异荭草苷通过MAPK/FoxO信号通路减轻LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应

为了研究异荭草苷(Isoorientin,ISO)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响及其机制,将对数生长期的RAW264.7细胞随机分为对照组、模型组(LPS 1μg·mL^(-1))和异荭草苷(ISO 2.5~40μg·mL^(-1)+LPS)给药组。各组细胞培养24 h后,MTT法检测ISO对RAW 264.7细胞毒性,Griess法检测细胞培养液中一氧化氮(NO)的含量,ELISA法检测细胞培养液中TNF-α的含量,q RT-PCR方法检测环氧合酶2(COX-2)m RNA的表达水平,蛋白质印迹分析法测定细胞中COX-2、JNK、p-JNK、p38、p-p38、FoxO1和FoxO3蛋白的表达。结果表明,与LPS模型组比较,ISO显著抑制LPS诱导的TNF-α(P<0.001)和NO(P<0.01)的产生,且未见其细胞毒性。此外,ISO以剂量依赖的方式显著抑制RAW 264.7细胞COX-2基因(P<0.001)和蛋白(P<0.05)的表达。蛋白质印迹分析显示,ISO显著抑制MAPK信号通路中p-JNK和p-p38的磷酸化,并减少Fox O1/3的核转位。综上所述,ISO可抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应,其作用机制可能与其在MAPK/FoxO信号通路中发挥调节作用有关。

基于网络药理学探讨黄芪甲苷作为保健食品对慢性萎缩性胃炎调节作用

该研究依托网络药理学预测分析黄芪甲苷(astragalosideⅣ)对调节慢性萎缩性胃炎的功效,为其在功能性食品中的应用提供依据。该实验从Swiss Target Prediction、PharmMapper、OMIM等数据库中获取黄芪甲苷调节慢性萎缩性胃炎的目标基因,取交集确定靶点基因。在STRING数据库上构建蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络。PPI网络依据介数中心性用Cytoscape软件进行拓扑分析,并通过Autodock Vina软件模拟可能的分子对接结果。在微生信在线平台进行GO和KEGG富集分析,筛选出相关信号通路。体外实验通过1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(1-methyl-3-nitro-1-nitrosoguanidine,MNNG)诱导人胃黏膜上皮细胞并用黄芪甲苷干预,来检测细胞活力及炎症因子分泌水平进行验证。最终筛选得到黄芪甲苷调节慢性萎缩性胃炎的潜在靶点53个,其中关键基因8个。GO富集分析显示,囊泡腔是生物过程发生的主要场所。KEGG结果表明,肿瘤中的蛋白聚糖是黄芪甲苷调节慢性萎缩性胃炎的关键信号通路。体外实验发现,黄芪甲苷对MNNG诱导的细胞损伤具有预防治疗作用,且可以下调IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α等炎症因子的分泌(P<0.05)。该研究表明黄芪甲苷可以通过多个靶点和途径发挥抗慢性萎缩性胃炎作用,可作为功能因子用于防治慢性萎缩性胃炎。

循环肿瘤DNA的检测技术及在癌症诊疗中的应用价值

循环肿瘤DNA(ctDNA)来源于肿瘤,能很好地反映肿瘤的基因信息,并且会随着肿瘤的进展发生相应的改变。近年来,ctDNA独特的能力备受人们关注并被广泛研究,本文在总结ctDNA的来源、性质和样品处理的基础上,对ctDNA的检测技术及在癌症诊疗中的应用进行综述,阐述了ctDNA标准物质在二代测序中的作用及重要性,并指出ctDNA样品的收集、存储、定量检测以及数据分析等各个流程中建立统一标准及规范的迫切性。

TP53-R273H/R273C基因突变数字PCR检测方法研究

TP53基因是肿瘤的抑制基因,也是癌症中常用的靶向检测基因。R273H和R273C是TP53基因检测中常见的热点突变。为了建立这2个突变的微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)检测方法,针对突变位点分别设计了2套ddPCR方法,验证了探针的特异性,并对退火温度和引物探针浓度进行了优化。结果显示,所建立的方法具有良好的特异性和重复性,ddPCR法与重量法之间的相关系数为0.9997和0.9996。R273H和R273C的检出限均为0.02%,定量限均为0.05%。这2套方法可用于准确检测TP53-R273H和TP53-R273C基因突变,为临床应用提供支持。

