抗营养因子大豆凝集素夹心ELISA检测方法的建立

为建立灵敏、特异的大豆凝集素(soybean agglutinin,SBA)酶联免疫吸附(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测方法。试验以SBA鼠源单克隆抗体为捕获抗体,SBA兔源多克隆抗血清为检测抗体,羊抗兔酶标抗体为二抗,通过对抗体的工作浓度及反应时间优化,建立SBA的双抗体夹心ELISA检测方法,并用建立的方法检测大豆、大豆粕、膨化大豆粕及酶解大豆粕中SBA含量。结果表明:建立SBA双抗夹心ELISA检测方法的检测范围为39.06~1250 ng/mL,检出限为3.00 ng/mL,样品添加回收率为77.96%~116.15%,变异系数为6.11%~18.34%,与大豆中胰蛋白酶抑制因子BBI、KTI,大豆球蛋白glycinin及大豆伴球蛋白-conglycinin等其他抗营养因子均无交叉反应。大豆中SBA含量显著高于大豆粕、膨化大豆粕及酶解大豆粕(P<0.05);大豆粕中SBA含量显著高于膨化大豆粕及酶解大豆粕(P<0.05);膨化大豆粕显著高于酶解大豆粕中SBA含量(P<0.05)。综上,本研究建立了灵敏度高、特异性好的SBA双抗夹心ELISA检测方法,该方法可用于饲料中大豆凝集素的监控检测。

减蛋综合征病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制及初步应用

为建立快速检测减蛋综合征病毒(EDSV)抗体的方法,基于EDSV的Fiber蛋白,制备快速检测EDSV抗体的免疫层析试纸条,为养禽业提供针对病原微生物的感染预警及免疫评估。利用胶体金标记EDSV Fiber蛋白抗原为探针,将羊抗鸡IgG和抗Fiber蛋白的抗体包被到硝酸纤维膜上,分别作为质控线和检测线,对家禽EDSV抗体水平进行监测。结果表明,制备的EDSV免疫层析试纸条具有高度特异性,与其他家禽病毒抗体无交叉反应,仅与EDSV抗体反应,在试纸条上产生可见的检测线;并且制备的试纸条具有高度稳定性,在室温条件下可至少保存6个月。应用制备的检测EDSV抗体的免疫层析试纸条对从河南、安徽、山东等地养鸡场采集的576份鸡血清样本检测,与血凝抑制试验(HI)结果进行平行比较,二者的Kappa值为0.878,具有良好一致性。综上,制备的检测ESDV抗体的免疫层析试纸条具有高度的特异性、敏感性、稳定性和易操作性,对EDSV抗体的临床检测具有实际应用价值。

以合成肽为抗原建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测ELISA试剂盒

【目的】建立合成多肽抗原检测FMD NSP抗体的ELISA方法。【方法】固相法合成特异性FMDV NSP B细胞表位肽,将其偶联在BSA载体蛋白上,作为抗原包被在ELISA板上,制备检测抗FMDV NSP抗体的ELISA试剂盒,并对该试剂盒进行方法考核。【结果】抗原包被浓度选择2.5μg·mL-1;检测199份血清标本,与美国UBI商品试剂盒符合率达到96.48%,与国产3ABC ELISA比较,符合率为97.48%,显示极好的一致性。【结论】该合成肽ELISA试剂盒可以用以检测NSP抗体,从而鉴别FMD的自然感染与疫苗免疫,试剂盒特异性强,重复性好、稳定性高,操作简便。

猪O型FMDV抗体检测试纸条与ELISA对比试验

为初步评价研制的猪O型FMDV抗体检测试纸条的性能,检测了免疫FMDV多肽疫苗20 d后制备的猪血清(143份),并对比FMDV VP1抗体检测ELISA试剂盒的检测结果。结果显示,二者的符合率为100%。猪O型FMDV抗体检测试纸条特异、敏感、快速、简便,具有广阔的推广应用前景。

不同肥料不同作物对铅污染土壤修复及酶活性的影响

通过盆栽试验，采用随机组合设计，研究施用菌肥和腐殖酸对铅污染土壤上玉米、高粱、蓖麻、向日葵对铅的吸收效果及其生长成熟后对土壤酶活性的影响。结果表明，在铅污染土壤上施用菌肥、腐殖酸，有效降低了重金属铅的毒害；能有效提高土壤中酶的含量，其中，过氧化氢酶含量提高11．9％～55．O％，磷酸酶含量提高1．2％～26．0％，脲酶含量提高43．1％，80．7％，蔗糖酶含量提高17．7％～36．7％；铅吸收量以重金属Ph与菌肥混合施用（Pb＋J）处理玉米最为显著，达到214．67mg／kg。说明施用菌肥和腐殖酸可以达到修复铅污染土壤的目的。

