复合型果蔬粉的研制

本文以番茄、胡萝卜、大头莱、苹果为原料,辅以环状糊精,采用先进的固体饮料加工工艺,制成营养和风味俱佳的速溶固体饮料粉。

从新型冠状病毒肺炎暴发反思兽医在国家公共卫生体系中的重要作用

国家疾病控制系统涵盖2个主要组成部分--疾病预防控制中心(医学CDC)和动物疾病预防控制中心(动物CDC),但国家公共卫生系统历来重视医学CDC,忽视动物CDC。就我国COVID-19暴发及历次人兽共患病重大疫情而言,医学CDC得到了极大关注,处于"人与动物交界面"和疫病源头控制最前沿的动物CDC仍然没有得到应有重视,未来可能仍有人兽共患病源头"四处漏风"的潜在可能性,国家公共卫生系统必须不断完善、统筹兼顾,重视兽医在公共卫生体系中不可替代的关键作用。

布鲁氏菌病的研究与防控进展

布鲁氏菌病(Brucellosis,简称"布病")是由布鲁氏菌(Brucella)引起的危害严重的人畜共患病,主要危害人畜生殖系统,人与人之间几乎不传播,患病动物是主要的传染源,近几年疫情急骤回升。作者综述了布病的研究现状及其流行趋势,初步探讨布病综合防控面临的主要困境。

单克隆抗体在食品检测中的应用

作者对单克隆抗体在食品检测中的应用进行了文献复习。迄今为止,对一些重要的食源性病原体及其产物,如细菌、细菌毒素、真菌毒素以及寄生虫等,已制备出多种单克隆抗体,用于动物的宰前诊断、食品检测及食物中毒的诊断,已显示出胜过常规使用(多克隆抗体)的免疫学方法,具有广阔的应用前景。在食品抗原分析上,一些难以用已有的方法解决的问题,有希望通过单克隆抗体技术得到解决。

镉、汞、铅污染及其微生物修复研究进展

随着人类活动的增强,重金属的应用越来越广,同时造成的环境污染问题愈发严重,特别是重金属镉、汞、铅。利用微生物技术修复环境污染中的重金属,以其成本低、效率高等特点,已经成为环境污染修复领域的研究热点。作者综述镉、汞、铅污染及其微生物修复的研究进展,并提出利用微生物细胞表面展示技术构建高效吸附重金属的基因工程菌,在微生物修复方面应用的重要价值。

中国旋毛虫分离株成虫和新生幼虫基因文库的构建及筛选

利用λＺＡＰⅡ载体构建了中国分离株Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌａｓｐｉｒａｌｉｓ及Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌａｎａｔｉｖａ成虫和新生幼虫ｃＤ－ＮＡ基因文库，检测结果表明，所克隆的ｃＤＮＡ片段分布在０．２～２．０ｋｂ之间，表明２个ｃＤＮＡ基因文库对ｍＲＮＡ的覆盖面很大。利用ＲＡＰＤ技术，以肌幼虫基因文库作对照，采用７０个单引物及２０对复合引物对以上２个文库进行筛选扩增，结果：（１）共获得２条Ｔ．ｓｐｉｒａｌｉｓ及４条Ｔ．ｎａｔｉｖａ的成虫与新生幼虫特异性基因片段，鉴于成虫与新生幼虫是旋毛虫的２个侵袭性阶段，其所特有的特异性基因片段极有可能就是这２个时期虫体的侵袭性因子基因，即所要寻找的强保护性抗原基因，从而为后续研究奠定了基础；（２）发现１条Ｔ．ｓｐｉｒａｌｉｓ种特有的基因片段，这一特异性基因片段为虫种鉴定提供了物质条件；（３）发现旋毛虫同种不同分离株（中国分离株及法国分离株）间ｃＤＮＡ文库扩增图谱完全相同。

组织蛋白酶B研究进展

组织蛋白酶B(cathepsinB:EC3.4.22.1)是溶酶体内半胱氨酸内切蛋白水解酶,其作用非常广泛,参与机体多种生理、病理过程.尤为重要的是,它能促进肿瘤细胞浸润转移,因此成为目前诊断、治疗恶性肿瘤的研究热点.综述了组织蛋白酶B的生物学特性、基因与蛋白结构特点、表达调控机制,以及应用方面的研究.

