清解扶正颗粒调控Cathepsin B/NLRP3通路减轻大肠癌小鼠5-FU化疗性肠黏膜炎的机制研究

目的基于Cathepsin B/NLRP3通路探讨清解扶正颗粒对大肠癌小鼠经5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗后所致的肠黏膜炎的治疗作用及作用机制。方法24只雄性BALB/c小鼠采取右前肢腋部皮下接种CT26细胞的方法构建大肠癌皮下移植瘤小鼠模型,待瘤体生长至100~300 mm3时,按照瘤体体积大小将小鼠随机分为对照组、5-FU组、5-FU+清解扶正颗粒组(5-FU+QFG组),每组8只。对照组给予生理盐水灌胃和腹腔注射,其他2组小鼠腹腔注射5-FU[50 mg/(kg·d^(-1))],每日1次,连续5 d;5-FU+QFG组在化疗的同时灌胃给予清解扶正颗粒(1.0 g/kg·d^(-1)),每日1次,连续7 d。每天观察小鼠的腹泻情况,记录体质量及瘤体积等情况。第7天末次给药后禁食12 h,动物取材,进行实验检测。采用苏木精-伊红染色(HE)法观察小鼠空肠组织病理变化;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测3组小鼠血清中二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(DLA)、内毒素(ET)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)表达水平;采用免疫组织化学法检测空肠组织中组织蛋白酶B(Cathepsin B)的阳性表达;采用实时定量聚合酶链式反应(qPCR)检测空肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin mRNA的相对表达水平,采用Western blot法检测空肠组织中ZO-1、Occludin、Cathepsin B、NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1蛋白的相对表达量。结果①小鼠一般情况:在实验周期内,清解扶正颗粒能够显著减轻5-FU化疗引起的腹泻症状(P<0.05),对5-FU化疗引起的体质量下降无显著改善(P>0.05),对5-FU抑制瘤体生长没有显著的协同效应(P>0.05)。②空肠组织病理变化:清解扶正颗粒可显著改善5-FU化疗引起的肠黏膜绒毛变短、隐窝变深、炎性细胞浸润等肠黏膜损伤症状。③血清DAO、D-LA、ET以及TNF-α、IL-1β、IL-6含量:与5-FU组比较,清解扶正颗粒可以显著降低大肠癌小鼠血清中DAO、D-LA、ET以及促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的含量(P<0.05)。④空肠组织Cathepsin B、NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1蛋白相对表达量:与5-FU组比较,清解扶正颗粒显著降低空肠组织中Cathepsin B、NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1蛋白相对表达量(P<0.05)。⑤空肠组织ZO-1、Occludin mRNA转录水平和蛋白表达水平:与5-FU组比较,清解扶正颗粒显著增加空肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin mRNA和蛋白相对表达量(P<0.05)。结论清解扶正颗粒通过调控Cathep⁃sin B/NLRP3信号通路,减少促炎细胞因子释放,抑制肠黏膜炎症反应,修复肠黏膜屏障损伤,从而减轻5-FU引起的化疗性肠黏膜炎。

田基黄对小鼠急性肝损伤的防治作用

目的探讨田基黄对急性肝损伤防治作用的药理机制。方法以四氯化碳(CCl4)制备小鼠急性肝损伤的模型,田基黄水煎剂灌胃,检测小鼠血清中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)活力以及一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6的含量,观察肝组织的病理损伤程度。结果不同浓度的田基黄能不同程度地降低CCl4所致异常升高的小鼠血清中的ALT,AST,NO,TNF-α,IL-6含量,升高SOD活性,并且改善肝脏组织的病理损伤。结论田基黄对CCl4所致小鼠肝损伤具有防治作用,其作用机制可能与降转氨酶、提高抗氧化能力和抑制NO,TNF-α,IL-6过量生成等有关。

