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正常人眼角膜上皮细胞的原子力显微镜观察 被引量:10
1
作者 蔡小芳 杨筱曦 +1 位作者 蔡继业 邓华 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期881-885,共5页
应用原子力显微镜(AFM)在单细胞水平上分析了人眼角膜上皮细胞的形貌和机械性质,为进一步探讨人眼角膜上皮细胞结构与功能的关系奠定了基础。将体外培养的人眼角膜上皮细胞用2.5%戊二醛固定,空气中干燥后用原子力显微镜进行观察。从AFM... 应用原子力显微镜(AFM)在单细胞水平上分析了人眼角膜上皮细胞的形貌和机械性质,为进一步探讨人眼角膜上皮细胞结构与功能的关系奠定了基础。将体外培养的人眼角膜上皮细胞用2.5%戊二醛固定,空气中干燥后用原子力显微镜进行观察。从AFM形貌图可知,细胞呈长梭形,膜表面布满颗粒状物质,由AFM附带软件IP2.1的线分析及面分析功能,得到细胞膜表面结构的几何参数,包括高低差Rp-v、均方根粗糙度Rq、平均粗糙度Ra、平均高度Meant Ht。利用AFM高空间分辨的力位移曲线测量系统,可得出细胞膜的粘弹力、硬度和杨氏模量。AFM能对人眼角膜上皮细胞表面的超微结构清晰地成像并提供更多更确切的表面信息,从另一层面增加对眼角膜上皮细胞的认识。 展开更多
关键词 原子力显微镜 人眼角膜上皮细胞 形貌 粘弹力 硬度 杨氏模量
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人羊膜上皮细胞的诱导分化 被引量:6
2
作者 周清 杨筱曦 +2 位作者 阮余霞 蔡小芳 陈剑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期503-505,509,共4页
目的:建立体外培养及标记人羊膜上皮细胞(HAECs)的方法并应用原子力显微镜(AFM)从细胞形貌变化上探讨人羊膜上皮细胞向角膜上皮细胞转分化的可视性研究。方法:取足月产人羊膜,采用酶消化法获得HAECs进行原代和传代培养,对培养的细胞进... 目的:建立体外培养及标记人羊膜上皮细胞(HAECs)的方法并应用原子力显微镜(AFM)从细胞形貌变化上探讨人羊膜上皮细胞向角膜上皮细胞转分化的可视性研究。方法:取足月产人羊膜,采用酶消化法获得HAECs进行原代和传代培养,对培养的细胞进行形态学观察和鉴定;HAECs与兔角膜基质细胞共培养2周,采用CK3+12免疫荧光细胞化学染色鉴定诱导后的细胞;应用AFM分别对共培养前后的人羊膜上皮细胞的表面超微结构进行观察,并与人角膜上皮细胞(HCECs)对比,分析细胞形貌的变化。结果:HAECs体外培养呈铺路石样外观,核/质比率小,连接成片。细胞形态为多角形,角蛋白keratin表达阳性,不表达CK3+12;免疫荧光显示共培养2周的HAECs表达CK3+12;AFM观察,共培养2周后HAECs细胞核中央由山谷样外观转变成类似HCECs的山峰样外观。结论:HAECs可成功进行原代和传代培养,在兔角膜基质细胞诱导培养条件下可向角膜上皮细胞转分化。 展开更多
关键词 原子力显微镜 人羊膜上皮细胞 转分化 角膜上皮细胞
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不同消化分离方法分离人羊膜间充质干细胞效果比较 被引量:10
3
作者 肖盼 陈剑 +4 位作者 王彦平 吴静 郭娴吟 杨筱曦 刘小勇 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期1033-1037,共5页
目的:比较不同消化分离方法提取人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)的分离效果,以供选择一种更有效的分离方法。方法:将新鲜羊膜组织分成4片6cm×6cm大小的组织块,采用4种不同方法进行消化分离:第1组:先刮除+胶原酶Ⅱ组;第2组:先刮除+胶原... 目的:比较不同消化分离方法提取人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)的分离效果,以供选择一种更有效的分离方法。方法:将新鲜羊膜组织分成4片6cm×6cm大小的组织块,采用4种不同方法进行消化分离:第1组:先刮除+胶原酶Ⅱ组;第2组:先刮除+胶原酶Ⅳ组;第3组:先剪碎+胶原酶Ⅱ组;第4组:先剪碎+胶原酶Ⅳ组。对这4组原代培养HAMSCs进行存活数、形态学观察比较,第3代HAMSCs抗原检测及成脂成骨诱导分化实验。结果:第1组和第2组的HAMSCs存活数高于第3组和第4组(P<0.05)。第1组和第2组的HAMSCs成份较第3组和第4组纯净,后2组夹杂着一些团状的人羊膜上皮细胞(HAECs)。抗原结果显示CD29、CD44、CD73、CD90、CD105表达阳性,CD31、CD34、CD45、HLA-DR表达阴性,Vimentin、SSEA-3、SSEA-4、OCT-4、telom-erase结果阳性。成脂成骨诱导分化实验成功。结论:通过先将人羊膜用胰蛋白酶+EDTA消化液消化后,再将HAECs刮除干净,然后剪碎再用胶原酶消化的改进方法对HAMSCs保护较好,较易提取,获取细胞量和纯度均较传统方法高。胶原酶Ⅱ和胶原酶Ⅳ2种消化酶对HAMSCs的提取影响不大。 展开更多
