联合新型Bcl-2反义核酸与足叶乙苷抑制人小细胞肺癌细胞的增殖

目的 研究一种新型Bcl 2反义寡核苷酸 F95 1在与足叶乙苷 (VP16 )联合使用时 ,对人小细胞肺癌细胞增殖的影响。方法 分别单独及联合应用F95 1、VP16于人小细胞肺癌细胞株NCI H4 4 6 ,通过MTT法检测细胞存活率 ,通过集落形成法检测集落生存率 ,按Welander法计算联合应用组的预测值 ,通过实测值与预测值的比较进行效应分析。结果 细胞存活率 (MTT法 )和集落生存率 (集落形成法 )均显示联合应用F95 1、VP16组的实测值明显低于预测值。结论 联合应用F95 1与VP16对人小细胞肺癌细胞的增殖有协同的抑制作用。

“自主学习”在组织胚胎学实验教学中的应用

目的:在组织胚胎学实验教学中建立"自主学习"模式。方法:应用学生主讲的"自主学习"模式,对2012级临床医学本科五年制学生的组织胚胎学实验教学进行改革。结果:自主学习组的实验成绩均值高于传统对照组,差异具有显著性(P<0.01);问卷调查显示,自主学习组对组织胚胎学的兴趣较传统学习组高,更愿意接受自主学习模式。结论:学生主讲的"自主学习"模式有助于提高医学生的自主学习意识、学习兴趣及成绩。

人精子甘露糖受体表达与顶体反应的关系

目的 研究人精子的甘露糖受体 (MR)表达与顶体反应的关系 ,以探讨体外获能培养精子的MR表达是否为人精子获能的标志。 方法 将上游法收获的活精子在获能培养基BWW中进行体外获能培养后 ,加入小鼠透明带溶解液 (mZPS)诱导人精子顶体反应 ,精子悬液用异硫氰酸荧光素标记的甘露糖基化牛血清白蛋白 (FITC DMA)为探针标记MR ,用豌豆凝集素 (PSA)法检测顶体反应。 结果 体外获能培养人精子的MR表达率与mZPS诱导的顶体反应率无相关性。 结论 体外获能培养精子的MR表达可能不是人精子获能的标志。

新生小鼠原始卵泡成熟的诱导

目的:建立人工诱导新生小鼠原始卵泡成熟的方法。方法:30只新生小鼠卵巢同种异体移植于去势的10只成年雌小鼠肾被膜下,14d后分离窦前卵泡进行体外成熟培养。结果:卵泡成活率为50.6%,窦腔形成率为22.3%,卵母细胞成熟率为10.3%,MⅡ期卵母细胞平均直径为71.8±5.6μm。结论:本方法可以诱导新生小鼠原始卵泡发育,从而得到第二次减数分裂中期(MⅡ期)的卵母细胞。

小鼠透明带溶解液诱导人精子顶体反应

目的研究小鼠透明带溶解液诱导人精子顶体反应的效果，建立人精子顶体反应模型。方法正常生育力人精子经Ｂｉｇｇｅｒｓ，ＷｈｉｔｅｎａｎｄＷｈｉｔｉｎｇｈａｍｍｅｄｉｕｍ（ＢＷＷ）获能５～６ｈ后，分别用小鼠透明带溶解液（ｍＺＰＳ）、ｍＺＰＳ的缓冲液ｈａｌｏｇｅｎｂｕｆｅｒ（ＨＢ）、Ｃａ２＋载体Ａ２３１８７处理１ｈ；对实验和对照组精子用经典的豌豆凝集素（ＰＳＡ）法检测顶体反应。结果ｍＺＰＳ组的顶体反应率高于对照组。结论ｍＺＰＳ能诱导人精子顶体反应，透明带诱导精子顶体反应具有一定的种间交叉性。

