC1-AC2载体的阳性植株3株以及转SUC2-GroEL/pBI121-AC1-AC2双载体的阳性植株2株。利用TYLCV侵染性克隆农杆菌注射接种法对T0代转基因阳性植株进行抗性鉴定,获得抗TYLCV的转基因植株7株。对T0代未扩出病毒条带的T1代植株进行抗性鉴定,结果发现转SUC2-GroEL、pBI121-AC1-AC2、SUC2-GroEL/pBI121-AC1-AC2不同载体的株系植株中平均带毒率依次是35%、25%和15%,推断转双基因的植株的抗病能力优于转单个基因植株的抗病能力。

RNAi介导的转基因番茄抗TYLCV研究

本研究将TYLCV的AC1和AC2基因中的保守序列嵌合并构建反向重复序列的RNAi载体p BI121-AC1-AC2,通过农杆菌介导法转化番茄获得13株再生植株。结果表明,PCR及RT-PCR检测发现有3株转基因番茄成功表达T-DNA插入的外源基因片段。利用侵染性克隆农杆菌注射及烟粉虱传毒两种接种方法对其进行了抗性鉴定,表明2株转基因番茄植株对TYLCV表现抗性,为抗TYLCV育种提供了新的种质资源。

早熟樱桃番茄金陵粉玉

金陵粉玉樱桃番茄为有限生长类型，早熟，果实椭圆形，平均单果质量22g左右，耐贮运。抗叶霉病、ToMV、枯萎病等病害，每667m^2产量4500kg左右。

大豆“南农86-4”突变体筛选及突变体库的构建

应用60Coγ射线和甲基磺酸乙酯(EMS)分别对"南农86-4"大豆种子进行诱变,并构建大豆突变体库。结果在M3代分别获得40份和145份叶、茎、花、种子、子叶等性状变异的材料。在两种方式诱变的M3代都获得蛋白质和油含量变化的材料,尤其在EMS诱变的M3代中获得47份蛋白质含量比对照高5个百分点以上的材料,5份蛋白质和油总含量比对照高5个百分点以上的材料。这些突变体可以作为新的种质资源,构建的突变体库也有助于大豆功能基因组研究的开展。

山东、安徽两省栽培番茄烟粉虱传双生病毒的PCR检测及序列分析

2008年秋季山东菏泽、安徽淮北保护地栽培番茄上发生了一种新的病害,对两地采集的4份病样进行了分子检测,结果表明4份样品所感染的病毒均属于菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus),同源率在98.7%以上。并对其中代表样品AH1进行了DNA-A克隆和序列分析,结果表明AH1全长2786个核苷酸,共编码6个ORF。基因组比较发现,AH1 DNA-A与浙江省和上海市报道的番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)同源性达到99.3%以上。这是该病毒在安徽、山东两省的首次报道,值得关注。

大豆“南农94-16”突变体库的构建及部分性状分析

本研究对"南农94-16"大豆种子用NaN3-60Coγ射线复合诱变以及EMS诱变来构建大豆突变体库。两种方式诱变大豆分别获得54份和66份叶、茎、花、种子、子叶等性状变异的突变体。用644对SSR标记分别对其中的14株耐涝突变体和1株叶色浅绿突变体进行了鉴定。结果表明,14株耐涝突变体,有2株与对照有超过100个标记的差异,其余植株分别有1到7个标记的差异;叶色浅绿突变体与对照有39个标记的差异,遗传分析表明该性状由细胞核单基因隐性遗传控制。这些突变体可以作为新的种质资源,构建的突变体库也有助于大豆功能基因组研究的开展。

CELⅠ酶的粗提取及其活性检测

CELⅠ酶是第一个从真核生物中提取的用于高效特异切割DNA双链碱基错配和DNA扭曲的内切酶,因而也是TILLING技术中用到的一种关键酶。文章对CELⅠ酶的粗提取及其活性检测进行了研究。错配切割实验表明,CELⅠ酶在包含有G→A点突变的杂合双链中,能有效地在错配位点进行切割,并可以通过ABI377测序仪获得直观的检测结果,从而可以用于TILLING分析。

番茄根结线虫病抗性基因的研究进展

已发现的番茄根结线虫病的抗病基因有9个,命名为Mi-1、Mi-2、……Mi-9。其中,只有Mi-1基因被克隆,并且成功转育到栽培番茄材料中,在番茄抗根结线虫病方面发挥了重大作用。但是该基因在土壤温度高于28℃时就会丧失抗性,而且突破Mi-1基因抗性的线虫群体也对番茄造成了威胁,而有些番茄抗根结线虫的基因可以较好地弥补Mi-1基因的不足,选育含有这些抗病基因的番茄材料十分必要。此外,对于Mi-1基因作用机理方面的研究也取得了很多成果。本文主要介绍番茄根结线虫抗病基因及其作用原理方面所取得的研究进展。