关键词 羊膜 间充质干细胞 细胞分离
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核心蛋白聚糖对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响 被引量:9
4
作者 周清 郭娴吟 +1 位作者 杨筱曦 陈剑 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期919-923,共5页
目的:观察核心蛋白聚糖(DCN)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增殖的影响,并对照观察丝裂霉素C(MMC)对HPF的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新途径。方法:(1)取患者的翼状胬肉体部组织,采用组织块贴壁培养法原代培养HPF。(2)... 目的:观察核心蛋白聚糖(DCN)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增殖的影响,并对照观察丝裂霉素C(MMC)对HPF的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新途径。方法:(1)取患者的翼状胬肉体部组织,采用组织块贴壁培养法原代培养HPF。(2)用0.01、0.1、1、5、10 mg/L DCN及MMC分别作用于体外培养的HPF,24 h、48 h、72 h后观察2种药物对HPF形态的改变,2种药物不同浓度分别作用12 h、24 h、48 h后MTT法比较2种药物的作用效果,不同浓度的DCN作用48 h后免疫组织化学染色增殖细胞核抗原(PCNA)法检测细胞生长活性,流式细胞术测定细胞周期时相变化。结果:10 mg/L DCN或1 mg/L MMC在12 h后均能显著抑制HPF的增殖(P<0.05),呈剂量和时间依赖性。1~10 mg/L DCN作用48 h使G0/G1期细胞百分比上升(P<0.05),5~10 mg/L DCN作用48 h使G2/M期和S期百分比(G2/M%+S%)显著下降(P<0.05),实验组和对照组均未检测到终末期凋亡细胞。1~10 mg/L DCN能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论:核心蛋白聚糖能抑制HPF的增殖,阻滞细胞在DNA合成前期。 展开更多
关键词 翼状胬肉 成纤维细胞 核心蛋白聚糖 丝裂霉素
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Purtscher及Purtscher样视网膜病变临床特征分析 被引量:3
5
作者 夏朝霞 冯志贞 +2 位作者 杨筱曦 陈向华 马演玲 《临床眼科杂志》 2014年第6期505-508,共4页
目的探讨Purtscher视网膜病变及Purtscher样视网膜病变的临床特征。方法对8例(14只眼)Purtscher视网膜病变及12例(22只眼)Purtscher样视网膜病变患者的视力、病因、眼底表现、荧光素眼底血管造影(FFA)图像特征及预后进行分析。结果致Pur... 目的探讨Purtscher视网膜病变及Purtscher样视网膜病变的临床特征。方法对8例(14只眼)Purtscher视网膜病变及12例(22只眼)Purtscher样视网膜病变患者的视力、病因、眼底表现、荧光素眼底血管造影(FFA)图像特征及预后进行分析。结果致Purtscher视网膜病变常见外伤有严重的头部外伤、胸部挤压伤及粉碎性骨折;由全身疾病引起的Purtscher样视网膜病变常见疾病有系统性红斑狼疮、硬皮病、皮肌炎、急性胰腺炎、多发性骨髓瘤,血小板减少性紫癜及羊水栓塞;眼底共性表现为:棉絮斑、Purtscher斑、视网膜出血,视网膜变白水肿、视乳头水肿;患者视力均有不同程度受损,预后差别大;总体疗效评价一般。结论 Purtscher及Purtscher样视网膜病变病因虽然不同,但造成视力损害主要原因均为小血管闭塞、视网膜出血、变白水肿,视盘及黄斑区水肿。治疗后可挽救部分视力,但总体效果不理想。 展开更多
关键词 Purtscher 视网膜病变 血管闭塞 荧光素眼底血管造影