副溶血弧菌TDH单克隆抗体的研制与性质鉴定

目的:制备副溶血弧菌耐热直接溶血毒素TDH单克隆抗体,并分析其免疫学特性。方法:用纯化的TDH毒素蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA方法进行阳性细胞筛选,有限稀释法进行亚克隆。并对该单克隆抗体进行了分子量大小、效价、亚类、特异性和亲和力分析。结果:筛选出一株能够稳定分泌TDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株命名为T9H4,其免疫球蛋白亚型鉴定为IgG1,亲和力常数可达2.19×109L/mol,并表现出较强的特异性。抗体纯化后效价达1∶1 024 000,SDS-PAGE电泳结果显示单抗蛋白重链分子量约为50 kD和轻链23 kD。结论:成功获得一株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,为开发免疫学快速检测方法提供重要实验基础。

羧甲基壳聚糖抗肿瘤及免疫增强活性研究

目的:评价羧甲基壳聚糖抗肿瘤和免疫增强活性。方法:MTT法研究羧甲基壳聚糖体外活性,S180实体瘤模型用于评价羧甲基壳聚糖体内抗肿瘤活性,流式细胞术分析肿瘤细胞的周期变化和细胞凋亡,ELISA法测定羧甲基壳聚糖对免疫功能的调节。结果:羧甲基壳聚糖抑制肿瘤细胞增殖,IC_(50)为30μg/mL,肿瘤抑制率为27.9%～43.6%。用药后细胞周期阻滞在G_1期,肿瘤细胞凋亡明显增加。体内具有明显的抑瘤和免疫增强作用。结论:羧甲基壳聚糖可以通过直接杀伤肿瘤细胞和增强免疫而发挥抗肿瘤效应。

天然抗氧化剂-抗癌转移的新途径

癌转移是引起癌症患者死亡的一个主要原因。癌转移的过程涉及转移相关基因、细胞外基质、癌细胞运动和血管新生。活性氧化物能促进癌转移的发生。抗氧化剂可以通过清除活性氧化物而抑制癌转移的发生。对天然抗氧化剂的抗癌转移活性筛选和结构改造,是开发高效、无毒副作用抗癌转移药物的一种十分重要的途径。在对多酚类、黄酮类、萜类、维生素类等天然抗氧化物质的开发中,有望寻得可用于临床病人的抗癌转移药物。

羧甲基壳聚糖对人高转移肺癌细胞—95-D增殖能力和体外转移能力的抑制作用

目的：评价羧甲基壳聚糖对人高转移肺癌细胞-95-D增殖能力和体外转移能力的抑制作用。方法：用软琼脂克隆形成实验、创伤实验、黏附实验和transwell小室实验来评价羧甲基壳聚糖对95．D细胞的影响。结果：羧甲基壳聚糖浓度在0～150μg·ml^-1范围内，剂量依赖性地抑制95-D细胞的增殖能力、移动能力、浸润能力、黏附能力和克隆形成能力。结论：羧甲基壳聚糖能有效抑制95-D细胞的增殖能力和体外转移能力。

羧甲基壳聚糖与阿霉素联合用药的体外抗肿瘤作用

目的:探讨羧甲基壳聚糖与阿霉素联合应用对人宫颈癌Hela细胞及人结肠腺瘤LS174-T细胞增殖的影响。方法:采用MTT比色法测定单独和合用羧甲基壳聚糖与阿霉素对癌细胞的生长抑制作用。应用金氏公式进行联合用药分析。结果:羧甲基壳聚糖和阿霉素均可有效地抑制癌细胞生长,且同时给药对癌细胞可产生单纯相加至增强的协同杀伤效果。序贯给药法中先给阿霉素后给羧甲基壳聚糖结果为协同作用,先给羧甲基壳聚糖后给阿霉素为拮抗作用。结论:羧甲基壳聚糖与阿霉素同时联合用药可产生协同作用,序贯联合用药产生单向协同作用。

