2007年南京医科大学第一附属医院细菌耐药性监测

目的了解2007年南京医科大学第一附属医院临床分离常见病原菌对常用抗菌药物耐药现状。方法采用纸片扩散法进行抗菌药物敏感性试验,按CLSI 2007年标准判定药敏结果,以WHONET5.4软件分析数据。结果2007年我院共分离细菌4408株菌,其中革兰阳性菌1154株(26.3%),革兰阴性菌2829株(64.2%);前10位病原菌依次为大肠埃希菌(19.4%),铜绿假单胞菌(17.9%),凝固酶阴性葡萄球菌(11.5%),肺炎克伯雷菌(10.4%),白念珠菌及其它酵母(9.1%),金葡菌(6.7%),鲍曼不动杆菌(5.9%),肠球菌(4.2%),肠杆菌属菌(4.1%)和链球菌(3.4%)。MRSA和MRCNS的检出率分别为30.8%和33.0%。未检出万古霉素和替考拉宁耐药的葡萄球菌,但检测到2株对万古霉素、替考拉宁均耐药的粪肠球菌和2株对万古霉素、替考拉宁均耐药的屎肠球菌;大肠埃希菌、克雷伯菌中产ESBLs检出率分别为32.8%、22.6%;分离到21株(2.7%)泛耐药的铜绿假单胞菌(只对多黏菌素敏感)和17株(6.5%)泛耐药的鲍曼不动杆菌。结论我院细菌耐药状况较为严重,进行细菌耐药性监测有助于了解我院细菌耐药性变迁,为临床经验用药提供理论依据。

美罗培南和亚胺培南-西司他丁对100株革兰阴性杆菌体外抗菌活性比较

目的了解革兰阴性杆菌对美罗培南的敏感性。方法用肉汤稀释法测定美罗培南对临床分离的100株革兰阴性杆菌的最低抑菌浓度（MIC），并与亚胺培南-西司他丁进行比较。结果美罗培南对100株革兰阴性杆菌的MIC50和MIC90值仅为亚胺培南-西司他丁的1／5-1／2。特别是对铜绿假单胞菌，美罗培南对铜绿假单胞菌MIC50为1mg／L，而亚胺培南-西司他丁MIC50为4mg／L。两者的敏感率分别是90％和50％。结论美罗培南对革兰阴性杆菌的抗菌活性明显优于亚胺培南-西司他丁。

Rosco纸片扩散法在酵母菌体外药敏试验中的应用

目的:Rosco纸片扩散法在酵母样真菌药敏试验中的临床应用评价。方法:应用Rosco纸片扩散法和美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)M27-A宏量肉汤稀释法测定临床分离的110株不同酵母样真菌菌株对氟康唑、两性霉素B、伊曲康唑的药敏情况,并以3株酵母菌株作质量控制。结果:两种方法完全符合率是92.6%,未出现一种方法测得的敏感或耐药菌株,在用另一种方法检测中为耐药或敏感的严重错误。结论:Rosco纸片扩散法可以代替NCCLSM-27A宏量肉汤稀释法在临床推广使用。

随机引物扩增多态性DNA技术在大肠埃希菌分型中的应用

目的:应用随机引物扩增多态性DNA(RAPD)技术分析大肠埃希菌DNA多态性,并对其进行分型,观察敏感株、耐药株基因型之间的关系。方法:利用蛋白酶K、酚-氯仿抽提DNA模板,应用一对随机引物建立RAPD的检测分析方法,并对12株敏感型、15株耐药型(ESBLs)大肠埃希菌进行基因分析。结果:12株敏感型有8种基因型;15株耐药型中有12种基因型。27株大肠埃希菌在250bp处有共同条带;15株耐药型在1200 bp处有共同条带,而敏感型则没有。结论:大肠埃希菌属间有特异性共同条带;耐药菌株中存在共同的特异性条带,与耐药性有关。因此,大肠埃希菌对β-内酰胺类耐药,可利用RAPD基因分型技术进行鉴定。