葫芦素E抑制多发性骨髓瘤细胞增殖及与阿霉素的协同效应

目的研究葫芦素E对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响,并观察葫芦素E与阿霉素的协同效应。方法采用CCK-8测定葫芦素E对4种多发性骨髓瘤细胞MM1.S、MM1.R、U266和RPMI8226的半数生长抑制率（GI50）,并通过CalcuSyn协同效应分析软件,计算药物合用指数（CI）,评价葫芦素E与阿霉素协同抗多发性骨髓瘤作用;流式细胞术检测葫芦素E对MM1.S、MM1.R的细胞周期、线粒体膜电位和细胞凋亡的影响;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP的变化,以及葫芦素E对IL-10刺激的RPMI8226细胞STAT3蛋白磷酸化的抑制作用。结果葫芦素E对4种多发性骨髓瘤细胞的GI50均在（12.3～161.7）nM范围内;葫芦素E导致多发性骨髓瘤细胞的SubG1期细胞比例、凋亡细胞比例和线粒体膜电位下降细胞比例均明显增加,并出现凋亡相关的活化蛋白如Cleaved Caspase-3和Cleaved-PARP。葫芦素E能有效抑制IL-10诱导的RPMI8226细胞STAT3磷酸化,并能与阿霉素协同抗多发性骨髓瘤。结论葫芦素E通过抑制STAT3蛋白磷酸化,诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡,并能协同阿霉素抗多发性骨髓瘤。

间作及几种物理防治对番茄黄化曲叶病毒病的防控效果

番茄黄化曲叶病毒病(TYLCVD)是以烟粉虱为传播媒介的病毒病,该病害的暴发直接导致番茄毁灭性绝产。从控制传播媒介烟粉虱种群数量着手,用黄板监测烟粉虱种群数量的变化,探讨了设置防虫网、铺设地膜、间种黄瓜、棚体覆盖紫外吸收膜等处理对烟粉虱种群数量的防控效果。采用平行跳跃式5点取样方法统计数据,采用SAS 9.1对数据进行统计,利用极差分析法对试验中涉及的影响因素进行分析。结果表明,设置防虫网处理较无防虫网处理烟粉虱种群数量少33.41%。铺设黑白地膜、银黑地膜对烟粉虱种群数量和番茄黄化曲叶病毒病有较好的防控效果,黑白地膜、银黑地膜较黑色地膜烟粉虱数量分别少54.50%、50.55%。统计后期覆盖防虫网、黑白地膜处理的发病率最低,为8.18%。间种黄瓜对烟粉虱的种群数量无显著影响,间作黄瓜处理下铺设黑白地膜发病率仅为8.05%,而铺设黑色地膜发病率达11.25%。影响TYLCVD发病的物理因素的主次顺序依次为:地膜、防虫网、黄瓜,最优组合为铺设黑白地膜、设置防虫网、间种黄瓜。覆盖紫外吸收膜较覆盖普通PVC膜烟粉虱种群数量少37.13%,紫外吸收膜处理下铺设银黑地膜田块发病率最低,为9.85%。大棚覆盖PVC膜,铺设不同地膜时,黄板监测统计的烟粉虱种群数量显示挂置2～9 d时诱集的烟粉虱种群数量上升幅度最大,诱集烟粉虱成虫数量由少至多依次为黑白地膜、银黑地膜、透明地膜、无地膜、黑色地膜。

番茄黄化曲叶病及其抗病育种研究进展

番茄黄化曲叶病(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)是世界范围内流行的一种毁灭性的病毒病,已成为世界番茄生产的限制性因素。近年来番茄黄化曲叶病在中国呈现逐年加重,自南向北迅速蔓延的趋势,已对中国番茄种植业造成极其严重的损失。防治该病的主要措施是培育抗病品种。为了更好地控制病害,文章对番茄黄化曲叶病毒的分类、抗性病鉴定方法、抗源筛选及遗传规律、抗性基因定位及标记辅助育种、基因工程等方面的研究进展进行了综述,以期为中国番茄黄化曲叶抗病育种工作提供一些信息,同时对抗性基因的应用和聚合育种进行了讨论和展望。

番茄抗灰霉病育种研究进展

灰霉病是设施栽培番茄的主要病害之一,常导致番茄减产30%～40%,给番茄生产造成严重损失,防治该病的根本措施是培育抗病品种。该文对番茄灰霉病菌的侵染、病菌分化、诱导抗性、抗源筛选、抗性基因定位及基因工程等方面的研究进展进行了综述,以期为番茄灰霉病抗性育种提供有益信息,同时结合育种实践对进一步研究进行讨论和展望。

番茄黄化曲叶病毒病在徐州地区的发生与综合防治

番茄黄化曲叶病毒病自2008年8月份在江苏徐州暴发以来,给当地的番茄生产造成了严重的损失。调查发现,该病害暴发的主要原因有:徐州地区适宜的气候条件有利于传毒媒介烟粉虱的繁殖,扩大了种群数量;设施栽培为烟粉虱提供了安全越冬场所;预警机制不够,未能将病害遏制在萌芽状态;寄主作物频繁调运促进了该病害的扩散;种植者对病害及传毒媒介缺乏认识,造成害虫再猖獗及病害难以控制;生产上缺乏抗病品种是该病害发生的根本原因。针对以上原因提出了农业防治、物理防治及化学防治相结合的综合防治措施。