完善实验动物废物处置质量管理体系的思考:以中国食品药品检定研究院为例

科技发展是推动人类社会前进的巨大动力,而实验动物资源是生命科学、医药等领域科技发展的条件保障。但在开展医药研发、检验检测等实验过程中,使用实验动物产生的废物也为城市管理带来了新的考验。废物的分类、回收、有效利用和生物安全危害等问题接踵而至,对法规、标准、规范等的制定提出了与时俱进的要求。质量管理体系建设是检验检测机构管理的地基和框架,具备较强的操作性和检查性,可以不断提升管理水平,加强基础管理的稳定性。随着各层级新的管理办法出台,很多单位现行的质量管理体系内关于实验动物废物管理的相关内容欠妥,存在未明确非医疗机构实验动物废物处置流程、实验动物废物分类不准确、不同分类的废物未能按照不同方式处置等问题。本文针对目前存在的问题,梳理了中国食品药品检定研究院质量管理体系需要增加或者删改的流程,并制订了现行有效的标准作业流程,在如何加强监督管理方面提出了切实可行的措施,并开创性地把6S管理内容纳入质量管理体系中。因此,针对实验动物废物的管理应从完善质量管理体系的角度出发,从源头做好废物分类和管理,有效控制生物危害,最大限度地减少环境污染,为可持续发展创造条件。

CNAS⁃CL06体系良好运行对动物实验数据科学性的积极作用

药品生物制品检验检测机构的动物实验室承担着检测和科研工作的重要支撑任务。本文梳理了中检院CNAS⁃CL06质量管理体系在运行中积累的管理经验,为同类机构在运行中提供借鉴,以保障动物实验数据的科学性。本实验动物机构顺利通过了CNAS实验动物机构认可,并在现场监督评审中按时完成了整改,同时依据《实验动物饲养和使用机构质量和能力认可准则》(CNAS⁃CL06)开展体系定期自查。在自查过程中一边检查问题一边完善体系内容,从动物采购、职业健康安全、动物疾病治疗与护理、设施运行突发事件演练等几方面着手,充实了质量管理体系内容,确保体系持续有效运行,保障了动物实验数据的有效性和标准化,同时在动物实验平台共享方面贡献了中检院的管理思路,为动物实验的云平台建设提供硬件和软件支撑。本文旨在根据工作实际探索形成实验动物行业质量管理模式,为制定和执行国家标准、行业/团体标准、认可认证标准等机构提供基础数据,为开展动物实验的机构提供可供探讨的管理模式,也为推动整个动物实验的规范化、科学化发展水平夯实基础。

基于科研范式变革的实验动物资源创新发展

实验动物是支撑生命科学和生物医药等领域科技创新的重要基础科研条件之一。随着科研范式的变革,准确把握科学前沿和国家重大需求,进一步凝练实验动物资源创制与发展中的难点和疑点,对加快推动实验动物新品种/新品系开发和动物模型创制与发展具有重要意义。本文梳理了我国实验动物资源建设和应用情况,就应对新形势下的科研范式变革中存在的主要问题进行了深入探讨,展望了我国实验动物资源发展新动向,以期为实验动物新资源研究开发提供新视角。

IL2rg^(-/-)大鼠支持人RSV在体内的长期感染

目的为了克服已有人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,hRSV)动物模型的局限性,如半受纳性和感染持续时间短,本文利用TALEN基因编辑技术建立了IL2rg基因敲除(IL2rg^(-/-))的大鼠模型。方法用hRSV滴鼻感染该动物模型,观察感染期(0~35 d)的临床表征、体重及体温变化;记录不同时间点(滴鼻感染后第4、11、20、35天)鼻腔、气管、肺等呼吸道脏器的病毒总拷贝数;在观察终点(滴鼻感染后第35天)对感染动物的靶器官进行病理分析;观察不同时间点(滴鼻感染后第4、20、35天)外周血T、B、NK、NKT细胞的变化及不同时间点多种细胞因子的变化。结果(1)通过鼻内接种hRSV后,纯合的IL2rg基因敲除大鼠的呼吸道内能保持较高的病毒载量,鼻腔中病毒的平均峰值滴度能快速升至1×10^(10 )copies/g,至第5周时,病毒依然能维持复制,病毒载量亦可达到1×10^(7)copies/g。(2)但其鼻、气管和肺组织,无明显病变。(3)感染hRSV的IL2rg^(-/-)大鼠外周血B细胞含量有上升。(4)IL-6和MCP-1两种细胞因子都在感染前期上升,在观察终点回落。结论本研究基于TALEN技术建立了IL2rg^(-/-)大鼠模型,并发现该模型能很好地支持hRSV高水平复制和并长期感染,为抗病毒药物筛选、抗hRSV抗体体内效力评价,提供了良好的动物模型。