医学双语教学的问题与思考

目前我国医学双语教学存在课程设置不连贯、课时不足、教材与师资匮乏等问题,就这些问题的解决,从课程设置、教学形式、教材建设等三方面提出自己的看法。

人小细胞肺癌NCI-H446细胞裸鼠异种移植瘤模型的建立

目的 建立成瘤稳定、潜伏期短的人小细胞肺癌NCI_H4 4 6细胞裸鼠移植瘤模型。方法 初代移植后 ,通过皮下埋块法进行裸鼠体内连续传代移植 ,并对移植瘤的生长、组织形态和超微结构、染色体核型进行观察和检测。结果 通过连续传代移植建立了成瘤稳定、潜伏期短的人小细胞肺癌NCI_H4 4 6细胞裸鼠移植瘤模型。移植瘤的组织形态和超微结构特点符合NCI_H4 4 6细胞特点 。

人急性淋巴细胞白血病MOLT-4细胞裸鼠异种移植瘤模型的建立

目的 建立可移植于裸鼠的、潜伏期短、高致瘤性的人急性淋巴细胞白血病 MOL T- 4细胞株。 方法 初代移植后 ,通过单纯体内传代法进行皮下埋块和体内、体外交叉传代法进行体外传代培养后移植 ,并对移植瘤的生长、组织形态和超微结构、细胞表面抗原表达、染色体核型等进行观察和检测。 结果 体内、体外交叉传代法进行体外传代培养 2 0代后的 MOL T- 4细胞裸鼠移植瘤平均潜伏期为 (2 1 .2 0± 1 .1 0 ) d,致瘤率 1 0 0 %。移植瘤的生长曲线呈“S”型 ;组织形态、超微结构和表面抗原表达特点符合 MOL T- 4细胞特点 ,染色体核型属人类染色体。 结论 通过体内、体外交叉传代法进行体外传代培养 2 0代后的 MOL T- 4细胞能成为潜伏期短、高致瘤性的细胞株 ,此法较单纯体内传代法快速。

新型Bcl-2反义寡核苷酸（F951）治疗人小细胞肺癌的药效学实验研究

目的 建立人小细胞肺癌NCI-H446细胞裸鼠异种移植瘤模型。方法 细胞悬液初代移植后，皮下埋块法连续传代移植，观察移植瘤的生物学特性。结果 潜伏期短、不易自行消退，呈进行性生长，并可出现肝转移．移植瘤细胞的组织形态与超微结构保留了NCI-H446细胞的特点．染色体检查证明为人类肿瘤细胞染色体核型。结论 皮下埋块法进行连续传代移植可缩短异种移植瘤的潜伏期，经过三次连续传代移植的NCI-H446细胞裸鼠移植瘤可作为人小细胞肺癌裸鼠异种移植瘤模型。

考马斯亮蓝染色法检测人精子顶体反应的评价

为建立一种检测人精子顶体反应的简便实用的新技术，用３．５％高氯酸水溶液配制０．０５％考马斯亮蓝（Ｒ２５０）染色液浸染人精子３０ｍｉｎ，顶体完整者顶体区染成紫蓝色，顶体反应者则不染。对获能前后和钙离子载体Ａ２３１８７诱导顶体反应的精子进行染色并与经典的顶体反应检测技术ＰＳＡ法对照，两种方法检测顶体反应率无显著差异。方法学检验证明新技术结果可靠。本法操作简便、经济，普通显微镜即可检测，易于推广，克服了原有技术复杂昂贵的缺点，具有研究和临床诊断的良好价值。

人精子甘露糖受体的胶体金标记电镜观察

本文首次报道人精子甘露糖受体（ＭＲ）的电镜标记技术和初步观察。采用甘露糖化牛血清白蛋白（ＤＭＡ，Ｓｉｇｍａ，Ａ８３０３）结合１０ｎｍ胶体金制备探针，标记获能前后精子和甲醇处理或Ａ２３１８７诱导顶体反应（ＡＲ）的精子。结果表明，甲醇处理后ＭＲ表达于顶体区质膜表面，活精子在ＡＲ过程中以不同方式表达ＭＲ活性；ＭＲ定位于：１．ＡＲ早期的精子顶体区质膜表面；２．ＡＲ期间精子的顶体小泡表面、顶体内膜及顶体基质；３．ＡＲ后精子的赤道带顶体内膜和顶体后区质膜；４．ＡＲ后精子的顶体后区质膜。作者认为ＭＲ原来存在于顶体内，大部分可能是膜结合蛋白。在精子发生ＡＲ的过程中ＭＲ才得以暴露并于ＡＲ后逐渐转移至赤道带和顶体后区，可能在精－卵膜融合中发挥介导作用。