芎芍胶囊对人脐静脉内皮细胞分泌血管新生因子的影响

目的探讨芎芍胶囊对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌血管新生因子影响的机制。方法采用血清药理学和体外干预培养HUVEC的方法,通过MTT法和酶联免疫吸附分析法观察芎芍胶囊低、中、高剂量对HUVEC的体外增殖和分泌Ang、Ang-2、VEGF、bFGF、EGF和TGF-β1的影响。结果芎芍胶囊各剂量组均有促HUVEC增殖的作用。低剂量组有促进HUVEC分泌Ang、Ang-2、EGF和VEGF的作用,而对bFGF、TGF-β1分泌的影响无明显差异;中剂量组有促进HUVEC分泌Ang、Ang-2、EGF和bFGF的作用,抑制TGF-β1的分泌,对VEGF的分泌无明显影响;高剂量组有促进HUVEC分泌Ang、EGF和bFGF的作用,并抑制VEGF与TGF-β1的分泌,而对Ang-2的影响无明显差异。结论芎芍胶囊能促进HUVEC的增殖,增加HUVEC分泌促血管新生因子和降低抑血管生成因子表达,且与剂量有一定的关系。

田基黄对人肝癌细胞HepG2增殖的影响

目的:探讨田基黄对人肝癌细胞增殖的影响。方法:体外培养人肝癌细胞株HepG2,用MTT法和流式细胞术(FCM)检测田基黄提取物及其含药血清作用于HepG2 24h后的细胞增殖情况。结果:MTT法结果表明,田基黄对HepG2增殖有抑制作用;FCM检测表明,田基黄阻止增殖中的HepG2进入S期。结论:田基黄能有效地抑制HepG2细胞增殖,提示阻滞细胞周期、抑制细胞增殖可能是田基黄治疗肝癌的一个机制。

清解扶正方加味联合美沙拉嗪治疗大肠湿热型溃疡性结肠炎35例

目的观察清解扶正方加味联合美沙拉嗪治疗大肠湿热型溃疡性结肠炎(UC)的临床疗效。方法选取2023年1—11月在龙岩市第二医院消化内科门诊及住院的大肠湿热型UC患者70例,采用随机数字表法分成对照组和治疗组各35例,对照组给予美沙拉嗪肠溶片口服,治疗组予清解扶正方加味联合美沙拉嗪肠溶片口服,2组疗程均为3个月。比较2组治疗前后中医证候积分、改良梅奥(Mayo)评分、肠道黏膜病变Baron评分及血清白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)变化情况。结果与治疗前比较,治疗后2组中医证候积分、Mayo评分、Baron评分及血清WBC、CRP、ESR均下降(P<0.05);且治疗后治疗组上述指标较对照组均显著降低(P<0.05)。结论清解扶正方加味联合美沙拉嗪治疗大肠湿热型UC,可显著缓解患者临床症状,减轻肠道炎症反应,提高临床疗效。

血府逐瘀汤对人脐静脉内皮细胞VEGF与PDGF分泌的影响

目的探讨血府逐瘀汤对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌血管内皮生长因子(VEGF)、血小板源性生长因子(PDGF)的影响及其与促进HUVEC增殖的关系。方法采用血府逐瘀汤含药血清体外干预HUVEC培养,通过MTT法和酶联免疫吸附分析(ELISA)法观察血府逐瘀汤对HUVEC的体外增殖和分泌VEGF、PDGF的影响作用。结果MTT检测结果显示血府逐瘀汤含药血清浓度为10%时对HUVEC具有显著增殖作用;ELISA检测结果显示血府逐瘀汤具有促进HUVEC分泌VEGF的作用,而对PDGF的分泌无明显的作用。结论血府逐瘀汤在一定剂量范围内能促进HUVEC增殖和促进HUVEC分泌VEGF,而对PDGF的分泌无明显促进作用;提示血府逐瘀汤可能通过促进HUVEC分泌VEGF而促进细胞增殖,从而起到祛瘀生新的作用。

芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的研究芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖作用。方法采用血清药理学和体外培养HUVEC的方法,通过倒置显微镜观察、MTT法和流式细胞术(FCM)检测芎芍胶囊高、中、低3个浓度含药血清对HUVEC增殖的影响。结果MTT法检测结果显示高、中、低剂量的芎芍胶囊含药血清均有促进HUVEC增殖的作用,增殖率分别为54.14%、54.98%、33.77%;FCM法检测发现高、中、低剂量芎芍胶囊含药血清均可增加S期细胞比例,分别为52.14%、42.65%、37.08%;显微镜观察结果也显示各含药血清具有促进HUVEC增殖的作用。结论芎芍胶囊能促进HUVEC的增殖,其促进细胞增殖的作用与浓度有一定的关系;提示芎芍胶囊的促血管新生作用可能是通过促进血管内皮细胞的增殖。

白花蛇舌草提取物诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的机制研究

目的探讨白花蛇舌草提取物在体外诱导结肠癌HT-29细胞株凋亡的机制研究。方法采用人结肠癌细胞HT-29常规体外培养,随机设定对照组和不同浓度白花蛇舌草提取物组,干预24 h。倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法测定不同浓度白花蛇舌草提取物对HT-29细胞增殖的影响,DNA Ladder试剂盒检测药物作用后细胞凋亡情况,AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位变化,应用比色法分析Caspase-9和Caspase-3的活化情况。结果白花蛇舌草提取物干预HT-29细胞24 h后,HT-29细胞密度明显减少,细胞变小,可明显抑制HT-29细胞增殖,细胞凋亡增加,线粒体膜电位丧失,具有显著地剂量依赖,并出现明显的DNA Ladder条带;Caspase-9和Caspase-3的活化随着药物浓度的升高而增加。结论白花蛇舌草提取物能通过线粒体通路诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡而发挥其抗肿瘤作用。

前列宁胶囊对BPH大鼠EGF、EGFR表达的影响

目的观察前列宁胶囊对良性前列腺增生模型大鼠血清表皮生长因子(EGF)含量及前列腺组织中EGF、表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响。方法将雄性SD大鼠60只,随机分成正常组、模型组、保列治组、前列宁胶囊(低、中、高剂量)组;采用去势后,皮下注射丙酸睾酮复制大鼠前列腺增生模型,连续给药28d,观察各组前列腺湿重及指数,RT-PCR检测大鼠前列腺组织中EGF、EGFR的mRNA表达,免疫组化法观察前列腺组织EGF和EGFR的蛋白表达情况。结果模型组的前列腺湿重和指数明显增加,前列腺组织EGF、EGFR的mRNA和蛋白表达较正常组显著升高(P<0.01);前列宁胶囊各剂量组和保列治组的前列腺湿重与指数及前列腺组织EGF、EGFR的mRNA与蛋白表达均较模型组显著降低(P<0.05),并呈现一定的剂量依赖性。结论前列宁胶囊对BPH大鼠有明显的治疗作用,能显著地抑制BPH大鼠EGF、EGFR的表达,提示这可能是前列宁胶囊治疗BPH的重要机制之一。

卷柏对小鼠免疫功能的影响

研究卷柏对小鼠免疫功能的影响。采用经口灌胃法 ,分别测定了给药后小鼠的体重、免疫器官 (胸腺、脾脏 )的重量和血清抗体 ( Ig G、Ig M、Ig A)的含量 ,以及外周血 T淋巴细胞 α-醋酸萘酯酶 ( ANAE)阳性率。结果 发现卷柏能降低小鼠血清 Ig G、Ig M、Ig A的含量 ;但对小鼠胸腺、脾脏及 T淋巴细胞 α-醋酸萘酯酶活性没有影响 。

射干对小鼠免疫功能的影响

为观察射干对小鼠免疫功能的影响,采用环磷酰胺造成免疫抑制的小鼠模型,给予射干水煎液高、中、低3种剂量,用盐酸左旋咪唑为阳性对照,用ELISA法测定小鼠血清中IL 2、IFN γ、IgG、IgM含量,从免疫器官、体液免疫、细胞因子等方面观察射干对环磷酰胺所致免疫抑制小鼠的影响,结果发现射干水煎液可以拮抗环磷酰胺所致的小鼠免疫抑制,对小鼠的免疫功能有调节作用。