兔源肠致病性大肠埃希菌全基因组测序及毒力和耐药基因分析

目的揭示一株从腹泻实验兔中分离到的肠致病性大肠埃希菌ILAREc-01的基因组特征、毒力基因和耐药基因分布情况。方法采用高通量测序法对基因组序列进行测定,采用VFDB、ARDB、CAZy、SWISS-PROT、COG、CARD、KEGG、T3SS等8个数据库对基因组中的基因功能进行预测,并且对ILAREc-01菌株进行了遗传进化分析。结果ILAREc-01基因组中编码5249个基因;CARD数据库分析表明ILAREc-01菌株具有7类耐药机制的59个耐药基因;通过VFDB数据库分析,在ILAREc-01中注释了553个毒力基因,并发现了肠细胞脱落位点毒力岛(LEE);ILAREc-01与FORC028、E2865和110512株具有较高的同源性。结论本研究进行了兔源肠致病性大肠埃希菌ILAREc-01的全基因组测序,完成了毒力基因和耐药基因的注释,并开展了遗传进化分析,为揭示该病原的致病机制和科学防控实验兔大肠埃希菌病提供了数据支撑。

利用CRISPR/Cas9技术构建基因修饰小鼠模型的技术优化进展

CRISPR/Cas9技术的兴起,推动了生命科学各个领域的发展。随着对其认识的不断加深,人们进行了多重改进和优化,以适应不同的应用场景。在基因修饰小鼠模型制作中,CRISPR/Cas9技术的优化也带来了众多突破性进展。本文简要回顾了CRISPR/Cas9技术的发展历程,并从CRISPR/Cas9元件优化、条件敲除/敲入基因修饰小鼠模型的构建以及CRISPR/Cas9元件和HDR模板的递送系统层面总结了优化策略,展望该技术未来的发展。

英国动物试验年度统计报告的分析与启示

实验动物资源调查是一项系统性和公益性的科技基础性工作,对于推动科技进步、促进基础学科发展、支撑经济社会发展和保障国家安全具有重要战略意义和不可替代的作用。研究分析比较英国动物试验年度统计报告的框架结构和统计指标,为我国实验动物资源调查提供参考。

几种常用实验动物垫料的质量评价研究概述

实验动物垫料是保证实验动物质量和影响动物试验结果的重要环境因素,也是衡量动物福利的重要标准。本文就常用实验动物垫料的种类、垫料的标准化、垫料的质量评价、灭菌方法等方面进行论述和总结,特别介绍接触性垫料、非接触性垫料的优缺点,对实际应用中选择和使用实验动物垫料提供参考依据,有利于实验动物垫料的新型研发和完善实验动物垫料国家标准等相关工作的开展。

兔出血症2型研究进展

兔出血症2型是由兔出血症病毒2型引起的危害家兔和野兔的一种新型高度传染性、急性致死性疫病,该病2010年在法国首次被发现。2020年4月该病传入我国四川省后,迅速传播至我国多个省份,对我国养兔业的健康发展造成了严重危害。目前,国内外关于兔出血症2型的研究比较有限,而且国内没有商品化的疫苗用于该病的预防,因此应该加强对该病的重视程度,积极开展防控技术的研究。论文通过对兔出血症2型的流行情况、病原学及理化特性、流行病学、临床症状、剖检病变、诊断方法和防治措施等多个方面进行阐述,以期为科学预防和控制兔出血症2型提供参考。

独立通风笼系统评估及检测机构在其中的角色

独立通风笼（IVC）系统由于其在减少啮齿类传染病在动物群体内的传播、增加饲养间里笼具密度、减少饲养间里过敏原浓度和气味方面的优势,以及作为屏障设施替身的潜在可能而获得越来越大范围推广使用.IVC系统的评估尚无客观统一标准,IVC生产厂商或供应商的宣传在很大程度上影响着用户特别是首次使用者的判断.本文从检测机构及IVC系统用户的角度,参考文献报道,试图提醒读者在IVC系统评估中的考虑事项,并阐述了第三方设施环境检测机构在其中扮演的角色.

