柯乐猪异常乳腺组织的TMT蛋白组学分析

【目的】基于串联体量标记(TMT)定量蛋白组学技术探讨柯乐猪母猪乳腺发育的调控机制,为选育工作提供依据。【方法】选取乳腺发育正常和异常的柯乐猪母猪各3头,采集乳腺组织,利用TMT定量蛋白组学技术探究正常和异常乳腺组织的差异表达蛋白,筛选与乳腺发育相关的差异关键蛋白,并对差异表达蛋白进行生物信息学分析。【结果】从柯乐猪乳腺组织中共筛选出474个差异表达蛋白,包括245个上调蛋白、229个下调蛋白;基因本体(GO)功能注释和富集分析显示,差异表达蛋白主要富集在上皮细胞分化、皮肤形成和肾小管上皮细胞分化等生物学过程中,主要分布在胞外区和细胞外空隙中,参与调节肽酶抑制剂活性和肽链内切酶活性;京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析显示,差异表达蛋白主要富集在补体系统、过氧化物酶体增殖物激活受体和金黄色葡萄球菌感染等信号通路上;结合差异表达蛋白互作网络分析,筛选出10个核心差异表达蛋白[上调蛋白有P14287(骨桥蛋白)、F1RXF9(角蛋白25)、I3LDS3(角蛋白10)、Q75QW1(上皮细胞黏附分子)、A0A5S8KLN1(丛生蛋白)、F1RW75(桥粒素),下调蛋白有A0A286ZT13(白蛋白)、P06867(血纤维蛋白溶酶原)、F1SCC9(含丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域的蛋白)、P50447(α-1-抗胰蛋白酶)]。【结论】采用TMT定量蛋白组学技术能有效筛选出母猪正常和异常乳腺组织中的差异表达蛋白。

干扰SOCS1基因表达对猪乳腺上皮细胞凋亡的调控效应

细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)是一种调节细胞内信号通路活性的负调控因子,参与调控机体细胞的多种生理功能。为探索SOCS1基因沉默对猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响,试验通过构建猪SOCS1基因shRNA干扰载体,转染猪乳腺上皮细胞,TMT定量蛋白组学筛选差异蛋白,Annexin V/PI、CCK-8和流式细胞术检测细胞周期、细胞增殖和细胞凋亡。结果显示,干扰组(shRNA-SOCS1-138)与空白组相比,共筛选到差异表达蛋白52个,其中上调蛋白26个,下调蛋白26个。GO富集发现,差异蛋白主要富集在病毒防御响应、EB病毒遗传缺陷反应后的免疫缺陷和对其他生物的免疫反应几个方面。KEGG通路富集发现,差异蛋白主要富集在坏死性凋亡、丙型肝炎和全身性红斑狼疮信号通路。干扰SOCS1后,乳腺上皮细胞450 nm的OD值在12、24、48 h和72 h的细胞量显著或极显著高于空白组;G1期和G2期细胞占比均极显著高于空白组,S期细胞百分比极显著低于空白组;干扰组与空白组之间细胞凋亡率差异达到显著水平。综合研究结果揭示,SOCS1基因沉默可促进细胞增殖和降低细胞的凋亡,引起G1/S期阻滞,并受多个信号通路的调控作用。

SOCS1基因过表达对猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响

【目的】明确细胞因子信号转导抑制因子1基因(SOCS1)过表达对乳腺发育关键信号通路(JAK/STAT)相关基因表达的影响,为揭示SOCS1基因调节猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的作用机制提供参考依据。【方法】构建SOCS1基因过表达载体pcDNA3.1-SOCS1和阴性对照载体pcDNA3.1-NC,分别转染猪乳腺上皮细胞,然后通过CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测转染后JAK/STAT信号通路相关基因的表达变化。【结果】以过表达载体pcDNA3.1-SOCS1和阴性对照载体pcDNA3.1-NC分别转染猪乳腺上皮细胞,过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组的SOCS1基因相对表达量极显著高于阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组(P<0.01,下同);转染48和72 h后,过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组猪乳腺上皮细胞的OD值极显著低于阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组,说明过表达载体pcDNA3.1-SOCS1能有效抑制猪乳腺上皮细胞的增殖能力;过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组的细胞凋亡率[(36.15±0.92)%]显著高于阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组[(30.55±0.35)%](P<0.05,下同),且过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组中的G1期细胞比例极显著降低,而S期和G2期细胞比例显著升高。与阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组相比,除JAK2、STAT3和TYK2基因外,过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组中的SOCS2、SOCS3、JAK1、STAT2、STAT5A、IL-6、PRLR、MCL1和PIAS3等9个JAK/STAT信号通路相关基因的相对表达量均极显著升高。【结论】SOCS1基因过表达可抑制猪乳腺上皮细胞增殖及促进细胞凋亡,并影响JAK/STAT信号通路相关基因的表达变化,从而在猪的乳腺发生发育调控机制中发挥重要作用。

