建筑技术创新研究——以模板施工技术为例

针对当前模板施工技术中墙柱模板不能周转至顶板使用,以及传统木模和钢模板难以继续适用于复杂建筑工程的问题,论文在对当前模板施工技术进行施工要点分析和改进的基础上,提出了一种模板边缘打孔施工技术,并总结了新型铝合金模板施工技术的要点和相关问题的应对措施,在提升施工安全性的同时提升了模板的施工效率。

我国临床前药物致癌试验转基因动物模型研究进展

目的:综述我国临床前药物致癌试验转基因动物模型研究进展。方法:介绍致癌试验常用转基因动物模型的构建、利用转基因动物模型开展致癌试验的优势、国际认可及国际监管机构新药申报中的应用、国内外致癌试验相关指导原则、我国开展基于转基因动物致癌试验面临的困境以及转基因动物模型构建的最新进展。结果与结论:基于转基因动物模型的致癌试验具有诸多优势也是目前国际趋势,在我国建立临床前药物致癌试验转基因动物模型非常必要。

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立FcγR基因大片段敲除小鼠模型

目的使用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除长度约为90kb的小鼠FcγR2b,FcγR3,FcγR4基因簇,为构建FcγR基因人源化小鼠奠定基础。方法使用在线预测软件在FcγR2b,FcγR3外显子区设计sgRNA,在每一位点挑选脱靶效应较低的五个候选sgRNA。通过CRISPR/Cas9活性检测试剂盒检测sgRNA在体外的活性。选取活性较高的sgRNA体外转录,与Cas9mRNA一并注射受精卵。通过PCR检测及测序,得到1只敲除片段为89711bp的基因修饰小鼠,且同时敲除FcγR2b基因5’端,FcγR3基因3’端及FcγR4基因。而且还利用软件预测了8个脱靶可能性最高的位点,并对首建鼠基因组的上述8个脱靶位点全部测序确认。结果结果显示未在预测脱靶位点附近发现小片段插入或缺失。结论建立了利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除基因组超大片段的技术,该技术结合BAC转基因技术,将为建立含有复杂基因族的人源化小鼠提供新的途径。

我国实验动物科技工作发展的政策支撑与思考

实验动物是生命科学研究的基础材料和支撑条件,是重要的战略性科技资源,也是国家科技基础条件平台建设的重要组成部分。十三五国家科技创新规划提出:“开展实验动物新资源和新品种培育,加快人源化和复杂疾病动物模型创制与应用,新增一批新品种、新品系,资源总量接近发达国家水平;……”。因此,本文从我国实验动物法律法规、标准体系、管理制度等方面梳理我国实验动物科技工作发展的相关政策,浅谈这些政策对我国实验动物资源建设与共享的导向作用,以及完善相关政策法规与落实管理措施的思考与建议。

p53基因敲除大鼠模型的构建及表型分析

使用TALEN技术制作p53基因敲除大鼠模型,建立种群并分析大鼠表型。设计特异性识别p53基因外显子2的TALEN蛋白并构建相应载体,将体外转录的TALEN m RNA注射SD大鼠受精卵,出生后从仔鼠中通过测序筛选靶位点正确剪切的阳性小鼠。结果显示,注射得到11只新生仔鼠,通过测序发现其中有10只靶位点发生剪切。选取其中4只作为首建鼠进行繁殖。p53基因敲除纯合子表现出肿瘤易发性,主要自发性肿瘤类型为恶性纤维组织肉瘤。此外,p53基因敲除纯合子大鼠表现出眼睛发育异常,视网膜变性及晶状体纤维排列紊乱。通过TALEN技术高效地获得了p53基因敲除大鼠模型,纯合子敲除大鼠除了易发肿瘤并伴有眼发育异常,因而该敲除大鼠模型除了可用于研究肿瘤发生机制外,也可用于研究p53基因在眼发育过程中的功能。

