抗癌草药半边旗有效成分对卵巢癌细胞基因表达的影响

本课题组首先发现草药半边旗（Pteris semipinnata L，PsL）具有明显的抗癌作用，并分离和鉴定了几种有效成分，其化学结构皆为二萜类化合物。其中之一5F（简称PsL5F）含量最高，其结构为Ent-llα-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic acid。近十年的研究表明，PsLSF抑制多种癌细胞的生长，

用肿瘤基因芯片检测大黄素对HO-8910PM细胞基因表达的影响

目的：检测大黄素对人高转移卵巢癌细胞中癌相关基因表达谱的影响。方法：应用肿瘤基因芯片检测大黄素对HO-8910PM细胞相关基因mRNA表达的影响，并对部分基因用实时定量PCR和Western blot进行验证。结果：共筛选出表达差异（即比值≥2．0或≤0．5）基因69个，其中36个基因表达水平下调，33个基因表达上调，对差异表达（即比值≥8．0或≤0．125）特别明显的基因如FOSLl和GDFl5进行验证，结果与芯片检测结果基本吻合。表达差异基因主要涉及细胞凋亡、细胞周期、细胞生长与分化、细胞运动、信号转导、基因转录和细胞代谢等7大类相关基因。结论：大黄素抗肿瘤作用可能涉及多基因、多通路的共同作用。

半边旗5种成分体外细胞毒活性比较及构效关系分析

用多种人癌细胞株以ＭＴＴ试验，体外筛选半边旗抗肿瘤活性成分。结果显示：化合物５Ｆ，６Ｆ，Ａ及半边旗乙醇提取物ＰＳＥ对５种人癌细胞均有不同程度的杀伤作用，且呈明显的剂量依赖关系。其中６Ｆ的活性最强，其次是Ａ，５Ｆ，而化合物４Ｆ和Ｂ对５种细胞均无细胞毒活性。分析它们的构效关系可以推测，αβ亚甲基环戊酮结构是其活性部位，结构中羟基数目和位置的不同可以影响化合物的活性强度。

黄芪水提液与己烯雌酚对去卵巢大鼠骨代谢的影响

用3月龄去卵巢SD大鼠为模型，4．5mg／L已烯雌酚（diethylstilbestoli，DES）和1kg／L黄芪水提液5mL／kg·dig，每周6次，持续12周，胫骨近端不脱钙骨片测量。结果：去卵巢组大鼠的骨形成和骨吸收均增加，但骨吸收大于骨形成，骨质丢失（％Tb．Ar—68％）；黄芪水提液和DES能有效防止去卵巢大鼠的骨丢失，效应相近（与去卵巢组比较％Tb．Ar分别＋122％和＋85％，两个治疗组间P＞0．05），但作用机理不同。黄芪水提液仅抑制去卵巢后的骨吸收，而DES则同时抑制骨吸收和骨形成，但以抑制骨吸收为主。

蛇床子素对去卵巢大鼠近侧胫骨代谢影响的定量研究

切除３月龄ＳＤ大鼠双侧卵巢１２周后，其骨形成的参数值明显增加（％Ｌ．Ｐｍ＋５８％，ＢＦＲ／ＢＶ＋１０５％，ＢＦＲ／ＢＳ＋７４％，％０．Ｐｍ＋１８８％），同时骨吸收的参数值增加（％Ｅｒ．Ｐｍ＋１５５％），荧光标记周长与吸收周长的比率－４１％，由于骨吸收大于骨形成，骨质丢失（％Ｔｂ．Ａｒ－５９％，Ｔｂ．Ｔｈ一１４％），出现高转换型骨质疏松。分别用蛇床子素（ｏｓｔｈｏｌｅ）６．７ｍｇ·ｋｇ￣（－１）ｉｇ，每周６次，尼尔雌醇（ｎｉｌｅｓｔｒｉｏｌ）１ｍｇ·ｋｇ￣（－１）ｉｇ，每周１次，持续１２周，均能明显抑制去卵巢诱导的骨高转换，防止骨质丢失。但蛇床子素抑制骨高转换的效应比尼尔雌醇低（蛇床子素治疗组比尼尔雌醇治疗组％Ｔｂ．Ａｒ一５５％）。

