班氏促卵助孕汤改善多囊卵巢综合征小鼠卵母细胞的质量

背景:班氏促卵助孕汤改善多囊卵巢综合征卵母细胞质量的分子机制亟待完善补充。目的:探讨班氏促卵助孕汤对多囊卵巢综合征小鼠卵母细胞质量的影响和分子机制。方法:21 d龄雌性昆明小鼠颈部皮下注射硫酸脱氢表雄酮构建多囊卵巢综合征模型,连续给药21 d,记录动情周期及妊娠情况,ELISA检测血清性激素水平,Annexin V染色检测卵母细胞凋亡率,DCFH-DA荧光探针检测卵母细胞内活性氧水平,免疫荧光法观察卵母细胞纺锤体及染色体情况,网络药理学及分子对接验证班氏促卵助孕汤核心有效成分与卵母细胞成熟相关因子(生长分化因子9和骨形态发生蛋白15)结合活性,实时荧光定量PCR和Western blot检测卵母细胞中生长分化因子9和骨形态发生蛋白15的mRNA及蛋白表达水平。结果与结论:①班氏促卵助孕汤中的成分(槲皮素、山奈酚、β-谷甾醇)与生长分化因子9、骨形态发生蛋白15具有良好的结合活性;②班氏促卵助孕汤能恢复小鼠动情期,改善性激素紊乱和妊娠情况,降低细胞凋亡率、活性氧水平、纺锤体组装异常率、染色体丢失率(P<0.01,P<0.05),促进生长分化因子9、骨形态发生蛋白15 mRNA和蛋白表达(P<0.01,P<0.05)。结果表明,班氏促卵助孕汤可能通过调控生长分化因子9和骨形态发生蛋白15的基因表达,改善多囊卵巢综合征小鼠卵母细胞质量,提高生育力。

物理化学实验改进:原电池电动势与液接电势的测定

本文针对原电池电动势测定实验中被忽略的液接电势,设计了一套测定原电池总电动势的实验装置,将其纳入实验内容,并引入液接电势、可逆电池电动势与原电池总电动势的关系的探究。改进装置简单、成本低,所测液接电势具有较好的稳定性、重现性。改进后的实验更完整、真实地体现了原电池总电动势的组成,而并非仅局限于可逆电池电动势的测定,有助于学生建立完整、正确的原电池认知和电化学知识体系。此外,测出的浓差液接电势可应用于离子迁移数的计算,将电动势法测离子迁移数融入教学,实现课程融合,提升学生对知识的综合运用能力。

供体核种类对水牛核移植效果的影响

采用电融合法和直接注射法进行核移植,以比较不同来源和不同类型水牛供体细胞的核移植效果。当用电融合法进行核移植时,成体耳部成纤维细胞的融合率(46.0%)、卵裂率(53.9%)和囊胚发育率(10.9%),均显著低于胎儿成纤维细胞(64.5%,70.1%和21.6%)、胎儿皮肤细胞(71.5%,70.8%和22.1%)以及卵巢颗粒细胞(88.2%,79.1%和25.5%);后三种细胞间的卵裂率和囊胚发育率无显著差异,但卵巢颗粒细胞的融合率显著高于胎儿成纤维细胞和胎儿皮肤细胞(P<0.05)。当用直接注射法进行核移植时,胎儿皮肤细胞注核后的存活率(78.2%)、卵裂率(41.6%)均显著低于成体耳部成纤维细胞(88.6%和57.4%)和胎儿成纤维细胞(85.8%和65.0%)。胎儿成纤维细胞注核后的卵裂率和囊胚发育率(23.3%)均显著高于胎儿皮肤细胞(10.1%)和成体耳部成纤维细胞(12.0%)。结果表明:(1)采用直接注核法进行核移植时,胎儿成纤维细胞作为核供体较为合适,而采用电融合法进行核移植时,用颗粒细胞作核供体更为适宜;(2)胎儿成纤维细胞的核移植效果好于成体成纤维细胞。

