甲胎蛋白异质体检测在肝癌鉴别诊断中的应用

目的探讨甲胎蛋白异质体(AFP-L3)检测在肝癌鉴别诊断中的意义。方法应用微量离心柱法分离检测小扁豆凝集素结合型AFP-L3的百分含量(AFP-L3%),同时检测血清中AFP总含量。结果以AFP-L3%>10%作为阳性判断标准,47例肝癌患者血清AFP-L3阳性率为72.3%,肝硬化和慢性肝炎AFP-L3%分别为0和1.8%,肝癌AFP-L3%水平明显高于肝硬化和慢性肝炎(P<0.01);以AFP>20μg/L作为阳性判断标准,肝癌、肝硬化和慢性肝炎患者血清中AFP阳性率分别为85.1%、35.7%和37.8%;以AFP、AFP-L3%作为诊断肝癌指标的灵敏度分别是85.1%、72.3%,特异度分别是55.4%、97.2%。结论AFP-L3%是肝癌鉴别诊断的有用指标。

肝癌患者血清中乙型肝炎病毒前C和BCP区基因变异的临床研究

目的了解常州地区乙型肝炎病毒(HBV)DNA前C区(1896)、BCP区(1762/1764)基因的变异,探讨与肝癌的相关性。方法运用基因芯片和核苷酸序列分析技术,对HBVDNA进行分析。结果前C区1896位、BCP区1762/1764位突变普遍存在。(1)在39例HBeAg(+)标本组中1896突变为5例(12.8%),1762/1764突变为15例(38.5%);在75例HBeAg(-)组中1896突变为26例(34.7%),1762/1764突变为55例(73.3%)。(2)在114例标本中,慢性乙型肝炎、慢性重型乙型肝炎、乙肝肝硬化、肝癌组中前C区1896、BCP区1762/1764位的总突变率分别为55.9%、71.4%、75.7%、88.9%。结论前C区1896、BCP区1762/1764位突变与HBeAg(-)显著相关,两者总突变率在肝癌患者中显著升高,尤其前C1896、BCP区1762/1764同时突变与肝硬化和肝癌密切相关。

甲胎蛋白异质体3对肝细胞癌的预测作用──附18例分析

目的:探讨甲胎蛋白异质体3(lentil lectin-reactive alpha-fetoprotein-L3,AFP-L3)对肝癌的预测作用。方法:抽取18例经影像学(B超、CT等)诊断未发现肝癌的肝硬化患者的静脉血5mL,采用国产微量离心柱法分离AFP-L3,用化学发光免疫法检测血标本中的甲胎蛋白和AFP-L3含量,以AFP-L3超过10%作为阳性判断标准。结果:18例肝硬化患者的AFP-L3分别为14%～75%,出院后分别接受3～18个月的随访,其中17例在出院后3～18个月内被诊断为肝癌。结论:AFP-L3阳性的肝硬化患者进展为肝癌的几率高,提示应对AFP-L3阳性的肝硬化患者进行密切随访,以便早期发现肝癌。

乙型肝炎病毒特定变异位点的结果分析

目的检测HBV基因多态性,从而有助于抗病毒药物的选择及疾病预后的判断。方法通过基因芯片技术,将HBV DNA进行PCR扩增,然后进行扩增产物尽杂交,芯片显色,结果分析。结果包括前C区1896位、BCP区1762/1764位、P区528/552位的突变普遍存在。①160例标本中,在HBeAg(+)组中G1896A突变为7例(14.3%),在HBeAg(-)组中G1896A突变为56例(46.3%);②160例标本中,慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化、乙肝肝癌组中A1762T/G1764A的突变率为36.7%(40/109)、51.4%(19/37)、91.7%(11/12);③30例用拉米呋定抗HBV治疗的慢性乙型肝炎患者中,治疗前用基因芯片法检测都为野生株,经治疗后血清HBV DNA滴度下降而转阴,但随着治疗时间延长出现血清HBV DNA反跳8例,其中552位突变1例,528位突变7例。结论基因芯片法结果准确高效,具有推广价值;HBV DNA位点的变异对于疾病的进展、预后、临床用药有重要作用。