绵羊毛发角蛋白结合蛋白启动子的克隆与活性分析

以绵羊基因组DNA为模板克隆获得绵羊角蛋白结合蛋白基因KAP6.1启动子。将KAP6.1启动子插入到切除了CMV启动子的pAcGFP1-N1质粒中,构建了重组真核表达载体,并采用脂质体法转染传代培养绵羊皮肤成纤维细胞并检测其表达活性。结果显示:(1)KAP6.1启动子序列大小为830 bp,与GenBank上绵羊角蛋白结合蛋白的参照序列(M95719)有99.64%的同源性;与M95719相比,KAP6.1在349位点、726位点和246位点上分别存在1个C缺失、1个转换(G代替A)和1个颠换(A代替T);在438位点上具有1个依赖DNA的RNA聚合酶结合位点TATA box,但未发现具有依赖DNA的RNA聚合酶识别位点CAAT box;(2)转染24 h后,在蓝光激发下检测到细胞核附近有绿色荧光蛋白的高表达,并在48 h后逐渐减弱,而细胞质内绿色荧光蛋白的表达量增加。这一结果表明,KAP6.1启动子在绵羊皮肤成纤维细胞的表达上可能具有特异性。

小鼠腹水IgG类单克隆抗体纯化方法的研究

分别采用辛酸硫酸铵法(CA AS)、硫酸铵沉淀法(AS)和DEAE离子交换层析法对小鼠IgG腹水进行了纯化效果的比较。结果表明:CA AS法提取IgG的纯度为67.5%,高于AS法(43.2%),低于DEAE法(100%);CA AS法提取IgG的回收率为51.2%,远高于DEAE(8.9%),略低于AS法(63.8%)。将不同纯化方法获得的IgG定容至相同浓度。ELISA试验结果表明:DEAE法的OD值明显降低,表明DEAE纯化方法降低了IgG的免疫学活性。说明CA AS法是一种操作简单、成本低、纯化效果和回收效果较佳的提取小鼠腹水IgG的首选方法。

抗氯霉素单克隆抗体的制备、纯化及其特异性鉴定

目的:获得能稳定分泌高亲和力抗体的抗氯霉素杂交瘤细胞。方法:重氮化法偶联制备氯霉素(CAP)的免疫抗原和检测抗原(CAP-BSA和CAP-OVA)。应用常规技术融合,三次有限稀释克隆和间接竞争ELISA法筛选杂交瘤细胞株,并鉴定抗体特异性。结果:得到一株能够稳定分泌高亲和力,特异性强抗体的杂交瘤细胞株4B12,辛酸-硫酸铵法纯化体内诱生法制备的腹水;纯化后的抗体效价>1:256000,杂交瘤细胞染色体平均数为50±2,分泌的抗体属于IgG1亚类,相对分子质量为157.92ku,亲和常数为8.26×108M-1;与甲砜霉素、庆大霉素、泰乐菌素、青霉素、链霉素和卡那霉素无交叉反应。结论:该细胞株可满足建立免疫学检测方法的需要和开发应用的要求。

大田软海绵酸单克隆抗体ELISA检测方法的建立

利用BALB／c小鼠腹水大量制备抗大田软海绵酸（okadaic acid，OA）的单克隆抗体，并以此抗体为探针建立了0A的快速、灵敏、简便的ELISA检测方法——直接和间接竞争抑制性ELISA方法，2种检测方法的回归方程和相关系数分别为：y=-38．678χ＋130．01，R^2=0．9886和y=-34．212x＋83．49，R^2=0．9784，线性范围为1.56～75μg／L和0.4425μg／L，对OA的最低检出质量浓度为0．6μg／L和0．18μg／L。并利用所建立的2种ELISA方法对贝类模拟样品及实际样品进行了检测，样品回收率分别为84．72％和98．38％。结果表明，此方法可满足海产品中贝类样品0A限量标准检测。