QDPR基因多态性对柯乐猪繁殖性状的影响

为了探究QDPR基因对柯乐猪繁殖性状的遗传效应,本试验以柯乐猪为材料,采用PCR产物测序法检测QDPR基因SNP多态位点,然后利用一般线性模型分析SNP位点对柯乐猪繁殖性状的遗传效应。结果显示,在柯乐猪QDPR基因第3外显子发现3个SNP位点:g.12537552 C>T、g.12537568 A>G和g.12537612 C>T,在3'UTR区域发现2个SNP位点:g.12548918 T>C和g.12548968 G>T。5个SNP位点均为中度多态,其中g.12537552 C>T、g.12537568 A>G和g.12537612 C>T都极显著偏离Hard-Weinberg平衡。关联性分析显示,g.12548918 T>C位点CC型个体的初生窝重和断奶仔猪数都显著高于TT型,同时g.12548918 T>C位点CT型个体的断奶平均重极显著高于TT型,g.12548968 G>T位点GT型个体的断奶仔猪数极显著高于GG型。综合所有指标差异,g.12548918 T>C和g.12548968 G>T 2个SNP位点均能显著影响柯乐猪繁殖性状,可以作为猪繁殖性状选择的遗传标记。

柯乐猪CRISP 3基因SNP鉴定及其对繁殖性状的影响

为分析富半胱氨酸的分泌蛋白3(cysteine rich secretory protein 3,CRISP3)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点对柯乐猪繁殖性状的影响,采用Sanger测序法检测250头健康经产柯乐猪母猪CRISP 3基因的SNP突变位点,利用SPSS 22.0软件分析SNP位点与柯乐猪产活仔猪数、初生窝重、初生均重、断奶窝重、断奶仔猪数和断奶均重6个指标的关联性。结果显示,在柯乐猪CRISP 3基因第4内含子共发现3个SNP突变位点,即g.43796318T>C、g.43796424T>A和g.43796425G>T,均存在3种基因型。g.43796318T>C和g.43796424T>A位点的优势基因型为TT,优势等位基因为T;g.43796425G>T位点的优势基因型为GG,优势等位基因为G。χ^(2)检验显示,g.43796318T>C位点基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05);g.43796424T>A和g.43796425G>T位点基因型分布均极显著(P<0.01)偏离Hardy-Weinberg平衡状态。3个SNP位点的多态信息含量(PIC)为0.25~0.50,表现为中度多态。连锁不平衡分析显示,g.43796424T>A与g.43796425G>T之间存在强连锁不平衡。关联分析显示,g.43796318T>C位点TT和CC基因型个体的初生窝重和初生均重均显著(P<0.05)高于TC基因型;g.43796424T>A位点TA基因型个体的产活仔猪数、初生窝重和断奶仔猪数均显著(P<0.05)高于TT和AA基因型;g.43796425G>T位点GT基因型个体的产活仔猪数、初生窝重和断奶仔猪数均显著(P<0.05)高于GG和TT基因型。双倍型关联分析显示,双倍型H2H4(CCTAGT)个体的产活仔猪数、初生窝重、断奶仔猪数和断奶窝重显著(P<0.05)高于H1H2(TCTAGT)个体和H2H2(CCAATT)个体;双倍型H2H2(CCAATT)个体的初生均重显著(P<0.05)高于除H4H4(CCTTGG)个体外的其他个体,且其断奶均重显著(P<0.05)高于其他双倍型个体。CRISP 3基因第4内含子上的3个突变位点与柯乐猪的6个繁殖性状均存在显著关联,可作为柯乐猪繁殖性状选择的候选分子标记。