检测副溶血弧菌TDH斑点免疫胶体金渗滤法的研究

目的:制备特异性检测副溶血弧菌TDH的斑点免疫胶体金渗滤测试盒(Dot immunogold filtration assay,DIG-FA)。方法:T6D4和T9H4两株抗体分别标记于金颗粒和点样于硝酸纤维素膜,通过双抗体夹心法来开发斑点免疫胶体金渗滤测试盒,并对测试盒的特异性、重复性、稳定性做了分析。结果:研制的斑点免疫胶体金渗滤测试盒能够特异性检测副溶血弧菌TDH,其最低检测限达到250 ng/ml TDH,该测试盒在4℃恒温条件下保存12周后仍表现出准确和稳定的检测结果。结论:成功制备了检测副溶血弧菌TDH的斑点免疫胶体金渗滤测试盒,对现场快速检测TDH提供了可靠的测试工具。

翻转课堂教学模式在大学药理实验教学中的尝试和思考

随着新的教育理念和新技术的出现,翻转课堂已经成为国内外教育改革的新浪潮。本文在药理学实验教学中进行翻转课堂教学模式的初步尝试,以期为翻转课堂在大学教育中的应用提供借鉴。

生物制药人才培养的理念创新

当今高等院校制药人才的培养理念难以满足我国生物制药行业对紧缺人才的需求,当务之急是创新教育理念、进行教育教学改革。上海海洋大学在生物制药专业建设中践行“素质为体、特色为翼、创新为魂”的理念,从人才培养目标、课程体系、教学方法、师资队伍等方面进行了探索。

Western斑点印迹法检测致病性副溶血弧菌

目的:对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的直接耐热溶血毒素(thermostable direct hemolysin,TDH)进行分离纯化,建立Western斑点印迹法技术检测致病性副溶血弧菌的方法。方法:用直接耐热溶血毒素免疫小鼠得到特异性抗血清,利用棋盘方法确定免疫血清最佳工作浓度,并对致病性与非致病性副溶血弧菌分别进行特异性测定。结果:最佳免疫血清最佳工作浓度为1:3200;检测致病性副溶血弧菌为阳性,非致病性副溶血弧菌属呈阴性。结论:Western斑点印迹法技术可以特异性检测致病性副溶血弧菌,灵敏度高、操作简单,可用肉眼判定结果。

斑马鱼应用于肝损伤疾病模型的研究进展

由于斑马鱼细胞组成、同源基因,免疫反应,药物代谢等方面与人类相比具有高度保守性。再加上斑马鱼体积小,产量大,适合被基因编辑等特点,适合于高通量的药物筛选。所以斑马鱼和斑马鱼胚胎常被用来模拟发育缺陷或化合物诱导的肝脏疾病。对斑马鱼作为肝脏疾病模型的优点,以及斑马鱼模型在免疫反应,药物代谢等方面的与人类的相似性进行综述。归纳了目前一些针对不同因素开发的斑马鱼模型及其相关病理机制以及相关药物筛选,并简要分析了其与哺乳动物模型的差异及优势,以期对肝脏疾病的药物筛选有所帮助。

表没食子儿茶素没食子酸酯通过下调GTP结合蛋白RhoA的表达抑制癌细胞的浸润和转移(英文)

目的:本研究测定了表没食子儿茶素没食子酸酯((-)-Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人肺癌细胞—95-D体外浸润、转移和RhoA表达的影响及对鼠黑色素瘤细胞体内转移能力的影响。方法:用“细胞迁移”和“培养小室模型”评价细胞的移动能力和浸润能力;用鼠黑色素瘤细胞肺部转移模型评价细胞体内的转移能力;用RT-PCR和Western blot方法测定RhoA的表达。结果:EGCG有效抑制95-D细胞的迁移和浸润,40μmol.L-1EGCG对95-D细胞浸润能力的抑制为79.9%,EGCG50 mg.kg-1.d-1,给药3周,对黑色素瘤细胞肺部转移能力的抑制为71.7%。RT-PCR和Western blot的实验结果表明:EGCG能有效下调RhoA的表达。结论:EGCG能够明显的抑制95-D细胞的浸润和转移,可能的作用机理涉及到它对RhoA表达的抑制。

