甲型肝炎病毒H2减毒株的某些生物学性质

猕猴试验表明,甲型肝炎病毒H2M20K5是一株减毒株。本文研究了该株在KMB17人胚肺二倍体细胞中的增殖动态、繁殖部位、病毒颗粒在氯化铯(CsCl)溶液中的浮力密度,以及该病毒的耐温性等生物学性质。 一、H2减毒株在KMB17细胞内的增殖动态 取50μl相当于7log感染滴度(荧光检测法)的H2减毒株,用适量含有2％新生牛血清的细胞培养液稀释,感染长成单层的KMB17细胞(4.5×10cm培养方瓶),35℃恒温培养,在不同培养天数(0,3,7,10,14,21,28天)各收获10瓶细胞。

甲型肝炎减毒活疫苗的研究Ⅱ.实验性疫苗的研制

用H_2M_(20)K_5(32℃)甲型肝炎减毒株在KMB_(17)人胚肺二倍体细胞上制备一批实验性甲型肝炎减毒活疫苗。经暂定的生物制品检定项目检测,疫苗内不含外源因子,感染性滴度为10^(6.5)TCID_50/ml,疫苗病毒为HAV。12只猕猴体内试验表明,疫苗接种后不引起具临床重要意义的肝炎指征,但可使全部猕猴产生抗HAV抗体。本批疫苗的安全性和免疫原性在猕猴体内得到证实,有必要在少量人群中作进一步试用观察。

H_2株冻干甲肝减毒活疫苗接种后血中T淋巴细胞亚群的变化

〔目的〕对接种H2 株冻干甲肝减毒活疫苗后机体血中T淋巴细胞亚群的变化进行动态观察。〔方法〕按一针接种程序 ,给每人接种 1瓶冻干甲肝减毒活疫苗 (H2 株 ) ,接种前及接种后 1、2、3、4、6、8周、3个月采取静脉血 ,用流式细胞仪检测全血T淋巴细胞亚群CD3 + 、CD4+ 、CD8+ 细胞的含量 ,并比较CD4+ /CD8+ 比值的变化。〔结果〕CD3 + 细胞在接种后 1-3周、CD4+ 细胞在接种后 1-2周呈现明显升高 ,分别与接种前作自身对照比较的t检验 ,差别有显著性意义(P <0 .0 5 )。〔结论〕H2 株冻干甲肝减毒活疫苗有良好的T细胞刺激能力。

儿童普及接种甲肝疫苗对人群甲肝抗体水平的影响

目的 研究儿童中普及接种甲肝活疫苗后 ,对人群甲肝总抗体水平的影响。方法 选择浙江省台州市椒江城区 ,按不同年龄分成 7组 ,分别于 1991年疫苗接种前及 2 0 0 0年儿童普及接种疫苗后 9年 ,检测正常人群 72 0名和 80 3名甲肝总抗体。血清检测法ELISA。结果 疫苗接种后人群总抗体阳性率有显著的提高。青少年及儿童 ( 18岁以下 )抗体阳性率由接种前的 2 9 84%提高到接种后的 6 4 15 % (P <0 0 1)。成人组( 2 5～ 35岁 )抗体阳性率从 78 9%到 84 5 % ,没有显著差别 (P >0 0 5 ) ,但未见有下降趋势。结论 儿童普及接种甲肝活疫苗后显著地提高了人群的总抗体水平 。

甲肝减毒活疫苗(H_2株)二针法免疫效果观察

目的 观察甲肝活疫苗 (H2 株 )二针法的免疫原性。方法 用 0、 6免疫程序 ,选 85名免前抗HAV IgG阴性的易感者接种甲肝活疫苗 (TCID5 0 =10 6 5 /ml)。结果 一针免后 1月血清抗体阳转率 10 0 % ,抗体几何平均滴度 (GMT1 )等于 7 2 8± 2 2 1。二针免后 1月 ,抗体阳转率仍为 10 0 % ,GMT2 等于 48 7± 2 2 3 ,再免后抗体滴度比一针增加了 6 7倍。结论 89 4%的再免者抗体均有增长 ,其中增长 4倍以上的占 74 1%。

甲型肝炎疫苗研究进展显著

甲型肝炎是世界性传染病,全世界约有40亿人受其威胁.本病主要发生在经济欠发达的第三世界国家,但美国年发病人数也达10万人左右.在中国,35岁以上成年人中,甲肝抗体阳性率达90%以上,常引起季节性的流行.1988年春季的上海甲肝大流行,患病数高达30万人之多. 甲肝是由甲型肝炎病毒(HAV)引起的疾病.HAV是小RNA病毒,直径27nm,属肠道病毒中的一种。