柯乐猪PRLR基因多态性与繁殖性状的关联性

本研究旨在探究催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)基因的单核苷酸突变位点(single nucleotide polymorphism,SNP)及其对柯乐猪繁殖性状的遗传效应,以期为提高柯乐猪的繁殖性能研究提供基因标记。采用PCR产物直接测序法对204头柯乐猪PRLR基因外显子区的SNP位点进行筛查鉴定,同时利用SPSS软件中单因子方差法分析各SNPs不同基因型和双倍型与7个繁殖性状的相关性,并通过在线软件分析碱基变异对mRNA二级结构的影响。结果显示,在柯乐猪PRLR基因第8外显子检测到g.20655220 C>T突变,其导致丝氨酸变成脯氨酸,为错义突变;在第4内含子检测到2个同义突变位点g.20648859 C>T和g.20648931 C>T,3个SNPs均存在3种基因型,g.20648931 C>T属于低度多态,其余2个位点属于中度多态;经卡方χ^(2)检验,g.20655220 C>T位点的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),g.20648859 C>T和g.20648931 C>T位点的基因型分布极显著(P<0.01)偏离Hardy-Weinberg平衡;g.20655220 C>T位点导致PRLR基因mRNA序列二级结构发生改变,致使mRNA二级结构稳定性降低;3个SNPs共组成5种单倍型和9种双倍型,优势单倍型H1(CCC)频率为0.610,优势双倍型H1H1(CCCCCC)频率为0.382。关联性分析结果显示,g.20655220 C>T位点CC基因型母猪的初生个体重、断奶窝重和断奶个体重均显著(P<0.05)高于CT基因型,g.20648931 C>T位点CT基因型母猪的初生个体重、初生窝重和断奶窝重均显著(P<0.05)高于CC基因型和TT基因型,且该位点在初生个体重上,CC基因型显著(P<0.05)高于TT基因型;双倍型H1H5(CTCTCT)在产仔数和活仔数上为优势双倍型,H2H3(CCTTCT)在断奶窝重和断奶个体重上为较优双倍型。综上,PRLR基因可作为候选基因参与柯乐猪繁殖性状的分子标记辅助选择。

KISS1基因SNP对柯乐猪繁殖性状的影响

研究旨在了解KISS1基因对猪繁殖力的影响,以78头初产柯乐猪为材料,采用聚合酶链式反应(PCR)产物直接测序与人工较对相结合鉴定KISS1基因单核苷酸多态性(SNP)位点,分析SNP位点对柯乐猪繁殖指标的影响。结果显示在KISS1基因第1外显子处发现g.64835073 A>G同义突变,在第1内含子处发现g.64835529 G>A突变,2个SNP位点均产生3种基因型,均为中度多态位点,且均符合Hardy-Weinberg平衡;g.64835073 A>G位点对5个繁殖指标的影响未能达到显著水平(P>0.05);其中g.64835529 G>A位点对总产仔数、初生个体重、断奶个体重的影响达显著水平,揭示g.64835529 G>A位点可能作为猪产仔数的一个分子标记。

