肝泡型包虫病的诊治进展

肝包虫病为慢性寄生虫病,由多房棘球蚴的幼虫引发,此病具有相当高的致残率和死亡风险,又被称作“虫癌”。临床上将肝包虫病分为肝泡型包虫病和肝囊型包虫病,肝包虫病在世界各地广泛流行,我国主要在西部农牧区居民群体中发生,对该地区居民的生存质量构成了巨大的威胁。目前临床上治疗肝包虫病以手术治疗方式为主,伴随着外科诊治技术的迅速发展和对肝包虫病研究不断深入,其诊治方案也不断完善。本文将主要综述肝泡型包虫病的诊断和治疗进展,旨在为临床医务人员提供参考,以尽早发现和治疗,降低疾病对患者产生的不良影响,改善患者预后。

异土木香内酯及其衍生物的药理作用及机制

随着分子生物学和药物化学的迅速发展,医药研究领域中天然产物及其衍生物作为治疗剂的开发受到极大关注。异土木香内酯及其衍生物具有独特的药理活性,在自噬、免疫、抗炎、抗菌及抗肿瘤等方面具有多重药用价值,尤其在抗肿瘤领域展现出潜在的应用前景。然而,异土木香内酯及其衍生物的具体药理机制和临床应用潜力尚未被充分揭示。未来,深入探讨异土木香内酯及其衍生物的药理机制有助于更好地评估其临床应用的可能性。

微小核糖核酸对包虫病患者免疫细胞功能的调控作用研究进展

包虫病是一种对宿主造成严重损害的潜在致命性人畜共患疾病。微小核糖核酸(miRNAs)是一类小型非编码RNA分子,可在转录后以序列特异性方式通过抑制或促进mRNA降解以调节基因表达,从而发挥调控生物学过程的作用。宿主感染棘球蚴绦虫后可以引起多种miRNAs表达改变,并参与宿主的免疫调节过程。在包虫病患者的感染过程中,miR-71、miR-4989-3p、miR-222-3p、miR-155-5p、miR-146a-5p可影响单核巨噬细胞功能,miR-277a-3p能够影响树突状细胞功能,miR-374b-5p、miR-126a-5p可影响T淋巴细胞功能,miR-181a-5p能够影响自然杀伤细胞功能,上述miRNAs通过影响患者的免疫细胞及其功能而参与免疫调节。但目前还有很多miRNAs的功能和机制尚未得到证实,需要我们使用更先进的方法来确定有效的miRNAs及其功能,以便为包虫病的早期诊断和治疗提供新靶点及理论依据。

松果菊苷对雨蛙素诱导的急性胰腺炎大鼠模型胰腺及肝损伤的影响与机制

目的通过建立急性胰腺炎(AP)大鼠模型,研究松果菊苷(ECH)对雨蛙素诱导的AP大鼠模型胰腺及肝损伤的改善作用及机制。方法24只SD大鼠随机分为空白组(Con组)、对照组(Con+ECH组)、AP组和AP+ECH组4组,每组各6只。AP模型构建前7 d给予10 mg/kg ECH腹腔注射,雨蛙素末次给药24 h后,腹主动脉取血,分离血清行ALT、AST、乳酸脱氢酶(LDH)、GGT、ALP、Alb、TBil、胆碱酯酶(ChE)、血淀粉酶(Amy)、脂肪酶(LPS)等生化检测;HE染色检测胰腺和肝组织病理学改变;透射电镜观察胰腺和肝组织微观结构改变;ELISA检测肝组织匀浆中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平;免疫组化分析胰腺和肝组织中TNF-α和p-p65 NF-κB水平;Western Blot检测肝组织中NF-κB通路蛋白表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q或Dunnett’s T3检验。结果与Con组相比,AP组大鼠ALT、AST、GGT、LDH、ALP、TBil、AMY、LPS指标均明显增高(P值均<0.01);肝组织匀浆液IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α水平均增加(P值均<0.01)。ECH干预降低AP大鼠ALT、AST、GGT、LDH、ALP、TBil、AMY、LPS水平,并能抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌。HE染色观察可见ECH干预后胰腺组织中腺泡细胞空泡变性和炎性细胞浸润较AP组减轻,肝细胞坏死较AP组减轻。透射电镜检查镜下见ECH干预后肝和胰腺细胞内线粒体肿胀程度较AP组减轻。ECH干预后能部分逆转AP大鼠胰腺和肝组织中p-p65 NF-κB、TNF-α的表达增加。此外,AP大鼠肝组织中MyD88、p-IκBα、p-IKKα、p-p65表达上调,而ECH干预后能部分逆转。结论松果菊苷可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB途径来改善AP诱发的胰腺和肝损伤。