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体外诱导人羊膜上皮细胞分化为角膜上皮样细胞的初步研究
6
作者 姚敏 陈剑 +4 位作者 王文娟 张晓玲 杨筱曦 周清 徐锦堂 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2012年第9期801-805,共5页
目的探索以人永生化角膜上皮细胞( immortalized human corneal epithelial cells,ihCEC) 培养液体外模拟角膜上皮细胞微环境,诱导人羊膜上皮细胞( human corneal epithe-lial cells,hAEC) 分化为角膜上皮样细胞的可行性。方法取( 37 &#... 目的探索以人永生化角膜上皮细胞( immortalized human corneal epithelial cells,ihCEC) 培养液体外模拟角膜上皮细胞微环境,诱导人羊膜上皮细胞( human corneal epithe-lial cells,hAEC) 分化为角膜上皮样细胞的可行性。方法取( 37 ± 1) 周剖宫产人羊膜组织,酶消化法提取 hAEC; 流式细胞仪测 CD29、CD90、CD105、CD34、HLA-DR 的表达。复苏培养 ihCEC,以 0 mg·L- 1、10 mg·L- 1、20 mg·L- 1、30 mg·L- 1、40 mg·L- 1丝裂霉素 37℃作用 2 h,吸去丝裂霉素,继续培养 72 h 后 CCK8 测吸光度并计算增殖抑制率。10 mg·L- 1、20 mg·L- 1丝裂霉素处理细胞后 12 h、24 h 收集细胞培养液培养 hAEC,CCK8 测吸光度绘制生长曲线; 收集 ihCEC 细胞培养液,制备条件培养基( CM) 培养 hAEC 10 d,倒置显微镜观察细胞形态,免疫荧光检测 CK12 的表达。结果 hAEC 可表达 CD29、CD90、D105,不表达 CD34、HLA-DR; 各浓度丝裂霉素组增殖抑制率分别为 10 mg·L- 1( 65. 48% ±1. 03) 、20 mg · L- 1( 77. 01% ± 0. 99) 、30 mg · L- 1( 75. 25% ± 0. 71) 、40 mg · L- 1( 76. 90% ±0. 97) ;20 mg·L- 1丝裂霉素培养 12 h 收集的细胞培养液对 hAEC 具有明显促增殖作用; 诱导分化后 hAEC 可表达 CK12。结论以 ihCEC 细胞培养液模拟的角膜上皮细胞微环境可诱导 hAEC 分化为角膜上皮样细胞。 展开更多
关键词 人永生化角膜上皮细胞 人羊膜上皮细胞 丝裂霉素 微环境 组织工程
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人羊膜上皮细胞的体外培养及标记
7
作者 阮余霞 周清 +5 位作者 陈剑 王彦平 杨筱曦 李红 唐光霞 吴静 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期555-558,共4页
目的改良人羊膜上皮细胞的培养方法,检测生长特性,观察荧光染料4,-6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记人羊膜上皮细胞(HAECs)的效率。方法取足月剖宫产术后羊膜经胶原酶和胰蛋白酶消化获得上皮细胞。MTT法绘制细胞生长曲线、流式细胞仪检测细... 目的改良人羊膜上皮细胞的培养方法,检测生长特性,观察荧光染料4,-6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记人羊膜上皮细胞(HAECs)的效率。方法取足月剖宫产术后羊膜经胶原酶和胰蛋白酶消化获得上皮细胞。MTT法绘制细胞生长曲线、流式细胞仪检测细胞的生长周期,免疫组化对细胞角蛋白进行鉴定。并用DAPI标记,测1、2周荧光阳性率。结果培养的HAECs多角形,生长分为缓滞期、对数增长期和平台期,近80%处于细胞周期的静止期G0。细胞角蛋白keratin阳性表达。DAPI标记1周标记率为100%;2周细胞形态好,标记率不变,荧光强度减弱。结论该实验方法成功培养人羊膜上皮细胞。DAPI短期标记效果理想。 展开更多
关键词 人羊膜上皮细胞 4 6-联脒-2-苯基吲哚 细胞培养
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复方樟柳碱穴位注射治疗干眼症的循证研究
8
作者 夏朝霞 杨筱曦 +4 位作者 冯志贞 陈向华 马演玲 屈蕾 陈斐妮 《眼科学》 2016年第3期70-76,共7页