刺五加多糖抗肿瘤作用与机理的实验研究

观察刺五加多糖（ＡＳＰＳ）对小鼠肉瘤Ｓ１８０细胞、人白血病Ｋ５６２细胞体外增殖的影响，发现ＡＳＰＳ对两种细胞的增殖均有强烈抑制作用，半数有效抑制浓度分别为０．３８ｇ·Ｌ－１和０．２８ｇ·Ｌ－１。为探讨其抗肿瘤机理，对Ｓ１８０细胞膜成分进行了分析，结果显示ＡＳＰＳ与细胞接触２４ｈ，引起细胞膜唾液酸含量升高，膜磷脂含量降低，膜磷脂脂肪酸组成发生明显改变（Ｃ２０：０、和Ｃ１４：０降低），与对照组相比，这些变化均有显著差异（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；但膜胆固醇含量、膜流动性（Ｃ／Ｐ比值、Ｕ／Ｓ比值）及膜中性脂脂肪酸组成不受影响。将ＡＳＰＳ与Ｓ１８０细胞膜在适当条件下一同温育，发现ＡＳＰＳ干扰膜的肌醇磷脂代谢，明显抑制磷脂酰肌醇转换。上述结果提示ＡＳＰＳ的抗癌机理与膜生化特性改变有关，其中对膜磷脂含量。

茯苓多糖抗肿瘤作用与机理的实验研究

观察茯苓多糖（ＰＰＳ）对小鼠肉瘤Ｓ１８０细胞、人白血病Ｋ５６２细胞体外增殖的影响，发现ＰＰＳ对两种细胞的增殖均有强烈抑制作用。为探讨其抗肿瘤机理，对Ｓ１８０细胞膜成分进行了分析，结果显示ＰＰＳ与细胞接触２４ｈ，引起细胞膜唾液酸含量升高，膜磷脂含量降低，膜磷脂脂肪酸组成发生明显改变（Ｃ２０：４和Ｃ１４：０降低），与对照组相比，这些变化均有显著差异（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；但膜胆固醇含量、膜流动性（Ｃ／Ｐ比值、Ｕ／Ｓ比值）及膜中性脂脂肪酸组成不受影响。将ＰＰＳ与Ｓ１８０细胞膜在适当条件下一同温育，发现ＰＰＳ干扰膜的肌醇磷脂代谢，明显抑制磷脂酰肌醇转换。提示ＰＰＳ的抗癌机理与膜生化特性改变有关，其中对膜磷脂含量、脂肪酸组成和作为膜磷脂组分之一的肌醇磷脂代谢的影响是重要环节。

半边旗中二萜类化合物的植化及抗肿瘤活性初步研究

目的：对半边旗中二萜类有效成分及抗肿瘤活性作进一步研究。方法：半边旗乙醇提取物上活性炭柱，乙醇氯仿（１０∶１）洗，减压浓缩后上硅胶柱，甲醇氯仿（９０∶２）洗脱，得纯化合物，经二维核磁共振（ＮＭＲ）确定了化合物的空间结构。以噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定肿瘤细胞存活率，。ＩＣ５０按改良Ｋａｒｂｅｒ公式计算。结果：共分得５个化合物Ｂ，４Ｆ，５Ｆ，６Ｆ及Ａ，其中Ａ是新化合物，６Ｆ是首次从该植物中分离得到。５Ｆ，Ａ，６Ｆ明显抑制人白血病粒细胞ＨＬ６０，人低分化胃腺癌上皮细胞ＭＧＣ８０３、人低分化鼻咽癌上皮细胞ＣＮＥ２Ｚ和人肝癌上皮细胞ＢＥＬ７４０２的增殖，活性依次增强。６Ｆ对ＨＬ６０细胞的活性最强［ＩＣ５０为（０．０９±０．０１）μｍｏｌ·Ｌ－１］，阳性对照５Ｆｕ的ＩＣ５０为：（５２．５±２．８）μｍｏｌ·Ｌ－１。结论：从半边旗分离得到的一类二萜化合物具有显著抑制多种癌细胞增殖的活性，其中６Ｆ活性最强。