加速发展我国洁蛋生产与消费重要性及关键技术探讨

综述了我国洁蛋生产消费的重要性研究进展,分析了我国洁蛋生产的现状及国外的生产情况,详细介绍了我国带壳鲜蛋清洗、消毒、干燥、分级、涂膜保鲜一系列的加工。

山羊精液冷冻保存技术研究

[目的]探索山羊精液的冷冻方法。[方法]以甘油为冷冻保护剂,采用细管法冷冻保存山羊精液,探讨甘油浓度和添加时间、冻结方法和解冻温度对山羊精液冷冻效果的影响。[结果]在稀释液中添加6%和7%甘油的处理组中,冻后精子活率与复苏率均显著高于添加3%、5%甘油的处理组。配液时添加6%甘油的处理组中冻后精子活率与复苏率均显著低于在4℃平衡后添加的处理组。把平衡的山羊精液分别在离液氮面3 cm处熏蒸9 min和-80℃冰箱中冻结9 min,前者的精子复苏率显著低于后者。在解冻温度分别为40、45和50℃的处理组中精子冻后活率与复苏率显著高于解冻温度为55和60℃的处理组,说明解冻温度以40～50℃为宜。[结论]在山羊精液冷冻保存中,甘油的最佳添加时间为4℃平衡后冻结前。

供体细胞培养处理方法对水牛核移植效果的影响

以经常规培养法 (DMEM+10 % FCS)、血清饥饿法 (DMEM+0 .5 % FCS培养 5～ 10 d)和 Apidicolin- APD结合血清饥饿法 (0 .1mg/ L APD培养 2 4 h,DMEM+0 .5 % FCS培养 1～ 18d)培养处理的水牛卵巢颗粒细胞和水牛成体耳部成纤维细胞作供核 ,分别采取带下注核法和胞质内注核法进行核移植。同一供核细胞各处理组间的核移植胚融合率 (以颗粒细胞作供核 )以及重组胚的囊胚发育率无明显差异 (P>0 .0 5 ) ,但经 APD+0 .5 % FCS培养处理供体细胞核移植后的分裂率显著高于其他组 (P<0 .0 5 )。用 7%乙醇处理的成体耳部成纤维细胞进行核移植 ,其重组胚的分裂率和囊胚发育率与对照组 (不含乙醇 )均无明显差异 (P>0 .0 5 )。结果表明 ,(1)血清饥饿处理水牛供体细胞对其核移植效果没有影响 ;(2 ) DNA合成抑制剂 APD结合血清饥饿培养处理水牛颗粒细胞和成体耳部成纤维细胞 ,可提高其核移植效果 ;(3)乙醇预激活处理水牛成体耳部成纤维细胞 。

广西巴马香猪耳皮成纤维细胞的分离与培养

试验主要对广西巴马香猪耳皮成纤维细胞的分离和培养进行了研究。利用组织块法能够成功分离培养广西巴马香猪耳皮成纤维细胞,其大小范围在1～3mm3,去除表皮有利于组织块贴壁和细胞的游出;而采用0.25%胰蛋白酶消化液4℃冷处理过夜,不仅有利于去表皮操作,减少取材处理时间,而且操作时间自由度大。在酶消化法中采用胰蛋白酶消化30min,胶原酶继续消化30～40min,能够成功分离培养广西巴马香猪耳皮成纤维细胞。广西巴马香猪皮肤成纤维细胞要经历滞留期、对数期、平台期,分别为0～2d、2～8d、8～12d。

不同中医证型原发性肝癌患者介入治疗前后血清蛋白指纹图谱的观察

目的应用表面加强激光解析电离化飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片检测不同中医证型原发性肝癌患者介入治疗前后血清蛋白指纹图谱的变化。方法将154例原发性肝癌患者分为肝郁证、脾虚证、湿热证、血瘀证及阴虚证5组,应用SELDI-TOF-MS分析其血清蛋白指纹图谱,观察肝癌介入治疗前后不同中医证型与血清蛋白指纹图谱之间的关系。结果与健康对照组比较,符合叶氏诊断模型者,肝郁证中质荷比(M/Z)为4 182 Da及6 589 Da、湿热证中M/Z为5 710 Da、阴虚证中M/Z为6 992 Da的差异蛋白表达下调;脾虚证中M/Z为5816 Da、血瘀证中M/Z为4 297 Da的差异蛋白表达上调;差异均有统计学意义(P<0.01);与介入前比较,符合叶氏诊断模型者,肝郁证中M/Z为4 182 Da及6 589 Da、湿热证中M/Z为5 710 Da、脾虚证中M/Z为5816 Da、血瘀证中M/Z为4 297 Da的差异蛋白表达下调;阴虚证中M/Z为6 992 Da的差异蛋白表达上调;差异亦有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论不同中医证型原发性肝癌患者介入治疗前后的血清蛋白指纹图谱变化有统计学意义。

精品课程“动物繁殖学”的建设和实践

"动物繁殖学"2006年被评为广西大学校级精品课程,2007年被评为广西省自治区级精品课程,本文重点介绍该精品课程在学校的定位,教学条件、教学方法和教学手段和特色.