多房棘球蚴囊泡来源EVs及其emu-miR-10-5p促进小鼠肝星状细胞活化

目的明确多房棘球绦虫囊泡来源胞外囊泡(Extracellular vesicles,EVs)及其emu-miR-10-5p在体外调节HSCs活化中的作用。方法小鼠腹腔注射原头节构建继发性多泡型包虫病模型,以小鼠体内病灶为材料培养多房棘球绦虫囊泡并进行PCR鉴定。透射电镜观察培养囊泡组织中胞外囊泡结构。差速-超速离心法分离囊泡培养上清中EVs,透射电镜、纳米粒径以及Western blot对分离EVs进行鉴定。CCK-8检测不同浓度EVs作用后HSCs活力。EVs作用于HSCs后RT-qPCR和Western blot检测α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ表达水平。生物信息学分析确定emu-miR-10-5p为特异性miRNA。过表达emu-miR-10-5p后EdU检测HSCs增殖,RT-qPCR个Western blot检测细胞中α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ表达水平。干扰囊泡组织中emu-miR-10-5p后提取培养上清液中EVs作用于HSCs后,检测HSCs细胞中α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ表达水平。结果成功通过小鼠体内病灶材料培养出多房棘球蚴囊泡,经PCR扩增特异性基因证实为多房棘球绦虫来源。TEM观察培养囊泡表面有较多的囊状结构。通过差速-超速离心分离出多房棘球蚴囊泡来源EVs,并经TEM证实为球形、膜状结构。囊泡来源EVs能被HSCs内化,并促进HSCs增殖和活化。通过综合分析多房棘球绦虫感染小鼠血清、棘球蚴组织、棘球蚴囊泡来源EVs、生发层细胞、原头节miRNA测序结果,发现emu-miR-10-5p在上述成分中均存在表达,并通过RT-qPCR证实emu-miR-10-5p在多房棘球蚴囊泡来源EVs中存在的量较高。进一步研究证实过表达emu-miR-10-5p能促进HSCs增殖,增加HSCs中α-SMA、Collagen I和CollagenⅢmRNA及蛋白表达水平。而干扰囊泡中emu-miR-10-5p后从培养上清液中提取的EVs未增加α-SMA、Collagen I和CollagenⅢmRNA及蛋白表达水平。结论多房棘球蚴囊泡来源EVs及emu-miR-10-5p能够促进HSCs活化。

棘球蚴感染后肝纤维化发病机制研究进展

棘球蚴病是一种人畜共患疾病,常见的两种为细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病。人体感染棘球蚴后可损伤肝脏,导致肝纤维化。棘球蚴可能通过作用于肝纤维化相关细胞[肝星状细胞(HSCs)、巨噬细胞(Mø)、T细胞及自然杀伤(NK)细胞]、相关信号通路及细胞因子,促进肝纤维化的发生发展。原头节、包囊囊液及棘球蚴蛋白等棘球蚴组分可直接激活肝组织HSCs,促进HSCs分化为肌成纤维细胞,促进肝纤维化的发生发展。棘球蚴可促进Mø细胞转化为致炎性M1型巨噬细胞,促进肝纤维化的发生发展。棘球蚴还可作用于CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞及Th17/Treg比例失衡,促进肝纤维化的发生发展。棘球蚴可通过调控多条信号通路以影响肝纤维化的发展。其可通过调控转化生长因子β(TGF-β)信号通路、Notch信号通路、Wnt/β-Catenin信号通路、MAPK信号通路,促进上皮-间充质转化和细胞外基质过度沉积,激活HSCs细胞的分化,促进肝纤维化的发生发展。棘球蚴还可通过调控肝纤维化相关细胞因子核因子-κB及成纤维细胞生长因子表达,促进HSCs细胞的激活,促进肝纤维化的发生发展。