血管新生相关因子mRNA在前列腺增生大鼠组织中的表达

目的探讨血管生长相关因子与大鼠良性前列腺增生(BPH)的相关性。方法将成年SD大鼠随机分为正常组、BPH模型组,每组10只,采用去势后皮下注射丙酸睾酮法建立大鼠BPH模型,30 d后观察2组大鼠血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)和转化生长因子(TGF-β_1)mRNA表达情况。结果大鼠前列腺指数BPH模型组显著大于正常组(P<0.05);光镜显示BPH模型组前列腺上皮细胞增生明显,与正常组比较,VEGF、EGF、bFGF的mRNA表达显著增多,TGF-β_1表达显著减少(P<0.05)。结论VEGF、EGF、bFGF在大鼠的BPH组织中表达上调和TGF-β_1表达下调,它们可能通过影响前列腺组织中血管内皮细胞增殖,参与BPH的发生发展过程,并促进其血管新生。

卷柏对实验性肝损伤小鼠保护作用的实验研究

探讨卷柏对实验性肝损伤小鼠保护作用机理。采用四氯化碳(CCl4)导致小鼠急性肝损伤的动物模型,用卷柏水煎剂灌胃给药,并设有联苯双酯(BPD)组为实验对照。结果:卷柏能显著地降低CCl4所致小鼠血清中ALT、AST、NO、PGE2和肝组织中MDA含量的升高;并可使CCl4所致小鼠肝组织中降低的SOD活性升高,改善肝脏组织的病理损伤。结论:卷柏对CCl4所致小鼠肝损伤具有保护作用,其作用机理可能与降酶、抗脂质过氧化反应、清除自由基、抑制NO过量成生,降低PGE2含量等有关。

前列宁胶囊治疗良性前列腺增生临床疗效观察

目的:观察前列宁胶囊治疗良性前列腺增生(BPH)的临床疗效及安全性与不良反应。方法:采用完全随机法将90例良性前列腺增生症患者分为治疗组与对照组各45例,治疗组采用前列宁胶囊治疗,对照组采用保列治治疗。观察两组治疗12周后的最大尿流率、平均尿流率、前列腺症状评分(IPSS)、生活质量指数(QOL)及主要症状改善情况,并观察其安全性与不良反应。结果:两组治疗前后最大尿流率、平均尿流率、I-PSS评分、QOL分值及排尿不尽感、排尿等待、夜尿次数比较均有显著性差异(P<0.05)。患者对前列宁胶囊和保列治的耐受性均良好,不良反应轻微。结论:前列宁胶囊对前列腺增生具有良好的临床疗效,值得临床推广应用。

老年大鼠脑细胞凋亡的实验研究

为研究老年大鼠脑细胞凋亡 ,采用提取大鼠脑细胞进行 DNA电泳的方法 ,结果显示老年大鼠脑细胞 DNA电泳出现细胞凋亡的特征性梯状电泳条带 ,说明老年大鼠脑细胞的凋亡率增高是衰老的特征之一 。

活血化瘀中药对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的观察常用活血化瘀中药赤芍、当归、红花、川芎、丹参、黄芪及复方当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊等对鸡胚绒毛尿囊膜(chorioall antoic membrane,CAM)新生血管生成的影响。方法制备CAM模型,分别应用赤芍、当归、红花、川芎、丹参、黄芪及当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊的含药血清,观察CAM血管生成的情况,同时,设立生理盐水对照组、空白血清对照组、空白对照组及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)阳性对照组。结果所选药物及bFGF皆有促进CAM新生血管生成的作用,其中,丹参及当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊等复方在血管生成及血管计数方面,均明显优于生理盐水对照组、空白血清对照组及空白对照组,与阳性对照药bFGF的作用相当;中药复方的作用优于丹参之外的其他单味中药。结论活血化瘀中药丹参及当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊具有较好的促进CAM新生血管生成的作用。本实验从一个侧面阐明了活血化瘀中药及方剂治疗缺血性疾病的作用机理,同时,研究也体现了中药复方应用的科学依据。