乙型肝炎病毒基因分型荧光PCR检测及临床应用

目的:了解乙型肝炎病毒基因分型、分布及其与肝功能损害、病毒复制水平的关系。方法:采集69例乙肝患者血样,采用荧光聚合酶链反应(PCR)检测乙肝病毒基因分型,通过荧光探针识别基因型特异性序列,采集分析荧光信号确定病毒基因型,分别检测谷丙转氨酶(ALT)水平、乙肝病毒e抗原(HBeAg)和HBV DNA含量。结果:69例乙肝患者中B型26例,C型43例。B型和C型患者的ALT水平分别为(453.54±447.93)U/L和(330.23±306.90)U/L(P>0.05);HBeAg阳性数分别为11例和23例(P>0.05);HBV DNA含量分别为(38.74±36.49)×104拷贝/ml和(34.53±34.09)×104拷贝/ml(P>0.05);不同临床类型乙肝患者中两种基因型的分布没有显著差异(P>0.05)。结论:本地区乙肝患者病毒基因型主要为B型和C型;二种基因型ALT水平、HBeAg表达水平、病毒复制水平以及肝炎病情均无显著性差异。

乙型肝炎病毒基因变异与免疫调节的关系

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(BCP)及前C基因变异与慢性乙型肝炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平的关系。方法应用基因芯片技术检测HBV BCP及前C基因T1762、A1764、A1896位碱基变化;应用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞表达水平。结果急性乙型肝炎、慢性活动性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者血清中HBV DNA T1762、A1764、A1896位碱基突变率分别为0、41.2%、69.4%、100%;急性乙型肝炎、慢性活动性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平高于正常对照;HBeAg阳性感染者高于HBeAg阴性感染者;变异株感染者低于非变异株感染者(P均<0.05)。结论前C/C基因变异与HBV感染后肝病的慢性化及临床病情加重有关,与CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平相关。

乙型肝炎病毒B基因亚型检测及临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒B基因型亚型分布特征及其与临床病情的相关性。方法采用巢式聚合酶链反应(nest PCR)扩增乙型肝炎病毒preC/C基因区DNA片段,用末端标记方法对PCR产物标记并直接测序,测序结果和GeneBank中登录的标准序列相比较。结果35例B基因型乙肝病毒感染者均为Ba亚型,未发现Bj亚型。结论江苏常州地区的B基因型乙肝病毒均为Ba亚型。

肝癌患者外周血白细胞中p16蛋白的表达及其意义

目的了解肝癌患者外周血白细胞中P16蛋白的表达及其意义。方法对20例正常献血员,32例慢性乙型肝炎,28例肝硬化,35例肝癌患者外周血白细胞进行P16蛋白的流式细胞荧光染色检查。结果P16蛋白在正常献血员,慢性乙型肝炎,肝硬化,肝癌中阳性率分别为(76.57±6.07)%、(43.09±8.08)%、(30.54±10.61)%、(16.29±6.86)%,正常献血员中的阳性率明显高于后三者(P<0.05),慢性乙型肝炎阳性率明显高于肝硬化和肝癌(P<0.05)。结论肝细胞癌的发生可能与P16表达减少有关。

基因芯片检测乙型肝炎病毒PreC/C突变与临床的关系

目的研究在HB eA g阴性的慢性乙肝患者中出现前C区G 1896位的突变与临床的关系。方法收集170例乙型肝炎患者的血清采用基因芯片法检测G 1896A的突变。结果在49例HB eA g(+)组中G 1896A突变为7例(14.3%),在121例HB eA g(-)组中G 1896A突变为56例(46.3%)。急性肝炎变异率为0(0/12),慢性乙型肝炎变异率为27.5%(30/109),乙肝肝硬化变异率为62.2%(23/37),乙肝肝癌变异率为91.7%(11/12)。结论HB eA g阴性的慢性乙肝患者的发生与G 1896A的突变密切相关。