冻干甲型肝炎减毒活疫苗（H2株）的接种与血清学观察

目的 观察H2株冻干甲型肝炎减毒活疫苗接种人体后的安全性和血清学免疫反应。方法 选择广西自治区蒙山县一小学学生(年龄7～12岁)164人和浙江省台州市椒江区一幼儿园儿童(年龄3～6岁)114人，免前筛选抗-HAV-IgG阴性，SGPT正常，无肝炎病史、症状和体症者，分别接种二个批号的H2株冻干甲肝疫苗。观察疫苗接种后30分钟、8、24、48、72小时的局部及全身反应，以后隔天记录体温及其它有关临床反应；接种疫苗后1、2个月采静脉血作SGPT及抗-HAV-IgG测定；同时长期随访作免后13、24个月血清抗-HAV-IgG抗体水平检测。抗体测定用EIA竞争抑制法，用WHO提供的标准品(含100mIU／ml)进行标定。结果 在整个观察期间，所有观察者未见有中、强副反应及其它临床副反应发生，SGPT检测结果无异常升高。H2株冻干甲肝疫苗与液体剂型一样具有良好的安全性。疫苗接种后的抗体应答，免后2个月抗体阳转率为99％～100％，13～24个月阳转率仍高达97．8％～98．9％；免后2个月抗体水平达到高峰，GMT达1607mIU／ml，在免后24个月抗体水平仍维持在448mIU／ml，比同类产品免后2个月抗体还高4倍以上。结论 H2株冻干甲肝疫苗安全性良好，接种后有较高的抗体阳转率和抗体水平，优于同类产品报道。

甲型肝炎减毒活疫苗（H2减毒株）口服免疫反应的研究

选自５个幼儿园和１个小学１０个班级ＳＧＰＴ值正常，抗甲肝病毒（ＨＡＶ）抗体阴性３－９岁儿童１９３名，进行８个不同批号的甲肝减毒活疫苗（Ｈ２减毒株），疫苗剂量为１０６．５ＴＣＩＤ５０，口服途径和皮下注射途径免疫的比较，８周血清检测结果表明：口服途径免疫组１０１名儿童全部未检测到甲肝抗体。皮下注射免疫组的９２名儿童中８８名（９５．５％）有甲肝抗体反应。１９３名儿童８周ＳＧ－ＰＴ值全部正常。

甲肝病毒减毒活疫苗（H2株）的cDNA克隆及序列分析

本文通过ｍＲＮＡ提取，逆转灵（ＲＴ）－聚合酶链反应（ＰＣＲ），获得甲肝病毒减毒活疫苗株（Ｈ２减毒株）的ｃＤＮＡ片段，再经分子克隆，从而得到贯穿甲肝病毒（ＨＡＶ）全基因组的１０个相互重叠基因片段的ｃＤＮＡ克隆。经双脱氧末端终止法进行核苷酸序列分析，得到了长度为７４７３ｂｐ的甲肝病毒减毒活疫苗株（Ｈ２减毒株）ｃＤＮＡ全序列。计算机分析表明，该株与野毒株ＨＭ１７５的核苷酸和氨基酸同源性分别为９９．

甲型肝炎减毒活疫苗(H_2株)10年流行病学效果观察

目的 观察在甲型肝炎 (甲肝 )高发县、区用甲肝减毒活疫苗 (H2 株 )大面积接种后长期的流行病学保护效果。方法 选择浙江省嵊泗县和椒江区二个试点。二组小学生定群研究 ,观察 4年。试点内 1～ 15岁儿童普遍接种甲肝活疫苗。部分研究对象作血清中和试验、免疫回忆反应及免后 10年抗体检测。结果 接种组与未接种组甲肝发病率差别具有显著性 (P <0 .0 1) ,疫苗保护率为10 0 %。疫苗接种率与甲肝发病率二者具有明显负相关。全人口甲肝发病率分别下降了 94.5 %和90 .3% ,1～ 15岁儿童组发病专率分别下降了 96 .9%和 97.9% ,10年期间没有发生甲肝流行。血清学检测结果 :免后阴性血清 ,用体外中和法验证有 6 3.8%仍有中和作用 ,加强免疫 1针后回忆反应明显。免后 10年抗 HAV IgG的阳性率为 80 .2 %。结论 甲肝减毒活疫苗 (H2 株 )长期的流行病学效果明显。通过普遍接种甲肝活疫苗 。

