抗血小板多肽在大肠杆菌中的克隆和表达

设计合成了两条编码KGDX (赖 甘 天冬 X)的寡核苷酸链 ,长度为 3 6个碱基对 ,两端分别为BamHI酶和XcoI酶切位点。将该基因插入原核高效表达载体PGEX 4T 1的tac启动子下游 ,获得重组质粒PGEX 4T 1KGDX ,转化大肠杆菌DH5a,3 7℃诱导使重组子表达。GST KGDX融合蛋白具有可溶性 ,产量为3 5mg/L培养基 ,表达量占菌体总蛋白 48 0 2 %。破碎菌体上清经谷胱甘肽 琼脂糖悬珠亲和层析法获得纯度为95 %的重组蛋白。1 2 5I7E3竞争拮抗实验结果表明 ,GST无GPIIb/IIIa结合作用 ,GST KGD融合蛋白能代替 7E3竞争性地与GPIIb/IIIa受体特异性结合 ,从而抑制血小板聚集。其IC5 0值为 40 μmol/L。

单硝酸异山梨酯缓释剂和卡托普利联合治疗心绞痛的疗效观察——附120例报告

目的:观察单硝酸异山梨酯缓释剂和卡托普利联合治疗冠心病心绞痛的疗效,探讨卡托普利增强单硝酸异山梨酯疗效的机制。方法:120例冠心病心绞痛病人随机分为2组,治疗组口服单硝酸异山梨酯缓释剂40mg,每晚1次,卡托普利6.25mg,每日2次;对照组仅口服单硝酸异山梨酯缓释剂40mg,每晚1次。2组均以4个月为1疗程。观察2组治疗前后每日心绞痛发作次数、胸闷次数、急救硝酸甘油含量,给药前及给药后第四个月静息状态12导联心电图或运动心电图的变化。结果:治疗后治疗组的心绞痛、胸闷症状的改善较对照组明显,有统计学意义(P<0.01)。心电图改善情况心电图ST段压低的总和(∑ST)下降(mm)、∑T波倒置导联数、∑T波倒置深度(mm),治疗组均较对照组改善(均为P<0.01)。治疗组的总有效率高于对照组(P<0.01)。结论:卡托普利能提高单硝酸异山梨酯治疗冠心病心绞痛的疗效。

谷胱甘肽S-转移酶-KGDX融合蛋白的抗血小板作用

目的 观察重组GST -KGDX(谷胱甘肽S -转移酶 -赖 -甘 -天冬 -X)融合蛋白对血小板聚集的抑制作用 .方法 设计合成了两条编码KGDX(赖 -甘 -天冬 -X)的寡核苷酸链 ,长度为 36个碱基对 ,两端分别为BamHI酶和XcoI酶切位点 .将该基因插入原核高效表达载体PGEX - 4T - 1的tac启动子下游 ,获得重组质粒PGEX - 4T -1KGDX ,转化大肠杆菌DH5a,37℃诱导使重组子表达 .采用谷胱甘肽 -琼脂糖悬珠亲和层析法获得纯化蛋白 .用血小板凝聚仪检测活性 .结果 GST -KGDX融合蛋白具有可溶性 ,产量为 35mg/升培养基 ,表达量占菌体总蛋白 48.0 2 % ,容易从裂解菌中纯化得到 .体外实验 :GST、GST -KGDX融合蛋白均能抑制ADP诱导的人血小板聚集 ,GST -KGDX强于GST(p<0 .0 5或 <0 .0 1) ,其IC50 值分别为 4μmol/L、6 μmol/L .结论 (1)GST、GST -KGDX融合蛋白在体外均能抑制ADP诱导的人血小板聚集 .(2 )大肠杆菌中能够表达出较高产量的GST -KGDX融合蛋白 ,为抗血小板因子提供了一个很好的蛋白质来源 .

