乙型肝炎病毒S基因插入和点突变株感染及其血清学特征

为探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染血清学不典型表现的分子病毒学基础，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物直接序列分析测定中国人感染的ＨＢＶＳ基因核背酸序列。结果发现：１５例ＨＢｓＡｇ阴性ＨＢＶ感染者中，１例第５５２位碱基胸腺嘧啶（Ｔ）被胞嘧啶（Ｃ）替换，导致ＨＢｓＡｇ第１３３位蛋氨酸被苏氨酸替代；３例第５４６位碱基Ｃ被Ｔ替换，导致ＨＢｓＡｇ第１３１位苏氨酸异亮氨酸替代；３例“Ａ”决定簇前密码子１２２～１２４间氨基酸插入。１例ＨＢｓＡｇ／抗ＨＢｓ共存个例可见ＨＢＶ第５８７位碱基鸟嘌呤（Ｇ）被腺嘌呤（Ａ）替换，导致ＨＢｓＡｇ第１４５位甘氨酸被精氨酸替代。结果说明ＨＢＶ感染血清学的不典型可能与感染ＨＢＶＳ基因插入和点突变变异株有关。研究同时提示：在中国这一ＨＢＶ感染高发区，血清学诊断的所谓的“非甲～戊”型肝炎中至少有部分病人为感染了ＨＢＶ变异株所致。

聚合酶链反应对输血后丙型肝炎的诊断研究

为研究丙型肝炎病毒血症的诊断,以三组与病毒不同区段互补的引物进行反转录巢式聚合酶链反应检测输血后肝炎17例(急性期14例)。按日本毒株的引物检出35％,按非编码区序列的引物检出76％的HCV RNA,两组引物共检出94％,而按Chiron原型的引物检测6例均阴性。HCV多变异,且血清水平极低,用几组不同保守区段的引物,进行巢式PCR,可以获得较高的检出率。

原位杂交研究慢性乙型肝炎病毒感染者肝组织内HBV DNA清除模式

用地高辛素探针原位杂交技术研究52例慢性HBV感染者肝内HBV DNA分布,发现在病毒高复制期,HBV DNA阳性肝细胞以弥漫性分布为主,肝细胞HBV DNA表型为胞浆型和核型,在病毒低复制期肝内HBV DNA阳性肝细胞以小叶聚集分布为主,多分布于灶性坏死和碎片状坏死区,在病毒非复制期,HBV DNA阳性肝细胞以局灶性分布为主,表型多为包涵体型和核型。提示在漫长的HBV感染过程中,肝内HBV DNA阳性肝细胞的分布经历弥漫性—小叶聚集性—局灶性的演变过程,该过程反映肝组织内HBV的清除模式。HBeAg(+)的慢性HBV无症状感染者肝组织病变轻可能是由于HBV DNA易装配为完整的病毒排出肝细胞的结果。说明免疫活性细胞攻击的靶细胞主要是含有HBV DNA的肝细胞。

乙型肝炎病毒标志物:不典型的血清学表现的分析

血清标志物是临床对乙型肝炎病毒(HBV)感染的检测常规方法,但有时出现一些不常见或不典型的结果,难以合理解释或导致错误解释。出现这种情况,目前多由于国内某些试剂盒的质量问题。这在临床工作中引起了不少麻烦。

错配PCR限制片段长度多态性分析：检测HBV前C区A＿（83）点突变

为建立一种简易的检测ＨＢＶ前Ｃ区Ａ８３点突变的方法，设计了一种针对Ａ８３变异株的错配引物，通过ＰＣＲ，可在Ａ８３变异株的扩增产物中引入一个ＢＳＵ３６Ｉ限制酶位点，将扩增产物（１０２ｂｐ）用该酶消化，含变异者显示８２ｂｐ的酶切片段，以此判定的变异与测序结果一致。用本法检测了慢性乙型肝炎１２例和随访ＨＢｅ血清转换者５例，结果表明前Ｃ区Ａ８３变异与病变发展一致。