半边旗有效成分5F注射液体内外抗肿瘤药理作用研究

目的 观察半边旗有效成分 5F注射液体外体内抗瘤活性、急性毒性作用及其对免疫器官的影响。方法 用MTT法观察 5F注射液对SPCA 1,K5 6 2瘤株的体外抗肿瘤作用 ;采用荷瘤小鼠瘤重、抑瘤率检测 5F注射液对小鼠移植性肿瘤S180、HepA肝癌的抑制作用 ;通过检测LD50 、胸腺指数、肝脏指数、脾脏指数、白细胞数等指标观察 5F注射液的急性毒性及对其免疫器官的影响。结果 5F注射液对SP CA 1,K5 6 2瘤株有显著的体外抗肿瘤作用 ;对荷瘤小鼠肝癌HepA、S180在体内也有抗肿瘤活性 ,5F注射液的半数致死量 (LD50 )为 4 14 4mg·kg-1。结论 5F注射液具有一定的体内体外抗肿瘤活性 ,同时对免疫功能有一定抑制作用。

淫羊藿提取液防治激素所致大鼠骨质疏松的实验研究

目的：探讨淫羊藿提取液防治激素所致大鼠骨质疏松的疗效。方法：采用３月龄Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠２４只，随机分为对照组（１组）、激素组（２组）和预防组（３组）。２组喂醋酸泼尼松（４．５ｍｇ／ｋｇ）２次／周；３组除按２组同法喂泼尼松外，还同时喂淫羊藿提取液２．０ｇ／（ｋｇ·ｄ）。３个月后对３组大鼠胫骨上段的骨片用图象分析仪进行测算和分析。结果：激素组与对照组比较，由于骨吸收大于骨形成，出现骨小梁面积和数量减少，骨小梁分离度增加。用淫羊藿提取液预防的激素组，骨吸收率比２组减少了７０％，因而骨量接近正常组水平。结论：实验结果提示，淫羊藿提取液能预防激素所致的骨质疏松。

半边旗有效成分及抗肿瘤活性研究

目的：半边旗的植化研究及其有效部位和有效成分的抗肿瘤活性研究。方法：半边旗乙醇提取物上活性炭柱，乙醇洗脱液减压浓缩得粗提物（Ｃ），甲醇氯仿（２∶１）洗脱液浓缩后以硅胶柱层析分离，得到一个倍半萜（Ｂ），两个二萜（４Ｆ、５Ｆ）。Ｂ、４Ｆ、５Ｆ的结构经光谱鉴定，尤其是用二维ＮＭＲ确证了空间结构。以台盼蓝染色作活细胞计数，算出药物对细胞的生长抑制率，ＩＣ５０按改良Ｋａｒｂｅｒ公式计算。结果：分离得到三个化合物，确定了结构。以ＨＬ６０细胞为筛选模型，结果表明：粗提物（Ｃ）、化合物５Ｆ明显抑制ＨＬ６０细胞增值。结论：药理实验表明，粗提物的抗肿瘤活性明显高于５Ｆ，预示粗提物中仍有高活性化合物，值得进一步研究。

重组人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与测序

蛋白激酶ＣＫ２是一种存在的信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶．它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体．用反转录ＰＣＲ从ＨＬ－６０细胞中获得了人蛋白激酶ＣＫ２β亚基编码区ｃＤＮＡ，将ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切ＰＣＲ产物连接到表达载体ｐＴ７－７的ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切位点中．转化感受态细菌ＤＨ５α获得转化子，阳性筛选率为７２％．限制性酶切分析结果表明，插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符．随机挑选４个阳性质粒测定其插入片段ＤＮＡ序列，结果显示有２个含有正确插入的人蛋白激酶ＣＫ２βｃＤＮＡ，命名为ｐＴＣＫＢ．其余２个克隆分别存在１个和２个点突变，即在其编码区ｃｏｎｄｏｎ１４８的ＴＣＡ→ＴＴＡ，结果Ｓｅｒ→Ｌｅｕ；另一个则在Ｃｏｎｄｏｎ１４３ＧＴＧ→ＡＴＧ，Ｖａｌ→Ｍｅｔ；Ｃｏｎｄｏｎ１７０ＧＴＧ→ＧＣＧ，Ｖａｌ→Ａｌａ．重组质粒（ｐＴＣＫＢ）克隆的成功，将为在原核细胞中表达蛋白激酶ＣＫ２β亚基以及利用ＣＫ２βｃＤＮＡ作为探针进行深入研究打下基础．