目的:应用复方樟柳碱(compound anisodine, CA)注射液行颞浅动脉旁注射治疗干眼症,探讨干眼恢复的效果。方法:采用复方樟柳碱注射液2 ml对单纯性干眼症患者50例和难治性干眼症患者82例,行颞浅动脉旁注射2~5个疗程,观察注射前后干眼的各... 目的:应用复方樟柳碱(compound anisodine, CA)注射液行颞浅动脉旁注射治疗干眼症,探讨干眼恢复的效果。方法:采用复方樟柳碱注射液2 ml对单纯性干眼症患者50例和难治性干眼症患者82例,行颞浅动脉旁注射2~5个疗程,观察注射前后干眼的各项指标:泪膜破裂时间(break-up time, BUT)、基础泪液分泌试验(Schinmer II test, Sit II)、角膜荧光素钠染色(fluorescein, FL)及干涩、刺痛、流泪、畏光、异物感、视物模糊等症状。结果:治疗2~5个疗程后分别观察上述指标,干涩、异物感减轻,刺痛、流泪、畏光、视物模糊消失,与治疗前比较BUT明显延长(t = 25.366, 22.125, 17.148),SIt分泌增加(t = ?14.726, ?17.213, ?7.256),FL染色率也明显减少。差异均有统计学意义(p <0.01)。结论:无论是单纯性干眼症和难治性干眼症患者采用复方樟柳碱注射液行颞浅动脉旁注射治疗后症状和体征均有显著性改善。 展开更多
关键词 复方樟柳碱 颞浅动脉 干眼
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原子力显微镜对人羊膜上皮细胞的观察 被引量:2
9
作者 陈茜 杨筱曦 +1 位作者 蔡小芳 蔡继业 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期39-42,共4页
目的:在单细胞水平上分析人羊膜上皮细胞的超微结构及其机械性能(粘弹力、杨氏模量、硬度等),为进一步认识细胞结构与功能的关系奠定基础。方法:应用原子力显微镜(AFM)高分辨率、高灵敏度的特点,对人的羊膜上皮细胞进行观察。结果:人羊... 目的:在单细胞水平上分析人羊膜上皮细胞的超微结构及其机械性能(粘弹力、杨氏模量、硬度等),为进一步认识细胞结构与功能的关系奠定基础。方法:应用原子力显微镜(AFM)高分辨率、高灵敏度的特点,对人的羊膜上皮细胞进行观察。结果:人羊膜上皮细胞呈椭圆形,由原子力显微镜力位移曲线测量系统,可得粘弹力:1034.375±294.21pN,硬度:1.1815±0.326mN/m,杨氏模量:16.44±4.67Kpa。结论:AFM能对人羊膜上皮细胞表面超微结构清晰地成像及提供更多更确切的表面信息及机械性能,从而增加对羊膜上皮细胞的认识。 展开更多
关键词 原子力显微镜(AFM) 人羊膜上皮细胞 形貌 粘弹力 硬度 杨氏模量
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共聚焦显微镜下观察糖尿病兔角膜细胞改变 被引量:1
10
作者 何艳花 陈剑 +4 位作者 王彦平 周清 张婷 杨筱曦 张静辉 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第8期1253-1255,共3页
目的:通过对糖尿病兔角膜连续活体观察,研究糖尿病角膜病理变化。方法:四氧嘧啶静脉注射12只新西兰大白兔,复制糖尿病疾病模型;另外3只为空白对照。用共聚焦显微镜在四氧嘧啶给药前和糖尿病模型建成后4、8、12周对角膜进行观察。结果:... 目的:通过对糖尿病兔角膜连续活体观察,研究糖尿病角膜病理变化。方法:四氧嘧啶静脉注射12只新西兰大白兔,复制糖尿病疾病模型;另外3只为空白对照。用共聚焦显微镜在四氧嘧啶给药前和糖尿病模型建成后4、8、12周对角膜进行观察。结果:随疾病模型建立时间的延长,糖尿病兔角膜出现上皮细胞脱落增多,前、后基质细胞数目减少,内皮多形性细胞增加,内皮数目减少。结论:糖尿病兔角膜病变,上皮细胞、基质细胞、内皮细胞随病程时间延长而减少。 展开更多
关键词 糖尿病 角膜 共聚焦显微镜
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小干扰RNA-Pax6对人晶状体上皮细胞生物学行为和上皮-间质转化的抑制作用
11
作者 郑宇星 杨筱曦 +3 位作者 易果果 吴淑端 冯志贞 夏朝霞 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期499-506,共8页