国外内部控制审计发展及启示

AICPA（1993）指出，投资者应当获取内部控制系统的独立评估。以安然事件为契机，美国认识到了企业内部控制的重要性，在《萨班斯法》中规定了在美国证券交易委员会登记的企业，其管理层有义务编制评价财务报告有效性的内部控制报告，并规定内部控制报告必须接受由注册会计师进行的审计。此后，英国、法国、日本、韩国等国家也先后引进并采用了类似的制度。

审计师行业专长对审计收费的影响分析——来自2006～2007年我国审计市场的证据

本文在借鉴传统审计收费模型的基础上,采用我国A股上市公司2006~2007年的数据,对审计师行业专长与审计收费之间的相关关系进行实证分析。研究表明,我国的审计师行业专长程度较低,审计师行业专长与审计收费之间存在正相关关系。研究审计师行业专长与审计收费之间的关系对于规范审计定价行为、形成有效市场结构有重要意义。

跨国公司在华三资企业的公司治理模式及启示

本文通过对跨国公司在华投资三资企业的公司治理模式的深入探索分析 ,得出以下结论 :跨国公司通过股权结构、董事会机构设置、销售网络和技术支持对三资企业进行控制 ,形成了母公司主导型的公司治理模式。对这一治理模式的研究 ,对于我国在入世的情况下更好的利用外资有重要的理论价值和借鉴意义。

治理导向审计模式内涵及运行机理分析

导向差异拓展出许多适应不同审计环境的审计模式,随着公司治理理论与实务的发展,治理导向审计模式被提出并受到广泛关注。文章在界定治理导向审计内涵的基础上,分析了治理导向审计产生的理论基础和环境因素。并进一步指出,良性的公司治理与审计互动是治理导向审计运行的机理所在。

PBL方法在审计学教学中的应用探析

本文在分析审计学教学引入PBL方法所具有优势的基础上,应用PBL方法在提出问题、查阅资料、小组交流、课堂讨论和评价总结五个环节进行了设计,最后指出运用PBL方法取得预期效果的支撑措施。

财务管理专业实践教学存在问题及对策探析

本文认为财务管理专业实践教学存在问题主要体现在实践课程体系与培养目标不协调、实践教学管理不完善、实践教学师资力量不足等方面。针对以上问题,本文在实践教学内容体系设计、专业实验室建设、校外实践教学基地建设、实践教师队伍培养、丰富学生课外实践形式等方面提出解决对策,以期提高财务管理专业实践教学质量。

磺胺嘧啶多克隆抗体的制备

为制备磺胺嘧啶(sulfadiazine,SD)多克隆抗体(pAb),用重氮化方法将SD偶联于载体蛋白BSA和OVA上,合成免疫抗原BSA-SD和包被抗原OVA-SD。用紫外扫描、SDS-PAGE凝胶电泳试验检测,结果表明偶联成功。用BSA-SD免疫新西兰大白兔,间接ELISA测定多克隆抗体效价。阻断ELISA结果显示:SD单克隆抗体(pAb)的IC50达19.19ng/mL,和其他磺胺类药物交叉反应小于等于2.7%。结果表明,获得了高效价和特异的pAb。

审计期望差距探析

本文在梳理审计期望差距要素的基础上,采用服务质量模型分析了审计期望差距存在的内在机理,发现审计期望差距是审计法律责任存在的根本原因。最后,针对缩小审计期望差距提出了应对措施。

盐酸克伦特罗单抗快速检测试剂盒的研制

以竞争性酶免疫分析原理为基础 ,应用特异性克伦特罗 (Clenbuterol,CL )单克隆抗体研制成功了β-肾上腺素受体激动剂克伦特罗的快速检测 EL ISA试剂盒 (CL- Kit)。 CL- Kit线性检测范围为 0 .5～ 12 8μg/ L,各标准品的吸光值变异系数为 2 .3%～ 3.6 %。标准曲线呈典型的 S型 ,相关系数 R2 =0 .996 ,符合 4参数 L ogit曲线拟合。检测结果表明 :CL 单抗对 CL 的半数抑制量 IC50 为 7.94 μg/ L,对沙丁胺醇 (Sb)的 IC50 为 10 0 0 μg/ L,肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素和来克多巴胺的 IC50 均≥ 6 4 0 0 μg/ L;CL- Kit与 Sb的交叉反应性为 0 .79% ,与异丙肾上腺素的交叉反应性为 0 .12 % ,与肾上腺素、去甲肾上腺素、来克多巴胺、各类抗生素及多种维生素均无交叉反应性。试剂盒测定回收率在 91%～ 10 5 % ,批内变异系数小于 2 0 % ,批间变异系数小于 10 %。