植物多糖对S180、K562细胞增殖和唾液酸、磷脂、胆固醇含量的影响

本实验用ＭＴＴ比色分析法研究了茯苓多糖（ＰＰＳ）、刺五加多糖（ＡＳＰＳ）、银耳多糖（ＴＦ）和香菇多糖（Ｌｅｎｔｉｎａｎ）４种植物多糖对体外培养的小鼠腹水型肉瘤Ｓ１８０细胞和人慢性骨髓性白血病Ｋ５６２细胞增殖的影响，结果证实ＰＰＳ、ＡＳＰＳ在体外具有直接抗肿瘤作用。ＰＰＳ对两种肿瘤细胞的半数有效抑制浓度（ＩＣ５０）均为１．５ｍｇ／ｍｌ，ＡＳＰＳ对Ｓ１８０和Ｋ５６２细胞的ＩＣ５０分别为０．３８ｍｇ／ｍｌ和０．２８ｍｇ／ｍｌ；ＴＦ和Ｌｅｎｔｉｎａｎ对两种细胞的增殖无抑制作用。本实验同时检测了ＰＰＳ、ＡＳＰＳ作用于Ｓ１８０细胞２４ｈ后，细胞膜唾液酸（ＳＡ）、磷脂（Ｐｌ）、胆固醇（Ｃｈ）含量的变化，发现除Ｃｈ及Ｃｈ／Ｐｌ比值无明显变化外，ＳＡ升高（Ｐ＜０．０５）、Ｐｌ减少（Ｐ＜０．０５），提示ＰＰＳ、ＡＳＰＳ的抗肿瘤作用可能与之有关。

半边旗抗肿瘤有效成分6F对HL-60细胞周期的影响及体外增效作用

目的：研究半边旗抗肿瘤有效成分６Ｆ对ＨＬ－６０细胞周期的影响及对常用抗肿瘤药的体外增效作用。方法：应用流式细胞光度术（ＦＣＭ）测定细胞周期，应用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定药物对细胞的抑制率。结果：不同浓度６Ｆ作用６小时即可使ＨＬ－６０细胞Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期比例升高，Ｇ１期比例下降，并呈一定的剂量效应关系，当作用到２４小时后，Ｓ期比例进一步升高，但Ｇ２／Ｍ期比例稍有回落。低浓度６Ｆ分别与２－氯代脱氧腺苷（２－ＣＬｄＡｄｏ），顺铂（ＣＤＤＰ），长春新碱（ＶＣＲ），氟尿嘧啶（５ＦＵ）合用可增强它们对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用，ｑ值大于０．８５，与各药有相加或协同作用，６Ｆ对２－ＣｌｄＡｄｏ，ＣＤＤＰ，ＶＣＲ，５ＦＵ的增效倍数分别为１．５８，１．５３，１．５５，１．３８。结论：６Ｆ可明显阻断ＨＬ－６０细胞在Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期；６Ｆ可增强上述药物对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用。已知，２－ＣｌｄＡｄｏ阻断细胞在Ｓ期，ＣＤＤＰ和ＶＣＲ阻断Ｇ２／Ｍ期，５ＦＵ阻断Ｇ１期。鉴于所试药物对细胞周期的影响不同，提示６Ｆ的体外增效作用可能与此有关。

人蛋白激酶CK2α′亚基在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组蛋白的纯化与性质鉴定

通过RT PCR从HL 6 0细胞获得人蛋白激酶CK2α′亚基编码区cDNA ,将NdeⅠ HindⅢ双酶切的PCR产物和pT7 7表达载体进行定向克隆、细菌转化、电泳初筛和限制性酶切分析鉴定 .随机挑选阳性克隆进行DNA测序确证 ,筛选含与已知序列完全相符的重组质粒 (命名为pTCKA′) .将其转化BL2 1(DE3)菌 ,IPTG诱导后未见高效特异表达 .然后将人CK2α′cDNA亚克隆至GST融合蛋白表达载体 ,经同样转化和诱导步骤后可见一蛋白特异高效表达 .Western印迹结果证明 :该蛋白能与兔抗人CK2α′3 3 3 3 50 肽段抗血清发生特异性免疫反应 .采用GSH Sepharose 4B柱纯化 ,凝血酶酶切 ,最后从 4g细菌获 4 4mg纯化重组蛋白 .通过性质鉴定和酶动力学分析证明 :克隆、表达和纯化的重组蛋白是有生物学活性的人CK2α′亚基 .

