CRISPR/Cas-等温扩增技术在食源性病原菌检测中的研究进展

食源性病原菌引起的食品安全事件引起广泛关注,为保证食品安全,采取有效的检测手段至关重要。新兴的簇状规则间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)及其关联蛋白(CRISPR-associated protein,Cas)组成的CRISPR/Cas系统是广泛存在于细菌和古细菌中的一种获得性免疫系统,可高效、特异性识别并切割外源核酸,与传统技术相比在检测病原菌方面更为高效。本文基于CRISPR/Cas生物传感系统-等温扩增技术联用的相关研究进行综述,对CRISPR/Cas系统的分类、原理以及与等温扩增耦合后在食源性病原菌检测方面的研究进展进行概述,并对其在即时检测应用中的前景以及所面临的挑战进行深入探讨,以期为CRISPR/Cas生物传感系统的进一步发展提供参考。

可缓解食物过敏的热灭活乳酸菌的筛选及其全基因组分析

食物过敏(FA)是指人体免疫系统对特定食物产生的异常反应,会导致消化道、呼吸道、皮肤和心血管系统等多个系统的不适。本文通过透明质酸酶抑制试验和RBL-2H3细胞试验,从20株乳酸菌中筛选出抗过敏活性较强的热灭活副干酪乳杆菌JY56。随后,通过全基因组测序和体外安全性试验,评价副干酪乳杆菌Y56菌株的安全性。最后,构建卵清蛋白(OVA)诱导的FA小鼠模型,明确HK-副干酪乳杆菌JY56对FA小鼠临床症状的缓解效果。结果表明,HK-副干酪乳杆菌JY56具有较高的β-氨基己糖苷酶(β-HEX)抑制率,其干预后细胞因子IL-4、IL-5、IL-13、TNF-α的含量显著降低。全基因组学测序分析发现副干酪乳杆菌JY56不具有毒性和传递接收抗生素耐药基因的能力。抗生素敏感性试验、溶血试验、有害代谢产物评价等安全性评价试验表明副干酪乳杆菌JY56对常用抗生素具有敏感性,不产生溶血作用和有害代谢产物。上述说明副干酪乳杆菌JY56具有安全性,其灭活菌体可用于后续研究。OVA刺激后会导致小鼠的体质量和直肠温度降低,过敏评分提高,而HK-副干酪乳杆菌JY56干预后可以明显缓解小鼠过敏症状。本研究结果为HK-副干酪乳杆菌JY56用于缓解食物过敏及相关疾病提供理论依据。

降尿酸乳酸菌菌株的筛选及其全基因组分析

高尿酸血症是痛风发病的生化基础,严重威胁人体健康。通过测定35株乳酸菌对鸟苷和肌苷的降解能力,筛选出4株具有较高降解能力的乳酸菌,对这4株菌的菌悬液、细胞内容物及代谢物进行黄嘌呤氧化酶活性抑制试验,选取其中抑制能力最强的菌株进行全基因组测序和安全性验证。结果表明,鼠李糖乳酪杆菌JY027对鸟苷和肌苷的降解率分别达80.27%和87.33%,且该菌株的菌悬液、细胞内容物及代谢物对黄嘌呤氧化酶的抑制率分别为85.71%,78.34%,84.05%,说明其具有较强的降尿酸能力。此外,通过对鼠李糖乳酪杆菌JY027的全基因组编码基因的预测,发现该菌株具有次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶、次黄嘌呤核苷酸脱氢酶等多个尿酸代谢相关基因。经过吲哚、溶血等试验验证了该菌株的安全性。本研究为鼠李糖乳酪杆菌JY027用于缓解高尿酸血症提供了理论基础。

冷藏原料乳中微生物及品质的动态变化规律

该研究采用了三代16S rDNA高通量测序技术监测了低温贮藏期间(4℃,8 d)的原料乳微生物动态群落结构和丰度,结合数据库分析原料乳中微生物功能基因代谢途径。结果表明,原料乳在低温贮藏过程中,嗜冷菌逐渐成为优势菌,它们的主要代谢途径碳水化合物代谢、脂质代谢和氨基酸代谢等与原料乳的品质变化密切相关,氨基酸的合成和代谢以及脂肪转运代谢丰度提高最终导致乳品风味、质地、组织趋于劣变状态。冷藏过程中以嗜冷菌为主的优势微生物大量繁殖并产生的耐热酶,水解原料乳中的蛋白质和脂肪,引起牛奶品质劣变。