环丙沙星人工抗原的合成与鉴定(英文)

采用碳二亚胺法将半抗原环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白进行偶联。采用非变性凝胶电泳法和紫外分光光度法对偶联物中环丙沙星与载体蛋白的分子结合比进行分析。紫外分光光度法表明,环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白的分子结合比分别为6∶1和13∶1。非变性凝胶电泳显示,即使只有6个环丙沙星分子与载体蛋白偶联,偶联物在凝胶中的迁移轨迹与载体蛋白和偶联剂处理的载体蛋白对照样品均有明显不同。结果表明,非变性凝胶电泳法和紫外分光光度法可用于环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白分子结合比的定性分析和定量分析。

李斯特氏菌因子血清的制备及食品检测的免疫磁性分离-PCR(MIPA)方法的建立

首先进行了李斯特氏菌因子血清的研制，制备出了可对所有李斯特氏菌分型的 １５ 个 Ｏ 抗原因子和４ 个 Ｈ 抗原因子的因子血清。利用复合因子血清的多克隆抗体包被磁性球，对食品中的单核细胞增多性李斯特氏菌进行免疫磁性分离，并与 Ｐ Ｃ Ｒ 方法相结合，建立了检测食品中单核细胞增多性李斯特氏菌的 Ｍ Ｉ Ｐ Ａ方法（免疫磁性分离—聚合酶链反应方法，ｍ ａｇｎ ｅｔｉｃ ｉｍ ｍ ｕｎｏｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｓｓａｙ）。对菌液、模拟样品的检测表明，本方法能够有效地克服食品基质、培养基成分和杂菌对 Ｐ Ｃ Ｒ 检验的干扰作用。食品样品在 Ｅ Ｂ增菌液中增菌 １２ ｈ 后，检测的敏感度达 ５ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ Ｌ，可以在 ２０ ｈ 内完成检测。本方法对实际食品样品的检测结果，与国家标准检验方法检测的结果一致。

鲍免疫相关基因和蛋白的研究进展

鲍是世界重要的海水养殖经济贝类,但近年来时常发生的疾病给养鲍业带来了大量的经济损失。目前有关鲍免疫相关基因和蛋白的研究报道较少,而这些功能分子对揭示鲍的免疫机制具有关键作用,文章综述了鲍免疫相关基因和蛋白的研究进展,以期为防治鲍疾病的相关研究提供参考。

灭菌乳中活阪崎肠杆菌PMA-PCR检测方法的建立

本试验旨在建立灭菌乳中活阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)的PMA-PCR检测方法。将DNA染料叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术结合,优化PMA最佳工作浓度和曝光时间,确定PMA-PCR区别死、活阪崎肠杆菌细胞的最佳条件。结果表明,活阪崎肠杆菌经100℃沸水处理20min可完全致死,PMA完全与死阪崎肠杆菌DNA共价交联并光解溶液中游离PMA的最佳曝光时间为15min,完全抑制死阪崎肠杆菌PCR扩增的最小PMA浓度为5μg/mL,不抑制活阪崎肠杆菌PCR扩增的最大PMA浓度为15μg/mL。经PMA处理后,在含有不同比例的死、活阪崎肠杆菌混合液中检测到活阪崎肠杆菌的最低检测限为40CFU/mL,在灭菌乳样品中检测到活阪崎肠杆菌的最低检测限为100CFU/mL。该方法为利用PMA-PCR检测食品中的活阪崎肠杆菌奠定了基础。