目的探讨沉默人类同源配对盒基因6(Pax6)对人晶状体上皮细胞(LECs)的生物学行为和上皮-间质转化(EMT)的作用。方法将SRA01/04人LECs分为小干扰RNA-Pax6(siRNA-Pax6)组和siRNA阴性对照(siRNA-NC)组,siRNA-Pax6组细胞转染siRNA-Pax6,siRNA... 目的探讨沉默人类同源配对盒基因6(Pax6)对人晶状体上皮细胞(LECs)的生物学行为和上皮-间质转化(EMT)的作用。方法将SRA01/04人LECs分为小干扰RNA-Pax6(siRNA-Pax6)组和siRNA阴性对照(siRNA-NC)组,siRNA-Pax6组细胞转染siRNA-Pax6,siRNA-NC组细胞转染无序siRNA。转染后24、48、72 h采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率;转染后48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡比例和不同细胞周期细胞比例;转染后24 h,采用细胞划痕实验检测细胞迁移率;转染后48 h,采用实时荧光定量PCR检测细胞内Pax6、α-晶状体蛋白A(CRYAA)、α-晶状体蛋白B(CRYAB)、转录因子Sox2及EMT相关分子平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)mRNA相对表达量,采用Western blot法检测各组细胞中Pax6蛋白相对表达量。结果2个组转染后不同时间点细胞存活率总体比较差异均有统计学意义(F_(分组)=4.776,P<0.05;F_(时间)=13.535,P<0.05),其中转染后48 h和72 h,siRNA-Pax6组细胞存活率均明显低于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与siRNA-NC组比较,siRNA-Pax6组G_(0)/G_(1)期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,差异均有统计学意义(t=9.971、-5.063,均P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞迁移率为(19.73±6.07)%,低于siRNA-NC组的(70.56±2.97)%,差异有统计学意义(t=-7.245,P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞中Sox2和α-SMA mRNA相对表达量低于siRNA-NC组,E-cadherin mRNA相对表达量高于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(t=-23.254、-5.294、6.062,均P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中CRYAA和CRYAB mRNA相对表达量明显高于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(t=5.521、8.270,均P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中Pax6 mRNA相对表达量为0.27±0.01,低于siRNA-NC组的1.00±0.05,差异有统计学意义(t=-14.456,P<0.001);siRNA-Pax6组细胞中Pax6蛋白相对表达量为0.24±0.05,低于siRNA-NC组的1.14±0.10,差异有统计学意义(t=-4.458,P<0.001)。结论沉默Pax6可抑制人LECs的增生及EMT过程,维持人LECs内正常晶状体蛋白的表达。 展开更多
关键词 小干扰RNA 人类同源配对盒基因6 后发性白内障 人晶状体上皮细胞 上皮-间质转化
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丝裂霉素C对翼状胬肉成纤维细胞膜通透性及超微结构的影响 被引量:6
12
作者 杨筱曦 蔡小芳 +3 位作者 陈剑 李彬斌 何艳花 张静辉 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期490-494,共5页
背景丝裂霉素C(MMC)对人翼状胬肉成纤维细胞的生长和增生有明显的抑制作用,但关于其对细胞膜影响的研究很少。目的探讨MMC对翼状胬肉成纤维细胞膜理化特性及超微结构改变的干预。方法收集翼状胬肉手术切除标本15例,用组织块培养法... 背景丝裂霉素C(MMC)对人翼状胬肉成纤维细胞的生长和增生有明显的抑制作用,但关于其对细胞膜影响的研究很少。目的探讨MMC对翼状胬肉成纤维细胞膜理化特性及超微结构改变的干预。方法收集翼状胬肉手术切除标本15例,用组织块培养法培养人成纤维细胞,以波形蛋白免疫组织化学染色法对培养细胞进行鉴定。取传3代后对数生长期细胞以5×10^3个/孔的密度接种于96孔板,将不同质量浓度0、50、100、200、300、400mg/LMMC加入培养孔中处理翼状胬肉成纤维细胞12h,用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测培养细胞的活力,应用Annexin V—FICT/碘化丙啶(PI)法检测细胞凋亡的情况;利用原子力显微镜(AFM)观察不同质量浓度MMC作用后人成纤维细胞膜超微结构的改变;检测细胞上清液中丙二醛(MDA)的浓度以评价细胞的脂质过氧化程度;检测细胞外液中漏出的乳酸脱氢酶(LDH)含量以评估细胞膜的通透性变化;用Fluo-3/AM标记和流式细胞术检测培养细胞内游离钙离子的变化。