GMP玻璃化冷冻对水牛MⅡ期卵母细胞冷冻损伤和体外发育能力的影响

将体外成熟(IVM)24h的水牛卵母细胞随机分成对照组、冷冻剂毒性试验组、GMP玻璃化冷冻组,研究玻璃微细管法(GMP)冷冻对水牛MⅡ期卵母细胞冷冻损伤和体外受精后发育能力的影响。结果表明:冷冻剂毒性试验组的存活率显著高于GMP玻璃化冷冻组;在透明带消化时间上,冷冻剂毒性试验组和GMP玻璃化冷冻组显著高于对照组。在单精入卵率上,冷冻剂毒性试验组和GMP玻璃化冷冻组显著低于对照组;在无精子入卵率上,冷冻剂毒性试验组和GMP玻璃化冷冻组与对照组差异显著;而多精入卵率3组间差异不显著。卵母细胞冷冻后进行体外受精,3组之间的2-细胞率,8-细胞率和桑椹胚率差异均极显著。表明冷冻剂和GMP玻璃化冷冻均会引起水牛MⅡ期卵母细胞透明带硬化,降低精子穿透率和其体外受精的发育能力。

3种玻璃化冷冻液对水牛MII期卵母细胞冷冻-解冻后体外发育的影响

本试验主要探索了3种玻璃化冷冻液对水牛MII期卵母细胞冷冻-解冻后体外发育的影响。水牛MII期卵母细胞经3组玻璃化冷冻液(Ⅰ:20%乙二醇(EG)+20%二甲基亚砜(DMSO);Ⅱ:20%EG+20%丙二醇(PROH);Ⅲ:20%EG+20%PROH+10%DMSO)毒性试验后,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组体外受精的分裂率、8-细胞率和囊胚率之间差异不显著(P>0.05),分裂率均显著低于对照组(P<0.05),但Ⅱ组8-细胞以后的发育潜力跟对照组无显著差异(P>0.05)。进一步比较了3组玻璃化冷冻液对卵母细胞的玻璃化冷冻效果。卵子解冻后进行体外受精后,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组的发育潜力均显著低于对照组(P<0.05),各组的8-细胞率和囊胚率之间无显著差异(P>0.05),但Ⅱ组卵裂率明显高于Ⅰ组(24.8±4.6%vs12.7±1.5%,P<0.05)。结果表明,3种冷冻玻璃化保护液均可用于冷冻水牛MII期卵母细胞,其中Ⅱ组处理的卵母细胞体外受精效果相对较好。

玻璃化冷冻水牛MII期卵母细胞的初步研究

为建立玻璃化冷冻保存水牛MⅡ期卵母细胞的有效程序,试验比较了3种冷冻保护剂组合(Ⅰ:20%乙二醇+20%二甲基亚砜;Ⅱ:25%乙二醇+25%二甲基亚砜;III:25%乙二醇+25%甘油)和3种玻璃化冷冻方法(毛细玻璃管法、铜环法及半麦管法)对水牛MⅡ期卵母细胞的毒性和冷冻效果的影响。结果表明,Ⅲ组的卵母细胞形态正常率显著低于Ⅰ和Ⅱ组(P<0.05),且III组的存活率也显著低于Ⅰ组(P<0.05),而Ⅰ和Ⅱ组的卵母细胞形态正常率和存活率没有显著差异(P>0.05)。进一步孤雌激活发现,Ⅰ组的卵裂率显著高于Ⅲ组(29.17±4.81%,5.56±11.11%,P<0.05),Ⅰ组的囊胚发育率显著高于Ⅱ和Ⅲ组(8.33±2.23%,2.43±2.87%,1.86±3.71%,P<0.05),然而Ⅱ和Ⅲ组间的卵裂率和囊胚发育率没有差别(P>0.05)。采用铜环法的回收率显著高于半麦管法(P<0.05),但和毛细玻璃管法之间差异不显著(P>0.05),冻后卵母细胞孤雌激活后的卵裂率和囊胚发育率差异不显著(P>0.05)。3种冷冻保护剂中Ⅰ组的细胞毒性作用最小,Ⅲ组的细胞毒性作用最大;铜环法和毛细玻璃管法能有效冷冻保存水牛的MⅡ期卵母细胞。

