一株具有多种毒力基因的粪肠球菌噬菌体的研究分析

以之前分离出的奶牛乳房炎源粪肠球菌SL22为宿主菌,从临床型乳房炎乳样中分离纯化噬菌体,对其进行生物学特性分析、小鼠治疗试验及毒力基因与耐药基因检测。结果分离到1株噬菌体,该噬菌体形成的噬菌斑如针尖状,电镜下发现该噬菌体无尾,头部呈对称多面体,直径约66 nm,将其命名为vB_Eco T_PSL22(简称PSL22);只裂解其宿主菌,核酸类型为dsDNA;最佳感染复数为0.1,裂解量约为52 PFU/cell;在p H4.0~12.0时活性稳定,能耐受60℃左右高温。对小鼠治愈率为33.33%(2/6),含有2个耐药基因(Acc和aac(3)-Ⅳ)和4种毒力基因(gelE、cylA、ace和efaA)。通过本次试验,可为临床型乳房炎奶牛乳房中噬菌体的多样性研究提供参考,也可为研究奶牛乳房中的微生态系统提供依据。

奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了了解新疆石河子地区奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌的耐药表型及耐药基因携带情况,试验对采自石河子地区2个规模化奶牛场患乳房炎奶牛的乳样进行细菌分离,使用种特异性引物对分离株进行鉴定,并采用纸片琼脂扩散法、最小抑菌浓度(MIC)测定法和PCR方法对分离得到的金黄色葡萄球菌的耐药表型和耐药基因进行检测。结果表明:从患乳房炎奶牛的138份乳样中共分离出74株金黄色葡萄球菌,镜检为阳性球菌,经PCR扩增确定为金黄色葡萄球菌,分离率为53.62%(74/138)。所有分离株均有不同程度的耐药性,对万古霉素、甲氧西林、磺胺甲口恶唑、林可霉素、青霉素、恩诺沙星的耐药率分别为97.30%、82.43%、79.73%、71.62%、67.57%、67.57%,其他9种药物的耐药率为16.22%~59.46%;对庆大霉素和多西环素两种药物的敏感性较高,分别为52.70%、74.32%。耐3种及以上抗生素的菌株占90.54%,耐9种及以上抗生素的菌株占56.75%,其中1个分离株对所有检测的抗生素均耐受。74株分离株中共检测到blaZ、linA、ermB、aacA-aphD、aac6-aph2、aph(3′)-a和tetM 7种耐药基因,其中氨基糖苷类耐药基因aacA-aphD检出率最高,为8.10%,其余耐药基因的检出率在2.70%~4.05%之间。说明新疆石河子地区奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌普遍耐药,且多重耐药现象较为严重,建议临床上根据药敏试验结果科学治疗奶牛乳房炎。

1株羊源多重耐药肺炎克雷伯菌噬菌体的生物学特性及全基因组分析

【目的】多重耐药病原菌的出现对公共卫生安全构成严重威胁,本试验拟对1株羊源多重耐药肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体进行生物学特性和基因组特征分析,为寻找可用于防治肺炎克雷伯菌感染的噬菌体制剂提供参考。【方法】以羊源多重耐药肺炎克雷伯菌分离株YH-2为宿主菌,采用双层琼脂平板法从粪污样品中分离纯化噬菌体,通过透射电镜观察其形态;测定噬菌体宿主谱、最佳感染复数(MOI)、一步生长曲线、热稳定性、酸碱耐受性等生物学特性;基于全基因组测序对其基因组特点进行分析。【结果】试验成功分离到1株肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体,命名为vB_KpnP_PYH-2(简称PYH-2),电镜观察发现PYH-2属于短尾噬菌体科,其噬菌斑中心透亮,周围有晕圈。随着培养时间的延长,晕圈会向四周扩散。噬菌体PYH-2不仅可以裂解1株羊源肺炎克雷伯菌,还能裂解5株奶牛乳房炎源肺炎克雷伯菌。噬菌体PYH-2的最佳MOI为0.001,潜伏期为15 min,爆发期为10 min,裂解量为63 PFU/cell;在40~50℃和pH 4.0~12.0的环境下均能保持稳定活性。噬菌PYH-2基因组全长45958 bp,GC含量为51.86%,不含耐药基因及毒力基因;全基因组中包含52个开发阅读框(ORFs),只有21个为已知功能基因,其中尾部相关蛋白有6个。【结论】本研究分离到1株潜伏期短、生物特性稳定、能高效杀菌的噬菌体,可作为裂解动物源肺炎克雷伯菌的噬菌体候选毒株,为噬菌体防治多重耐药性肺炎克雷伯菌感染奠定了基础。

