香蕉枯萎和细菌性软腐病菌的多重PCR检测

香蕉枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.cubense和细菌性软腐病菌Dickeya zeae的复合侵染为害给香蕉产业发展带来严重挑战,有必要建立相关病害的多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction, multiplex PCR)检测技术。本文基于尖孢镰刀菌古巴专化型1号生理小种(F.oxysporum f.sp.cubense race 1,FOC1)基因组contig 438区间(35 631-37 693 bp)(GenBank:AMGP01000438.1)和4号生理小种(F.oxysporum f.sp.cubense race 4,FOC4)基因组contig 195区间(4 028-6 126 bp)(GenBank:AMGQ01000195.1)存在160 bp插入序列差异设计特异扩增引物FOC-F/-R,同时以香蕉细菌性软腐病菌D.zeae的促旋酶B亚单位基因(the subunit B of gyrase gene)(GenBank:JQ284039)序列设计特异扩增引物gyrB-F/-R。多重PCR检测结果显示:本技术可在一次PCR扩增反应内同时检测香蕉枯萎病菌1号、4号生理小种和细菌性软腐病菌;多重PCR的灵敏度结果表明:检测香蕉枯萎病菌的DNA浓度最低限为0.1 ng/μL,细菌性软腐病菌的灵敏度为103cfu/mL;检测结果稳定可靠。因此,本研究建立的多重PCR检测方法可有效应用于检测香蕉发病组织中的香蕉枯萎病菌和细菌性软腐病菌,也可用于香蕉种苗和田间土壤带病菌的监测,为香蕉种植保驾护航。

烟草镰刀菌根腐病生防菌GDND-2的鉴定及防病效果

为烟草根腐病生防菌剂的研发储备菌株资源。以烟草根腐病菌为靶标,筛选拮抗菌,通过培养形态、生化特征和分子技术鉴定菌株。用平板划线测定拮抗菌耐受力,盆栽试验验证其对病害的防效。筛选出拮抗菌GDND-2,其10%和20%发酵滤液对病菌生长抑制率为53.09%和62.24%。鉴定GDND-2为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velenzensis),该菌抑菌谱广,耐极端温度、酸碱和盐碱,对多菌灵等7种常用杀菌剂不敏感。GDND-2发酵液处理15、30、45 d,对烟草根腐病的防效为70.00%、74.62%和79.51%,处理45 d的防效高于多菌灵。贝莱斯芽孢杆菌GDND-2抗菌谱广,性状优良,可有效防治烟草根腐病,有望开发为生防菌剂。

结合信息物质的昆虫病原微生物自传播技术研究进展

昆虫病原微生物是害虫综合治理的重要措施,但其防治效果不稳定、速效性差、自然流行慢,因此探索增强昆虫病原生物流行技术是提升其防治效果的重要手段。自传播技术利用昆虫自身传播病原微生物以控制害虫种群数量,该技术提高了昆虫病原微生物在田间的传播效率和精准防控效果,是目前害虫防治具有开发潜力的技术之一。本文阐述了国内外关于结合信息物质的昆虫病原微生物自传播技术研究进展,系统介绍了自传播技术的原理、昆虫病原微生物类群、防治对象和装置等,并对该技术未来发展趋势进行了展望,以期为提高昆虫病原微生物防控害虫效果提供新思路。

提升水稻上植保无人机喷施药液沉积效果的关键因素

旨在解决植保无人机在水稻上施药后存在雾滴分布不均、农药沉积率不高等实际田间作业问题,比较分析了飞防助剂、施药液量、飞行速度对植保无人机在水稻上施药后雾滴分布和农药沉积率的影响,明确可产生显著性差异的关键因素,进一步分析该因素是否影响农药混配药液的微粒物理性质和润湿性能。结果表明:在三因素三水平的正交试验中,不同试验处理在上层收集的雾滴的面积显著大于中层和下层,加入助剂促使试验处理在不同高度上的雾滴分布较为均匀,它们在中、下层收集的雾滴的面积占比明显得到提高;飞防助剂、施药液量和飞行速度可不同程度地影响农药沉积率,农药沉积率范围在43.72%~68.63%;体现3个因素对农药沉积率影响程度的R值分别为13.44、6.25和4.93,其中仅飞防助剂产生的差异达显著性水平;在药液混配后0~48 h内,加入2种不同助剂均可显著降低其表面张力和静态接触角,加入2种不同助剂的药液之间则未表现显著差异;此外,呈现较高农药沉积率的助剂品种则可同时有效降低药液在混配后0~48 h内的粒径大小和粒径分散程度。研究结果对于植保无人机在水稻上的精准施药技术提升具有重要参考依据,可以提高农药沉积率,减少农药流失。

