烧伤焦痂毒性组分D_1的进一步分离和毒性测定

烧伤焦痂毒性组分Ｄ_１的进一步分离和毒性测定楼淑芬，陈宗荣，舒崇湘（第三军医大学预防医学系复合伤研究室）６３００３８我室过去报道了烧伤焦痂提取液对大鼠肝线粒体呼吸的抑制作用［１］和焦痂提取物中可溶于乙酸乙酯的毒性组分Ｄ１的抑制作用［２］。本文拟就Ｄ１?..

焦痂毒性提取物对线粒体膜电位的作用

文中报告了焦痂毒性提取物Ｄ１对大鼠肝线粒体内膜膜电位的影响。在线粒体悬液中加入Ｄ１后，内膜膜电位有明显下降，Ｄ１亦可使内膜通透性增加。由电子传递链产生的质子可能渗透逆流，以致造成质子供应不足，不能维持正常的膜电位，影响线粒体氧化磷酸化脱偶联。

烧伤焦痂脂类引起大鼠肝线粒体脂质过氧化的实验研究

用烧伤焦痂脂类提取物（Ｄ１）与大鼠肝线粒体在体外直接作用，测定大鼠肝线粒体内丙二醛（ＭＤＡ）含量及脂氢过氧化物（ＲｏｏＨ）含量在Ｄ１作用前后的变化。结果：与Ｄ１作用后的鼠肝线粒体ＭＤＡ含量是正常对照组的２２６％（Ｐ＜０．０１）。与Ｄ１作用后的鼠肝线粒体ＲＯＯＨ含量是作用前的２００％（Ｐ＜０．０１），实验结果表明Ｄ１可引起大鼠肝线粒体脂类过氧化损伤。

焦痂毒性提取物D1对大鼠肝线粒体膜流动性的作用

用电子自旋共振（ＥＳＲ）技术和荧光偏振技术，对烧伤焦痂脂类提取物（Ｄ１）直接作用于大鼠肝线粒体前后的膜脂流动性作了测定。结果：Ｄ１引起马来酰亚胺（ＭＡＬ－Ⅰ）标记的线粒体膜蛋白的Ｓ／Ｗ值下降；Ｄ１使５－Ｄｏｘｙｌ标记的线粒体膜脂Ｓ值降低；并使肝线粒体的荧光强度（Ｆ）升高，荧光偏振度（Ｐ）与各向异性（ｒ）下降。

安定-氯胺酮对烧伤小鼠肝组织糖皮质激素受体的影响

目的 研究安定 氯胺酮复合麻醉对烧伤小鼠肝组织糖皮质激素受体的影响 ,初步探讨其对创伤应激的调节作用。方法 雄性BALB c小鼠 ,随机分为正常对照组、烧伤对照组、麻醉对照组、预处理组及后处理组。麻醉采用安定 氯胺酮复合麻醉 ,背部 15 %～ 2 0 %Ⅲ度烧伤。烧伤后 4h测定血清皮质酮浓度 ,用Westernblotting在蛋白质水平测定肝组织糖皮质激素受体。结果 烧伤对照组血清皮质酮浓度明显升高 ,肝组织糖皮质激素受体明显降低。预处理组与后处理组血清皮质酮浓度均低于烧伤对照组 ,肝组织糖皮质激素受体与正常对照组相差不明显 ,预处理组与后处理组相差不显著。结论 烧伤应激引起小鼠血清皮质酮明显升高 ,其受体在蛋白质水平明显降低。安定 氯胺酮复合麻醉对其具有一定的调节作用。

烫伤大鼠肝组织糖皮质激素受体的变化及α-MSH、合成肽KPV的调节作用

目的 探讨烫伤所致的病理性应激时大鼠肝胞液糖皮质激素受体的变化及可能的调节机制。方法 以 [3H]地塞米松为配体 ,用放射性配基 受体结合分析法测定了正常对照组、轻度烫伤组和重度烫伤组大鼠肝胞液糖皮质激素受体的结合容量(Receptorcapacity ,R0 )和表观解离常数 (Kd)。采用体内注射TNFα、IL 1 β中和抗体和α 促黑色素细胞刺激激素 (α melanocyte stimulatinghormone ,α MSH)和合成肽KPV(Ac D Lys L Pro D Val)等措施调节其改变。结果 与正常组的R0 [Massactionrobust:(30 7.86± 2 4.2 2 )fmol/mg ;Scatchard :(30 6 .71± 2 7.96 )fmol/mg]相比 ,烫伤后 1 2h ,轻烫组的R0 [MassActionRobust:(2 85 .1 9± 1 6 .6 2 )fmol/mg ;Scatchard :(2 96 .6 4± 1 6 .0 6 )fmol/mg]差异不显著 ;重烫组的R0 [Massactionrobust:(2 0 5 .5 2± 30 .41 )fmol/mg ;Scatchard :(2 0 8.45± 30 .78)fmol/mg]则显著下降 (P <0 .0 5 )。用体内注射TNFα、IL 1 β中和抗体和α MSH和KPV均能明显改善重烫组R0 的降低。结论 TNFα、IL 1 β中和抗体、α