结果组织块法原代培养贴壁1~2周可见大量长梭形细胞爬出,波形蛋白检测呈阳性反应。用MMC处理培养细胞12h后,人成纤维细胞的活力减弱,MMC对细胞增生的抑制作用呈剂量依赖性。0、50、100、200、300mg/LMMC处理组细胞凋亡百分比分别为4.2%、4.2%、5.4%、19.3%和25.8%。AFM下可见不同质量浓度MMC作用后人成纤维细胞膜超微结构的异常,不同质量浓度MMC处理组细胞外液中LDH活性及细胞上清液中MDA浓度明显高于对照组,且均随着MMC质量浓度的增加,LDH活性及细胞上清液中MDA浓度逐渐增加,组间两两比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。Fluo-3/AM标记和流式细胞术检测表明,培养细胞内游离钙离子增多。结论MMC能引起翼状胬肉成纤维细胞膜的理化性质改变,其作用呈剂量依赖性,细胞膜是其药效和毒性的作用靶点之一。 展开更多
关键词 丝裂霉素C 翼状胬肉 细胞毒性 超微结构
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人羊膜上皮细胞培养液抑制角膜新生血管的实验研究 被引量:2
13
作者 李彬斌 杨筱曦 +2 位作者 周清 何艳花 陈剑 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期408-413,共6页
背景角膜新生血管(CNV)是一种常见的眼部病变,研究其发病机制及其抑制剂是眼科研究的热点和难点。目的研究人羊膜上皮细胞(AECs)培养液对CNV的抑制作用及机制。方法消化法培养及鉴定人AECs,并收集培养液,酶联免疫吸附试验(ELIS... 背景角膜新生血管(CNV)是一种常见的眼部病变,研究其发病机制及其抑制剂是眼科研究的热点和难点。目的研究人羊膜上皮细胞(AECs)培养液对CNV的抑制作用及机制。方法消化法培养及鉴定人AECs,并收集培养液,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测色素上皮衍生因子(PEDF)和白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)在培养液中的质量浓度。兔角膜上皮细胞分离后分别用无血清DMEM培养基、人AECs培养液、混合培养液(DMEM+人AECs培养液)培养48h,采用实时定量聚合酶链反应(QRT—PCR)法检测不同培养液培养的角膜上皮细胞中血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达。用含质量分数10%胎牛血清的DMEM培养基培养人脐静脉血管内皮细胞(UVECs),并分别加入无血清DMEM、混合培养液和人AECs培养液,划痕法和细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测各组培养液对人UVECs迁移的影响。分别在上述3种培养基中加入终质量浓度为50txg/L的bFGF,CCK8法检测各培养液中人UVECs的增生情况。在原子力显微镜(AFM)下观察人AECs培养液对人UVECs超微结构的影响。结果人羊膜培养和传代细胞角蛋白免疫组织化学染色阳性证实为人AECs。与无血清DMEM组相比,人AECs培养液组的兔角膜上皮细胞VEGFmRNA(1.00+0.22VS.2.98_+0.46)及bFGFmRNA(1.00+0.36VS.2.55-+0.48)的表达均明显下降,差异均有统计学意义(p_-0.001、0.002);培养后不同时间人AECs培养液组人UVECs的增生吸光度(A)值明显下降,差异均有统计学意义(P〈0.05),人UVECs的迁移率下降,差异有统计学意义(P〈0.05)。AFM观察见人AECs培养液组的血管内皮细胞膜粗糙、表面颗粒紊乱,细胞间连接及伪足减少。ELISA法检测人AECs培养液中PEDF的质量浓度为(70.41±0.68)Ixg/L,IL-1Ra的质量浓度为(153.56±0.36)-s/L,无血清DMEM组中未检出。结论人AECs培养液可抑制角膜上皮VEGF及bFGF的表达,抑制血管内皮细胞的增生和迁移,细胞结构和功能改变,这可能是其抑制CNV的机制之一。 展开更多
关键词 人羊膜上皮细胞 角膜新生血管 血管内皮生长因子 人脐静脉血管内皮细胞 碱性成纤 维细胞生长因子 超微结构
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抑制翼状胬肉术后血管增生免疫纳米微球VEGF McAb-PLA(Tet)-NP的制备方法研究 被引量:2