信息化管理生态补偿机制在广东省农业面源污染治理中的实践与成效

针对以往生态补偿机制在农业面源污染治理实践过程中遇到的补贴目标不明确、监管不足和挤占挪用等难题,世界银行贷款广东农业面源污染治理项目建立了信息化管理生态补偿机制。该机制2014—2020年在广东省的27个县推行实践,53.47万户农户参加,实施面积达34.02万公顷,发放补贴金额达16406.57万元。结果表明:(1)项目实现补贴精准发放;(2)有效引导农户形成良好的种植习惯;(3)该机制协调项目各管理部门共同参与和监管补贴流程;(4)项目区化肥和农药使用量比项目实施前分别减少30.6%和30.9%,有效控制农业污染源头;(5)该机制可复制、可推广,目前在广东省财政支持下继续在省内推广应用。该项目的实践成效可为完善我国生态补偿机制及推动现代农业可持续发展提供有益的借鉴。

广东韶关烟区烟草镰刀菌根腐病病原鉴定及致病性分析

为明确广东韶关烟草镰刀菌根腐病菌种类及致病力,在珠玑、始兴、南雄和乌茎采集根腐病样本,用组织分离法分离病原菌,盆栽接种带菌麦粒测定其致病性,观察菌株形态,基于EF-1α和β-Tub基因序列构建发育树鉴定病原菌。结果表明,获得45株镰刀菌,通过形态特征和分子技术鉴定为茄病镰刀菌Fusarium solani、共享镰刀菌F.commune、藤仓镰刀菌F.fujikuroi和尖孢镰刀菌F.oxysporum,分别占比42.22%,26.67%、20.00%和11.11%,对烟草均有致病性,强弱排列为F.commune≈F.fujikuroi>F.oxysporum>F.solani。本研究可为广东韶关地区烟草镰刀菌根腐病的防治提供依据。

斜纹夜蛾成虫带核型多角体病毒的巢式PCR检测

旨在建立一种快速、可靠的斜纹夜蛾成虫带核型多角体病毒(Spodoptera litura Nucleopolyhedrovirus,SpltNPV)的分子检测方法,以克服目前常规PCR技术很难检测到斜纹夜蛾成虫带病毒的缺陷。以SpltNPV的蜕皮甾体尿苷二磷酸葡萄糖转移酶(ecdysteroid UDP-glucosyltransferase,egt)基因为检测对象,基于该基因序列设计了巢式PCR引物,其中一对外侧引物egt-F/R和一对内侧引物egt1-F/R,并研究斜纹夜蛾成虫带毒的巢式PCR检测可靠性。结果表明:基于egt基因的巢式PCR方法可以特异性扩增SpltNPV的DNA,引物egt-F/R的扩增检测最低限为10-7μg/μL;且基于引物egt-F/R的两轮普通PCR无法检测出成虫带毒,而采用巢式PCR方法可有效扩增出目的egt片段,巢式PCR检测方法的灵敏度比两轮普通PCR检测方法提高2个数量级。因此,本研究成功建立了基于SpltNPV的egt基因的巢式PCR检测技术,该方法为斜纹夜蛾成虫带毒、传毒等流行病学研究提供了可靠的技术支撑。

智力支撑广东农业面源污染治理:模式创建、实践成效与展望

农户对化肥和农药的不合理使用是造成农业面源污染的重要原因。在农村地区,基层农业科技人员年龄和知识老化导致在实际农业面源污染治理中,存在着环境友好型农业生产技术推广不到位的问题。智力支撑是指通过加强对农业生产者(含农资经营者)的培训,为农业面源污染治理提供现代化人才。本文介绍广东农业面源污染治理过程中构建的智力支撑模式的实践与推广情况,并以惠州市惠阳区为例,介绍智力支撑下的农业面源污染治理成效。世界银行贷款广东省农业面源污染治理项目构建省、市、县、镇、村五级专家库形成智力支撑模式,建立以省、市、县专家构成的技术支撑体系,实现项目建设与培训,解决项目实施遇到的技术问题;建立以镇农技人员为主体、每个项目实施村聘用2名村级助理的技术服务体系,为农户提供项目技术示范和指导;通过建立有效的激励制度,提高镇技术指导员和村技术助理的积极性。实践结果证明,智力支撑模式可有效助力农业面源污染治理,农户参与项目的积极性提高,参加项目的农户化肥农药使用量下降、实现节本增收、种植技术和环境保护意识得到提升,参与项目的农资店经营更加规范。本项目通过构建智力支撑体系,为项目实施提供强有力的技术支撑力量,同时还培养了一批农业面源污染治理管理和技术人才,助推实施乡村振兴战略。