4种不同处理的实验动物饮水储存时间-细菌培养报告

目的通过模拟现实环境,对国家药物安全评价监测中心可能使用的4种处理动物饮水的储存时间-菌落进行监测,为该中心的实验动物饮水管理提供参考。方法将4种水样存放在模拟现实环境下,每周分别取样接种血平皿进行细菌培养,为控制样品传递可能造成的污染,取样及接种操作安排在临近储存环境的设备中进行。结果高压灭菌管道自来水连续5周未检测到细菌,高压灭菌过滤水连续8周未检测到细菌;新鲜未高压灭菌管道自来水及过滤水水样细菌检出阳性,其中新鲜自来水存放1周后每毫升水样中菌落单位超过100个,新鲜过滤水存放1周后每毫升水样中菌落单位平均34个(范围:29～37 cfu/mL)。结论高压灭菌水储存5周满足无菌要求,可提供给清洁级以上动物饮用;未经高压灭菌过滤水储存1周内可满足国标要求,可供普通级动物使用,但接取新鲜水样将更加安全;新鲜管道自来水满足国标要求,可供普通级动物使用,但建议不要储存过夜饮用。

中、美、日三国啮齿类饲料样品比较分析——24个月长期啮齿类致癌性实验的饲料选择

目的评估饲料品质、供应风险及价格,为24个月长期致癌性试验寻找最佳的饲料及饲料供应商。方法将日本进口MF18饲料,美国进口LabDiet饲料以及北京科澳生产的啮齿类饲料样品分别包装,委托专业检测实验室对常规营养成分、毒理及微生物指标进行检测,评估饲料品质;对各来源饲料的运输风险、非可控因素等可能影响饲料品质及稳定供应的方面进行评估;兼顾饲料价格作为参考评估因素。结果经评估,3种饲料品质均符合饲料国标GB14924-2001*的要求;以毒性研究关注的毒理指标作为评价标准,则3种饲料品质排序为:MF18饲料(最佳)—>LabDiet饲料(较佳)—>科澳国产饲料(佳);进口饲料的运输及供应稳定性相比存在较大风险;国产饲料价格相对便宜但未成为关键评估因素。结论经过综合评估,特殊定制的本地国产饲料被认定为是国家药物安全评价监测中心24个月致癌性试验用的最佳饲料。

屏障内独立通风笼与敞口笼饲养雄性Balb/c小鼠的比较

目的采用独立通风笼(individually ventilated cage,IVC)饲养实验小鼠,积累运行经验和背景数据。方法 80只5周龄SPF级雄性Balb/c小鼠,在屏障内同室分别饲养在换气参数为70、50和30次/h的IVC系统及敞口笼内8周,各设置5只/笼和10只/笼2种饲养密度;每周逐只称重、第8周进行大体剖检,主要脏器称重;以Excel软件绘制体重曲线,以SPSS软件统计各饲养组两两间差异。结果 1 5只/笼饲养的动物体重曲线优于10只/笼;2与设置为30和70次/h换气的IVC相比,无论是5只/笼或10只/笼饲养,换气50次/h的IVC饲养动物体重曲线平滑度及趋势均更加接近5只/笼传统敞口饲养;3组间体重未因饲养设施或密度因素造成显著差异(P>0.05);4IVC在30次/h换气5只/笼饲养比敞口10只/笼饲养时的肝脏系数显著高(P<0.05),该参数的其它组间、及其它脏器系数值均未见组间差异显著(P>0.05)。结论根据实验结果,推荐该型号IVC换气次数设置为50次/h,饲养Balb/c小鼠密度5只/笼为佳。

实验动物运输中的福利保障

运输动物可能发生在各个动物生产或使用单位的内部,也可能发生在动物供应商与用户之间,对于野生动物,还可能会发生在捕捉地点与饲养设施之间。动物的运输过程中,许多的方面可能对动物福利产生直接的影响。包括搬运,从熟悉的同种中隔离及可能的单独饲养,被装载在不熟悉的运输容器中,装卸,运输途中的运动、震动、包括加速和减速,为保证平衡导致的紧张(特别是大动物),不熟悉的信息、声音和气味,温度和湿度的波动及极端温度,黑暗(避光设置),被停止供食或无采食和饮水意愿,最终用户提供的新环境和程序,不熟悉的人和可能社会等级竞争重构健等均是潜在造成动物应激的因素。认真评估和组织运输中的各个方面,人道对待所运输的动物对保障研究的质量和动物福利是必须的。本文简单论述了运输对实验动物福利的影响及造成这些影响的潜在因素、评价指标。推荐了一个人道运输实验动物的通行准则,以及一些有价值的文献数据。更加详细的内容可以阅读参考文献的原文。