Hartley豚鼠生物净化群体建立及微卫星遗传质量分析

目的对现有Hartley豚鼠种群进行剖腹产净化,通过遗传检测,确认净化后的种群符合封闭群遗传特征。方法生产群中不同繁殖单元广泛选择雌、雄个体,按1∶1比例合笼交配,于合笼后70 d实施剖腹产手术,仔鼠人工乳饲喂。用循环交配法繁殖一代,从F1代中选取30个个体采集耳部组织样本,提取DNA,应用18个豚鼠基因组微卫星位点进行遗传检测。结果剖腹产共获得85只仔鼠,成活56只,离乳47只(23雄、24雌),成活率65.9%,离乳率83.9%;18个豚鼠微卫星位点共检测到81个等位基因,平均杂合度0.5747,平均多态信息含量(PIC)0.5216。Hardy-Weinberg遗传平衡检测,14个位点符合H-W遗传平衡,3个位点显著偏离H-W遗传平衡,1个位点呈现纯合状态。结论通过剖腹产对豚鼠种群进行了净化,净化后的群体具备较理想杂合度,属高度多态性群体,符合封闭群实验动物遗传特征。

冠状病毒动物模型研究进展及2019-nCoV可能的易感小动物模型

建立高致病性冠状病毒动物模型对疫苗、抗体、药物、病毒致病机制研究意义重大。非人灵长类、雪貂、叙利亚仓鼠等动物均可用于建立冠状病毒的感染和疾病动物模型。不同动物模型能从不同层面模拟重现临床感染症状。然而,从适用性、经济性、易于获取等角度综合考虑,建立冠状病毒易感的小鼠模型,并快速提供数量充足的动物,对于冠状病毒疫情防控更有现实意义。本文简述了MERS-CoV、SARS-CoV以及新型冠状病毒(2019-nCoV)3种高致病性冠状病毒小鼠模型的研究进展。基于近日发表在Nature的研究成果,即SARS-CoV和2019-nCoV均利用hACE2受体感染宿主细胞推测,我们于2018年构建的hACE2-KI/NIFDC人源化小鼠模型有望用于2019-nCoV的相关研究。

Hartley豚鼠SPF级核心种群生长曲线与血液生理生化指标测定

目的测定SPF级Hartley豚鼠核心群的生长体质量,血液生理、生化指标,并与清洁级豚鼠各指标进行比较。方法选择种群中雌、雄个体各10只,通过称重,记录0~8周龄体质量;豚鼠采血,应用全自动血细胞计数仪与全自动血液生化分析仪检测各项生理、生化指标。结果在SPF级豚鼠血液生理指标中,白细胞计数(WBC)、中性粒细胞计数(NEUT)、嗜酸性粒细胞计数(EOS)3项指标,在雌性与雄性间有显著性差异(P<0.05);血小板压积(PCT)、血小板容积(MPV)、淋巴细胞计数(LYM)、淋巴细胞百分比(LYM%)、中性粒细胞百分比(NEUT%)、嗜酸性粒细胞百分比(EOS%)、嗜碱性粒细胞百分比(BAS%)在雌、雄性别间表现为差异极显著(P<0.01)。血液生化指标中,碱性磷酸酶(ALP)两性别间有显著性差异(P<0.05),尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、胆固醇(CHO)3项指标,两性别间差异极显著(P<0.01)。与清洁级豚鼠比较结果显示,各项血液学指标中除白细胞计数(WBC)以及雌性豚鼠的红细胞体积(MCV)与血小板计数(PLT)无显著差异(P>0.05)外,其他指标均存在极显著差异(P<0.01)。结论绘制了SPF级豚鼠生长曲线。SPF级豚鼠血液学指标在性别间有差异,与清洁级豚鼠相比存在显著差异。

大小鼠模型命名方法与规则简介

近年来,随着生命科学以及生物医药工程技术的迅猛发展、基因编辑技术的突破,建立了越来越多的大小鼠模型动物,并广泛应用于基础研究中,如肿瘤学、传染病学、免疫等的研究。模型动物资源总量不断增加,模型动物命名不规范统一,给模型动物管理、国际交流和知识产权的保护带来一些困扰。本文以美国JAX实验室命名规则为基础,较详细的介绍了常见的模型动物(如大鼠、小鼠)的命名方法,并对不同类型模型的命名方法进行了举例说明,以期建立符合国际规范、便于国际交流的模型动物命名方法。