产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌科对头孢美唑等抗菌药物的体外敏感性分析

目的比较头孢美唑等12种β-内酰胺类药物对产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形菌的体外抗菌活性。方法收集2005—2006年全国15所教学医院产ESBLs非重复的528株大肠埃希菌、311株肺炎克雷伯菌和15株奇异变形菌，通过琼脂稀释法测定12种抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC），数据输入WHONET5．4软件进行耐药性分析。结果对于产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，碳青酶烯类敏感率最高（100．0％），头霉素类次之（80．1％～97．3％）；哌拉西林／他唑巴坦活性（78．5％～95．1％）高于头孢哌酮／舒巴坦（44．1％～56．2％）；头孢他啶对产ESBLs大肠埃希菌的活性要明显高于其他三代头孢菌素和头孢吡肟，但对于产ESBLs肺炎克雷伯菌，这种差距缩小，头孢呋辛敏感率〈1．6％；产ESBLs的奇异变形菌对碳青酶烯类、头霉素类和俨内酰胺类加酶抑制剂的药物均为100．0％敏感，而对头孢菌素的敏感性低。结论碳青酶烯类、头霉素类对产ESBLs的肠杆菌科保持了较高的抗菌活性。

中国7所教学医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子流行病学及耐药性研究

目的调查2007年中国7所教学医院耐甲氧西林金葡菌(MRSA)的分子流行病学分布及耐药性特征。方法采用多位点序列分型(MLST)和葡萄球菌蛋白A基因(spa)分型技术对114株MRSA进行分子流行病学研究,并进行Panton-Valentine毒素(PVL)编码基因lukS检测,采用琼脂稀释法进行13种抗菌药物的药敏试验。结果 114株MRSA中共发现8种MLST-spa分子克隆型,ST239-t030、ST239-t037和ST5-t002是主要的型别,分别占总数的41.2%、28.8%和21.9%。仅有1株MRSA检测到lukS基因阳性。MRSA菌株最敏感的抗菌药物为万古霉素与替考拉宁(100%),甲氧苄啶-磺胺甲口恶唑次之(86.8%);主要的分子克隆型ST239-t030、ST239-t037和ST5-t002菌株具有相似的药敏谱,但所有甲氧苄啶-磺胺甲口恶唑耐药菌株均属于ST239-t037。结论在中国MRSA的流行株由数种主要的分子克隆型引起,与周边国家和地区的情况基本一致。

女性阴道微生态变化与年龄、妊娠及4种阴道疾病关系的探讨

目的:研究年龄、妊娠及4种阴道疾病对阴道pH和阴道乳酸杆菌分布的影响。方法:检测212例不同年龄段正常女性,150例不同孕期妊娠女性,50例念珠菌性阴道炎、细菌性阴道病,26例滴虫性阴道炎,28例老年性阴道炎女性阴道pH和阴道乳酸杆菌分布。结果:在21￣60岁的年龄段,随着年龄的增长,阴道平均pH值升高,阴道乳酸杆菌检出率下降;妊娠期阴道pH明显降低(P<0.01),阴道乳酸杆菌检出率和21￣30年龄段组相比无明显差异(P>0.05);念珠菌性阴道炎,滴虫性阴道炎,细菌性阴道病和老年性阴道炎,阴道乳酸杆菌检出率均低于正常对照组,且阴道乳酸杆菌半定量计数大都集中在+￣++范围中,和正常对照组明显不同,其中老年性阴道炎病人阴道pH值最高,细菌性阴道病病人的阴道乳酸杆菌检出率最低。结论:阴道乳酸杆菌在阴道中的分布受年龄、妊娠及阴道疾病的影响。

2008年南京医科大学第一附属医院细菌及真菌耐药性监测

目的了解2008年我院临床分离病原菌分布及其对常用抗菌药物的耐药性。方法细菌及真菌鉴定采用API系统;细菌药物敏感试验测定采用纸片扩散法(K-B法),根据CLSI2008版判断结果;真菌药物敏感试验测定采用Rosco纸片法,判断标准由Rosco公司提供;WHONET5.4软件进行统计分析。结果 2008年我院共分离出病原菌4972株,其中,革兰阳性菌1106株,占22.2%,革兰阴性菌2475株,占49.8%,真菌1386株,占27.9%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的菌株分别占59.2%和52.7%。葡萄球菌属中甲氧西林耐药株对大多数常用抗菌药物的耐药率显著高于甲氧西林敏感株,未发现对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺的耐药株。肠球菌属中,屎肠球菌和鸟肠球菌对多数抗菌药物的敏感率低于粪肠球菌,3种肠球菌均已出现少数对万古霉素或替考拉宁耐药的菌株。肠杆菌科细菌中大肠埃希菌和克雷伯菌属的ESBLs分离率为59.4%和45.3%,产ESBLs菌株对常用抗菌药物的耐药率高于非产ESBLs菌株。非发酵革兰阴性杆菌对抗菌药物的耐药率均显著高于肠杆菌科细菌。结论细菌耐药性呈增长趋势,白假丝酵母菌的分离率升至第1位,需加强耐药性监测,并采取有效控制措施。