己烯雌酚对去卵巢大鼠骨代谢影响的定量研究

目的：观察己烯雌酚对去卵巢大鼠骨质疏松的作用及机制。方法：用４．５ｍｇ·Ｌ－１的己烯雌酚按５ｍｌ·ｋｇ－１·ｄ－１ｉｇ，每周６次。１２ｗｋ后，用半自动图象数字化分析仪对大鼠胫骨近段不脱钙骨片进行骨计量学分析。结果和结论：己烯雌酚能明显抑制去卵巢引起的骨高转换，使治疗组的骨量明显高于去卵巢组（％Ｔｂ．Ａｒ＋１２２％），但未能完全防止去卵巢引起的小梁骨丢失（与对照组比较：％Ｔｂ．Ａｒ－２８％）。

一种新二萜类化合物的体外抗肿瘤研究

目的研究一种新二萜类化合物凤厥内酯Ａ（Ｆ－Ａ）的抗肿瘤活性。方法采用体外培养的人癌细胞株——早幼粒细胞白血病ＨＬ－６０和红白细胞白血病Ｋ５６２作对象，观察Ｆ－Ａ对其抑瘤活性、诱导分化、细胞周期的影响。结果Ｆ－Ａ对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞２４ｈ的半数抑制浓度ＩＣ５０分别为７．６ｍｇｇ－１和９．１ｍｇｇ－１，在４ｍｇＬ－１时即明显抑制ＨＬ－６０细胞的对数生长；对３Ｈ－ＴｄＲ参入作用在培养４８ｈ后有一定抑制作用；透视电镜显示肿瘤细胞有损伤表现；细胞周期分析显示Ｇ２＋Ｍ期细胞增多；ＮＢＴ还原反应试验阴性。结论Ｆ－Ａ明显抑制ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞生长，抗肿瘤活性强，对细胞周期的影响提示Ｍ期阻滞，研究初步提示Ｆ－Ａ不具细胞诱导分化作用。

半边旗体内外抗癌作用及急性毒性研究

本文观察了半边旗水提液(PWE)和醇提液(PAE)体内外抗癌活性及急性毒性。结果表明,PWE和PAE对培养的人白血病细胞株HL—60和K562有明显抑制细胞增殖的作用,呈浓度依赖性;并明显降低HL—60细胞的分裂指数;PWE对小鼠S180肉瘤和小鼠HepA肝癌有明显的抑瘤作用,低10倍剂量的PWE与低剂量5—Fu联合用药可使5—Fu抑瘤率提高,在抑瘤的同时不降低荷瘤鼠末梢血白细胞数(p>0.05);以75g生药/kg/d小鼠灌胃,连续观察一周无异常;PWE和PAE溶血试验均为阴性。提示急性毒性很低。

芦荟大黄素对高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移潜能的影响

目的研究芦荟大黄素(Aloe emodin,AE)对人高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移潜能的影响及其作用机制。方法 MTT法检测AE对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;Transwell chamber法检测AE对MDA-MB-231细胞侵袭重组基底膜能力和趋化性运动能力的影响;RT-PCR、Western blot法检测AE对MDA-MB-231细胞黏着斑激酶(FAK)mRNA和蛋白表达的影响。明胶酶谱法检测MDA-MB-231细胞分泌的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性。结果 80μmol·L-1 AE抑制MDA-MB-231细胞体外侵袭重组基底膜能力、趋化性运动能力,其抑制率分别为(52.98±5.46)%,(45.88±8.51)%。作用于MDA-MB-231细胞24 h后,AE下调FAK mRNA和蛋白表达,下调MDA-MB-231细胞分泌MMP-9。结论 AE抑制MDA-MB-231细胞体外侵袭能力、趋化性运动能力,其作用机制与其下调FAK表达和MMP-9的分泌有关。