己酮可可碱、孕酮和A23187对人精子甘露糖受体表达的影响

人精子经ＢＷＷ获能５～６小时后，分别用己酮可可碱（ＰＦ）、孕酮（Ｐ）和Ａ２３１８７三种已知的获能及（或）顶体反应促进剂处理１小时，对实验和对照组精子用异硫氰酸荧光素标记的甘露糖化牛血清白蛋白（ＭＦＩＴＣＢＳＡ）作探针标记精子甘露糖受体（ＭＲ）。结果表明，获能促进剂ＰＦ并不促进ＭＲ表达而Ｐ和Ａ２３１８７则有显著促进ＭＲ表达的作用。Ｐ对ＭＲＩＩ型的促表达作用略强于对ＩＩ型，而Ａ２３１８７则对ＩＩ型的促进显著强于Ｉ型。认为ＭＲ的表达是一种依赖于钙离子的细胞生物学过程，并与顶体反应有密切关系。推测ＭＲ可能具有介导精子与卵膜融合的作用。

精子质膜凝集素受体金标表面复型术

精子质膜凝集素受体金标表面复型术江一平，吴翊钦，钟秀容，林芸秀，熊良玉（福建医学院组胚教研室，福建医学院组胚电镜室，福州３５０００４）为了对细胞膜表面受体分布进行高分辨率、大视野的立体观察，本文将胶体金标记与金属喷镀表面复型技术相结合，建立了金标表面...

低渗膨胀试验对人精子头部影响的表面复型电镜初步观察

目的了解低渗膨胀（ＨＯＳ）试验对人精子头部超微结构的影响，以便进一步理解ＨＯＳ对精子功能检测的意义。方法正常生育力人精子经ＨＯＳ处理后固定于盖玻片上，冷却干燥后进行表面复型（ＳＲ），透射电子显微镜观察。结果ＳＲ图像见ＨＯＳ阴性的精子顶体区无显著变化但可见某些局部质膜破孔；高度卷曲的精子尾主段质膜上仍保留着清晰的拉链状膜粒结构和肋柱，除顶体区外，质膜无明显破损；头部有特征性变化，其中顶体后区较平坦，顶体后缘与核后环清晰，而顶体区质膜形态变化较大。凡尾部产生形变者，其头部顶体区质膜呈网格状或多泡状隆起或顶体破裂丢失，类似于体外获能或顶体反应的变化。结论ＨＯＳ可能反映精子产生获能和顶体反应的潜能。

不同功能状态精子表面复型的透射电镜观察

目的建立实用的实验程序，观察不同功能状态下的精子表面超微结构特点。方法用ＢＷＷ上游法分离活动的人精子：ＢＷＷ体外获能、诱导顶体反应和低渗膨胀试验处理后，将精子贴附于阳离子膜玻片上，叔丁醇冷却干燥后真空铂－碳喷镀复型。复型膜经３％氢氟酸剥脱，次氯酸钠腐蚀，透射电镜观察。结果人精子表面复型图像清晰，立体感强，细节较丰富、清晰，获能精子顶体区呈网络状，顶体反应时可见顶体区大量互相吻合的小泡，经低渗处理的精子顶体区出现类似获能和顶体反应的现象。结论表面复型－透射电镜技术可用于观察精子的不同生理状态引起的表面形貌变化，方法简便，可重复性好，具有良好的应用价值。