乙型肝炎患者血清中庚肝病毒核酸的检测

目的:了解乙型肝炎患者HGV感染情况,探讨HGV感染与HBV感染的关系。方法:应用巢氏PCR对1104例乙型肝炎患者进行了血清HGV-RNA检测,以251名正常人为对照。结果:共检出血清HGV-RNA阳性者34例,阳性率3.08%。乙型肝炎患者血清HGV-RNA阳性率(3.17%)与正常人群(2.79%)相比无显著差异(P>0.05)。慢性乙肝患者血清HGV-RNA阳性率(4.78%)显著高于急性乙肝患者(0.96%)(P<0.05)。结论:HGV感染可表现为病毒携带状态、亚临床型和不同临床类型,乙型肝炎患者并不比正常人群更易感染HGV,HGV与HBV重叠感染可能与病情发展和慢性化的形成有关。

肝硬化患者可溶性补体受体1型水平的变化及意义

目的研究肝硬化患者可溶性补体受体1型(sCR1)水平的变化,探讨其在肝硬化发展过程中的意义。方法采用双抗体夹心(ELISA)法,测定Child-Pugh肝功能分级A(31例)、B(26例)、C(29例)三级的肝硬化患者sCR1水平,将其与Child-Pugh得分进行比较。同时测定30例肝细胞癌,8例胰腺癌,15例乳腺癌,8例肺癌患者以及30例正常献血员sCR1水平并进行组间比较。结果肝硬化患者sCR1的水平显著高于正常献血员,差异有统计学意义(P<0.01),肝细胞癌患者与肝硬化患者间差异无统计学意义(P>0.05),其他恶性肿瘤患者与正常献血员差异无统计学意义(P>0.05)。Child-Pugh得分与sCR1水平存在正相关关系(r=0.86)。结论sCR1水平与肝功能状况密切相关,有可能作为抗炎症分子在阻止肝脏硬化过程中起一定作用。

微量离心柱法分离检测甲胎蛋白异质体（AFP-L3）及其临床意义

目的探讨甲胎蛋白异质体（AFP-L3）在肝细胞癌诊断中的意义。方法应用预装有耦联小扁豆凝集素（LCA）的琼脂糖微量离心柱分离AFP-L3，采用双抗体夹心、化学发光法检测AFP和AFP-L3，并计算AFP—L3值，以AFP〉20μg／L，AFP-L3〉10％作为阳性判断标准。结果肝细胞癌患者血清中AFP、AFP-L3水平明显高于其他肝病患者，P值均〈0．001，肝癌患者以AFP、AFP-L3作为诊断指标的敏感度分别是85．1％、72．3％，特异度分别是55．4％、97．2％；8例肝病患者AFP-L3〉10％，影像诊断未发现肝癌，至少三个月以后确诊肝癌。结论甲胎蛋白异质体（AFP—L3）在肝细胞癌诊断及与良性肝病的鉴别诊断中具有重要价值。

乙型肝炎病毒外膜大蛋白血清学检测及临床意义

HBV的外膜蛋白主要包括主蛋白、中蛋白和大蛋白。大蛋白存在于感染性颗粒（Dane颗粒）和亚病毒管状颗粒上，是病毒形成完整外膜的重要标志，与病毒复制密切相关，对HBV复制过程具有反式激活作用，并与病毒颗粒从细胞内释放有关，过量乙肝病毒外膜大蛋白（HBV—LP）在肝细胞内质网积聚是导致内质网应激的关键因素，并与肝细胞毒性甚至肝癌相关。有研究表明，HBV—LP具有双重跨膜拓扑结构，这是HBV—LP发挥多种功能作用的依赖性结构，针对HBV—LP特殊构象制备的单克隆抗体，

乙型肝炎病毒感染者病毒变异与外周血调节性T细胞的关系

目的探讨乙型肝炎病毒前C区A1896变异与患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平的关系。方法应用聚合酶链反应扩增包括HBV前C区在内的DNA片段,经纯化、末端标记后测序,判读结果;应用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞表达水平。结果68例慢性乙型肝炎(慢性乙肝)、36例肝硬化和18例肝癌患者血清A1896位碱基突变率分别为41.2%、69.4%和100.0%;A1896变异株感染者CD4+CD25+调节性T细胞水平明显低于非变异株感染者(P<0.01)。结论A1896基因变异与乙型肝炎病毒感染后肝病的慢性化及临床病情加重,CD4+CD25+调节性T细胞表达以及患者免疫状态的改变相关。