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作者 夏朝霞 杨筱曦 +3 位作者 冯志贞 陈向华 屈蕾 马演玲 《中华眼科医学杂志(电子版)》 2016年第3期124-129,共6页
目的探讨制备抑制翼状胬肉术后血管增生免疫纳米微球,即血管内皮生长因子单克隆抗体.聚乳酸(汉防已甲素)。纳米微粒[VEGFMcAb—PLA(Tet)-NP]的制备方法。方法采用复乳法,以天然中药Tet作为试验药物,以PLA为包封材料,制备汉防... 目的探讨制备抑制翼状胬肉术后血管增生免疫纳米微球,即血管内皮生长因子单克隆抗体.聚乳酸(汉防已甲素)。纳米微粒[VEGFMcAb—PLA(Tet)-NP]的制备方法。方法采用复乳法,以天然中药Tet作为试验药物,以PLA为包封材料,制备汉防已甲素聚乳酸纳米微粒·PLA(Tet)-NP]。观察其表面形态、结构、粒径及电动电位(Zeta电位)。采用碳二亚胺法将Tet聚乳酸纳米微球PLA(Tet)-NP与抗人VEGFMcAb连接,制备免疫纳米微球。观察其表面形态、结构、粒径及Zeta电位。结果成功制备出了PLA(Tet)-NP及VEGFMcAb—PLA(Tet)-NP。微粒的表征:类圆形囊泡,均质,粒径大小约为200-242nm,Zeta电位为-7.7my。结论通过聚乳酸为包封材料,可成功制备出载药PLA(Tet)-NP,采用碳二亚胺法与抗人VEGFMcAb成功连接。为今后进一步开展抑制翼状胬肉术后血管增生的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 汉防已甲素(Tet) 聚乳酸 NP 免疫微球 VEGF
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糖尿病患者超声乳化白内障吸除术后干眼症相关指标变化的临床观察 被引量:5
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作者 苗晓晴 黄祖烽 杨筱曦 《中华眼科医学杂志(电子版)》 2015年第6期18-23,共6页
目的了解糖尿病(DM)患者超声乳化白内障吸除术后干眼症相关指标的变化。方法收集2013年10月至2015年1月期间广东省湛江中心人民医院眼科行超声乳化白内障吸除术的80例(80只眼)白内障患者的临床资料。术前对所有患者进行基础泪液分泌试验... 目的了解糖尿病(DM)患者超声乳化白内障吸除术后干眼症相关指标的变化。方法收集2013年10月至2015年1月期间广东省湛江中心人民医院眼科行超声乳化白内障吸除术的80例(80只眼)白内障患者的临床资料。术前对所有患者进行基础泪液分泌试验(SIt)及泪膜破裂时间(BUT)检测,均在正常范围;患者除视物模糊外,无其他主观不适。按是否患合并DM将患者分为实验组38例(38只眼)和对照组42例(42只眼)。实验组和对照组患者的SIt和BUT变化值以均数±标准差(x珋±s)的形式表示,并采用配对t检验进行组内比较;采用独立样本t检验的统计学方法进行组间比较。结果实验组术前3 d、术后1周和术后3个月SIt平均值分别为(10.58±0.89)mm、(6.08±0.63)mm及(9.63±1.03)mm,术后1周及3个月与术前相比,差异有统计学意义(t1=25.43,4.31;P1<0.05)。实验组术前3 d、术后1周和术后3个月BUT平均值分别为(9.40±1.21)s、(4.88±1.90)s及(7.79±1.22)s,术后1周及3个月与术前相比,差异有统计学意义(t1=12.37,5.78;P1<0.05)。对照组术前3 d、术后1周和术后3个月SIt平均值分别为(11.02±0.87)mm、(8.52±1.11)mm及(10.14±0.95)mm,术后1周及3个月与术前相比,差异有统计学意义(t2=11.49,4.42;P2<0.05)。对照组术前3 d、术后1周和术后3个月BUT平均值分别为(9.60±0.73)s、(5.17±0.44)s及(7.83±0.73)s,术后1周及3个月与术前相比,差异有统计学意义(t2=33.68,11.11;P2<0.05)。术后1周实验组SIt下降(4.50±1.03)mm,对照组下降(2.50±0.94)mm,两组比较,差异有统计学意义(t=6.63,P<0.05)。术后1周实验组BUT下降(4.60±1.68)s,对照组下降(4.43±0.83)s,两组比较,差异有统计学意义(t=2.30,P<0.05)。术后3个月实验组SIt下降(0.95±0.61)mm,对照组SIt下降(0.88±0.59)mm,两组比较,差异无统计学意义(t=0.49,P>0.05)。术后3个月实验组BUT下降(1.69±0.75)s,对照组下降(1.76±0.58)s,两组比较,差异无统计学意义(t=0.04,P>0.05)。术后1周两组患者均出现干眼症症状,如干涩感、异物感、畏光烧灼感、痒感、眼红、视疲劳、视物模糊及视力波动等症状。部分患者角膜荧光素钠染色(+),可见角膜上皮散在均匀分布的近圆形干燥斑。术后3个月干眼症症状逐渐消退,角膜荧光素染色(-),干燥斑消失。结论DM会影响超声乳化白内障吸除术后早期眼表功能的恢复,对患者远期干眼症相关指标无明显影响。 展开更多