安定-氯胺酮麻醉对烧伤小鼠早期三种炎性细胞因子影响

目的 研究安定 氯胺酮麻醉对烧伤小鼠早期炎性细胞因子的影响 ,初步探讨其对创伤应激早期炎症反应的调节作用。方法 雄性BALB c小鼠 ,随机分为正常对照组、烧伤对照组、麻醉对照组、预处理组 (麻醉后 15min烧伤 )及后处理组 (烧伤后 15min麻醉 )。麻醉采用安定 氯胺酮麻醉 ,背部 15 %～ 2 0 %Ⅲ度烧伤。烧伤后 4h测定血清TNF α、IL 1β、IL 10浓度。结果 烧伤后血清TNF α、IL 1β、IL 10水平均比正常对照组显著增高 ;预处理组与后处理组血清TNF α、IL 1β、IL 10的浓度明显低于烧伤对照组 ;预处理组除IL 10明显高于正常对照组以外 ,其余均与正常对照组相差不明显 ,而后处理组只有TNF α水平与正常对照组相差不显著 ,其余都显著高于正常对照组 ;血清中IL 1β后处理组明显高于预处理组 ,而TNF α、IL 10的水平两组相差不显著。结论 安定 氯胺酮麻醉对严重创伤后炎性细胞因子的表达和释放有一定抑制作用 。

烧伤小鼠肝组织糖皮质激素受体的变化

目的 观察烧伤小鼠 2 4h内肝组织糖皮质激素受体在蛋白及mRNA水平的时相变化特点。方法 将 6 0只BALB/C小鼠随机分为正常对照组和实验组 ,实验组给予背部Ⅲ度 15 %～ 2 0 %烧伤。分别于伤后 2、4、6、12、2 4h测定血清皮质酮浓度 ,用Westernblotting、RT -PCR在蛋白质和mRNA水平测定肝组织糖皮质激素受体。结果 烧伤小鼠血清皮质酮浓度 2～ 4h达到高峰 ,2 4h仍未恢复正常 ;肝组织糖皮质激素受体在蛋白质水平 4～ 6h降至最低 ;而mRNA水平仅仅在伤后 2h有短暂降低。结论 烧伤应激引起小鼠血清皮质酮水平明显升高 ,其受体在蛋白及mRNA水平均可降低 ,但蛋白的降低不仅仅发生在mRNA水平。

角质细胞生长因子对肠上皮细胞辐射损伤的防护作用

目的 探讨角质细胞生长因子 (KGF)的辐射防护作用与机制 ,为应用KGF防护肠道辐射损伤提供实验依据。方法 应用正常及不同剂量γ射线损伤的肠上皮细胞 (IEC 6) ,通过在培养体系中加入不同剂量的KGF后检测细胞增殖活性的变化以及凋亡细胞百分率 ,作为KGF辐射防护效应和细胞辐射敏感性变化的指标。结果 正常培养的IEC 6细胞 ,KGF呈剂量依赖型促细胞增殖作用 ;10Gy照射后KGF促细胞增殖作用显著减弱。KGF预处理能显著降低IEC 6细胞辐射敏感性 ,其IP50 ( 50 %增殖抑制照射量 )从对照( 15.3± 0 .6)Gy降至 ( 12 .2± 0 .4 )Gy。结论 KGF具有促肠上皮细胞增殖作用 ,其辐射防护作用表现为降低细胞辐射敏感性 ,抑制辐射诱导的细胞凋亡可能是其作用机制之一。