黔北麻羊MC4R基因多态性及其与生长性状的关联分析

【目的】探究黔北麻羊黑素皮质素受体-4(melanocortin receptor-4,MC4R)基因多态性及其与生长性状的关联性,为黔北麻羊的选种选育提供理论依据。【方法】选取196只6月龄黔北麻羊,利用DNA混合池结合Sanger测序筛选MC4R基因单核苷酸多态性(SNP)位点,并采用SPSS 22.0软件中的一般线性模型(GLM)对MC4R基因SNP位点与黔北麻羊生长性状进行关联分析。【结果】在黔北麻羊MC4R基因中发现4个SNPs位点:g.59345469 C>A和g.59346773 T>C位点分别位于5′-和3′-端非编码区(UTR);g.59345871 A>C位点突变导致第37位天冬氨酸(Asp)变为丙氨酸(Ala),引起RNA二级结构及蛋白质二级结构、三级结构发生明显改变;g.59346263 A>G位点突变导致第168位异亮氨酸(Ile)变为缬氨酸(Val),对RNA二级结构和蛋白质二级结构有明显影响。关联分析结果显示,g.59345469 C>A位点对黔北麻羊体重、胸围和管围均有显著影响(P<0.05);g.59345871 A>C位点对黔北麻羊体重、体高、管围和胸围均有显著影响(P<0.05);g.59346263 A>G位点对黔北麻羊体高、体重和胸围均有显著影响(P<0.05);g.59346773 T>C位点对黔北麻羊体重和胸围均有显著影响(P<0.05)。4个SNPs位点联合共检测到9种单倍型和21种双倍型,其联合对黔北麻羊体重、体高、胸围和管围均产生显著遗传效应(P<0.05),纯合双倍型H5H5(AAAAGGCC)个体的生长性状优于其他双倍型。【结论】黔北麻羊MC4R基因存在4个SNPs位点,与黔北麻羊体重和胸围均存在显著关联,可作为黔北麻羊体重和胸围的遗传标记用于分子育种。

白羽王鸽MyoG基因多态性及其与体尺和肉质性状的关联分析

【目的】研究白羽王鸽肌细胞生成素(myogenin,MyoG)基因多态性及其与体尺和肉质性状的关系,为该品种的分子标记选育工作提供参考依据。【方法】以108只12周龄的白羽王鸽为研究对象,利用PCR直接测序法筛查白羽王鸽MyoG基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,通过RNAfold预测MyoG基因突变前后的mRNA二级结构,并利用SPSS 26.0软件分析MyoG基因SNP位点与白羽王鸽体尺和肉质性状的相关性。【结果】在白羽王鸽MyoG基因外显子3上检测到4个SNPs位点:g.590075 C>T、g.590084 G>A、g.590102 G>A和g.590114 C>T,均为同义突变,且均产生3种基因型,其中,g.590075 C>T位点呈低度多态,其余3个SNPs位点均呈中度多态。卡方检验结果显示,g.590084 G>A和g.590114 C>T位点均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),且两个位点之间存在强连锁不平衡。g.590084 G>A和g.590102 G>A位点突变导致MyoG基因mRNA序列二级结构和自由能发生改变。4个SNPs联合产生4种单倍型和9种双倍型。关联分析结果表明,g.590075 C>T位点与白羽王鸽龙骨长呈极显著关联(P<0.01);g.590102 G>A位点对体斜长有极显著效应(P<0.01);双倍型H3H3(CCAAAACC)个体的体斜长优于其余双倍型,H4H4(TTGGGGCC)个体在龙骨长和胸宽方面优于其他双倍型。g.590084 G>A和g.590114 C>T位点与白羽王鸽胸肌的剪切力呈极显著或显著关联(P<0.01;P<0.05);双倍型H3H3(CCAAAACC)个体在胸肌的pH和肉色方面优于其余双倍型,而在剪切力和失水率方面,双倍型H2H4(CTGAGGCT)和H4H4(TTGGGGCC)表现较优。【结论】MyoG基因对白羽王鸽部分体尺和肉质性状有显著影响,可作为白羽王鸽新品系培育的候选基因。

PPARα基因SNPs对关岭黄牛生长性状的影响

本实验采用PCR产物测序和序列比对软件鉴定关岭黄牛PPARα基因SNPs,统计软件SPSS 23.0分析SNPs与生长性状的相关性,探索PPARα基因与关岭黄牛生长性状的关系。结果显示,在关岭黄牛PPARα基因中检测到4个SNPs:位于第7外显子的g.116502086 G>C和g.116502113 T>C同义突变、位于3’端非编码序列的g.116508773 C>T和g.116509086 G>A突变,g.116502086 G>C和g.116508773 C>T为中度多态位点,g.116502113 T>C和g.116509086 G>A为低度多态位点,4个SNPs均处于Hardy-Weinberg平衡状态,且SNPs间不存在强连锁不平衡,共产生5种单倍型和15种双倍型,单倍型H1出现频率最高、H5最低,双倍型H1H2出现频率最高、H5H5最低;g.116502086 G>C和g.116502113 T>C位点对体重均有显著影响;g.116508773 C>T位点对体重、体高、体斜长有显著效应,等位基因C对增加体重、体高、体斜长有利;g.116509086 G>A位点对体重和体高有显著效应,等位基因A对增加体重和体高有利,综合结果发现,4个SNPs产生的单倍型H4(G116502086T116502113C116508773A116509086)和双倍型H4H4(GG116502086TT116502113CC116508773AA116509086)有利于提高关岭黄牛体重、体高和体斜长,可能作为关岭黄牛生长性状选择的辅助性标记。