化肥减量配施增效剂对土壤理化性质及菜心产量、品质的影响

【目的】探讨化肥减量配施增效剂对广东省惠州地区蔬菜地土壤理化性质及菜心产量、品质的影响,为蔬菜地化肥减量提供理论依据和技术支持。【方法】以华南地区代表性的蔬菜作物菜心为研究对象,采用田间小区试验,设置当地施肥(T1,CK)、当地施肥+增效剂(T2)、减肥20%(T3)、减肥20%+增效剂(T4)4个处理,比较不同处理下土壤的理化性质、微生物量、酸性磷酸酶活性以及菜心产量、品质等指标。【结果】与T1(CK)相比,T3处理菜地土壤毛管持水量、田间持水量、非毛管孔隙度和总孔隙度分别提高13.3%、43.1%、29.4%和9.2%,T4处理菜地土壤非毛管孔隙度和总孔隙度分别提高42.1%和13.0%;与T1(CK)相比,T3处理菜地土壤pH值提高15.9%,其他土壤肥力指标均无显著变化,T4处理菜地土壤pH值提高13.4%、碱解氮和速效钾含量分别显著提高33.3%和15.8%;与T1(CK)相比,T3处理菜地土壤微生物量碳、氮和酸性磷酸酶活性分别提高35.6%、43.1%和15.5%,T4处理土壤微生物量碳、氮、磷和酸性磷酸酶活性分别提高78.1%、111.2%、49.1%和24.3%;与T1(CK)相比,T3处理菜心氮、磷、钾养分吸收量分别提高22.1%、11.3%、17.9%,T4处理菜心氮、磷、钾养分吸收量分别显著提高33.0%、28.5%和30.0%;与T1(CK)相比,T3处理菜心产量提高19.4%、硝酸盐含量下降13.6%、Vc含量提高2.2%,T4处理菜心产量显著增加28.1%、硝酸盐含量下降12.1%、Vc含量提高4.2%。【结论】化肥减量配施增效剂可以提升土壤肥力、提高土壤的微生物量和酸性磷酸酶活性、提高菜心的产量和改善品质。

转基因水稻对稻瘟病的抗性研究

采用苗期初筛、复筛、抗谱测定和田间自然诱发试验等不同鉴定方法,对经分子检测证明已整合有碱性几丁质酶基因和β-1,3-葡聚精酶基因的22个转化系的转基因水稻植株进行稻瘟病抗性鉴定研究,筛选出对稻瘟病的抗性比原种对照七丝软占有明显提高的一系列转基因水稻品系,其中表现高抗的有来自F4-9转化株系的7个品系。高抗材料的R7代品系,经室内抗谱测定及田间病圃试验结果,仍然表现高抗稻瘟病。本研究通过转基因技术,成功地将优质感病品种改良成高抗品系,研究结果证明了利用基因工程手段培育抗病水稻新品种是一个非常有希望的育种途径。

香蕉种苗中枯萎病菌和细菌性软腐病菌实时荧光PCR检测

香蕉枯萎病菌和细菌性软腐病菌复合侵染且潜伏期较长,建立香蕉种苗病害早期监测的分子检测方法非常重要。本文基于尖孢镰刀菌古巴专化型1号生理小种(Fusarium oxysporum f.sp.cubense race 1,FOC1)基因组Contig 438区间(35631~37693 bp)(GenBank:AMGP01000438.1)设计特异扩增引物qFOC1-F/-R、4号生理小种(Fusarium oxysporum f.sp.cubenserace4,FOC4)基因组Contig195区间(4028~6126bp)(GenBank:AMGQ01000195.1)设计特异扩增引物qFOC4-F/-R,同时以香蕉细菌性软腐病菌Dickeya zeae的促旋酶B亚单位基因(Subunit B of gyrase gene)(GenBank:JQ284039)序列设计特异扩增引物qgyrB-F/-R。qPCR检测结果显示:实时荧光检测引物扩增特异性强。通过拟合曲线方程分析得到:检测香蕉枯萎病菌的DNA浓度最低限为3 pg·μL^(-1),细菌性软腐病菌的菌液浓度最低限灵敏度为70 cfu·mL^(-1),检测灵敏度较高,结果稳定可靠。因此,本研究建立的实时荧光PCR检测方法可有效应用于检测香蕉种苗中的香蕉枯萎病菌和细菌性软腐病菌,确保种苗的安全生产。