金黄色葡萄球菌超抗原与特应性皮炎及湿疹关系的初步探讨

目的:探讨皮损部位金黄色葡萄球菌(金葡菌)超抗原(SAg)与特应性皮炎(AD)及湿疹(EC)的关系。方法:反向被动乳胶凝集法测定来自91例AD和174例EC患者皮损共123株金葡菌SAg的产生情况,结合患者的严重度指数(EASI)评分、6种不同皮疹的评分以及血清学指标进行分析。结果:AD组皮损处SAg总阳性率(55.4%)及中毒休克综合征毒素(TSST)-1阳性率(21.4%)均高于EC组(37.3%、4.5%)。AD组内金葡菌肠毒素B(SEB)阳性组EASI评分高于SEB阴性组和金葡菌阴性组。EC组SAg产生与EASI评分无关,但SAg阳性组其皲裂评分较高。AD患者血清白介素(IL)-4、γ干扰素(IFN-γ)及总IgE水平与SAg无关,EC患者SAg阳性组血清总IgE水平高于金葡菌阴性组,IL-4和IFN-γ水平与SAg无关。结论:与EC相比,AD与金葡菌SAg的关系更为密切,某些型别SAg分型与AD临床严重度可能有一定联系。

鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物的耐药机制研究

目的探讨鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物的耐药机制。方法收集我院2006年5月—2007年2月不同患者痰培养标本中分离的鲍曼不动杆菌80株,剔除重复菌株用肉汤稀释法测定菌株在环丙沙星、含有不同浓度羟基氰氯苯胺(CCCP)的环丙沙星、亚胺培南-西司他丁的MIC。PCR扩增gyrA基因和parC基因并进行酶切分析,选取部分PCR扩增产物进行测序鉴定。荧光定量PCR方法检测环丙沙星敏感株与耐药株的adeBmRNA表达的相对定量。结果鲍曼不动杆菌对环丙沙星的敏感率为15%,随加入CCCP的浓度增高而增加,并接近亚胺培南的敏感率。PCR限制性片段长度多态性(RFLP)分析显示,58株耐药菌中39株gyrA基因不能被Hinf I酶切,23株praC基因不能被Hinf I酶切,敏感株均能被Hinf I酶切,耐药株中的gyrA和parC基因存在突变。环丙沙星耐药菌株的adeBmRNA表达量明显高于敏感菌株。结论鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物耐药除了与gyrA、praC基因突变有关外,还与主动外排泵基因adeBmRNA过表达有关。

寻常痤疮致病菌的分离及其药敏结果

对１７３例寻常痤疮患者的痤疮内容物进行了需氧菌和厌氧菌的培养、分离和鉴定，并对所分离的致病菌用试管肉汤稀释法进行了ＭＩＣ的测定。共检出致病菌２１７株，其中痤疮丙酸杆菌７１株（占３２．７２％），颗粒丙酸杆菌３９株（１７．９７％），其余为葡萄球菌（１０７株，占４９．３１％）。药敏试验表明，全部分离株对美满霉素均较敏感（ＭＩＣｓ＜４．０ｍｇ／Ｌ），大部分离株对克林霉素敏感（ＭＩＣ５０＜０．５ｍｇ／Ｌ）；对于甲硝唑和替硝唑，这些致病菌均耐药（ＭＩＣｓ＞３２ｍｇ／Ｌ）。

双侧双瓶血培养在临床应用的初步研究

目的探讨双侧双瓶血培养在临床应用的必要性。方法采用全自动血培养仪对2010年4月～2011年4月南京医科大学第一附属医院血液科送检的693份血液标本进行培养,对双侧双瓶、单侧双瓶和单侧单瓶血培养的真阳性率和污染率分别进行统计学分析。结果 308份双侧双瓶标本中,有44份培养出细菌,其中37份为有意义阳性标本,真阳性率为12.0%(37/308),污染率为2.3%(7/308);320份单侧双瓶标本中,阳性标本31份,有意义的阳性标本23份,真阳性率为7.2%(23/320),污染率为2.5%(8/320);65份单侧单瓶标本中,有7份细菌生长,其中4份为凝固酶阴性葡萄球菌生长,真阳性率为4.6%(3/65),污染率为6.2%(4/65)。双侧双瓶血培养真阳性率明显高于单侧双瓶(χ2=4.051,P<0.05)及单侧单瓶,但与后者比较无统计学意义。3种培养方法污染率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论双侧双瓶血培养可提高血培养阳性率,且并不增加污染率。推广双侧双瓶血培养在临床应用有一定价值。