甲型肝炎减毒活疫苗（H2株）一针接种后免疫保护效果的15年观察

目的 评估甲型肝炎（甲肝）减毒活疫苗（H2株）一针接种后的15年血清学和流行病学保护效果.方法 在浙江省台州市椒江区选择220名免前抗甲肝抗体阴性儿童（年龄1～3岁）作为血清免疫学追踪观察对象,分别于接种H2株疫苗后的2个月、12个月、6年、10年和15年观察抗甲肝抗体阳性率和几何平均滴度（GMT）.分析该观察区1～15岁儿童组疫苗接种率和甲肝发病率之间的关系及整个人群15年流行病学效果观察.血清学检测方法采用ELISA法（用WHO标准品校正）和ABBOTT（美国）AxSYM mEIA法.结果 在血清学追踪观察人群中疫苗接种后2个月和接种后15年,抗体阳转率分别为98.6%和81.3%,抗体阳转率下降缓慢 15年后抗-HAV-IgG的GMT为128 mIU/ml,显著高于WHO专家建议的20 mIU/ml保护水平.随着疫苗接种率的逐年提高,1～15岁年龄组儿童的甲肝发病率明显下降,二者之间有非常明显的相关性（Kendall-Rank 相关性检验,τ=-0.931,P＜0.01）.疫苗接种者连续15年累计观察236 413人年,未发生一例甲肝 而未接种者累计观察27 206人年,发生甲肝4例,疫苗保护率为100% 儿童大规模免疫接种为整个人群建立了良好免疫屏障,甲肝发病率下降幅度达96.7%.结论 甲肝减毒活疫苗（H2株）一针接种后的血清学和流行病学保护效果持久,可达15年.

冻干甲型肝炎减毒活疫苗诱导的人体特异性免疫应答

目的观察人体接种冻干甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)后产生的特异性免疫应答。方法选择16名血清甲型肝炎抗体阴性的健康志愿者,接种1针冻干甲型肝炎减毒活疫苗,接种前和接种后2、4、8、12、156周(3年)采血,采用ELISA检测血清抗HAVIgG抗体;采用流式细胞术检测全血各淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+的百分率及表达细胞因子IFN-γ和IL-4的阳性细胞百分率;采用ELISPOT法检测外周血淋巴细胞分泌IFN-γ的斑点形成细胞(SFC)。结果接种疫苗后2周,表达IL-4的阳性细胞百分率与接种前相比显著升高;接种后4周,CD4+淋巴细胞亚群百分率与接种前相比显著升高;接种后8周,抗体100%阳转;接种后3年,抗体和分泌IFN-γ的SFC有一项以上阳性者占85.7%(12/14)。结论接种冻干甲型肝炎减毒活疫苗,能诱导机体产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。

甲型肝炎减毒活疫苗病毒(H_2株)人群水平传播的能力

目的观察甲型肝炎(甲肝)减毒活疫苗(H_2减毒株)接种后病毒在密切接触者中是否传播。方法分别于1987年5月对浙江省医学科学院职工和家属5例、1988年4月对杭州市某小学2(2)班学生15例及1989年3月对同一所小学1(1)班、1(3)班学生42例,共62例志愿者进行甲肝减毒活疫苗(H_2减毒株)接种。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测接种者血清甲肝IgM抗体及总抗体,采用ELISA双夹心捕捉抗原法和细胞培养法检测5名志愿者接种后的粪便。甲肝的诊断依据临床表现、转氨酶升高和甲肝IgM抗体等标准。结果4例志愿者接种后的31份粪便用ELISA双夹心法检测甲肝抗原全部阴性。取上述其中8份标本接种人胚肺二倍体细胞(KMB17),经二次传代有3例接种者在8～21 d时检测到甲肝病毒(HAV)。与42例接种者抗体全部阳转不同,在免疫接种后的10～11个月,作为密切接触者的24名同班同学,甲肝抗体阴性。在部分接种甲肝减毒活疫苗的班级中观察了经历一次自然甲肝野毒流行后的免疫反应。50名学生中,15名接种者甲肝抗体全部阳性,未接种者中30名甲肝抗体阴性,5名甲肝IgM抗体阳性。结论甲肝减毒活疫苗(H_2减毒株)接种后,有少量HAV疫苗病毒在粪便中排出,但目前未观察到在人群中引起水平传播。