预测微生物学模型在乳及乳制品中的应用

乳及乳制品营养成分丰富,是微生物生长的良好培养基,在生产加工过程中极易受到污染,因此乳及制品中微生物污染情况、生长规律以及源头控制研究备受关注。预测微生物学模型基于数学算法,是挖掘微生物动态规律、解析微生物对食品品质变化影响的重要技术支撑,在乳及乳制品质量安全保障中发挥重要作用。文章综述了乳及乳制品中微生物污染现状及目前存在的预测微生物模型种类,从微生物生长预测、货架期预测、微生物产毒预测等模型应用角度对预测微生物学模型进行介绍,并对近年来预测微生物学模型在乳及乳制品中的应用进行总结,为预测微生物学在乳及乳制品安全方面应用提供借鉴与参考。

乳品安全控制溯源技术研究进展

为保障乳品质量与安全,近年来不断开发高效乳品安全溯源技术。文章介绍了乳品安全溯源技术现状,对原料乳收集及加工过程中可能存在的风险和乳品掺假问题进行分析,并阐述无线射频识别(RFID)及电子产品码技术、指纹技术和区域链技术及其在乳品安全溯源方面的国内外实例,为乳品安全溯源问题提供思路,便于出现问题时及时追溯源头,促进乳品行业稳步发展。

酶水解降低牛奶蛋白致敏性研究进展

酶水解及其与加工技术的组合已经被广泛开发并用于降低牛奶蛋白的致敏性。文章综述了酶水解及其与其他加工技术(热处理、超声、高静水压、冷等离子体、糖基化和超滤)的组合在影响牛奶蛋白致敏性方面的最新进展和作用机制,并对比、分析和总结这些加工与酶水解技术组合优缺点。研究发现,酶水解与加工技术的组合在降低牛奶蛋白致敏性方面比单一处理更有效。主要归因于加工技术可以通过诱导蛋白质结构发生变化,使其暴露更多的酶切位点,从而提高酶对牛奶蛋白致敏表位的破坏。为低致敏性牛奶蛋白生产提供参考。

孕激素与二甲双胍联合米菲司酮治疗子宫内膜癌的疗效以及对生殖激素的影响

目的探讨孕激素与二甲双胍联合米菲司酮治疗子宫内膜癌的疗效以及对生殖激素的影响。方法按照随机数字表法抽取新乡市第二人民医院2020年1月至2021年12月因子宫内膜癌入院的72名患者,分为对照组和观察组,各36例。对照组使用孕激素与二甲双胍治疗子宫内膜癌,观察组在对照组的基础上加用米菲司酮,比较两组患者的疗效、生殖激素[促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)、雌二醇(E_(2))、孕醇(P)、睾酮(T)]的水平以及肿瘤标志物水平[血清糖类抗原125(CA125)和人附睾蛋白4(HE4)]、恶性肿瘤生存质量量表(QOL)评分。结果观察组患者的疾病缓解率为83.33%,对照组患者的疾病缓解率为58.33%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组FSH、LH、T激素水平均低于对照组(P<0.05);观察组与对照组PRL、E2、P激素水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组CA125、HE4值均降低,且观察组与对照组比较,CA125、HE4值更低(P<0.05);治疗后两组患者生存质量皆有所改善,且观察组改善情况优于对照组(P<0.05)。结论孕激素与二甲双胍联合米非司酮治疗子宫内膜癌能够调节生殖激素水平,加强抗癌细胞作用,抑制并促进癌细胞凋亡,提高患者的生活质量,具有较好的临床效果。

乳及乳制品危害因素及其检测技术研究进展

乳及乳制品中各种化学、生物及物理性危害因素一直影响乳品行业的稳定发展。针对乳及乳制品中各种危害因素,目前已开发了包括微生物检测技术、仪器分析技术、免疫分析技术和生物传感技术在内的各种检测技术。本文介绍了目前国内外乳及乳制品中的各类危害因素及其对人体健康安全所造成的影响,结合对应乳及乳制品质量安全检测技术进行分析与对比,深度解析乳及乳制品质量安全检测技术的发展进程,形成了以高通量、高灵敏度、快速化以及微型化发展的趋势,旨在为乳中危害因素的相关检测技术的发展提供借鉴参考。

原料乳中腐败微生物对液态乳品质的影响及防控

乳因其营养丰富备受关注,被称为人体的“白色血液”,同时乳也是微生物良好的培养基,因此原料乳品质和液态乳加工过程都会受到严格把控,但目前液态乳在储藏期、流水线或货架期内发生腐败变质现象仍屡屡发生,引起行业对乳及乳制品安全的高度重视。原料乳作为液态乳生产的原料,是其品质保障的基础,原料乳中腐败微生物随着储藏时间的延长而大量繁殖,经过热处理后未被完全杀死的腐败菌及其产生的耐热酶仍会继续影响液态乳品质,此外生物膜的形成也为腐败菌在管道内残留提供了机会,加大了腐败微生物防控的难度。因此本文将从原料乳中腐败微生物多样性进行阐述并探究腐败微生物对于液态乳的不良影响,挖掘腐败微生物破坏液态乳可能存在的作用机制,总结现阶段国内外对腐败微生物的防控手段并探讨其商业应用价值,旨在为今后液态乳质量安全保障及延长货架期提供理论指导。