分离方法对移植卵巢卵泡发育的影响

目的评估机械法、酶解法和酶解-机械结合法等分离方法对小鼠移植卵巢分离卵泡的发育及其生殖潜能的影响,建立更好的卵泡分离技术方案。方法B6D2F1新生小鼠卵巢移植后分别用机械法、长时酶解法、短时酶解法或酶解-机械结合法分离卵巢组织中的腔前卵泡,分离回收卵泡在体外培养12d时加入绒毛膜促性腺激素(hCG)处理26h,收获卵丘复合体进行体外受精。结果机械法的卵泡回收量、卵泡培养残存率、排卵率均高于酶解法,短时酶解法的排卵率高于长时酶解法;酶解-机械结合法的平均卵泡回收量、平均排卵数、卵母细胞成熟率等多项指标均高于其他各组。结论酶解-机械结合法是分离小鼠卵泡良好的技术方案。

小鼠前向运动精子分离采集技术改良

目的提高从小鼠附睾采集的精子中前向运动精子的比例。方法设计"双舱培养皿"和"双舱浮游法(B法)"采集小鼠精子,并与当前普遍采用的"常规浮游法(A法)"进行配对比较实验。采用A,B法分别采集同一只小鼠的双侧附睾精子。结果前向运动精子活跃地从"双舱培养皿"的内舱游出至外舱。A、B两法分离得到的前向运动精子百分率分别为(56.83±7.23)%和(77.33±5.69)%,变异系数分别为12.72%和7.36%,差别具有统计学意义。结论"B法"能稳定显著地提高前向运动精子的百分率,优于"A法"。

人精液液化速率的简易定量测定术及其方法学评价

目的建立简便、实用的精液液化速率测定技术。方法以常规显微镜擦镜纸作滤过膜与硅化玻璃漏斗结合,制备“精液液化速率测定装置”,并对12例健康供精者和63例临床不明原因不育症患者精液进行测定。通过单位时间内滤过的精液量换算液化百分率,以时间为横坐标制作液化曲线。结果使用“精液液化速率测定装置”,以硅油作质量控制实验,过滤效果稳定,误差较小,有较好的敏感性;由人精液液化曲线可见,精液液化过程可分为“快相”和“慢相”两个阶段,正常人快相约15 min,液化率>90%;不育患者快相时程延长、幅度降低,40 min只达约80%;84.13%标本虽然于80 min内完全液化,但却存在“快相”时程延长而幅度降低的现象。结论本文建立的方法可提供准确的精液液化信息,提示有些“不明原因不育症”病例可能与精液液化不良有关。

改良非石蜡切片法荧光标记三维凝胶培养系统中形成的输卵管内膜干细胞团

目的 :研究改良非切片技术对细胞团中的细胞进行定性荧光标记的方法可行性及效果。方法 :将6~8周龄ICR雌鼠输卵管撕碎,用胶原蛋白酶消化20 min,将分散的输卵管混合细胞播种于三维凝胶培养系统中,培养6d后,用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)及膜蛋白上皮特异性黏附分子(EpCAM)标记凝胶培养系统中形成的细胞团。结果 :在非免疫荧光标记实验中,EdU插入到S期细胞的DNA中,并且被灵敏地检测出。免疫荧光标记实验中,用小鼠抗EpCAM标记细胞团。无论是免疫还是非免疫荧光标记,都可以得到很清晰的阳性结果。结论:改良后的非切片荧光标记法相较于传统的切片法更加方便、更加快捷。

显微数码互动系统在留学生组织学与胚胎学实验课的灵活应用与体会

随着本校高等教育水平的不断提高和国际化接轨,自2009年开始招收海外留学生,目前本校海外教育学院已有400多名海外留学生。同时伴随着2013年第1期和2016年第2期全国来华留学英语授课品牌课程的申报,组织学与胚胎学课程对留学生的教学一直在不断探索和进步,教学条件和师资力量也一直不断完善。组织学与胚胎学是基础医学的重要组成学科,其中本校安排理论课51学时,实验课39学时。每个实验班约20人,小班制教学和显微数码互动实验室密切了师生间的距离,极大地提高了学生的学习主动性和积极性,对理论课知识理解和掌握起到重要的相辅相承作用。