一株裂解性鸡白痢沙门氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析

为了分离一株裂解性鸡白痢沙门氏菌噬菌体,对抗多重耐药细菌,试验从健康鸡粪便中分离富集噬菌体,采用双层琼脂平板法纯化、增殖,超速离心法浓缩,利用透射电镜观察噬菌体形态,通过提取噬菌体基因组、酶切、电泳确定核酸类型,同时测定噬菌体的宿主谱、最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱及热稳定性等生物学特性。结果表明:从鸡粪中分离得到1株裂解性噬菌体,命名为PSP2-22。该噬菌体头部直径为(60±5)nm,尾部长为(130±5)nm,为长尾噬菌体科;核酸类型为双链DNA。该噬菌体不仅能裂解鸡白痢沙门氏菌,还可裂解鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌;最佳感染复数为0.1;平均裂解量约为136 pfu/cell,效价最高可达9.83 lg pfu/mL;在pH值6~11时相对稳定,70℃作用60 min之后仍具有一定活性。说明噬菌体PSP2-22是一株对不同温度和pH值有较强适应能力的双链DNA噬菌体,宿主谱相对较宽,具有潜在的应用价值。

一株致病性临床型乳房炎源粪肠球菌SL22的分离与鉴定

为了解北疆某规模化奶牛场临床型乳房炎源粪肠球菌的耐药与毒力情况,采集了47份临床型乳房炎乳样进行细菌分离,通过生化鉴定及16S rRNA对粪肠球菌进行鉴定,进行了药敏试验及33种耐药基因检测,了解其耐药情况;通过小鼠LD50、病变观察及6种毒力基因检测,了解其致病性。分离鉴定出了1株粪肠球菌,命名为SL22;遗传进化树构建中,与粪肠球菌菌株MD48、MD60(GenBank登录号分别为MW5784.17.1、MW5784.16.1)同源性为92.00%;在哥伦比亚血平板上具有溶血现象,为α溶血;在耐药情况检测中,SL22对青霉素G、杆菌肽耐药,对万古霉素等药物敏感,含有4种耐药基因(qnrD、floR、aac(6’)-lb-cr、int I 1);在毒力测定中,SL22对小鼠的LD50约为1.6×10^(9)CFU/只,死亡小鼠肝脏、小肠出血明显,且含有4种毒力基因(gelE、cylA、ace、efaA)。本试验为奶牛乳房粪肠球菌感染的防治提供了参考。

一株奶牛乳房炎源链球菌噬菌体P27的分离及生物学特性分析

本试验旨在分离奶牛乳房炎源链球菌裂解性噬菌体,并对其进行生物学特性测定及比对分析。以实验室保存的奶牛乳房炎源链球菌为宿主菌,从新疆石河子地区奶牛场粪便、污水及奶牛饮用水中分离纯化裂解性噬菌体。利用双层琼脂平板法测定其裂解能力、最佳MOI、一步生长曲线的变化、热稳定性、酸碱耐受性等,并对结果进行比对分析。本试验中分离纯化出了1株裂解性噬菌体。使用透射电子显微镜观察P27其头部长约76.2 nm,尾长约153.1 nm,为常见的肌尾噬菌体,将其命名为vB_SMC_P27(简称P27)。P27最佳MOI为10℃、60℃下50 min活性丧失;在pH4.0~12.0时,噬菌体P27活性未有明显下降;裂解量约为156 PFU/cell,潜伏期约为15 min,爆发期约为140 min。其对奶牛乳房炎源链球菌的裂解率为33.33%(6/18)。P27裂解效果较好,增殖迅速,在生产中具有防治奶牛乳房炎源耐药链球菌的潜力。

新疆部分地区鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

鸡大肠杆菌病是一种常见多发病，是由鸡致病性大肠杆菌引起的局部或全身性疾病，临床上表现为多种病型，包括大肠杆菌性败血症、气囊炎、肉芽肿、蜂窝织炎、输卵管炎等。常见感染途径是蛋、呼吸道和口腔。