冻干甲型肝炎减毒活疫苗H_2株的安全性和免疫原性研究

为观察H2 株冻干甲型肝炎 (甲肝 )减毒活疫苗接种人体后的安全性和免疫原性 ,选择广西壮族自治区蒙山县一小学学生 (年龄 7～ 12岁 ) 16 4人和浙江省台州市椒江区一幼儿园儿童 (年龄 3～ 6岁 ) 114人为接种对象 ,免疫前筛选抗甲肝病毒IgG抗体 (抗 HAV IgG)阴性 ,血清丙氨酸氨基转移酶 (SGPT)正常 ,无肝炎病史、症状和体征者 ,分别接种 2个批号的H2 株冻干甲肝活疫苗。观察接种疫苗后 30min ,8、2 4、4 8、72h的局部及全身反应 ,以后隔天记录体温及其它有关临床反应。接种疫苗后 1、2个月采静脉血测定SGPT及抗 HAV IgG ,同时长期随访检测免疫后13、2 4个月血清抗 HAV IgG水平。检测用酶免疫测定 (EIA)竞争抑制法 ,用世界卫生组织 (WHO)提供的标准品(含 10 0mIU/ml)进行标定。结果显示 :在整个观察期间 ,所有观察者未见中、强反应及其它临床反应发生 ,SGPT检测结果无异常升高。H2 株冻干甲肝活疫苗具有良好的安全性。接种疫苗后 2个月抗体阳性率为 99 1%～10 0 0 % ,13～ 2 4个月阳性率仍高达 97 8%～ 98 9% ;免疫后 2个月抗体几何平均滴度 (GMT)达 16 0 7mIU/ml,在免疫后 2 4个月抗体GMT仍维持在 4 4 8 3mIU/ml。表明H2 株冻干甲肝活疫苗安全性良好 ,接种后有较高的抗体阳转率和GMT。

病毒颗粒中氢氘置换的证实

已知重水(D2O)能增加某些病毒的热稳定性,但其机理不清.用基质辅助气体同位素质谱法,研究了日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)和甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)用D2O处理后,测定病毒及其RNA结构中的氘氢比值(D/H),以δDSMOW表示.结果说明,与正常病毒相比,上述D2O处理后的病毒样品中国δDSMOW值明显升高,其升高值与病毒样品的加入量呈良好的线性关系.实验还指出,D2O处理后的病毒国δDSMOW值的升高与其热稳定性的升高是相关联的.实验结果证明,D2O处理导致病毒及其RNA结构中发生氢氘置换,氢氘置换可导致病毒生物学性状(热稳定性增加)的表型改变.

甲型肝炎病毒活疫苗H_2减毒株全基因文库的建立

探讨甲型肝炎（甲肝）病毒减毒活疫苗株的分子生物学作用机制。方法运用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，参考国外报道的甲肝病毒ｃＤＮＡ序列，进行ｃＤＮＡ的合成扩增和分子克隆，并以７种限制性内切酶进行酶谱分析。结果获得了甲肝病毒活疫苗Ｈ２减毒株的ｃＤＮＡ片段；经分子克隆，得到了贯穿Ｈ２减毒株全基因组的１０组相互重叠基因片段的ｃＤＮＡ克隆，经过酶谱分析，建立了Ｈ２减毒株的全基因文库。结论全基因文库的建立，为进行ｃＤＮＡ全序列分析，为甲肝病毒减毒机理的研究打下良好基础。

甲型肝炎减毒活疫苗(H_2株)不同加强程序的免疫效果

为了观察甲型肝炎 (甲肝 )减毒活疫苗 (H2 株 ,10 6 5TCID50 /ml)不同加强程序的免疫效果 ,并探讨甲肝减毒活疫苗的优化免疫方案 ,于 1993年在浙江省台州市椒江区选择 2 6 4名经事先检测 (ELISA法 )抗 -HAV -IgG抗体阴性的儿童 ,按 4种不同加强程序 ,即在接种 1针后的 6个月、12个月、3年、6年接种第 2针。每次接种后 1个月采集血清标本 ,观察免疫后抗体阳转率及几何平均滴度 (GMT)。结果 :接种甲肝减毒活疫苗第 1针后 1个月抗 -HAV -IgG抗体阳转率为 92 2 %～ 10 0 0 % ,GMT为 1∶3 17～ 1∶5 15 (ELISA法 ) ;按 4种不同加强程序接种第 2针后 ,抗 -HAV -IgG抗体阳转率都达 10 0 0 % ,GMT都增长 >4倍 ;其中 0、6个月与 0、12个月加强程序GMT最高 ,达 1∶34 4 3～ 1∶35 12 (ELISA法 )或 30 6 9mIU/ml～ 3133mIU/ml(AbbottEIA法 )。甲肝减毒活疫苗加强接种后抗体GMT有大幅度提高 ,其中 0、6个月或 0。