我国菠萝使用农药登记现状及对策

菠萝是热带特色小宗作物,生产上发生的病虫害较多。截至2020年8月20日,我国在有效登记状态的农药产品41 579个,其中登记在菠萝上使用的农药产品26个,仅占0.06%;而这26个产品中,有22个(占84.62%)是植物生长调节剂赤霉酸、4个(占15.38%)是除草剂,可见菠萝上符合规定使用的农药产品极其匮乏。本文根据广东和海南菠萝主要病虫害发生情况,综述近年来菠萝主要病虫害化学防治研究进展;并以中国农药信息网作为农药登记数据来源,分析同类病虫害登记使用农药品种的有效成分、毒性、剂型等情况,分析菠萝病虫害防控使用农药产品需求,为开展特色小宗作物——菠萝农药登记提供依据。

广东稻瘟病菌生理小种的分布及发生动态

１９９１一１９９４年对广东省稻瘟病菌生理小种发生和分布情况的研究表明，ＺＢ群是广东的优势种群，ＺＣ群次之；优势小种主要是Ｂ＿（１３）、Ｂ＿５、Ｂ＿１和Ｃ＿（１３）。但不同稻作区之间发生动态有差异，优势种群ＺＢ群是随着海拔高度上升，出现频率逐渐上升，优势小种的致病性也是随着纬度上升而增强。

粳籼89穗颈瘟分离菌株的致病力及遗传宗谱研究

通过对粳籼89的穗颈瘟分离菌株的致病力及遗传宗谱研究,结果表明:(1)粳籼89分离菌株的小种类型复杂,既有籼型小种如ZA1、ZB1、ZB5、ZB13、ZC13等,又有粳型小种如ZD5、ZG1等;(2)该类菌株的致病力存在不稳定性,同一菌株不同时间接种,鉴别寄主上表现的小种类型不同,对其他主栽水稻品种或抗源的致病力也表现不同,但这些菌株无论何时接种到粳籼89上均能使其表现感病,病级在4级以上;(3)该类菌株接种到粳籼89衍生品种或其他粳籼杂交后代上,一般能侵染这类品种;(4)利用RFLP技术,采用探针MGR586与限制性内切酶EcoRI组合对病菌进行DAN指纹分析,结果16个粳籼89分离菌株被分在2个相邻的遗传宗谱里,即宗谱1(9个菌株)和宗谱2(7个菌株),这两个宗谱恰好是广东的优势宗谱。

籼稻品种三黄占2号的稻瘟病持久抗性评价与遗传分析

籼稻三黄占2号在生产上种植10多年,表现了稳定持久的稻瘟病抗性。接种及多点田间试验结果表明,三黄占2号不仅对中国稻瘟病菌株有广谱抗性,而且对菲律宾稻瘟病菌株亦有高的抗性频率(98%)。在国际稻瘟病圃(IRBN)其叶瘟及穗瘟抗性相当或好于持久抗性品种OS6、Moroberekan和IR36。三黄占2号感病后,亦显示出高水平稻瘟病数量抗性。分析由三黄占2号与丽江新团黑谷杂交构建的重组自交系分离群体的抗病性,发现三黄占2号稻瘟病质量抗性是由多个主效基因控制的,其稻瘟病数量抗性是非小种专一的。应用候选抗性基因方法鉴定出3个质量抗性主效基因,5个与其数量抗性显著相关的防卫基因标记(P≤0.05)。结果表明,广谱的质量抗性与高水平的数量抗性的结合,使三黄占2号获得稳定持久的稻瘟病抗性。用回交法把三黄占2号的抗病性基因导入优质高产感病品种特籼占13号,获得与三黄占2号的抗病性相类似的BC3F3株系,分子标记辅助检测证明三黄占2号的主效基因及QTLs能较好地遗传给杂交后代。初步选出一些抗病性好及经济性状好的新抗病品系。