乙肝病毒复制是慢性肝病活动的直接原因

聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测４８例ＨＢｓＡｇ（＋），抗ＨＢｅ（＋）慢性肝病患者血清ＨＢＶＤＮＡ，３８例阳性，１０例阴性．１０例ＰＣＲ阴性产物用狄高辛素标记探针进行斑点杂交，又检出６例ＨＢＶＤＮＡ阳性，ＨＢＶＤＮＡ总阳性率为９２％，ＨＢＶＤＮＡ阳性患者丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）水平均增高，而阴性患者ＡＬＴ在正常水平。结果表明，此类病人体内存在ＨＢＶ复制，导致病变持续活动甚至加重。

一例中国重型肝炎病人乙型肝炎病毒基因组全序列的测定

用聚合酶链反应（PCR）产物直接和克隆后序列分析，测定1例重型肝炎病人感染的HBV变异毒株全基因组序列，该毒株长3221个碱基，为adw亚型，与同一地区HfuAg阳性无症状携带者感染的adw亚型全序列比较，有35个罕见和独特的核着酸改变，导致27个氨基酸替代，其中前C和C基因变异最多，这一毒株在多种调节序列，包括启动子SPI、SP11、XP、增强子ENI和EN11，也存在变异。但并无日本毒株的X区和ENHll－CP的聚集变异。结果说明我国重肝HBV毒株有独特的变异特点。

重型肝炎病人的乙肝病毒前C基因变异研究

对１１例重型肝炎病人乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ直接序列进行分析以阐述变异特点。一次或套式ＰＣＲ扩增到的ＨＢＶＤＮＡ，以不对称ＰＣＲ法制备成单链模板后直接作序列分析。结果１１个病例中，９例有１～２个氨基酸替代变异：Ｇ１８９６→Ａ的替代，产生一个终止密码，见于１例抗－ＨＢｅ阳性的病人，第１７位（ＡＡ１７）缬氨酸被苯丙氨酸替代，见于１例ＨＢｅＡｇ阴性的病人，ＡＡ１５和ＡＡ２９的丝氨酸替代变异见于２例ＨＢｅＡｇ阴性、ＨＢＶ含量甚低的病例，１８５８Ｃ→Ｔ替代见于４例病人，与ＨＢｅＡｇ表型无关，无一伴有终２８变异，呈相互排斥现象。说明重型肝炎病人的ＨＢＶ前Ｃ基因存在多种变异类型。这些变异点只见于１～２例病人，似乎不是引发重型肝炎的重要原因。

慢性无症状乙型肝炎病毒携带——感染的持续和低落

按感染状态和肝组织学将慢性无症状HBV携带者261例分为三组,可能代表自然史的三个阶段。初期肝细胞膜HLA-I表达微弱,难以引起T细胞充分的细胞毒效应以清除病毒,免疫耐受容忍稳定的高复制状态。在自发活动期,坏死-炎症较轻微,HBeAg血清转换缓慢,临床过程平静。后期有低水平的免疫清除,在HBsAg清除的8例中有5例肝内仍残留HBV DNA。

慢性病毒性肝炎:临床病理学认识的发展

1968年提出的慢性肝炎分类,应用了20余年几乎没有修订。这一分类将组织学表现与预后相联系:慢性持续性肝炎(CPH)以门管炎为特征,认为预后良好;慢性活动性肝炎(CAH)必定有碎屑样坏死,门管炎侵及邻近肝实质,可有纤维形成。

丙型肝炎病毒的亚型及其可能含义

<正> 丙型肝炎病毒(HCV)的全核苷酸序列已经阐明,不同地区的分寓株只有68.1～~91.8％的核苷酸相同,提示存在不同的亚型。HCV基因型可能与致病性、传染性、抗病毒治疗的应答和地区聚集有关。 HCV的不同亚型基于全基因组序列的变异。经不同分离株部分区段序列的对比分析,发现一些区段核苷酸的变异亦能代表HCV的不同亚型。而这些变异,可分析聚合酶链反应(PCR)产物检出,这样才有可能对较大数量的病例进行临床研究。

家庭内乙型肝炎病毒变异株感染的分子病毒学调查

为分析乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）家庭内聚集感染病例的ＨＢＶ变异特点，我们对１０个家庭２５例ＨＢＶ感染者进行了分子病毒学研究，均用单链构型多态性分析（ＳＳＣＰ）ＨＢＶ外膜基因“ａ”决定簇片段的变异，ＰＣＲ－限制性片断长度多态性分析，分析ＨＢＶ前Ｃ区终码变异。结果与用聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物直接序列分析测定的４个家庭有、无ＨＢＶ变异株感染的外膜基因序列和前Ｃ基因序列比较，从分子水平鉴定ＨＢＶ家庭内传播，同时建立了ＳＳＣＰ检测ＨＢＶ免疫逃避变异株的方法。