柯乐猪DSP基因SNP鉴定及其与繁殖性状的关联分析

本研究旨在分析柯乐猪桥粒斑蛋白(Desmoplakin,DSP)基因单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)与繁殖性状的相关性。选择86头柯乐猪母猪,利用DNA混合池结合Sanger测序筛选DSP基因SNP位点,并采用SPSS 22.0软件中的一般线性模型(GLM)对DSP基因SNP位点与柯乐猪繁殖性状进行关联分析。结果表明,在柯乐猪DSP基因中共发现了9个SNP位点,在第14外显子发现3个SNP位点:g.4897767G>A、g.4897776C>T和g.4897824G>A,在第14内含子发现6个SNP位点:g.4897943G>T、g.4897954C>T、g.4897991T>C、g.4897997T>G、g.4897999C>G和g.4898004C>T。连锁不平衡分析发现g.4897767G>A、g.4897999C>G和g.4898004C>T位点之间、g.4897824G>A与g.4897999C>G、g.4898004C>T位点之间以及g.4897776C>T与g.4897943G>T、g.4897991T>C位点之间均存在强连锁不平衡。统计分析显示,g.4897943G>T位点对断奶均重的影响达到显著水平。对外显子的SNP位点进行单倍型分析,发现单倍型5种、双倍型10种,其中双倍型个体H1H2(AGCCAG)总产仔数、断奶仔猪数和断奶窝重均显著大于H2H4(AGCCAA)个体;H1H5(AGCCGG)的初生窝重显著大于H2H4(AGCCAA)个体;H4H4(GGCCAA)的初生均重显著大于H1H2(AGCCAG)个体。通过分析单倍型mRNA二级结构发现,单倍型H2(ACA)、H4(GCA)、H5(ACG)均引起了DSP基因mRNA二级结构改变,可能会影响转录和翻译效率,进而影响猪繁殖性能。综上,DSP基因可以作为柯乐猪繁殖性状选择的分子标记。

柯乐猪TAC3第1内含子多态对繁殖性状的影响

TAC3基因参与哺乳动物繁殖相关的生命活动。试验以78头初产柯乐猪为材料,通过PCR产物直接测序和序列比对鉴定TAC3基因的遗传变异,分析遗传变异对繁殖性状的影响。结果显示,在柯乐猪TAC3基因第1内含子中检测到1个中度多态位点:g.22329038 T>C,产生3种基因型TT、TC和CC,TC和T分别为优势基因型和优势等位基因,基因型分布未偏离Hardy-Weinberg平衡,TT基因型个体的产活仔数显著高于CC基因型(P<0.05),其他指标在不同基因型间差异未能达到显著水平(P>0.05),揭示g.22329038 T>C位点可能是柯乐猪产活仔数的一个重要分子标记。

长顺绿壳蛋鸡ATP2B2基因多态性及其对蛋壳品质的影响

为了探究钙离子转运ATP酶B2(ATP2B2)基因多态位点对长顺绿壳蛋鸡蛋壳品质的影响,本实验采用PCR产物直接测序和序列比对软件鉴定ATP2B2基因SNP位点,SPSS 22.0软件单因素方差分析检测SNP位点不同基因型蛋壳指标的差异。结果发现,3个SNP位点位于第4外显子的非编码区(UTR)、第15外显子的蛋白质编码区(CDS)和第25外显子的蛋白质编码区(CDS),分别为g.4030584 A>G、g.4144313 C>T和g.4193196 G>A,共存在6种单倍型和10种双倍型。卡方(χ^(2))检验结果表明:3个SNP位点所产生的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。关联性分析研究的结果显示:g.4030584 A>G、g.4144313 C>T突变位点显著影响个体蛋壳强度;3个SNP位点联合产生的双倍型H2H4个体的蛋壳厚度显著高于H1H1、H1H2;H1H1个体的蛋壳强度显著高于H2H3、H2H5、H2H6。综上结果表明,g.4030584 A>G、g.4144313 C>T突变可能是影响蛋壳强度的标记位点,双倍型H2H4可能是影响蛋壳厚度的有利双倍型,H1H1可能是影响蛋壳强度的有利双倍型。