新疆石河子地区奶牛乳房炎链球菌的分离鉴定及药敏试验

旨在调查新疆石河子地区奶牛乳房炎源链球菌的耐药状况,以提高药物治疗效果,减少牛乳中的药物残留提供依据。通过培养特性、染色特点、形态观察、生化试验分离纯化并鉴定出10株链球菌。10株链球菌对氨苄青霉素、氟苯尼考高度敏感,而对链霉素、呋喃唑酮则表现出明显的耐药性,耐药率分别为50%、80%;耐药谱型表现为最多的菌株耐8种药物。

新疆石河子地区奶牛乳房炎大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

本试验旨在调查新疆石河子地区奶牛乳房炎源大肠杆菌的某些生物学特性及其耐药状况,以提高药物疗效,减少牛奶中药物的残留。试验从新疆石河子地区患乳房炎奶牛的乳样中分离纯化并鉴定出21株大肠杆菌,并对大肠杆菌分离株进行抗菌药物敏感性分析。结果表明,21株大肠杆菌对21种抗菌药物中的6种药物耐药率超过50%,其中最多的耐药15种,最少的耐药5种,耐药6及6种以上的菌株共占到76.19%。提示,该地区奶牛乳房炎源大肠杆菌对多种药物已产生了不同程度的耐药性,且存在严重的多重耐药情况。

一株鸡源致病性大肠杆菌噬菌体的分离及其生物学特性

目前,在鸡业发展过程中,大肠杆菌病是一种较为常见高发病,常造成鸡局部或全身性感染[1-2].大肠杆菌病是一种条件致病菌,差的卫生条件、不良的卫生管理,很容易造成大肠杆菌病的发生.随着养鸡业规模化、集约化的不断发展,大肠杆菌病越发严重,病原对抗生素和抗菌药的耐药性越来越强.为了防治鸡大肠杆菌病,饲养主大多采用饲喂抗生素或抗菌药物的方法,但普遍存在耐药性和用药成本升高等问题.同时,由于长期使用抗生素或抗菌药,使产品存在药物残留,导致产品品质下降,很难满足人们对绿色健康养殖的要求.

新疆石河子地区对猪圆环病毒2型抗体水平的检测与分析

为了解新疆石河子周边猪场猪圆环病毒2型(PCV)免疫抗体整体水平,并制定合理有效的免疫程序,采集石河子周边13个养殖场共726份猪的血清,采用间接ELISA(酶联免疫吸附试验)试剂盒进行分析。检测结果表明,整体猪群阳性率整体水平为98.08%,猪场的抗体水平均在80%以上,抗体水平为100%的猪场占猪场总数的61.54%。同时,种公猪、母猪、育肥猪、种公猪的抗体的整体水平均达到95%以上,而育肥猪抗体水平最低,为95.15%。该结果能够进一步了解石河子周边地区猪场圆环病毒抗体的免疫整体水平,为制定合理的治疗措施和免疫程序提供参考。

一株鸡大肠埃希氏菌裂解性噬菌体的分离与生物学特性分析

旨在为鸡大肠埃希氏菌病防治提供噬菌体材料。使用双层琼脂平板法从鸡场污水中分离纯化得到1株鸡埃希氏菌裂解性噬菌体vB-EcoM-IME540(IME540),并通过噬菌斑、透射电镜观察该噬菌体的噬菌斑和形态特征,测定其最佳感染复数、耐热稳定性、pH敏感性等生物学特性,并对其进行全基因组测序及进化分析。结果表明,噬菌体vB-EcoM-IME540的噬菌斑呈透亮的圆形,直径0.8 mm~1.1 mm,边缘整齐无晕环,裂解谱较窄(3/45);透射电镜下其头部呈椭圆形且具有收缩尾与尾丝,头尾被颈圈分开,头大小约106.7 nm×73.3 nm,尾长约140 nm×16.7 nm;全基因组大小为170237 bp,G+C为39.46%;基因序列与大肠埃希氏菌噬菌体Bp7的相似性为97.44%;最佳MOI=0.000001,潜伏期约为20 min,暴发时长约为130 min,裂解量约为23 PFU/cell;在80℃条件下20 min活性全部丧失;在pH为4.0~13.0内均有很高的活性。说明噬菌体vB-EcoM-IME540是一株具有一定耐热、耐酸碱能力的肌尾科的大肠埃希氏菌裂解性噬菌体。