重型肝炎病人中乙型肝炎病毒C基因变异研究

通过对 1 1例重型肝炎病人中扩增的 HBV DNA直接序列分析 ,研究重型肝炎病人中 HBV C基因的变异及其特点。每个病例的 HBV C基因均有数量不等的变异 ,产生 1～ 1 2个氨基酸替代。慢性重型肝炎病人的 HBV C基因变异明显多于亚急性重型肝炎病人。C基因的变异呈聚集性 ,相对集中于 T淋巴细胞和 B淋巴细胞的抗原识别位点。重型肝炎病人的 HBV C基因有较高的变异率 ,在慢性重型肝炎的病人明显高于亚急性重型肝炎病人 ,变异相对集中于 T淋巴细胞和 B淋巴细胞抗原识别位点 。

中国乙型肝炎病毒毒株X基因／C基因启动子发现热点变异

目的：HBV／X基因存在调控HBV复制的调节序列．X基因变异将影响这些调节序刊功能，研究中国HBV毒株X基因／C基因启动子(BCP)区变异情况。方法：通过对25例中国HBV毒株BCP区测序．推测中国HBV毒株BCP区第2个AT丰富区的一对点突变，核苷酸(nt)1762碱基由A→T和1764碱基由G→A变异可能为热点变异。在此基础上．进一步设计BCP下游反义链错配引物，将点突变附近的一个碱基(nt1767)由A→T，则正好可在BCP变异株中引进一个BclⅠ(T↑GATCA)酶切位点，结合限制性片段长度多态性分析(RFLP)筛检143例中国人感杂的HBV毒株BCP区变异．并与前C区变异比较。结果：114倒血清HBVDNA阳性慢性HBV感染者．BCP区和(或)前C变异者49倒(43％)．BCP变异者37例(32％)。BCP变异无论在HBeAg阳性或阴性慢性肝炎病例的发生率均显著高于HBV无症状感染者。BCP可与前C终码变异共存或单独出现。结论：在中国HBV毒株BCP区存在热点变异。HBV毒株BCP变异可能影响HBV前C基因组mRNA转录，是HBV感染持续和肝病变进展的原因之一。

检测丙型肝炎核心抗体的合成肽酶联免疫试验

为建立一种以酶联免疫试验检测丙型肝炎病毒的核心抗体,按病毒氨基酸序列C区合成一个36-寡肽,将其作为试剂抗原包被固相,以捅获待检血清的相应抗体,以酶标抗入IgG将其检出。输血后非甲非乙肝炎32例检出抗体20例(62.5％),其中发病1个月内的13例中检出8例。特异性由抑制试验确定。17例阳性血清可用聚合酶链反应检出病毒。结果表明,完善这一系统可能发展为试剂盒。

乙型肝炎病毒外膜基因插入变异株及野株的全序列测定和系统树分析

用核酸序列分析技术，测定１例乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阴性中国人感染的乙型肝炎病毒ＨＢＶ／ａｄｗ亚型全基因组序列。该变异株全序列为３２２４个碱基，与从同一地区２例ＨＢｓＡｇ阳性携带者得到的ａｄｗ和ａｄｒ全序列的同源性分别为９８．０％和９２．５％，与已出版的Ａ—Ｅ基因组比较，进行了病毒的系统树分析。该变异毒株除在外膜基因Ａ决定簇前有９个碱基插入外，在多种调控元件，包括启动子ＳＰＩ、ＳＰＩＩ、ＣＰ、ＸＰ、增强子ＥＮＩ和ＥＮＩＩ，均无独特的变异点。

丙型肝炎病毒核酸单引物聚合酶链反应产物的直接序列分析

利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,得到丙型肝炎病毒核酸非编码区引物所引导的扩增片段。用改进的不对称PCR方法,制备单链cDNA,直接作为模板进行序列分析,结果与Takamizawa发表的序列符合。本法简单方便,亦可用于其他类似的研究中。