重组糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂的表达和纯化

观察糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂重组GST KGDX(谷胱甘肽S 转移酶 赖 甘 天冬 X)融合蛋白对血小板聚集的抑制作用。设计合成了两条编码KGDX(赖 甘 天冬 X)的寡核苷酸链 ,两端分别为BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点。将该基因插入原核高效表达载体pGEX 4T 1的tac启动子下游 ,获得重组质粒 pGEX 4T 1KGDX ,转化大肠杆菌DH5a,37℃诱导使重组子表达。GST KGDX融合蛋白具有可溶性 ,产量为 35mg/L培养基 ,表达量占菌体总蛋白的 48.0 2 %。破碎菌体上清经谷胱甘肽 琼脂糖悬珠亲和层析法获得纯度为 95 %的重组蛋白。血小板凝聚仪检测活性表明 ,在体外GST KGDX融合蛋白抑制ADP诱导的人血小板聚集作用强于GST(P <0 .0 5或 <0 .0 1 )。全血流式细胞术结果表明 ,GST KGDX能与GPⅡb/Ⅲa受体特异性结合。结论 :大肠杆菌中能够表达出较高产量的GST KGDX融合蛋白 。

5-单硝异山梨醇酯和银杏叶并用治疗心绞痛疗效观察

目的 :比较 5 单硝异山梨醇酯和银杏叶并用与单用 5 单硝异山梨醇酯对心绞痛患者的疗效。方法 :10 0例心绞痛患者随机分为对照组 (5 单硝异山梨醇酯组 )和治疗组 (5 单硝异山梨醇酯和银杏叶并用组 )。疗程 4个月。结果 :5 单硝异山梨醇酯合用银杏叶组可明显减少硝酸甘油的消耗量。治疗组总有效率 95 .6 % ,高于单用 5 单硝异山梨醇酯 (85 .1% )(P <0 .0 5 )。结论 :银杏叶可明显增强 5 单硝异山梨醇酯对冠心病心绞痛疗效 。

经皮冠状动脉介入治疗急性心肌梗死患者的sST2对冠状动脉侧支循环形成的预测价值

目的经皮冠状动脉介入治疗急性心肌梗死患者的可溶性致癌抑制因子2(Soluble suppression of tumorigenesis 2,sST2)对冠状动脉侧支循环形成的预测价值。方法我们纳入2020年6月至2023年7月我院收治的85例行急诊PCI(Percutaneous coronary intervention)的ST段抬高型心肌梗死(ST elevation myocardial infarction,STEMI)患者作为研究对象,入院后患者均根据最新急性ST段抬高型心肌梗死治疗指南行急诊PCI术,通过标准血管造影在基线时收集冠状动脉侧支循环(Collateral circulation,CC)数据。根据Rentrop分级法对侧支循环进行分级:没有填充任何血管等级为0,小侧支充填为1级,部分心外膜动脉充盈为2级,完全心外膜动脉灌注为3级。其中0级和1级被视为侧支循环形成不良,2级和3级被视为侧支循环形成良好。患者被分为两组:CC良好组(n=33)和CC不良组(n=52)。急性心肌梗死患者入院第一天介入术前用ELISA法测定血清sST2,所有患者均行急诊PCI术。对比CC形成良好组与CC形成不良组的一般资料,用Logistic回归分析危险因素,以受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分析入院时血清sST2水平,以及对STEMI患者侧支循环的预测价值。结果通过回顾性分析发现,85例患者中冠状动脉侧支循环形成良好33例,冠状动脉侧支循环形成不良52例,冠脉侧支循环形成率38%。冠状动脉侧支循环形成不良组血清sST2浓度高于侧支循环形成良好组,差异有统计学意义(P<0.05);入院sST2预测STEMI患者急诊PCI术后侧支循环的ROC曲线下面积为0.706(95%CI:0.579~0.833,P<0.05)。结论s ST2水平对STEMI患者冠状动脉侧支循环形成具有良好的预测价值。

多目标线性规划MATLAB软件求解

多目标线性规划由于往往只是求其有效解(非劣解),求解方法及具体演算过程比较复杂,本文也给出多目标线性规划的模糊数学解法.但借助工具软件MATLAB,可以达到对多目标线性规划问题较易求解的目标,从而更好地利用多目标线性规划解决实际问题.