L-Carnitine拮抗培养心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的 探讨L Carnitine对心肌细胞缺氧 /复氧损伤的防护作用及其可能的机制。方法 以原代培养新生鼠心肌细胞建立缺氧 /复氧损伤模型 ,观察不同剂量L Carnitine处理后细胞增殖活性、凋亡细胞百分率及DNA断片化率 ,作为反映L Carnitine对心肌细胞缺氧 /复氧损伤防护作用及其机制的指标。结果 在 5～ 5 0 0 0nmol/L范围内 ,L Carnitine预处理对培养心肌细胞缺氧 /复氧损伤均显示保护效应 ;在 5、5 0及 5 0 0nmol/L时均显著降低DNA断片化率 ;L Carnitine在 5 0nmol/L时与单纯缺氧 /复氧组比较可显著降低凋亡细胞百分率。结论 缺氧 /复氧对心肌细胞的影响之一是可诱导心肌细胞凋亡 ;L Carnitine对培养心肌细胞培养缺氧/复氧损伤具有防护作用 ,其机制可能与抑制缺氧 /复氧诱导细胞凋亡有关。

烫伤大鼠血浆TNF-α水平的变化及α-MSH和合成肽KPV的调节作用研究

目的 :观察烫伤对大鼠血浆肿瘤坏死因子 α(TNFα)水平的变化及 α 黑色素细胞刺激激素(α MSH)和 KPV合成肽的调节作用。方法 :用酶联免疫吸附 (EL ISA )法检测正常对照组、轻度烫伤组和重度烫伤组大鼠血浆 TNFα的水平 ,用烫伤前大鼠尾静脉注射 TNFα和白介素 1β(IL 1β)中和抗体及腹腔注射α MSH和 KPV等调节重度烫伤大鼠血浆 TNFα的水平。结果 :与正常对照组血浆 TNFα水平相比 ,烫伤后 12小时 ,轻度烫伤组大鼠血浆 TNFα水平显著升高 (P<0 .0 1) ;与轻度烫伤组相比 ,重度烫伤组大鼠血浆 TNFα水平升高更加明显 (P<0 .0 1)。体内注射 TNFα和 IL 1β中和抗体及 α MSH和 KPV均能明显减轻重度烫伤组大鼠血浆高 TNFα血症状态。结论 :烫伤可使大鼠血浆 TNFα的水平明显升高 ;体内注射TNFα、IL 1β中和抗体及 α MSH和 KPV均可在一定程度上减轻重度烫伤所致的血浆

干扰素诱导蛋白P56与糖皮质激素受体的相互作用及对其转录活性的影响

糖皮质激素受体(GR)在严重创伤早期及全身性炎症反应中具有重要作用,为寻找与GR相互作用的新的蛋白质,以期调节GR的功能活性,应用酵母双杂交技术,以糖皮质激素受体配体结合区(GR LBD)为诱饵蛋白,在人骨髓cDNA文库中筛选到 4 2个阳性克隆.测序结果表明,其中一个克隆为干扰素诱导蛋白P5 6的大部分编码序列(2 2 1～ 16 4 2bp,编码第 5 3位至第 4 78位氨基酸).利用酵母双杂交实验再次验证P5 6与GR具有结合作用.并用PCR方法从酵母质粒中扩增出P5 6片段,进行GST P5 6原核融合蛋白表达与纯化,及真核表达与免疫共沉淀.蛋白质结合实验表明,P5 6与GR LBD在体内外有结合作用.CAT报告基因检测表明P5

烧伤后小鼠血清皮质酮及肝组织糖皮质激素受体水平的变化

目的 探讨烧伤小鼠 2 4h内肝组织糖皮质激素受体时相变化特点。方法 将 60只BALB c小鼠随机分为正常对照组和实验组 ,实验组造成背部Ⅲ度 15 %～ 2 0 %烧伤。分别于伤后 2、4、6、12、2 4h测定血清皮质酮浓度 ,采用Westernblotting、RT PCR在蛋白质和mRNA水平测定肝组织糖皮质激素受体。结果 烧伤小鼠血清皮质酮浓度 4h达到高峰 ,2 4h仍未恢复正常 ;肝组织糖皮质激素受体在蛋白质水平明显降低 ,4～ 6h降至最低 ;而mRNA水平仅仅在伤后 2h有短暂降低。结论 烧伤应激引起小鼠血清皮质酮水平明显升高 ,其受体在蛋白及mRNA水平均可降低 ,但蛋白降低不主要发生在mRNA水平。