兔精液冷冻保存的初步研究

以家兔为试验动物，从精液解冻后的精子活率和复苏率2个指标，分别对3种稀释液（1：Tris0．25mol／L＋蔗糖0．1mol／L＋柠檬酸钠83mmol／L＋卵黄10％十二甲基亚砜（DMSO）15％；2：配方1＋葡萄糖0．47mmol／L；3：Tris0．29mol／L＋葡萄糖0．71mmol／L＋柠檬酸钠67mmol／L＋卵黄209／6＋甘油4％）、两种抗冻剂（甘油4％、DMS015％）、4℃下平衡时间（30、60、120、180min）三个方面进行了比较试验。公兔采精用假阴道法，采精后立即检查精子活率，达0．60以上的供试验用。结果表明：（1）3种稀释液中，用稀释液2稀释的精液，精子解冻后活率和复苏率显著高于稀释液1和稀释液3（精子活率：0．153vs0．103、0．109；复苏率：0．205vs0．137、0．147，P〈0．01），而稀释液1和稀释液3之间差异不显著（P〉0．05）；（2）在稀释液2中，分别用4％甘油和15％DMSO作防冻剂，两者的精子解冻后活率之间（0．193vs0．261，P〈0．01），复苏率之间（0．250vs0．340，P〈0．01）差异极显著；（3）在4℃下平衡30、60、120、180min，结果发现，在30～60min之间，解冻后精子活率之间（0．261vs0．249），复苏率之间（0．340vs0．325）差异均不显著（P〉0．05），但是随着平衡时间（120～180min）的增加，精子活率明显降低，精子几乎死亡。结论：采用稀释液2的配方，在4℃下平衡30～60min，可获得较好的兔精液冷冻保存效果。

水牛体细胞连续核移植的效果

为探讨水牛体细胞连续核移植的效果,以水牛胎儿成纤维细胞为核供体,进行了水牛体细胞连续核移植。结果显示,连续核移植的融合率显著高于原代核移植(87.9%vs76.2%,P<0.05),但两者之间的分裂率和囊胚率没有显著差异(P>0.05);这说明水牛体细胞核移植胚胎可被再次克隆而不降低其发育能力,水牛体细胞连续核移植是可行的。

水牛卵母细胞孤雌激活方法研究

对体外成熟（ ＩＶＭ） ２７～２８ｈ的水牛卵母细胞经 ７％酒精（ＥＨ）激活处理５ｍｉｎ后，置入不同浓度的（０，０．６２５μｇ／ｍｌ，１．２５μｇ／ｍｌ，２．５μｇ／ｍｌ，５μｇ／ｍｌ）放线菌酮（ＣＨＸ）培养１０ ｈ，而后固定染色或在胚胎培养液（ＣＭ）中继续培养检查激活分裂率。结果培养在 ０．６２５μｇ／ｍｌ和 １．２５μｇ／ｍｌ ＣＨＸ的卵母细胞的激活分裂率和总原核形成率明显高于对照组（Ｐ＜ ０． ０５），而培养在 ５μｇ／ｍｌ ＣＨＸ的卵母细胞的激活分裂率和原核形成率则极显著低于对照组（Ｐ＜０．０１）。如果在含有０．６２５μｇ／ｍｌ ＣＨＸ的培养液中加入细胞松驰素 Ｂ（ＣＢ）（３μｇ／ｍｌ， ６μｇ／ｍｌ），对激活分裂率，桑椹胚／囊胚发育率和总原核形成率无明显影响（Ｐ＜０．０５），但可明显提高对原核的形成率（Ｐ＜０．０５）。这些结果说明：（１）适当浓度的ＣＨＸ能提高卵母细胞激活效果；（２）ＣＢ能抑制卵母细胞激活后第二极体排出，从而提高原核的形成率。