Beagle犬安全药理遥测系统埋植手术术位开裂处治失败1例报告

笔者所工作的实验室发生1例beagle犬安全药理遥测系统埋植手术术位开裂。由于兽医自身经验不足及其它条件的限制,在术后护理中采取系列缝合处理后未能实现创口闭合,且因术位发生继发感染而宣告处治失败。本文将简报这1失败案例以避免类似失误。

不同实验室对4种动物饮水水质检测的结果比较

目的对4种不同方法处理的动物饮水的部分常规检测项目进行检测,了解饮水机处理及高压灭菌处理后成分含量的变化。比较不同实验室获得的结果,相互验证准确性,为国家药物安全评价监测中心的实验动物饮水管理政策提供参考。方法在本中心内部实验室,以常规试剂对4种动物饮水的12项指标进行检测;委托专业检测实验室对4种饮水中相同的12项指标,以及2种未高压灭菌水的其他21项指标进行检测,实现对饮水机及高压灭菌处理后各成分含量变化趋势与程度的了解;把握实验室间检测结果的差异,相互验证准确性。结果2个实验室共检测出13项指标数据,其他20项未检出。根据委托检测结果,经饮水机处理水中可溶解性总固体的含量(包括碳酸氢钙、碳酸钙、硫酸盐、氯化物、硝酸盐、氟化物等)及耗氧量均降低97%以上;高压灭菌处理水的总硬度降低约25%,而氯化物、亚硝酸盐含量出现轻微升高;自检结果印证类似趋势。自检结果显示,经饮水机处理的水质呈弱酸性,高压灭菌自来水的pH值明显升高,委托检测未呈现该趋势。结论实验室间数据对比显示,内部检测结果可信,可满足日常管理需要;与单纯高压灭菌水相比,经饮水机处理水的杂质含量明显降低,更加适合在动物毒性实验中应用。

HEV经输血感染兔模型研究

目的建立输血感染戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)兔模型,了解HEV全血输注传播的可能性,并观察感染后的指标动态。方法以兔HEV接种4只SPF兔,经腹腔静脉窦采集抗凝血,然后立即以约10 m L/kg经耳缘静脉注射输血方式分别给予正常SPF受体兔5只,每周监测受体兔粪便和血清抗原、抗体和核酸,连续13周。结果静脉输血后,5只受体兔均出现粪便排毒,其中3只受体兔引起慢性戊肝,排毒时间超过13周,同时出现病毒血症和HEV抗原阳性,HEV抗体阴性或弱阳性;2只受体兔引起急性戊肝,排毒时间均小于6周,同时HEV抗体检测Sample/Cut-off(S/CO)值均大于13、HEV抗原阴性、无病毒血症。结论通过输全血方式可以感染兔,并引起急性或慢性HEV感染。

动物实验管理系统的特点分析

随着现代办公方式的改变,信息化,无纸化办公成为一种趋势,相应的管理平台、管理系统也随之应运而生。本文主要通过对中国食品药品检定研究院的动物实验管理系统具体功能的叙述,讨论网络化,平台化办公方式的特点。

玉米芯垫料替代刨花垫料后动物的换窝频度

本研究目的在于考察不同材质的动物垫料对动物排泄物的吸收程度,为采用玉米芯垫料取代传统刨花垫料后,在动物管理中设计垫料更换频度提供参考数据。研究选用初始均重分别约500 g(n=72)和200 g(n=24)的2批次SD大鼠及1批均重约35 g(n=24)的BALB/C小鼠,在动物笼具内动物数量及铺垫垫料厚度不同时,通过测定动物笼具内氨浓度值、垫料吸湿性能、垫料和动物皮毛洁净度评分等参数对两种垫料进行评估。结果表明,在使用相同体积(厚度)垫料的情况下,玉米芯垫料可以获得比柳木刨花垫料更好的吸水和氨吸附能力,从而可以减少垫料更换频率。

一种新型干养式兔笼架具的特点分析

实验动物是生命科学研究和发展重要的基础和支撑条件,对医学发展和人类健康具有十分重要的意义。实验兔是由遗传背景明确、来源清楚的家兔经人工饲养、繁育,并对其携带的微生物及寄生虫进行控制培育而成。实验兔广泛应用于科学研究、教学、生产、鉴定和其他科学实验。笼架具为实验兔提供了生存的空间,本文主要从实验兔饲养管理、福利伦理以及笼架具的工艺设计等方面对一款新型干养式兔笼架具的特点进行分析。