医疗器械技术审评CAPA系统的构建与探讨

目的:医疗器械的安全有效性评价事关公众健康,因此,建立确保评价质量的管理体系有重要意义。"纠正和预防措施系统"是质量管理体系的重要环节和有效工具,建立医疗器械技术审评"纠正和预防措施系统",对于医疗器械评价质量的持续改进有举足轻重的作用。方法:本文就技术审评"纠正和预防措施系统"的构建进行了扼要介绍,并对其中涉及到的问题进行了初步探讨,以期为相关人员提供借鉴。结果与结论:"纠正和预防措施系统"的建立,对于规范医疗器械技术审评,降低审评风险,确保技术审评质量的不断提高发挥了重要作用。

猴真菌监测分析

目的:了解猴真菌携带情况,为猴致病性真菌感染防控提供科学依据。方法:用真菌培养、Taq Man-MGB探针实时荧光定量PCR、普通PCR、基因克隆和测序技术,进行猴的真菌监测分析。对所有真菌分离株进行抗真菌药敏试验。结果:从全国几个不同厂家122只猴中分离获得71株真菌,形态和分子鉴定确证这些真菌为阿萨希毛孢子菌、圆形毛孢子菌、白色念珠菌、黄曲霉、烟曲霉、黑曲霉、焦曲霉、杂色曲霉、聚多曲霉、匿名曲霉、产黄青霉、草酸青霉、变幻青霉、宛氏拟青霉、小刺青霉、绳状青霉、卷枝毛霉、多变根毛霉、伞枝犁头霉、球毛壳霉、热带头梗霉、节菱孢霉菌、暗孢节菱孢菌、链格孢、松色二孢菌。结果表明,猴真菌种类比较丰富,获得真菌11属25种,毛孢子菌属、曲霉属、青霉属、毛霉属、念珠菌属真菌在这些致病真菌中占主导地位。抗真菌药敏试验分析结果显示:这些真菌分离株对制霉菌素、两性霉素B、氟康唑、咪康唑、酮康唑、氟胞嘧啶、特比萘芬已产生了耐药性。结论:联合使用真菌培养、Taq Man-MGB探针实时荧光定量PCR、普通PCR、基因克隆和测序技术能有效分析猴真菌。猴的真菌大多为人兽共患病病原体。研究结果为我国猴真菌监测提供参考数据,为致病性真菌的侵袭防治提供科学依据。

hDPP4转基因及定点敲入小鼠模型的建立及其对MERS⁃CoV易感性比较

中东呼吸系统综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)是2012年发现的新型高致病性冠状病毒,其病死率高达34.4%。人二肽基肽酶-4(human dipeptidyl peptidase-4,hDPP4)分子是MERS-CoV进入宿主细胞的受体。为了获得稳定的MERS-CoV易感小鼠模型,本文分别利用Tol2转基因技术和CRISPR/Cas9技术将hDPP4受体导入C57BL/6小鼠,筛选获得转基因小鼠hDPP4-Tg、定点敲入小鼠hDPP4-KI;通过Q-PCR、Western Blot及活体成像技术,分析了hDPP4基因的表达特征。结果显示,在hDPP4-Tg小鼠中,其表达水平较低,在脑中高表达;而在hDPP4-KI中整体表达水平高,表达优势脏器为肺。假病毒感染实验表明,hDPP4-Tg几乎不易感,而hDPP4-KI小鼠对假病毒高度易感。进而,对假病毒感染hDPP4-KI小鼠的感染途径、感染剂量、是否剃除被毛等条件进行优化,获得了稳定易感的MERS-CoV假病毒感染模型,并利用该模型初步评价了单克隆抗体hMS-1的体内活性。本研究显示,即使相同的受体基因,不同策略构建的遗传修饰小鼠模型的效果差异较大;受体分子表达水平与模型的易感性高度相关;本研究获得的高效而稳定的MERS-CoV假病毒感染模型可望在抗体评价、疫苗研制、药物筛选等领域提供模型工具,提示将受体分子定点插入小鼠基因组、高表达受体基因是成功构建病毒易感模型首选策略。