下呼吸道感染病原菌变迁及耐药状况分析

目的:了解下呼吸道感染病原菌的变迁、主要流行病原菌的耐药状况,为临床合理应用抗菌药物提供依据。方法:用WHONET5.3软件统计分析2005～2006年南京医科大学第一附属医院住院患者痰液培养标本及药敏结果。结果:革兰阴性菌占所有非重复阳性标本的51.1%;其次为真菌占33.7%。所有病原菌中,白色念珠菌位居第一,铜绿假单胞菌、不动杆菌属、肺炎克雷伯菌亦较为常见,常见细菌的耐药菌株比例较高。2006年不动杆菌属、大肠埃希菌占所有病原菌比例较2005年明显升高。产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumbeta-lactamase,ESBLs)菌株检出率为8.3%,大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产ESBLs比例在两年间亦有显著性变化,对第三、四代头孢菌素及氟喹诺酮类耐药比例较高。2006年耐甲氧西林葡萄球菌(methicillin-resistantstaphylococcus,MRS)检出率明显高于2005年,占所有葡萄球菌的59%,对大环内酯类、氟喹诺酮类及头孢菌素类呈现高度耐药。结论:目前下呼吸道感染病原菌中多药耐药比例逐年增加,针对产ESBLs菌株建议选用碳青霉烯类,对MRS推荐用万古霉素。

大蒜素联合不同药物对多重耐药鲍曼不动杆菌的体外抗菌作用

目的评价大蒜素单用及其联合亚胺培南或头孢哌酮/舒巴坦对多耐药鲍曼不动杆菌的体外抗菌作用。方法用微量肉汤稀释法,分别测定大蒜素、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦对30株多耐药鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度(MIC);同时测定大蒜素与亚胺培南、大蒜素与头孢哌酮/舒巴坦组合药物对该菌株的MIC,计算出部分抑菌浓度指数(FICI)。结果大蒜素单药对鲍曼不动杆菌的MICrange为16～64μg.mL-1,MIC50为32μg.mL-1,MIC90为32μg.mL-1。大蒜素联合亚胺培南和大蒜素联合头孢哌酮/舒巴坦的FICI范围均为0.31～1.50。结论大蒜素单药对鲍曼不动杆菌有明显的体外抑菌作用;亚胺培南和头孢哌酮/舒巴坦均可增强大蒜的体外抗菌活性。

血培养阳性病原菌分布及耐药性分析

目的分析血培养阳性病原菌分布及药物敏感性,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法选取2015年1月至2016年12月南京医科大学第一附属医院临床住院和门诊患者送检的血培养标本中分离的1 495株病原菌进行研究,比较主要病原菌分布情况、药物敏感试验情况。结果 1 495例血培养阳性病原菌中,构成比位居前5位的病原菌分别为大肠埃希菌303株(20.27%)、肺炎克雷伯菌205株(13.71%)、金黄色葡萄球菌103株(6.89%)、表皮葡萄球菌80株(5.35%)和鲍曼不动杆菌71株(4.75%);血培养阳性病原菌主要来源于ICU(14.05%)、血液科(13.38%)和感染科(7.96%)等科室;大肠埃希菌对阿米卡星、亚胺培南和美洛培南的敏感率在95.00%左右,对哌拉西林、头孢唑啉、头孢曲松和头孢呋辛的敏感率低于30.00%;肺炎克雷伯氏菌对亚胺培南和美洛培南的敏感率在84.00%左右;金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺仍保持较高的敏感性,而对青霉素和苯唑西林的敏感性很低。鲍曼不动杆菌对阿米卡星、左氧氟沙星和复方磺胺甲噁唑的敏感率分别为66.70%、47.8%和37.10%,对其他药物的敏感率均在30.00%以下。结论定期监测和分析当地患者血培养阳性病原菌种类及药物敏感性,对临床合理使用抗菌药物具有重要指导意义。