丹栝方干预糖尿病动脉粥样硬化大鼠糖脂代谢及氧化应激研究

目的探讨丹栝方对糖尿病动脉粥样硬化大鼠糖脂代谢及血清活性氧族(ROS)、胸主动脉核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)阳性表达及其mRNA表达水平的影响,以揭示其干预糖尿病慢性并发症的部分机制。方法选取自发性糖尿病GK大鼠(Goto-Kakisaki Wistar rats)40只,以含代谢抑制剂丙硫氧嘧啶的高脂饲料饲养及内皮型一氧化氮合酶(NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯腹腔注射,制备高脂糖尿病动脉硬化模型。将GK糖尿病成模鼠先按体重分层,再按血糖浓度根据随机数字表法分为丹栝方组[丹栝方,8mL/(kg·d)]、二甲双胍组[二甲双胍,150mg/(kg·d)]、辛伐他汀组[辛伐他汀,2mg/(kg·d)]、模型组[纯净水,8mL/(kg·d)],每组各10只;另取同龄、体重可比Wistar大鼠10只作为正常对照组(正常组)。各组均灌胃干预24周。监测空腹血糖(FBG)、体重,测定HbA1c、TC、LDL-C、HDL-C、TG、血清ROS,免疫组化法分析主动脉NF-κB,Real-time PCR检测主动脉NF-κB(P65) mRNA表达。结果正常组体重最终显著超过其他各组(P<0.01),四组GK造模组间比较,差异无统计学意义。四组GK造模鼠全程FBG都高于正常组(P<0.01,P<0.05);首次FBG、基线血糖各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05),末次FBG二甲双胍组和丹栝方组都显著低于模型组(P<0.01)和辛伐他汀组(P<0.05)。干预24周后,四组GK造模鼠FBG、HbA1c、TC、LDL-C、HDL-C、胸主动脉NF-κB的阳性表达率,及模型组、二甲双胍组、丹栝方组胸主动脉NF-κB mRNA的表达均高于正常组(P<0.01,P<0.05);二甲双胍组、丹栝方组、辛伐他汀组TG、血清ROS,及辛伐他汀组胸主动脉NF-κB mRNA表达低于正常组(P<0.01,P<0.05)。药物干预三组FBG、TC、LDL-C、血清ROS、胸主动脉NF-κB mRNA的表达,丹栝方组、二甲双胍组胸主动脉NF-κB的阳性表达率,及丹栝方组HbA1c、TG显著低于模型组(P<0.01,P<0.05)。二甲双胍组、丹栝方组FBG低于辛伐他汀组(P<0.05)。辛伐他汀组、丹栝方组胸主动脉NF-κB mRNA的表达,及丹栝方组TC、LDL-C显著低于二甲双胍组(P<0.01)。结论丹栝方通过综合调节血糖、血脂,下调氧化应激,以发挥其防治糖尿病的慢性并发症作用。

痛风宁颗粒对实验性鸡痛风性关节炎的影响

目的 探讨痛风宁颗粒对鸡痛风性关节炎症的作用。方法 采用 1 0 0d龄蛋鸡 ,在产蛋日龄前喂以产蛋高峰期的高核蛋白、高钙饲料 ,并限制进水量 ,诱发鸡痛风性关节炎 ,并以别嘌呤醇、丙磺舒、小苏打、舒风宁作为对照药 ,对比观察痛风宁颗粒对鸡痛风性关节炎关节肿胀及关节腔滑液白细胞计数的影响。结果 痛风宁颗粒用药后 ,病鸡的跗踝关节肿胀明显消退 ,关节腔白细胞计数显著下降 ,其作用与舒风宁相当 ,优于小苏打、丙磺舒、别嘌呤醇。