关键词 糖尿病 超声乳化白内障吸除术 基础泪液分泌试验 泪膜破裂时间
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碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人羊膜间充质干细胞增殖的影响 被引量:5
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作者 高松哲 陈剑 +6 位作者 王彦平 肖盼 宋子宣 阮余霞 杨筱曦 吴静 唐光霞 《热带医学杂志》 CAS 2011年第5期543-545,共3页
目的观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)增殖的影响,以探索体外培养HAMSCs的最适条件。方法分离、培养HAMSCs,选取第3代细胞进行鉴定及检测。实验组将bFGF分为0.1、0.5、1、5、10、20、40、... 目的观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)增殖的影响,以探索体外培养HAMSCs的最适条件。方法分离、培养HAMSCs,选取第3代细胞进行鉴定及检测。实验组将bFGF分为0.1、0.5、1、5、10、20、40、80ng/ml共8个浓度组;阴性对照组只加HAMSCs,不加bFGF;空白对照组只加培养基。各组孵育48h后加入Am-Blue试剂,继续孵育,待培养基由靛青蓝色开始变成粉红色时取出用酶标仪测量各组的吸光度(OD),重复3次实验。结果 0.5、1、5、10、20、40、80ng/ml浓度组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);10ng/ml组与0.5、1、5ng/ml组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);10ng/ml组与40、80ng/ml组相比,差异无统计学意义(P=0.067),表明bFGF促增殖作用最强的最小浓度为10ng/ml。结论 bFGF能够促进HAMSCs增殖,且促增殖作用最强的最小浓度为10ng/ml。 展开更多
关键词 羊膜 间充质干细胞 碱性成纤维细胞生长因子 增殖力 Am-Blue
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伴先天性视网膜色素上皮肥大的家族性腺瘤性息肉病诊疗探索
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作者 黄小波 张迪 +5 位作者 彭慧 杨筱曦 屈蕾 郑宇星 夏朝霞 任东林 《结直肠肛门外科》 2021年第5期446-452,共7页
家族性腺瘤性息肉病(FAP)有高度恶变倾向,提倡早诊断早治疗。先天性视网膜色素上皮肥大(CHRPE)是该病最常见且最早出现的肠外表现。结合已有文献报道和作者团队临床实践经验,我们认为,虽然目前以CHRPE作为早期确诊FAP体征的诊断标准尚... 家族性腺瘤性息肉病(FAP)有高度恶变倾向,提倡早诊断早治疗。先天性视网膜色素上皮肥大(CHRPE)是该病最常见且最早出现的肠外表现。结合已有文献报道和作者团队临床实践经验,我们认为,虽然目前以CHRPE作为早期确诊FAP体征的诊断标准尚未建立,但采用结肠镜检查、基因检测和眼科筛查相结合的方法诊断FAP可为患者提供获益。本文通过分析本中心伴CHRPE表现的FAP病例诊治经验,对FAP家系进行眼科筛查,分析患者的眼部特征并展开思考,探讨将CHRPE作为早期特征性肠外表现诊断FAP的可行性。 展开更多
关键词 家族性腺瘤性息肉病 先天性视网膜色素上皮肥大 诊断
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精致假睫毛,后患不少
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作者 简文杨 杨筱曦 《幸福(时尚育儿)》 2018年第4期13-13,共1页
美丽的眼妆绝对是女性外貌加分的必备条件。时下,各种眼妆大法也层出不穷,让人目不暇接,然而眼科专家则提醒广大女性,千万不要只顾吸引别人的眼球而伤害了自己的眼睛,注重眼部健康才能顾盼生辉。
关键词 睫毛 眼科专家 女性
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