SEANIR监测中国15所教学医院不发酵糖革兰阴性杆菌对13种抗菌药物的药敏试验

目的分析SEANIR监测2008年中国15所教学医院医院获得性不发酵糖革兰阴性杆菌对抗菌药物的敏感性,并评价帕尼培南体外药敏试验方法。方法收集2008年分离自中国15所教学医院医院获得性感染患者的非重复鲍曼不动杆菌349株、铜绿假单胞菌359株、嗜麦芽窄食单胞菌145株和洋葱伯克霍尔德菌100株,用琼脂稀释法测定13种抗菌药物的MIC,对比MH培养基和1:40 MH培养基对帕尼培南药敏试验结果的影响。结果鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的敏感率仅为51.6%～63.7%;多黏菌素B和米诺环素对鲍曼不动杆菌的体外抑菌活性最强,且对亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌仍具有较高的抑菌率(分别98.1%和72.8%)。多黏菌素B和阿米卡星对铜绿假单胞菌的抑菌率最高(分别为96.1%和83.3%),其次为用1:40 MH培养基测定帕尼培南、哌拉西林-他唑巴坦和美罗培南的抑菌率(72.4%～77.2%)。嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克霍尔德菌对米诺环素和甲氧苄啶-磺胺甲噁唑均较敏感(敏感率为78.6%～98.0%)。结论多黏菌素B对鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌,米诺环素对鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克霍尔德菌,具有较强的体外抗菌活性。帕尼培南的体外药敏试验,鲍曼不动杆菌应采用MH培养基测定,铜绿假单胞菌应采用1:40 MH培养基测定,其抗菌作用与亚胺培南较为接近。

Mohnarin 2009年度报告:青壮年(14-65岁)来源菌株耐药监测

目的了解我国青壮年(14-65岁)感染患者病原菌构成及其耐药情况。方法收集114家成员单位2009年度抗菌药物敏感试验数据,根据Mohnarin的监测方案和CLSI2009年标准,用WHONET软件(5.5版本)对青壮年(14-65岁)患者的耐药监测数据进行分析总结。结果 2009年度全国114家Mohnarin成员单位,临床分离菌青壮年人群来源的菌株共82115株。其中,革兰阴性菌占70.04%,主要菌株依次为大肠埃希菌14696株(17.90%)、肺炎克雷伯菌8517株(10.37%)、铜绿假单胞菌7903株(9.62%)及鲍曼不动杆菌7309株(8.90%);革兰阳性菌占29.96%,主要菌株依次为金黄色葡萄球菌7550株(9.19%)、表皮葡萄球菌4068株(4.95%)、粪肠球菌3099株(3.77%)和屎肠球菌2590株(3.15%)。对葡萄球菌属保持100%敏感的有利奈唑胺、万古霉素;出现替考拉宁耐药的葡萄球菌约0.8%和万古霉素耐药的屎肠球菌为2.6%;肠杆菌科细菌中,大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌的ESBL检出率分别为62.1%,42.4%和27.5%;所有上报的肠杆菌科细菌,均开始出现碳青霉烯类耐药菌株;非发酵菌对各类抗菌药物的敏感性均很低,保持70%敏感率的药物主要有多粘菌素B和碳青霉烯类;但不动杆菌对碳青霉烯类的敏感性已下降到50%左右;苛氧菌在青壮年人群感染标本中的分离率仍很低,但对各类抗菌药物保持很高的敏感性。结论我国青壮年人群感染病原菌以革兰阴性菌为主,所有细菌对常用抗菌药物的耐药性严重。

金黄色葡萄球菌随机扩增多态性DNA分型及其应用

目的 利用随机扩增多态性DNA(randomamplifiedpolymorphicDNA ,RAPD)分析技术 ,对金黄色葡萄球菌进行基因分型 ,并观察临床耐药型与其基因型之间的关系。方法 利用自己合成的随机引物 ,建立RAPD检测分析方法 ,并利用这一方法对 5株金黄色葡萄球菌进行基因分型的研究。结果 5株金黄色葡萄球菌中 ,2株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)为同一基因型 ,另外 3株为两种基因型 ,均是敏感菌株。结论 从RAPD分析的初步结果可以看出 ,金黄色葡萄球菌的临床表现型与基因型存在一定的关系 。