贫铀对人肾小管上皮细胞的毒性作用

目的 阐明贫铀 (depleteduranium ,DU)对人肾小管上皮细胞 (humankidneycell,HKC)的急性毒性作用及损伤部位 ,为救治提供依据。方法 将 0 0 63～ 0 5 0 0mg ml的DU溶液作用于HKC ,研究细胞超微结构、存活率的变化 ,多种酶含量的改变及HGPRT基因突变的频率。结果 0 0 63～ 0 5 0 0mg ml浓度的DU可引起HKC细胞结构改变 ,存活率显著下降 ;溶酶体酶NAG含量随DU浓度的增加而增加 ;其他酶含量也发生变化 ;HGPRT基因突变的发生率显著高于正常对照组 ,并呈二项式相关关系。加入苯乙酸、亚硒酸钠使上述指标变化不大。结论 DU可引起细胞活力降低 ,损伤细胞膜、线粒体、溶酶体等 ,使细胞抗氧化能力下降 ;HGPRT基因突变率与DU浓度之间呈相关关系 ;加入恶性转化的抑制剂亚硒酸钠和苯乙酸 。

L-carnitine对缺氧/复氧新生大鼠心肌细胞能量生成及CPT-Ⅱ mRNA表达的影响

目的 探讨L 肉毒碱 (L carnitine ,L Car)对缺氧 复氧培养新生大鼠心肌细胞能量生成的影响及其机制。方法 以原代培养新生大鼠心肌细胞建立缺氧 复氧损伤模型 ,高效液相色谱检测单纯缺氧 复氧以及L Car预处理缺氧 复氧心肌细胞ATP、ADP、AMP生成改变 ;RT PCR方法检测心肌细胞肉毒碱脂酰基转移酶 Ⅱ (carnitinepalmitoyltransferase Ⅱ ,CPT Ⅱ )mRNA表达。结果 与正常对照组比较 ,培养心肌细胞缺氧 2 4h复氧 0、2、4、8h后 ,心肌细胞ATP、ADP均明显下降。与单纯缺氧 复氧组比较 ,L Car预处理组心肌细胞缺氧 复氧后ATP含量明显增高 ;培养心肌细胞缺氧 2 4h后 ,CPT ⅡmRNA表达除复氧 2h有所上升外 ,复氧 4、8h表达渐次降低。L Car预处理使缺氧 2 4h复氧 4h心肌细胞CPT ⅡmRNA表达呈浓度依赖性增高 ,5 0nmol L处理组CPT ⅡmRNA表达显著高于 0nmol L处理组。结论 心肌细胞缺氧 复氧过程中能量生成明显降低 ,其损伤可能与三羧酸循环中呼吸酶CPT Ⅱ表达降低有关 ;L Car对培养仔鼠心肌细胞缺氧复氧损伤具有显著保护作用 ,其机制可能是与L Car从转录调控水平改善CPT Ⅱ合成有关。

植入贫铀片大鼠血液和肝肾功能的变化

目的 :弄清嵌入 (植入 )贫铀弹片是否会引起机体血液、肝肾功能的变化 ,为救治提供依据 .方法 :手术植入贫铀片 ,临床生化自动检测仪测定各指标 .结果 :在植片后 5mo大鼠白细胞数显著增高后又回降 ,淋巴细胞的变化趋势与白细胞相同 ,红细胞和血红蛋白变化不大 ,血小板显著下降后又显著增高 .ALT和AST先升高后下降 ;T BIL一直下降 ,后虽回升 ,但仍显著低于正常组 ;AL/AS 比值一直升高 ,后下降至 0 .3左右 .植片后初期肾功能出现一定损伤 ,2 0d左右逐渐好转 ,1 2 0 1 5 0d时 ,各指标基本恢复正常 ,但尿蛋白、亚硝酸盐异常及肌酐呈上升趋势 .结论 :贫铀片可引起动物血液、肝肾功能异常 ,后逐渐恢复 。

吸入贫铀粉尘和/或嵌入贫铀片大鼠体内铀的分布

目的 :模拟吸入高浓度贫铀 (depleteduranium ,DU)粉尘和 /或有DU弹片嵌入损伤 ,研究铀在机体内的动态变化和分布的主要器官 .方法 :将大鼠分为吸入粉尘组、单纯植片组、吸入 +植片组和正常对照组 ,在吸入高浓度的DU粉尘和/或在肌肉中植入DU片后第 1 ,3,7,1 5 ,2 0和 2 6日收集尿、血、肾、肺、肝、胸骨和卵巢样本 ,预处理后用激光荧光法测定铀含量 .结果 :在 1～ 2 6d的大部分时相点中 ,吸入组中铀浓度最大的器官依次是肺、卵巢和肾 ;单片组是肾、卵巢和胸骨 ;吸入 +植片组是肾、肺、卵巢和胸骨 ,大部分组织铀浓度均高于吸入组和单片组 .结论 :经吸入途径进入的铀分布的主要器官是肺、卵巢和肾 ,植入途径是肾、卵巢和胸骨 。