羧甲基壳聚糖与阿霉素联合对Hela细胞的抑制作用研究

目的:探讨羧甲基壳聚糖与阿霉素联合应用对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定单独和合用羧甲基壳聚糖与阿霉素对癌细胞的生长抑制作用,应用金氏公式进行联合用药分析。结果:羧甲基壳聚糖和阿霉素均可有效的抑制癌细胞生长,且同时给药对癌细胞可产生单纯相加至增强的协同杀伤效果。序贯给药法中先给阿霉素后给羧甲基壳聚糖结果为协同作用,先给羧甲基壳聚糖后给阿霉素为拮抗作用。结论:羧甲基壳聚糖与阿霉素同时联合用药可产生协同作用,序贯联合用药产生单向协同作用。

天然产物治疗炎症性肠病的研究进展

炎症性肠病是一组慢性胃肠道炎症性疾病,临床表现为腹胀、腹泻、腹痛,有时甚至出现血便。目前用于治疗炎症性肠病的药物有氨基水杨酸、糖皮质激素和免疫抑制剂等。这些药物可以减轻或延缓炎症性肠病的发生和发展,但在长期使用后,一些患者可能会出现某种程度的毒副作用。近年来研究发现许多天然产物具有明显的抗炎作用,它们可以降低炎症性肠病的复发率,提高治疗安全性。系统综述了来自几种植物、动物和微生物天然产物的抗炎活性。

微波诱导合成5-芳氧亚甲基-2-[5′-(4″-氯代苯基)-2′-呋喃甲酰胺基]-1,3,4-噁二唑

在微波辐射条件下,由1 芳氧乙酰基 4 [5′ (4″ 氯代苯基) 2′ 呋喃甲酰基]氨基硫脲(1a～1i)在醋酸汞存在下,快速环合合成了一系列5 芳氧亚甲基 2 [5′ (4″ 氯代苯基) 2′ 呋喃甲酰胺基] 1,3,4 二唑(2a～2i).

壳寡糖的制备及生物活性研究进展

壳寡糖(COS)是氨基葡萄糖和N-乙酰氨基葡萄糖通过β(1→4)糖苷键链接的低聚物,是带正电荷的碱性氨基低聚糖,可从节肢动物和昆虫外骨骼以及真菌细胞壁中的甲壳素经过脱乙酰化和水解获得。其水溶性好,无细胞毒性,易通过肠道吸收,主要从尿中排泄。COS及其衍生物被证明具有抗炎、免疫调节、神经保护及抗氧化等多种生物活性。本文综述近年有关COS的制备方法、药代动力学、生物活性、安全性等方面的研究进展概况,以期为今后研究提供参考。

芦根多糖的提取及其抗氧化活性的研究

目的利用微波法提取芦根多糖,测定其含量,并研究芦根多糖的抗氧化活性。方法通过正交实验探讨芦根多糖提取的最佳工艺,从清除抑制羟基自由基的产生、还原力和对脂质体抗氧化活性的测定3个方面研究了芦根多糖的体外抗氧化效果,并同VC进行比较。结果芦根多糖含量为0.798%。微波法提取芦根多糖的最佳工艺参数为料水比1:3,微波强度为大火,提取时间8min。多糖还原能力仅稍次于抗坏血酸;多糖对羟自由基的清除能力较抗坏血酸来说较弱;对脂质过氧化的抑制作用在吸光度小于等于0.88时与多糖的浓度成正相关。结论微波法对芦根中的多糖的提取有辅助作用,芦根多糖具有一定的抗氧化活性。