基于RNA-Seq对柯乐猪正常和异常乳腺差异基因的挖掘研究

本研究旨在获取母猪异常和正常乳腺组织的差异表达基因。选择乳腺发育正常和异常的经产柯乐猪各3头,利用RNA-seq对正常和异常乳腺组织的差异基因进行筛选和生物信息学分析,结果显示:正常与异常乳腺相比较共筛选出1847个差异基因,其中上调基因767个,下调基因1080个;GO富集分析显示,生物学过程(Biological Process)差异表达基因主要富集在细胞过程(Cellular Process)和生物调节(Biological Regulation),细胞组分(CellularComponent)差异表达基因主要富集在细胞(Cell)、细胞部分(Cell Part)和膜(Membrane),分子功能(MolecularFunction)差异基因主要集中在粘合剂(Binding)和催化活性(Catalytic Activity)方面;KEGG富集分析显示,差异表达基因主要富集在神经活性配体-受体相互作用通路,其次为细胞因子与细胞因子受体的相互作用以及PI3K-Akt信号通路;上调的差异表达基因主要富集在细胞因子与细胞因子受体的相互作用,其次为神经活性配体-受体相互作用通路;下调的差异表达基因主要富集在人乳头瘤病毒感染和神经活性配体-受体相互作用信号通路,其次为PI3K-Akt信号通路和细胞周期等通路。在可变剪接分析中,正常发育乳腺组织的所有可变剪接事件多于发育不良的,A3SS和RI差异可变剪接事件都是上调,而SE、A5SS和MXE差异可变剪接事件中大部分下调。本研究通过对差异基因及其信号通路的功能注释分析,发现乳腺发育显著相关的193个差异基因,主要富集在细胞周期、Th1和Th2细胞的分化、PI3K-Akt信号通路和焦点粘连等信号通路,绘制了193个差异基因的网络互作图,筛选出关联度前10位的差异基因为CDC6、F2、E2F1、DRD2、KNG1、GHRL、LEP、IFNG、FN1、PPARG,且关联度最高的CDC6可调节多个信号通路。研究结果为进一步阐述哺乳动物乳腺发育的调控机制提供了一定的科学依据。

三穗鸭SLC4A9基因表达量及其多态性对蛋壳品质的遗传效应分析

为探究溶质载体家族4成员9(solute carrier family 4 member 9,SLC4A9)基因的表达量及其多态性对鸭蛋壳品质的遗传效应,试验采用实时荧光定量PCR法检测SLC4A9基因在三穗鸭不同组织中的表达水平,采用PCR产物直接测序法筛查三穗鸭SLC4A9基因的SNP位点,并分析SNP位点对三穗鸭蛋壳品质的遗传效应。结果显示,SLC4A9基因mRNA在三穗鸭10个组织中均有不同程度表达,其中在心脏和胰腺中为高度特异性表达,肾脏中为中度表达,其他为低度表达。试验共检测到10个SNPs位点,其中3个位于外显子上(g.6803 C>T、g.7065 C>T和g.7089 C>G),且均为错义突变,7个位于内含子上(g.7162 C>G、g.11044 G>A、g.11090 T>C、g.11234 C>T、g.11261 C>T、g.11349 C>T和g.11403 G>A),其中g.6803 C>T位点突变导致丙氨酸(GCG)变为缬氨酸(GTG);g.7065 C>T位点突变导致丙氨酸(GCC)变为缬氨酸(GTC);g.7089 C>G位点突变导致丙氨酸(GCA)变为甘氨酸(GGA)。χ2检验结果显示,g.6803 C>T、g.11090 T>C和g.11349 C>T突变位点的基因型分布均偏离了Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05),其余位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。关联分析结果表明,g.11349 C>T位点的CC和CT基因型蛋壳强度显著高于TT基因型(P<0.05)。综上,SLC4A9基因的10个SNPs位点均对三穗鸭的蛋壳品质产生影响,其中g.11349 C>T位点达到了显著水平,可为蛋鸭蛋壳品质的改善及遗传标记提供参考依据。