A2β-酪蛋白的功能性及其在乳制品中应用的研究进展

牛奶中富含多种营养成分,包括蛋白质、脂质、碳水化合物等,每100 g牛奶中就含有3 g蛋白质,其中主要包括乳清蛋白和酪蛋白。β-酪蛋白占牛奶蛋白总量的24%~28%,其主要包括两种基因型:A1型与A2型。A1β酪蛋白经消化后产生的β-酪啡肽-7会导致人体消化功能紊乱、心血管疾病等不良反应。A2β-酪蛋白则产生较少甚至并不产生β-酪啡肽-7,在胃肠道消化、提高抗氧化功能、降低胆固醇浓度等方面具有益生作用。本文综述了β-酪蛋白基因型在人体内消化后所产生的影响,并阐述了A2β-酪蛋白的益生功能,讨论其对人体健康的作用。并从β-酪蛋白基因型在乳制品中的应用入手,阐述A2β-酪蛋白乳制品的研究进展,为今后乳制品中A2β-酪蛋白的功能研究提供指导意义。

A1/A2型β-酪蛋白检测方法研究进展

乳中最常见的β-酪蛋白主要分为A1型和A2型。A2型为原始β-酪蛋白,而A1型等变异体是源于DNA突变所导致的氨基酸序列发生变化。由于A1β-酪蛋白基因型的个体牛具有较高的产奶量,因此在不断选育后产生了大量的A1型等变异体。但研究表明,A2β-酪蛋白比A1β-酪蛋白表现出更好的生物活性。目前已开发出了各种A2奶类产品,但其中的A1/A2型β-酪蛋白的检测方法还未标准化。就目前常见的A2β-酪蛋白的检测方法进行了分类阐述总结,分别从分子、蛋白质水平以及代谢物差异等方面检测A2β-酪蛋白或检测A2奶中是否存在A1β-酪蛋白。这对未来创新、改进检测A2β-酪蛋白的方法以及建立乳制品中A2β-酪蛋白检测及定量分析提供理论参考,以期更好的便携式现场检测方法标准化地应用于现实。

克罗诺杆菌在婴儿配方奶粉及其加工环境中耐受性和耐药性研究进展

克罗诺杆菌(Cronobacter)是一种食源性致病菌,容易感染新生儿和低体重早产儿并引起坏死性小肠结肠炎、脑膜炎和败血症等疾病,致死率高达40%~80%,治愈后可能存在严重精神系统后遗症。由流行病学可知,婴幼儿感染克罗诺杆菌与婴儿配方奶粉(Powdered Infant Formula,PIF)的关系十分密切。近年来,克罗诺杆菌污染PIF事件频发并且因其耐药性给临床治疗带来巨大挑战,造成严重后果。究其原因,是由于该菌对PIF及其加工环境的耐受能力强,不易被完全消杀从而造成持续污染。因此,为详细了解克罗诺杆菌在不利条件下的生长特性,该研究从克罗诺杆菌耐热性、耐干燥性、耐酸碱性、耐紫外性以及耐药性多个角度综述目前克罗诺杆菌耐受性相关研究进展,以期为我国克罗诺杆菌的防控消杀以及临床治疗提供参考。

克罗诺杆菌分型技术研究进展

克罗诺杆菌(Cronobacter spp.)是污染婴幼儿配方乳粉(powdered infant formulas,PIF)的主要食源性致病菌之一,可通过辅料的添加和加工环境进入PIF,可引起新生儿严重感染,导致菌血症、脑膜炎等疾病。因此,高时效性及高精度的菌株分型技术对于克罗诺杆菌的溯源和防控具有重要意义。文章对克罗诺杆菌常用的分型技术进行综述,包括血清分型、生化分型、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分型、脉冲场凝胶电泳分型、多位点序列分型、CRISPR-Cas阵列分析、随机多态性扩增DNA基因分型、核糖体分型、特殊基因分型和全基因组分型,并对上述各种方法的原理和溯源能力进行概述。

浅析当下新闻人的职业困惑与发展对策

新媒介技术的普及和发展极大地改变了我们原有的新闻媒介工作状况,传统的职业新闻人的既有职业优势也受到了冲击,新闻工作者的职业定位和边界逐渐模糊。本文从现如今我国公民记者不断发展盛行的视角出发,探寻当下新闻工作者的身份和职业窘境;思索新闻内容生产和传播环境,在当前新媒介信息技术不断发展的大背景下存在的难题;展望未来新媒介技术环境下,职业新闻工作者趋利避害,积极地融入到当前新媒介技术和传播环境当中,坚守既有职业优势,做到新闻信息的专业化生产,力求新闻报道的公共价值和社会责任。