严重创伤后巨噬细胞在炎症介质释放中的作用及其功能调节

目的 研究大鼠腹腔巨噬细胞在烫伤大鼠应激反应性高细胞因子血症中的作用及其功能调节。方法 用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测重度烫伤大鼠血浆TNF -α、IL - 1β、IL - 10的水平 ;用腹腔注射脂质体包裹的氯甲磷酸二钠杀伤体内巨噬细胞 ,观察注射后大鼠烫伤血浆细胞因子的变化 ;收集烫伤大鼠腹腔巨噬细胞 ,分别加LPS、LPS +DEX(地塞米松 )、LPS+α-MSH(α -melanocyte-stimulatinghormone)和LPS +KPV(Ac -D -Lys -L -Pro -D -Val)共孵育 ,检测上清液中TNFα、IL -1β、IL - 10的水平 ,并与未烫伤大鼠进行比较。 结果 重度烫伤可使大鼠血浆出现高水平的TNF -α、IL - 1β、IL - 10 ,腹腔注射氯甲磷酸二钠脂质体可使重度烫伤大鼠血浆TNF -α、IL - 1β和IL - 10水平显著下降 ;接受LPS刺激后 ,重度烫伤大鼠腹腔巨噬细胞可分泌高水平的TNF -α、IL - 1β和IL - 10 ,接受LPS +DEX、LPS +α -MSH和LPS +KPV刺激后无明显下降 ,IL - 10水平在LPS +DEX刺激后下降显著 ;与未烫伤大鼠腹腔巨噬细胞相比较 ,发现DEX对重度烫伤组腹腔巨噬细胞分泌TNF -α、IL - 1β和IL - 10的抑制减少量显著低于DEX对未烫伤大鼠腹腔巨噬细胞分泌抑制减少量。结论 巨噬细胞在重度烫伤大鼠血浆高细胞因子血症的发生。

碘伏和苯妥因局部用药对放烧复合伤创面的治疗研究

目的:用大鼠放烧复合伤模型观察碘伏与本妥因（PHT）局部单用与伍用的抗感染和促愈效果。方法:复制大鼠15％Ⅱ度烧伤和4Gy60Coγ辐照复合15％Ⅲ度烧伤的损伤模型，观察不同给药方案治疗后30d存活率、创面残留率、创面感染率、肉芽组织蛋白与羟脯氨酸含量以及血管生成等指标变化。结果:碘伏单用和与PHT伍用在两种损伤均显示显著的抗感染作用和促愈作用，创面感染率、组织菌量30d创面残留率均低于对照组，而肉芽组织蛋白、羟脯氨酸含量及血管密度计数用药后7～24d两种损伤模型相继高于对照组。两药伍用未见拮抗效应，而且无论是抗感染还是促愈效果均优于单用。PHT促进蛋白、羟脯氨酸的合成代谢与促血管形成作用可能是其促愈效应的生化和形态学基础。结论:碘伏与PHT局部伍用可起抗感染和促进创面愈合的良好作用。用于放烧复会伤的治疗有重要的搭在应用价值。

放射损伤、烧伤及放烧复合伤大鼠早期心肌一氧化氮的变化及其对心肌的作用

目的：研究６Ｇｙ放射损伤（Ｒ）、烧伤（Ｂ）及放烧复合伤（ＲＢ）早期心肌一氧化氮（ＮＯ）合成的变化及其对心肌的作用。方法：观测三种损伤大鼠伤后２４ｈ心肌ＮＯ含量、一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性的变化，ＮＯ供体ＳＩＮ－１对正常大鼠心肌ｃＧＭＰ、Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性的影响。结果：Ｂ组和ＲＢ组心肌ＮＯ的合成及诱生型ＮＯＳ活性明显增强，Ｒ组无变化（Ｐ＞０．０５）。ＮＯ供体ＳＩＮ－１致心肌ｃＧＭＰ合成增加及心肌膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性下降，地塞米松对以上变化有明显抑制作用。结论：Ｂ和Ｒ组早期心肌ＮＯ合成增强，主要起因于诱生型ＮＯＳ的过量表达，进一步引起心肌ｃＧＭＰ含量和Ｎａ＋－Ｋ－＋ＡＴＰ酶活性的改变。