抗稻瘟病单基因系对籼稻稻瘟病菌小种鉴别力分析

利用 30个抗稻瘟病单基因系对 14 6个来自广东的稻瘟病菌单孢分离菌株进行了致病性测定 ,其中 17个单基因系对测试菌株的致病性有较好的鉴别力。基于主成分因子分析法 ,对 17个单基因系和 14 6个菌株组成的互作变量矩阵进行了因子提取 ,结果表明其中 9个单基因系为代表的抽提因子可以解释变量总方差的 80 .4 37% ,初步组建了这 9个单基因系构成的稻瘟病菌生理小种单基因系鉴别寄主。按其对变量方差贡献大小排序 ,它们分别是 :IRBLkp K6 0 (Pi kp)、IRBLi F5(Pi i)、F12 8 1(Pi ta2 )、IRBL9 W (Pi 9(t) )、IRBLsh S (Pi sh (1) )、IRBLz Fu(Pi z)、IRBLkh K3(Pi kh)、IRBL1 CL(Pi 1)、IRBLz5 CA(Pi z5)。用这 9个单基因系可将 14 6个菌株划分为 83个小种 ,将来自广西、福建、湖南、湖北、浙江、四川等籼稻区的 5 4个菌株划分为 2 6个小种。筛选的 9个单基因系对我国籼稻区稻瘟病菌致病性有较强的鉴别力。在抗病性鉴定中 ,基于单基因系的代表菌株选择 。

抗稻瘟病和纹枯病的转基因水稻新品系

将水稻碱性几丁质酶基因 (RC2 4)导入优良籼稻品种竹籼B ,外源RC2 4基因可以稳定整合到R0代至R6代转基因水稻基因组中 ,并得到表达 .已获得同时抗稻瘟病和纹枯病的转基因品系竹转 6 8和竹转70以及 43个转基因纯合株系 .

水稻空间诱变突变品系主要农艺经济性状及稻瘟病抗性变异

对籼稻品种特籼占13经返回式卫星搭载空间诱变的21个高代(SP10)突变品系的主要农艺经济性状以及稻瘟病抗性表现进行考察.结果表明:参试的各突变品系大部分主要农艺经济性状均表现明显的变异,既有正向也有负向变异;不同突变品系对稻瘟病的抗性表现差异很大,同一突变品系对不同致病菌株的抗性表现差异也较大,表明空间诱变对稻瘟病抗性变异作用明显但较为复杂.从参试突变品系中可选出在株高、熟期、产量、外观品质和抗性等性状同时得到明显改良的新品种和新种质.

使用双抗真菌蛋白基因提高水稻抗病性的研究

将含有串联的RC24基因和β-1，3－Glu基因的pGB12质粒与含有hpt基因的p35H质粒用基因枪法同时导入华南地区一优良籼稻（OryzasativaL．ssp．indica）品种“七丝软占”中。Southernblot分析证明获得17个同时整合有RC24基因和β-1，3－Glu基因的转基因系。而Northernblot分析表明在不同的转基因系中两基因的表达量存在很大差异。对R1及R2代转基因植株的分子分析表明，这两个基因已稳定遗传到R1、R2代，并在RNA水平上持续表达。转基因植株苗期抗稻瘟病试验表明，部分R1代转基因植株苗对广东省稻瘟病菌（Magnaphorthagrisea）中的5个代表菌株表现出不同程度的抗性提高。而其中18株抗性提高的R1代转基因植株的R2代各苗对广东省稻瘟病菌优势生理小种中的3个代表菌株表现出一致的抗性提高，结合分子分析，初步证明获得10株整合有RC24和β-1，3－Glu双基因的稻瘟病抗性提高的R1代转基因纯系植株。且这些转基因纯系植株的离体叶片对纹枯病菌（RhizoctoniaSolaniKuhn的抗性也明显提高。

水稻品种对稻瘟病的质量抗性和数量抗性的初步研究

水稻品种对稻瘟病的质量抗性和数量抗性的初步研究朱小源，杨祁云，霍超斌，伍尚忠（广东省农业科学院植物保护研究所，广州５１０６４０）关键词：稻瘟病；水稻品种；质量抗性；数量抗性ＳｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅＱｕａｌｉｔａｔｉｖｅａｎｄＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＲ...