IFN-β通过STAT1诱导SARI表达抑制AML细胞增殖并促进凋亡

目的:探讨IFN-β诱导SARI表达对急性粒细胞性白血病(AML)细胞增殖、凋亡的作用,并筛选其潜在的调控分子。方法:qPCR、Western blot筛选SARI低表达的AML细胞作为实验细胞株;不同浓度IFN-β干预AML细胞,于不同时间采用qPCR、Western blot检测SARI表达,选取IFN-β作用的适当浓度和时间;采用RNA-Seq转录组测序及KEGG富集分析初步筛选IFN-β诱导AML细胞SARI表达的潜在调控分子;通过相应分子抑制剂联合IFN-β处理AML细胞,MTS法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡;明确该分子参与IFN-β诱导SARI表达对AML细胞增殖及凋亡的作用。结果:HL60和NB4细胞SARI表达相对较低,选为实验细胞株;1 ng/ml IFN-β作用12 h后AML细胞SARI表达升高且细胞增殖被抑制,凋亡增多;筛选STAT1为IFN-β诱导SARI表达的潜在调控分子;抑制STAT1后,IFN-β对AML细胞SARI表达、增殖抑制、凋亡促进的作用被明显逆转。结论:IFN-β可通过STAT1诱导AML细胞SARI表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

SARI及PI3K/AKT通路分子在AML患者骨髓中的表达及其临床意义

目的:探讨SARI及PI3K/AKT通路分子在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)患者骨髓中的表达情况及其临床意义。方法:收集100例AML患者的骨髓标本,并以30例造血干细胞移植健康供者作为正常对照。分别采用qPCR和Western blot检测SARI及PI3K/AKT通路分子的mRNA及蛋白表达。结果:AML患者骨髓中SARI mRNA的表达低于正常对照(P<0.05),且初诊和复发组中SARI mRNA和蛋白表达量均低于缓解组(P<0.05)。ROC曲线分析显示当SARI mRNA的截断值为0.191时,诊断AML的AUC为0.705,灵敏度为70.0%,特异度为66.2%;SARI mRNA高表达组AML初诊患者的缓解率高于未缓解率(P<0.05),配对t检验分析显示同一AML患者其初诊阶段SARI mRNA表达明显低于缓解阶段(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示SARI mRNA高表达组AML患者总生存时间长于低表达组(P<0.05)。初诊和复发组中PI3K、AKT、mTOR、4EBP1 mRNA表达均高于缓解组(P<0.05);除p-AKT外,初诊和复发组中上述分子及对应的磷酸化分子p-PI3K、p-mTOR、p-4EBP1蛋白表达均明显高于缓解组(P<0.05),且均与SARI蛋白表达呈负相关(P<0.05)。结论:SARI在AML骨髓中异常低表达,与患者疗效、预后密切相关,其机制涉及PI3K/AKT通路的激活。SARI可作为AML诊断、疗效与预后评估的新指标。

多元化融合混合式教学模式的探索与教学效果——以临床检验基础课程为例

基于国家精品在线开放课程,应用“智慧+教育”现代化教学手段,开展贯通“临床检验基础—临床专业知识—检验技术应用”的多元化融合异步SPOC混合式教学,并采用学习体验问卷、课程成绩等方式,探讨线上线下混合式教学模式在临床检验基础课程的应用效果。结果表明,学生的课程成绩有明显的提高,学生能够接受线上线下混合式教学模式,并对其教学效果总体满意,该教学模式有助于培养学习能力。线上线下混合式教学模式提升了临床检验基础课程教学的内涵和质量。

医学院校专业课教师与辅导员协同育人研究--基于“课程思政”背景下的育人模式探索

专业课教师与辅导员肩负着协同育人的重要使命,但目前仍旧存在教育参与者观念误区、合力成效不显、评价体系有待完善等问题,可通过健全制度保障、搭建协同平台、完善评价体系等渠道予以推进,促进专业课教师与辅导员发挥好协同育人作用,进而更好地落实教育的立德树人本质要求。

医学检验专业课程思政教学体系构建与实施

以国家级首批一流课程及省级首批课程思政示范课程——“临床血液学检验”的课程思政建设为例,探讨如何提高医学检验专业课程教师课程思政意识和能力,确立课程育人目标、发掘契合教学知识点的思政内涵,建立“教学内容—呈现形式—思政内涵”三者匹配的课程思政案例库,构建思政元素进大纲、进教案、进讲稿、进课件、进课堂“五进”形式的专业课课程思政教学体系,并提出课堂思政教学的具体举措,从而为医学检验专业课程思政教学的建设和开展提供参考模式。

右美托咪定抑制肝细胞脂质累积的作用及机制研究

目的:探讨右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)对肝细胞脂质代谢过程的调控作用及可能机制。方法:分离小鼠原代肝脏细胞,用游离脂肪酸处理24 h构建肝细胞脂质累积模型,分别用浓度200 ng/mL,500 ng/mL和1000 ng/mL的DEX药物处理原代肝脏细胞24h。收集细胞进行油红O染色观察细胞中脂质累积情况;通过实时荧光定量PCR和免疫印迹技术检测细胞脂质代谢关键基因的表达情况;通过实时荧光定量PCR检测DEX处理不同作用时间点α_(2A)-肾上腺素受体的表达变化情况;进一步通过免疫印迹技术探究DEX对相关信号通路蛋白表达的影响。结果:不同浓度DEX药物处理原代肝脏细胞后,细胞中脂质累积明显减少,且呈剂量依赖性。与脂肪酸和甘油三酯合成的关键基因如脂肪酸合成酶、硬脂酰辅酶A去饱和酶1及过氧化物酶体增殖物激活受体γ的表达显著被抑制(P<0.05);α_(2A)-肾上腺素受体的表达先升高后被抑制;DEX药物可显著降低原代肝脏细胞P65和P38的磷酸化水平(P<0.05)。结论:DEX可减轻肝脏细胞脂质累积,其机制可能与细胞α_(2A)-肾上腺素受体和MAPK/NF-κB信号通路被抑制有关。

舒尼替尼诱导耐药白血病细胞K562/ADR焦亡的作用及其通路研究

目的:探讨舒尼替尼(SU11248)对耐药白血病细胞K562/ADR死亡的诱导作用及其相关信号通路。方法:使用不同浓度舒尼替尼干预K562/ADR细胞,分别于24、48、72、96 h收集各组细胞,采用MTS法检测舒尼替尼对K562/ADR细胞增殖能力的影响,确定适当的舒尼替尼干预时间和浓度。通过qPCR和Western blot检测舒尼替尼干预后K562/ADR细胞的凋亡相关基因mRNA和蛋白表达水平变化。使用4种不同细胞死亡抑制剂Nec-1、VX-765、CQ、Fer-1检测舒尼替尼干预后K562/ADR细胞的死亡方式。通过qPCR和Western blot检测舒尼替尼干预后K562/ADR细胞的焦亡相关基因mRNA和蛋白表达水平变化。结果:舒尼替尼可明显抑制K562/ADR细胞的增殖,抑制效果呈一定的时间及浓度依赖性(r_(48 h)=0.9579、r_(4μg/ml)=0.9740),其48 h的IC_(50)为(3.96±0.14)μg/ml;舒尼替尼干预后K562/ADR细胞凋亡相关基因Bax、BCL-2、Caspase-3、Caspase-9的mRNA和蛋白表达水平均无明显变化;4种不同细胞死亡抑制剂处理后,仅焦亡抑制剂VX-765能够明显逆转舒尼替尼对K562/ADR细胞的增殖抑制作用(P<0.01);舒尼替尼干预后K562/ADR细胞焦亡相关基因Caspase-1、Caspase-4、Caspase-5、NLRP3、GSDMD、IL-1β的mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。结论:舒尼替尼可诱导耐药白血病细胞K562/ADR发生焦亡,深入研究细胞焦亡相关信号通路有望为耐药白血病治疗提供实验依据。

SU11248干预白血病细胞HL-60对P27^KIP1和cyclin G蛋白表达的影响

目的:探讨SU11248对人髓系白血病细胞株HL-60的效应及其对HL-60细胞表达P27KIP1和cyclin G蛋白改变的影响。方法:应用MTT法检测SU11248对HL-60细胞增殖能力的影响;采用Western blot检测SU11248干预HL-60细胞前后P27KIP1和cyclin G蛋白表达水平的变化及其相关性。结果:不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mg/L)SU11248作用HL-60细胞24h、48h、72h、96h后,SU11248可抑制HL-60细胞增殖,抑制作用呈现剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为2.0mg/L。2.0mg/LSU11248作用HL-60细胞72h时抑制率达到最高。2.0mg/LSU11248作用HL-60细胞后cyclin G蛋白表达呈时间依赖性降低,而P27KIP1蛋白表达呈时间依赖性升高。两蛋白各时间组的改变与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:SU11248具有抑制HL-60细胞增殖的生物效应,在HL-60细胞及SU11248干预HL-60细胞过程中,P27KIP1基因可能对cyclin G基因及细胞周期发挥负性调控作用。SU11248通过上P27KIP1、下调cyclin G而干扰细胞周期可能是其发挥抑制肿瘤细胞分裂的环节之一。

SU11248对骨髓瘤细胞U266增殖及凋亡作用的实验研究

目的:探讨SU11248对骨髓瘤细胞U266的生物学效应的影响及其作用机制。方法:应用MTT法检测SU11248对U266细胞增殖能力的影响;用流式细胞技术检测细胞的DNA倍体及细胞周期变化、用凝胶电泳分析DNA片段化、用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测SU11248对U266细胞凋亡的影响;以RT-PCR法检测3.0μg/mlSU11248作用U266细胞后c-myc、hTERT、Bcl-2、BaxmRNA表达变化。结果:SU11248可明显抑制U266细胞增殖(P<0.05),呈现剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为3.0μg/ml。SU11248可将U266细胞阻滞于G0/G1期,并呈现剂量依赖性;能诱导U266细胞呈现典型的DNA梯状带;促进细胞原位凋亡。3.0μg/mlSU11248作用后,U266细胞c-myc、hTERT、Bcl-2mRNA表达水平呈时间依赖性降低,而BaxmRNA表达水平呈时间依赖性增强。结论:SU11248能抑制U266细胞增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与下调U266细胞Bcl-2、c-myc和hTERT的表达及上调Bax的表达有关。

上气道咳嗽综合征中医治疗及与红细胞免疫的相关性研究

目的观察中药(自拟方)加敷贴法治疗上气道咳嗽综合征(UACS)患儿的临床疗效并探讨红细胞免疫在其发病中的意义。方法将90例上气道咳嗽综合征患儿随机分为中药组30例,中药加敷贴组30例,对照组30例,同时选取健康体检儿童30例为正常组。中药组予单纯中药治疗;中药加敷贴组在中药组基础上,加穴位敷贴治疗;西药组予氯雷他定口服,同时配合色甘酸钠滴鼻。观察三组患儿的临床疗效、红细胞C3b受体花环率(RBC-C3bRR)变化情况。结果中药加敷贴组、中药组临床显效率明显优于西药组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。中药加敷贴组患儿咳嗽、咽部不适及咽后壁分泌物改善方面优于西药组,差异有统计学意义(P<0.01);中药加敷贴组患儿滤泡减少改善时间优于西药组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前三组C3bRR均低于正常组,差异有统计学意义(P<0.01);治疗后中药组及中药加敷贴组C3bRR与西药组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论红细胞免疫功能的低下参与了UACS患儿的病理损伤过程。中药加敷贴疗法在改善UACS临床症状、调节红细胞免疫功能方面有较好疗效,从而达到有效控制上气道咳嗽综合征的目的。

SU11248诱导K562白血病细胞凋亡的分子机制研究

目的:研究SU11248(舒尼替尼)诱导慢性骨髓性白血病K562细胞凋亡的分子机制。方法:采用CCK-8比色检测SU11248对K562细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测K562细胞周期变化;间接免疫荧光检测凋亡相关蛋白的表达及定位;免疫印迹检测凋亡相关蛋白的表达变化。结果:CCK-8比色显示SU11248可明显抑制K562细胞增殖(P<0.05),呈现剂量和时间依赖性。FCM显示该药可阻滞K562细胞于G0/G1期。间接免疫荧光染色可见SU11248组细胞色素C(Cyto C)在胞质中呈弥散或粗块状分布,而p53、p73及NF-κB p65均主要定位于胞质,较对照组表达差异不明显。免疫印迹显示,随时间延长,SU11248组较对照组Bcl-2表达呈下降趋势,Bax和Cyto C表达呈增加趋势,同时有Caspase-9和Caspase-3的激活,而p53、p73及NF-κB p65表达变化不明显。结论:SU11248可通过阻滞细胞周期进程及激活内源性线粒体凋亡通路诱导K562细胞调亡。

白消安诱发造血功能障碍小鼠模型的建立及淋巴细胞转化功能的测定

目的 建立白消安诱发急性造血功能障碍的动物模型 ,探讨淋巴细胞在骨髓再生障碍中发生变化的基础和意义。 方法 采用白消安悬液 (2 m g/ml)每天两次胃饲小鼠 ,每次 0 .2～ 0 .3ml,胃饲 7～ 10天 ,观察其外周血和骨髓液中细胞数量和形态的变化 ,并检测外周血淋巴细胞转化功能。 结果 用该方法诱导小鼠后 ,其红细胞、白细胞、血小板、网织红细胞及骨髓有核细胞计数均明显减少 (P<0 .0 1) ,骨髓象检查显示骨髓正常造血组织被脂肪细胞等替代。外周血淋巴细胞转化率明显升高 (P<0 .0 1)。 结论 白消安诱导小鼠急性造血功能障碍结果稳定 ,发生率高 ,方法简单 ,各项指标与人的再生障碍性贫血相似 ;

白血病细胞周期蛋白G基因mRNA的表达及其临床意义

目的探讨细胞周期蛋白G基因(CyclinG)mRNA在白血病患者中的表达及其临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对129例白血病患者和10例正常人白细胞的CyclinGmRNA表达进行分析。结果(1)急性白血病(AL)组和慢性白血病(CL)组CyclinGmRNA的表达值明显高于正常对照组(P<0.05)。但AL组和CL组的差异无显著性(P>0·05)。(2)AL、AML、ALL组中初治/复发亚组的CyclinG阳性率分别为71.3%、66.7%和85.7%,均明显高于相应的缓解组(P<0.05或P<0.01)和正常对照组(P<0.01);但各白血病缓解组与正常对照组之间无显著差异(P>0.05)。(3)Cyc-linG阳性表达率在白血病初治患者的不同性别、不同年龄、不同幼稚细胞之间无显著性差异。但AL组和AML组中初治患者WBC计数>50×109/L组的CyclinG的阳性率明显高于WBC计数≤50×109/L组。(4)初治患者中有53例CyclinG表达阳性,其中强阳性表达患者的缓解率(51.7%)显著低于一般阳性患者的缓解率(79.1%)(P<0.05)。结论CyclinG在白血病患者中有异常高表达,与白血病的发生有一定联系;其异常高表达可能是白血病预后不良的因素之一。

罗哌卡因硬膜外阻滞用于乳腺癌改良根治术的效果观察

目的观察0.375%罗哌卡因与0.25%布比卡因胸段硬膜外阻滞用于乳腺癌改良根治术的麻醉效果及不良反应。方法 80例行乳腺癌改良根治术的患者,分成两组,每组40例。观察组使用0.375%罗哌卡因连续硬膜外阻滞,对照组使用0.25%布比卡因连续硬膜外阻滞,手术开始前5 min均静脉注射哌替啶50 mg+氟哌利多2.5 mg使患者安静入睡。手术结束前15 min硬膜外腔注入吗啡2 mg+生理盐水6 mL行单次术后镇痛。观察指标包括收缩压、舒张压、心率、呼吸、动脉血氧饱和度、感觉阻滞起效时间、最高阻滞平面时间、阻滞范围、麻醉质量、呼吸抑制程度、不良反应及术后疼痛情况等。结果两组麻醉起效时间、阻滞范围、麻醉质量、呼吸抑制程度差异无统计学意义(P>0.05),达最高阻滞平面时间观察组快于对照组(P<0.05)。低血压、心动过缓不良反应发生率观察组明显少于对照组(P<0.05),两组术后无明显疼痛。结论 0.375%罗哌卡因与0.25%布比卡因都能安全用于胸段硬膜外阻滞,满足乳腺癌改良根治术的麻醉要求。但罗哌卡因有较短的诱导时间和较低的神经及心脏毒性,用于胸段硬膜外阻滞行乳腺癌改良根治术更具有广泛的安全范围和优越性。

创建医学检验专业本科课程PBL教学新模式

医学检验学是一门包括多门课程的应用性和实践性很强的学科。在医学检验专业课程教学中,引入PBL教学法,是体现新教育理念,实现开拓型、创造型医学检验人才培养目标的有效手段之一。如何正确引入PBL教学,克服其弊端,探索一套适合我国教育背景的检验专业PBL教学法,值得摸索和探讨。PBL与传统的教学模式和多种教学形式有机融合的教学新模式,应具有良好的应用前景。

腰硬联合麻醉在老年人下腹部手术中的应用

目的观察0.5%等比重布比卡因腰硬联合麻醉在70岁以上老年人下腹部手术中应用的可行性和安全性。方法120例70岁以上择期行下腹部手术患者,ASAⅠ～Ⅲ级,随机分为腰硬联合麻醉(CSEA)组和连续硬膜外麻醉(CEA)组,观察麻醉后感觉平面起效时间、阻滞完善时间、最高感觉阻滞平面、局麻药用量、麻醉效果及其不良反应。结果 CSEA组麻醉起效时间、阻滞完善时间显著快于CEA组(P<0.01),局麻药用量显著少于CEA组(P<0.01),CSEA组的麻醉优良率(100%)高于CEA组(83%),差异有高度统计学意义(P<0.01),最高感觉阻滞平面、不良反应两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论只要用药和操作得当,0.5%等比重布比卡因CSEA可安全有效地应用于70岁以上老年人下腹部手术。

胸科手术后患者自控镇痛的临床效果观察

目的:观察胸科手术后硬膜外自控镇痛(PCEA)与静脉自控镇痛(PCIA)两种镇痛方法的临床效果和副作用。方法:选择ASAⅠ～Ⅱ级需行食管癌或贲门癌手术患者90例,随机分为PCEA组60例和PCIA组30例。PCEA组术毕前20min硬膜外给予0.25%罗哌卡因6ml+吗啡2mg后接镇痛泵,配方为0.75%罗哌卡因27ml+吗啡5～8mg(0.1mg/kg)+氟哌利多3～5mg,生理盐水稀释至100ml;PCIA组术毕前20min静脉推注芬太尼0.05mg后接镇痛泵,配方为芬太尼0.8～1.0mg+氟哌利多3～5mg,生理盐水稀释至100ml。两组持续注速2ml/h,单次PCA剂量0.5ml,锁定时间15min。术后定时进行疼痛、镇静评分,观察镇痛效果和不良反应。结果:两组术后镇痛效果均确切,疼痛评分、镇静评分、镇痛优良率比较差异均无统计学意义(P>0.05);PCIA组不良反应发生率较高,嗜睡发生率与PCEA组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PCEA与PCIA用于胸科手术后镇痛安全有效,综合整体镇痛质量,经硬膜外自控镇痛优于经静脉自控镇痛。

图像分析系统检测白血病细胞核多倍体的临床意义

目的研究急性白血病(AL)细胞DNA倍体及增殖细胞核抗原(PCNA)的变化,探讨AL细胞DNA倍体与白血病细胞增殖的关系及临床意义。方法图像细胞术分析41例AL细胞DNA倍体的变化;单克隆抗体免疫细胞化学染色技术检测42例AL细胞PCNA的表达。结果对照组细胞DNA含量以2C为主,未发现DNA含量≥5C的多倍体细胞;DNA含量分布范围较窄,倍体峰相较单一。AL组≥5C的多倍体细胞明显增加,DNA含量分布范围较宽,倍体峰相右移或多峰相。AL、ALL和ANLL的多倍体检出率分别为56.1%,62.5%和52.0%,均明显高于对照组(P<0.01)。对照组PCNA表达阴性,AL、ANLL和ALL的PCNA阳性率分别为59.5%,62%和56%;DNA多倍体阳性组PCNA阳性细胞数(47.6%±20.76%)明显高于DNA多倍体阴性组[(4.61%±11.01%),P<0.01]。结论AL细胞PCNA表达和DNA合成及细胞的恶性增殖潜能密切相关;图像分析技术可同步进行AL细胞DNA测定和形态观察;通过倍体直方图可直观、简便地观察DNA多倍体情况。

原位杂交检测白血病细胞表皮生长因子受体基因的表达及其临床意义

表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜表面受体，其介导的信号转导效应具有多向性，包括细胞增殖分化、迁移和内环境的稳定，并与细胞的再生和恶性转化密切相关，在人类多种恶性肿瘤中存在高表达。近年的研究进一步表明，某些实质性肿瘤如喉癌，其EGFR表达随肿瘤的恶性程度和浸润转移性而增强，且与肿瘤的发生和预后明显相关。在造血肿瘤细胞SKT6中也发现EGFR的表达。本课题应用敏感性高、特异性强的检测基因mRNA序列的原位杂交技术，检测急性白血病细胞EGFR基因的表达，探讨EGFR在急性白血病中的作用及其临床意义。