Lingo数学实验

利用Lingo软件解决线性规划问题,能够比较有效地进行线性规划的求解及帮助理解相应的解的经济学意义。数学实验是计算机技术、软件引入数学教学后出现的一种教学方法。数学实验课是一个可以让学生独立学习与充分体现自我数学才能的课程,在数学实验的教学过程中,采用模块实验法与案例实验法相结合的方法进行教学,鼓励学生对问题进行讨论、提出假设、建立数学模型并利用数学软件进行编程解决问题,指导学生完成实验报告并验证实验结果的合理性。通过数学实验课的教学,可以有效地帮助学生灵活掌握知识,实现有意义的学习。在线性规划的教学中,可以比较好地结合线性规划和Lingo软件的运用进行数学实验教学,文中设计了一次运用Lingo软件的数学实验课程,通过教学实践,获得了比较好的教学效果。

微积分MATLAB数学实验

微积分MATLAB数学实验课程的开展,能够比较好地帮助学生,在具有扎实的专业基础上,发展学生的动手实践和应变能力。能够有效地帮助学生学会独立使用各种方法解决问题,培养学生的创新能力和实践能力,提高学生对数学的应用意识并培养学生用所学的数学知识和计算机技术去认识问题和解决实际问题的能力。

微积分MATLAB数学实验

微积分MATLAB数学实验课程的开展,能够比较好地帮助学生,在具有扎实的专业基础上,发展学生的动手实践和应变能力。能够有效地帮助学生学会独立使用各种先方法解决问题,培养学生的创新能力和实践能力,提高学生对数学的应用意识并培养学生用所学的数学知识和计算机技术去认识问题和解决实际问题的能力。

浅谈五万分之一土地利用现状图缩编的质量控制

围绕1∶50000数字土地利用现状图缩编的生产检查和质量控制,从土地利用现状数据源,地图综合取舍及地图综合精度等方面介绍土地利用现状图缩编质量控制的做法和体会。

重组多功能抗凝多肽的表达及活性测定

目的 探讨多功能抗凝多肽基因的克隆、表达的可行性及其活性的测定。方法 设计一个具有双重抗凝功能的重组多肽分子结构 ,它由谷胱甘肽 S 转移酶 (GST)作为载体蛋白与重组抗凝多肽融合而成。编码重组抗凝多肽的DNA序列是根据氨基酸序列逆向翻译后经人工合成 ,并插入表达质粒pGEX 5X 3中 ,与其中的编码GST序列的 3′端融合。采用大肠杆菌DH5α进行原核表达。应用亲和层析的方法得到纯化的融合蛋白。重组抗凝多肽含有 31个氨基酸 ,由 3个功能部分组成 :(1)Lys Gly Asp(KGD)氨基酸序列 ,可抑制血小板GpⅡb/Ⅲa受体与纤维蛋白原的结合 ;(2 )纤维蛋白单肽A的 7 16残基 (FBA7 16) ,是凝血酶的抑制剂。 (3)水蛭素C末端的 12肽 ,可直接抑制凝血酶。结果 纯化的融合蛋白能抑制二磷酸腺苷诱导的血小板聚集 (10 0 μmol/L时其活性为对照组的 2 0 7% ) ;随浓度增加而显著延长部分凝血活酶时间 (80 μmol/L时凝血活酶时间为 74 7s)和凝血酶时间 (80 μmol/L时为 10 2 3s)并抑制凝血酶的蛋白酶分解活性 (10 0 μmol/L时活性为对照的 11% )。同时 ,也发现GST也有抗血小板作用 ,但其作用要明显弱于融合蛋白。