海产品贝毒素大田软海绵酸ELISA及HPLC-MS/MS检测方法的研究

为了检测海产品贝毒大田软海绵酸,保障其食用安全,利用活泼酯法将小分子OA与载体蛋白偶联,免疫BALB/c小鼠,细胞融合技术建立分泌抗OA的杂交瘤细胞株,并对其各种特性进行分析;小鼠腹水法大量生产抗体,纯化后建立ELISA方法,同时建立OA的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS)检测法,并对部分市售海产品进行了实际检测,ELISA方法标准曲线为y=-34.212x+83.49,相关系数为0.9784,线性范围0.4～25μg/L,灵敏度0.18μg/L;HPLC-MS/MS检测方法标准曲线y=193.07x-780.6(Q1/Q3:m/z827.4～m/z723.5)和y=83.021x-335.6(Q1/Q3:m/z827.4～m/z809.5),R2均为0.9991,线性范围10～800μg/L,灵敏度小于2μg/L,平均RSD为4.34%。在检测的实际样品中两种样品ELISA呈阳性反应,其中一种经过了HPLC-MS/MS的验证。所建立的ELISA及HPLC-MS检测方法均可用于海产品腹泻性贝毒OA限量标准检测,为进出口海产品OA标准方法的建立提供实验基础。

2006—2012年鲁豫冀地区15株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及ORF5/Nsp2基因的遗传变异分析

为研究鲁豫冀地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的遗传变异情况,对2006—2012年来自3省区发病猪场的42份样品进行PRRSV分离鉴定,并进行了生物学特性研究和PCR鉴定,结果显示先后分离到15株PRRSV。分别采用RT-PCR扩增其ORF5基因和部分Nsp2基因并测序,与GenBank中68个ORF5序列和40个Nsp2序列的推导氨基酸序列进行比对,遗传变异分析结果表明,15株分离株均属于美洲型毒株,其中13个毒株Nsp2基因推导的氨基酸序列均存在氨基酸的不连续缺失,其ORF5基因推导的氨基酸序列与JXA1株有较高的同源性(95.5%～97.5%);SDDY2007株与疫苗株RespPRRS MLV和VR2332株亲缘关系相近,处于同一个亚群中;而HN25-2009分离株Nsp2基因推导的氨基酸序列有30个氨基酸的特征性缺失,其ORF5基因推导的氨基酸序列的遗传进化分析结果显示该分离株处于VR2332所在亚群(氨基酸同源性97.5%),具有一定特殊性。本试验结果表明,2006—2012年高致病性PRRSV是鲁豫冀地区的优势流行毒株,且存在疫苗毒株,3省区流行毒株间有一定遗传差异,但无明显地域特征。

抗隐孢子虫子孢子ScFv-PE40免疫毒素表达质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达

用PCR方法扩增抗隐孢子虫子孢子ScFv片段,插入表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28-ScFv,然后,将绿脓杆菌外毒素(PE40)片段定向克隆到ScFv基因的下游,构建免疫毒素表达质粒pET28ScFv-PE40。经酶切分析、PCR检测和测序进行鉴定。成功地构建了免疫毒素表达质粒pET28ScFv-PE40。将上述质粒转化受体菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,成功地表达了目的蛋白。免疫毒素ScFv-PE40大小约为66kDa,表达量约占菌体蛋白总量的14%。

大腹圆蛛主壶腹腺cDNA文库构建和丝蛋白基因筛选

首次通过反转录 -置换法和使用pUC18质粒成功构建大腹圆蛛 (Araneusventricosus)主壶腹腺 (majorampullategland)cDNA基因文库 ,并以鸟枪法从中筛选出具有典型重复结构的大腹圆蛛主壶腹丝蛋白cDNA基因AvF1,大小为 174 4bp ,编码区为15 72bp ,编码氨基酸 5 2 4个 ,分子量为 4 2 4 89 5 5Da,典型的重复结构为(GGP)nGGX。与现有已知的蛛丝蛋白基因中三带金蛛 (Argiopetrifas ciata)鞭毛样丝基因 (AtfF)有最高的同源性 6 9 3%。大腹圆蛛主壶腹腺cDNA文库的构建和蛛丝蛋白新基因的克隆 ,为提供大腹圆蛛蛛丝蛋白基因背景和进一步研究蛛丝蛋白奠定了基础。