金华市经营性健身场所瑜伽开展现状及对策研究

本论文以金华市7所具有代表性的健身场所作为研究对象.运用文献资料、专家访谈法、问卷调查法、数理统计等研究方法从金华市经营性健身场所管理人员、教练员、健身者三个层面对金华市经营性健身场所瑜伽项目的开展情况进行调查,找出瑜伽项目在金华市经营性健身场所开展中存在的问题,分析原因,提出相应的对策.

长顺绿壳蛋鸡SLC8A1基因多态性及其对蛋壳品质的影响

【目的】探究溶质载体家族8成员A1(solute carrier family 8 member A1,SLC8A1)基因多态性对长顺绿壳蛋鸡蛋壳品质的影响,为今后改善蛋壳品质提供参考。【方法】根据GenBank数据库中鸡SLC8A1基因序列(登录号:NC_052534.1),使用Primer Premier 3.0软件设计引物进行PCR扩增,采用直接测序法筛选SLC8A1基因SNP位点,并利用SPSS 22.0软件检测SNP位点不同基因型蛋壳指标的差异。【结果】在SLC8A1基因外显子11上共发现3个新的SNPs:g.16085681 T>C、g.16085766 C>T和g.16085781 T>C,共存在3种单倍型:H1(TCT)、H2(CTC)、H3(TTC),以及6种双倍型:H1H1(TTCCTT)、H1H2(TCTCTC)、H1H3(TTTCTC)、H2H2(CCTTCC)、H2H3(CTTTCC)、H3H3(TTTTCC)。χ~2检验结果显示,3个SNPs位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),均表现为中度多态。关联性分析结果显示,g.16085681 T>C位点TC基因型个体蛋壳强度显著高于TT基因型(P<0.05),g.16085681 T>C位点和单倍型H2(C_(16085681)T_(16085766)C_(16085781))对SLC8A1基因mRNA二级结构产生明显的影响;g.16085766 C>T位点CC基因型个体蛋形指数显著高于TT基因型(P<0.05);双倍型H1H1、H1H3个体蛋形指数显著高于H2H3,H2H3个体蛋壳强度和蛋壳厚度均显著高于H1H3,H1H2、H2H2个体蛋重均显著高于H3H3(P<0.05)。【结论】g.16085681 T>C位点可作为影响蛋壳强度的标记位点,g.16085766 C>T位点可作为影响蛋形指数的标记位点,双倍型H2H3可能是蛋壳强度和蛋壳厚度的有利双倍型。

2种PUFA对内鸭LXRα、ChREBP和CD36基因的表达调控分析

为了探究ω-6系列亚油酸(linoleicacid,LA)和ω-3系列二十碳五烯酸(eicospentaenoicacid,EPA)对肉鸭肝X受体α(LXRα)、碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)和CD36基因表达的影响,笔者设置基础饲粮组、基础饲粮+4%亚油酸组、基础饲粮+4%EPA这3个处理饲喂櫻桃谷母鸭,在0、2、4、6、8和10周龄时分别检测LXRα、ChREBP和CD36在鸭肝脏不同时期的mRNA表达丰度,分析其表达调控效应。结果显示:ω-6系列亚油酸和ω-3系列EPA对LXRα、ChREBP和CD36基因mRNA表达量均有抑制作用,且亚油酸抑制作用低于EPA,Ⅰ组显著高于Ⅱ组和Ⅲ组。由此可以推测,ω-6系列亚油酸和ω-3系列二十碳五烯酸均会影响肉鸭肝脏中脂肪相关基因的表达,调控肉鸭脂肪沉积。探讨PUFA对动物脂类代谢的影响机制,通过PUFA调控动物的脂类代谢提供了理论依据,可以通过在日粮中添加多不饱和脂肪酸,生产低脂、低胆固醇且富含PUFA的功能性禽类产品。