油罐火灾中举高消防车的战术性能分析

举高消防车由于举升高度高、喷射流量大等特点,在油罐火灾中发挥着重要作用。从油罐火灾对举高消防车的需求分析出发,对举高消防车的冷却范围和灭火范围等战术性能进行分析,给出臂架炮的冷却和灭火控制范围常规数值。在此基础之上,分析举高消防车供灭火剂的几种喷射方式。研究结果对消防员了解举高消防车的战术性能,提高灭火效率具有指导意义。

水牛卵母细胞成熟时间对核移植效果的影响

主要探讨水牛卵母细胞的成熟时间对其体细胞核移植效果的影响,结果表明,在体外成熟(IVM16～24h)期间,不同的去核时间对水牛卵母细胞核移植后的融合率、分裂率和囊胚发育率都没有显著影响(P>0.05),但卵母细胞去核后的注核存活率,IVM16～18h组与IVM22～24h组有极显著差别(P<0.01)。经6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)抑制成熟培养的卵母细胞,再成熟培养16～18h后,与直接在体外成熟培养16～18h的卵母细胞的融合率、分裂率和囊胚发育率相比,均无显著影响(P>0.05)。水牛卵母细胞的成熟时间对其核移植效果无明显影响,6-DMAP可用于调整水牛卵母细胞的去核操作时间。

基于聚类分析的原发性肝癌介入治疗前中医证型特点研究

目的通过对原发性肝癌中医证候进行分析,探讨肝癌介入治疗围手术期的证候特点。方法选取肝癌患者365例为研究对象,收集62项四诊信息并量化计分,采用SPSS13.0软件对四诊信息等进行聚类分析,归纳出肝癌的中医辨证分型。结果经聚类分析,365例肝癌患者中医辨证可分为肝郁证、脾虚证、湿热证、血瘀证及阴虚证五型,其中以脾虚证多见,肝郁证、阴虚证、血瘀证、湿热证次之。结论聚类分析可实现肝癌证型的规范化诊断。

新疆部分地区绵羊肺腺瘤病流行病学调查

为了解新疆部分地区近年来绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)的流行病学特征,对新疆6个地区部分种羊场进行调查,提取肺脏组织和血液中的DNA,经临床诊断和病理学观察并用PCR法对样品进行检测。结果表明:病变肺脏组织中为外源性OPA的阳性率是36.36%(4/11),血样中为内源性OPA的阳性率是78.25%(1981/2534)。外源性阳性样品env基因与ex JSRV核苷酸同源性最近的是内蒙株(JQ837489)为98.1%,与en JSRV核苷酸同源性最近的是美国株(EF680300)为86.5%,进化树分析结果可知本实验ex JSRV和en JSRV两者存在地域性。这说明新疆部分地区内源性OPA感染较普遍,而外源性OPA感染相对较少。本研究可为新疆地区OPA的防制提供理论依据。

水牛卵母细胞去核方法的摸索

本研究对水牛卵母细胞的去核方法进行了摸索。首先通过盲吸法去核,摸索水牛卵母细胞在体外成熟不同时间的成熟率和去核率;其次采用spindle-View系统去核,摸索用这种系统去核的最佳时间。水牛卵母细胞IVM16-18h与IVM 19-21h的成熟率之间有显著差别(43.0％vs58.2％,P<0.05),与22-24h组的成熟率之间有极显著差别(43.0％vs 68.8％,P<0.01).而去核率的情况刚好相反。随着卵母细胞成熟时间的延长,卵细胞的核与PB1的相对距离增大。在体外成熟18h,20h,22h,有较大比例(分别为72.6％、67.9％、64.0％)的卵母细胞中的核与PB1的位置较近,但当成熟时间增加到24h时,这一比例下降到57.6％(72.6％vs 57.6％,P<0.05),如采用Spindle-View系统去核则可消除成熟时间对去核率的影响,这些结果表明:1.水牛卵母细胞的成熟时间的延长不断提高,而去核率呈下降趋势;2.水牛卵母细胞成熟时间的延长会增加核与PB1的相对距离;利用Spindle-View系统可提高成熟时间较长的卵母细胞的去核率。