一种快速检测婴幼儿配方奶粉中阪崎克罗诺杆菌的方法

对磁珠吸附过程中三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸(Tris-EDTA,TE)缓冲液的p H值、蛋白酶K添加量、吸附时间和吸附温度等参数进行了优化。在优化条件下氨基磁珠可以非特异性地直接吸附婴幼儿配方奶粉中存在的脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA),并结合聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术特异性扩增阪崎克罗诺杆菌DNA,检测灵敏度达到102CFU/mL。此外,经特异性试验验证,此方法用于检测常见食源性致病菌及克罗诺菌属中的非阪崎克罗诺杆菌均无交叉反应。同时,经干扰性试验验证,体系中存在的其他干扰菌株DNA并不会影响阪崎克罗诺杆菌的检测。该方法避免了抗体的使用,解决了抗体制备难度大、成本高等问题,同时克服了传统方法 3～5 d前增菌时间过长的弊端,实现了对婴幼儿配方奶粉中阪崎克罗诺杆菌的快速检测。

免疫磁分离和可视化金纳米杂交探针法快速检测婴幼儿配方乳粉中的阪崎克罗诺杆菌

利用免疫磁分离和金纳米杂交探针策略,开发一种快速和灵敏的可视化检测婴幼儿配方乳粉(powdered infant formula,PIF)中阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)方法。抗体功能化的磁颗粒捕获C.sakazakii,金纳米探针对聚合酶链式反应的产物进行分析,这种探针法可以替代传统的电泳。免疫磁颗粒是由100μL磁颗粒、120μL碳化二亚胺盐酸盐、80μL C.sakazakii单克隆抗体和体积分数0.02%的吐温-20制备。特异性检测中仅有C.sakazakii是阳性结果。在纯培养基和不经预富集的人工污染PIF中,分别能检测到10^(2) CFU/mL和10^(3 )CFU/g的C.sakazakii。经过3 h的预富集,此方法可以在PIF中检测到低至4.5×10^(1) CFU/g的C.sakazakii。可视化检测、电泳和紫外扫描光谱结果一致。因此,免疫磁分离和金纳米探针的方法可以替代凝胶电泳,对于快速检测C.sakazakii具有重要的意义。此方法将有助于检测PIF样本的C.sakazakii。

放射源在线监控系统设计

放射源污染已经成为环境污染中的重要问题,放射源检测是避免核污染的有效方法。阐述放射源在线监控系统的设计思路,该系统利用ZigBee技术,集辐射剂量测量、放射源定位、放射源追踪、报警、辐射事故应急决策、监管部门联动等功能于一体。

B超监视下行早孕人工流产术同期子宫肌瘤切除术的疗效研究

目的探讨B超监视下行早孕人工流产术同期子宫肌瘤切除术的疗效。方法选择2018年1月至2019年1月本院接诊的120例早孕合并子宫肌瘤患者进行研究,通过随机数表法分为观察组和对照组,每组60例。对照组仅在B超监视下行人工流产术,观察组在B超监视下同期行人工流产术+子宫肌瘤切除术。比较两组手术情况及并发症。结果观察组手术时间比对照组长(P<0.05),两组术中出血量、阴道流血时间、月经恢复时间比较差异无统计学意义(P>0.05);两组术后复查未发生宫内残留,无宫腔粘连、子宫穿孔等严重并发症,两组术后其余并发症发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论B超监视下行早孕人工流产术同期子宫肌瘤切除术疗效显著,未增加并发症发生率,安全性好。

植物乳杆菌发酵蓝莓果汁工艺优化及其抗氧化能力

利用植物乳杆菌LJ26发酵蓝莓果汁,利用Box-Benhnken设计响应面试验对发酵工艺进行优化。确认最佳发酵工艺为发酵温度37℃、发酵时间24 h和发酵剂接种量3%,获得的发酵蓝莓果汁中活菌数达1×10^9 cfu/mL。对发酵前后蓝莓果汁中功能活性物质进行检测,发酵后果汁中酚类物质含量增加了43.42%,花青素含量提高了5.88%。通过体外自由基清除试验和Caco-2细胞氧化损伤缓解试验检测了发酵前后蓝莓果汁的抗氧化能力变化,结果发现发酵后蓝莓果汁DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除率显著提高,缓解Caco-2细胞氧化损伤能力显著增强,证明植物乳杆菌LJ26可以作为提高蓝莓果汁品质的菌株,为蓝莓深加工技术提供了理论基础。