糖原合酶激酶3β在大鼠脑老化及神经退行性变中的表达与分布改变

目的比较糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK3β)在正常成年、老年及β淀粉样蛋白(amy-loid beta,Aβ)诱导的神经退行性变模型大鼠脑内的表达与分布差异,探讨其在神经退行性变中的功能意义。方法立体定位仪下海马内注射Aβ1-42建立神经退行性变模型,免疫组织化学观察GSK3β在不同大鼠脑内的分布与定位,Western印迹法定量检测GSK3β在皮层、海马等区域的表达。结果GSK3β在脑内分布广泛,主要定位于神经元样细胞,在皮层锥体细胞层、海马锥体细胞层、齿回颗粒层、纹状体及丘脑等区域分布较为密集。老年及Aβ注射组(一侧)GSK3β免疫阳性细胞密度明显增多,以Aβ注射组为甚,阳性信号除细胞体外还延伸至长突起远端。蛋白定量检测显示GSK3β在老年和Aβ注射大鼠较正常成年大鼠呈现明显增高。结论在脑老化及Aβ诱导的神经退行性变中存在GSK3β的表达上调,它可能在相关神经病理事件中扮演了重要角色。

抗克伦特罗单克隆抗体杂交瘤的建立及其分泌单抗的免疫学特性鉴定

目的 :建立抗克伦特罗 (CL)单克隆抗体杂交瘤细胞系 ,制备CL单克隆抗体 ,并鉴定其免疫学特性。方法 :用重氮化法将半抗原CL偶联于载体蛋白BSA ,形成结合抗原BSA CL ;以BSA CL免疫BALB/C小鼠 ,应用杂交瘤技术建立分泌CL单克隆抗体细胞株 ;用体内诱生腹水法生产CL单抗 ,硫酸钠盐析法提纯。应用抗小鼠同种型抗体测定单抗的同种型 ,用竞争性ELISA和胶体金膜层析试验测定CL单抗的反应特异性和反应动力学。结果 :筛选出C 4G1、C 2H6、C 2D6和C 4C94株高敏感性和高特异性杂交瘤生产单抗 ,其单抗的间接ELISA效价分别为 5× 10 -5、3× 10 -4、6× 10 -4、2× 10 -5;同种型分别为IgG1/κ、IgG1/κ、IgG2a/κ、IgG2a/λ。C 4G1的亲和力常数K =1 6 8× 10 8L/mol,C 2H6的亲和力常数K =1 3× 10 8L/mol。经WestGold蛋白质印迹鉴定单抗与CL特异性结合。C 4G1单抗对CL的半数抑制浓度 (IC50 )为 7 94ng/ml,对沙丁胺醇 (Sb)的IC50 为 10 0 0ng/ml,对肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素和来克多巴胺的IC50 均≥ 6 4 0 0ng/ml;C 4G1单抗与Sb的交叉反应性为0 79% ,与异丙肾上腺素的交叉反应性为 0 12 % ,而与肾上腺素、去甲肾上腺素、来克多巴胺、各类抗生素及多种维生素均无交叉反应性。结论

兽药残留的免疫学快速检测技术概述

简要阐释了免疫学快速检测技术在兽药残留检测中的应用,并对此领域中的研究进展进行了简单介绍。

抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及金标试纸检测方法的建立

以BSA-CAP-HS免疫Balb／C小鼠,用细胞融合技术筛选抗氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞,体内诱生腹水法制备cAP mAb,并鉴定其免疫学特性;依据胶体金免疫层析试验(GICA)原理,以CAP mAb 为金标抗体,研制CAP残留快速检测金标试纸(CAP-Strip),并对其性能进行测定。结果表明,筛选出了3株杂交瘤细胞,其中最好的4F9-B2株间接ELISA效价细胞培养上清为1:1 280,腹水为1:640 000,亲和常数(Ku)为 1．84×1010 L/mol,对CAP的半数抑制浓度(IC50)为0．88μg/L,与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应(CR%)为150%,与其他酰胺醇类和抗菌素类药物无交叉反应;CAP-Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit拟合曲线,目测检测限为0．5μg/L;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100％;可见CAP-Strip具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合于CAP残留的快速检测,具有较高的推广应用价值。