新疆石河子地区奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

为调查新疆石河子地区奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌的药物敏感性状况,提高药物治疗效果,本试验通过细菌培养特性、染色特点、形态观察、生化试验鉴定出25株金黄色葡萄球菌并对其进行了耐药性分析。结果显示,25株金黄色葡萄球菌对阿莫西林、杆菌肽、复方新诺明的耐药率均在80%以上,对氟苯尼考和林可霉素却高度敏感,分别为100%和92%;耐药谱型表现为最多的菌株耐9种药物,最少的耐药3种。试验结果表明,该地区奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌对多种药物存在着严重的多重耐药情况。

奶牛乳房炎防治的研究进展

奶牛乳房炎作为奶牛较为常见且影响较大的一种疾病,给畜牧业与食品业带来了严重的经济损失。传统的抗生素治疗方法因其在临床上容易出现广谱耐药和药物残留等问题受到广泛争议。所以,探索新型的治疗方案迫在眉睫。以中草药制剂、疫苗等为代表的生物制剂因具有较多的优点而被人们广泛关注。本文作者基于前人的研究成果,阐述了奶牛乳房炎的新型治疗方法,为进一步研究奶牛乳房炎的治疗提供一定的参考与帮助。

新疆石河子地区猪场呼吸与繁殖障碍综合征免疫抗体水平检测与分析

为了解新疆石河子地区猪呼吸与繁殖障碍综合征(PRRS)免疫抗体水平及其消长的规律,采集周边不同地区13个猪场共726份血清,采用间接ELISA方法检测PRRS免疫抗体水平并进行分析。结果显示,该地区PRRS免疫抗体阳性率平均为87.33%,免疫抗体阳性率超过80%的猪场占全部猪场的76.92%,同时,母猪、种公猪、育肥猪免疫抗体的整体水平均超过85%,而仔猪的免疫抗体水平较低,仅为71.11%。结果表明当地应用的PRRS疫苗的免疫原性较好,免疫效果确实;仔猪免疫抗体水平较低的具体原因尚不清楚。该结果可为进一步了解石河子周边地区猪场PRRS免疫抗体的现状,制定合理的治疗措施和免疫程序提供参考。

一株奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌短尾噬菌体的分离及其生物学特性分析

以实验室保存的奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌为宿主菌,从新疆石河子地区奶牛场粪便和污水中分离纯化裂解性噬菌体,并对其生物学特性进行分析,为奶牛乳房炎的噬菌体防治提供材料,并通过噬菌斑、透射电子显微镜观察,测定其最佳感染复数、噬菌谱、热稳定性、pH稳定性、生长曲线等特性进行分析。结果显示:分离到1株裂解性噬菌体P42,噬菌斑呈透亮无晕环的圆形,透射电镜观察形态为短尾噬菌体;目前此噬菌体只能裂解其宿主菌,最佳感染复数为0.001;60℃20 min时活性丧失,且在pH4.0~9.0时,噬菌体P42的活性没有明显的变化;感染宿主菌的潜伏期是10 min,暴发期为140 min,裂解量约为126 PFU/cell。本研究分离筛选到的噬菌体P42是一株裂解性短尾科噬菌体,其裂解效果较好,繁殖迅速,为奶牛乳房炎的噬菌体防治及其制剂的研发提供了参考。

奶牛乳房炎源大肠埃希氏菌噬菌体的分离与生物学特性分析

以实验室保存的奶牛乳房炎源大肠埃希氏菌为宿主菌,从石河子大学试验站奶牛圈舍内的污水中分离纯化到一株大肠埃希氏菌噬菌体,对其进行生物学特性分析。利用双层琼脂平板法分离纯化噬菌体,对噬菌体进行噬菌斑及电镜观察,测定其裂解率、核酸类型、最佳感染复数、一步生长曲线、热稳定性和酸碱稳定性。结果表明,该噬菌体形成的噬菌斑透亮、近似圆形,直径约2.2 mm~2.4 mm;电镜观察发现该噬菌体的头部大小约63.4 nm×65.2 nm,尾部大小约114.4 nm×18.6 nm,形态与肌尾噬菌体相似,将其命名为vB-EcoC-P17(简称P17);其对大肠埃希氏菌的裂解率为30.00%(6/20),核酸类型为dsDNA;最佳感染复数为0.1,裂解量约为17PFU/cell,暴发期约130 min;在pH5.0~11.0时活性稳定,能耐受60℃左右高温。表明噬菌体P17是一株对不同温度、不同酸碱性环境有较强适应能力的裂解性肌尾科大肠埃希氏菌噬菌体,为奶牛乳房炎的噬菌体防治提供了生物学材料。

奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌噬菌体P82的分离及特性研究

【目的】为开发噬菌体“鸡尾酒”制剂防治奶牛乳腺炎提供生物学材料。【方法】以实验室分离的奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌82为宿主菌,通过点滴法和双层平板法在奶牛场的污水、弃奶和粪便混合物中分离并纯化其噬菌体,通过噬菌斑及透射电子显微镜对该株噬菌体的形态特征进行观察。利用核酸酶处理分析该噬菌体核酸类型,并对其裂解谱、最佳感染复数、一步生长曲线、热稳定性、pH稳定性进行研究。【结果】分离筛选出金黄色葡萄球菌82的裂解性噬菌体P82,电镜下观察其头部为二十面体,大小约为120 nm×83 nm,有一条带可伸缩尾鞘的长尾,长约126 nm,属于有尾噬菌体目,肌尾噬菌体科。通过琼脂糖凝胶电泳鉴定其核酸类型为双链DNA(dsDNA)。噬菌体P82的最佳感染复数为0.001,对奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌裂解率为36.51%(23/63),宿主谱较广;其生长潜伏期约为25 min,爆发期约为45 min,裂解量约为74 PFU/cell;在pH 4.0~12.0时活性稳定,在pH 2.0和13.0时则完全失去活性。噬菌体P82热稳定性较高,在70℃作用60 min后仍有裂解能力,在80℃作用40 min时则失去裂解能力。【结论】本研究分离的噬菌体P82效价较高、裂解能力强、增殖速度快、噬菌谱广,对不同温度和pH均有较好的耐受度,能作为专一性裂解奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌的噬菌体候选株,可与其他噬菌体混合制成噬菌体“鸡尾酒”制剂用于防治奶牛乳腺炎,为奶牛乳腺炎的噬菌体疗法提供材料。

1株羊源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

为了确定和分析新疆某羊场患呼吸道疾病病例的细菌性病原,采集病死羊的肺脏、胸腔积液等样品进行细菌分离,通过生化试验、16S rRNA基因测序、特异性引物PCR鉴定、药物敏感性试验、毒力基因测定、对小鼠半数致死量(LD_(50))测定等方法对分离株进行生物学特性研究。结果显示,从病羊胸腔积液中分离鉴定出一株荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌,将其命名为Pmh7。Pmh7对链霉素、头孢呋辛等10种抗菌药物敏感,对万古霉素、杆菌肽等5种抗菌药物耐药;携带6个毒力基因(fimA、nanB、ompH、sodC、Oma87、sodA),对小鼠的LD_(50)为2.3×10^(6)CFU。结果表明,引发该羊场呼吸系统疾病的病原为荚膜D型多杀性巴氏杆菌,有较强的致病性。本研究结果可为防治羊巴氏杆菌病提供参考,为巴氏杆菌病的流行病学监测奠定基础。

基于宏基因组学的新疆牧场牛潜在人兽共患病原菌调查

目的调查新疆牧场规模化养殖牛携带的细菌多样性以及潜在细菌性人兽共患病致病菌种类,为牛规模化养殖过程中人兽共患病的防治提供科学依据。方法选取新疆地区规模化养殖牧场牛群,同时采集牛鼻咽拭子和牛肛拭子样品,提取全基因组DNA进行宏基因组分析。采用宏基因组二代测序,采用比对Minikrakenv2数据库及生物信息学方法,对该地区牛携带的微生物菌群及其潜在病原菌种类进行分析。结果宏基因组检测结果显示,所有牛样品中微生物菌群均以细菌为主。不同类别牛样品比较发现,牛肛拭子样品和牛鼻咽拭子样品均以厚壁菌门、放线菌门、变形菌门和拟杆菌门占主导地位,但两种类别牛样品的优势菌属各不相同,两者共有的优势菌属为异壁放线菌菌属和芽孢杆菌属。样品中共发现蜡样芽孢杆菌、大肠杆菌、猪链球菌、肺炎链球菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯氏菌、空肠弯曲杆菌、化脓性链球菌和多杀巴斯德杆菌等9种人兽共患病原菌,其中大部分都是食源性细菌性致病菌。PCoA和ANOSIM生物信息学分析结果表明,两组样品、两个地区牛携带的细菌群落多样性以及潜在的人兽共患病原菌之间的差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论新疆地区规模化养殖牧场牛鼻咽拭子和牛肛拭子样品携带的细菌结构均呈现较丰富的多样性,并检出了以食源性传播为主的人兽共患病原菌,存在一定的食品安全和疾病传播隐患。