全球营养领导层倡议营养不良诊断标准在普外科老年人群中应用现状与进展

营养不良在老年人群中的发生率呈逐年上升的趋势,可导致老年人的身体功能下降、易发生感染、延迟康复等,严重影响其生活质量及疾病预后。因此,营养不良的早期识别和诊断对普外科老年患者有着重要的意义。目前针对老年人群营养不良的诊断主要包括全球营养领导层倡议营养不良诊断标准(Global Leadership Initiative on Malnutrition,GLIM)、主观全面评定(Subjective Global Assessment,SGA)等。GLIM进入临床应用较晚,能否全面反映外科老年人群的营养状态仍有争议。本文主要探讨GLIM在普外科老年人群中诊断营养不良的应用现状,旨在为老年人营养不良的诊断提供参考。

ERCP选择性胆管插管困难的研究进展

选择性胆管插管(Selective biliary cannulation, SBS)是内镜下逆行胰胆管造影术(endoscopic retro-grade cholangiopancreatography, ERCP)成功的基础步骤,然而其有着不容小觑的失败率。当标准插管技术失败后,选择何种辅助插管技术及抢救技术以成功实现胆管插管是摆在内镜医师面前的重要难题。本文旨在对困难胆管插管的定义、影响因素、相关并发症及不同辅助插管技术进行综述,以期为内镜医师提供循证医学参考。

肝细胞癌微血管侵犯的治疗进展

虽然肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)采用以根治性切除手术切除为核心的多方式、多学科治疗方式,但术后5年复发率仍达到70%,肝移植术后复发率约为35%。术后肿瘤复发是影响肿瘤患者预后的重要因素,多项研究表明微血管侵犯(microvascular invasion, MVI)是HCC术后早期复发及预后不良的独立危险因素。但是MVI需要术后病理确诊的方式严重限制了其临床价值。本文将从肝细胞癌MVI治疗方案进行文献综述。

肝细胞癌免疫治疗研究进展

肝细胞癌发病隐匿,多数患者就诊时已处于中晚期,失去根治性手术切除的机会,预后较差。随着临床诊疗的不断进展,中晚期肝细胞癌治疗由过去相对单一、局限的治疗逐渐发展为系统性治疗的新模式。近年来,以免疫检查点抑制剂(ICI)为代表的免疫治疗在临床中的应用日益普及。目前关于免疫治疗联合局部、靶向抗肿瘤治疗的临床研究逐渐增多,尤其是ICI联合靶向治疗已经成为肝细胞癌治疗领域的研究热点。本文主要针对免疫治疗在肝细胞癌治疗中的研究进展进行综述。

肝门部胆管癌根治性切除术后教科书式结局发生的预测因素分析

目的探讨肝门部胆管癌(pCCA)根治性切除术后患者实现教科书式结局(TO)的独立预测因素。方法回顾性收集陆军军医大学第一附属医院、四川省人民医院及青海大学附属医院在2013年5月至2019年5月间收治的pCCA患者资料,共纳入316例。实现以下所有6个结局,被认定为实现TO:术后30 d内无并发症、术后30 d内无死亡、术后30 d内无再入院、无围手术期输血、无延长的住院时间、阴性切缘。依据是否实现TO,将患者分为TO组(n=79)和非TO组(n=237)。比较两组患者的基线资料,并采用Logistic回归分析法确定pCCA根治性切除术后患者实现TO的独立预测因素。结果316例患者中,79例(25.0%)实现TO。TO组患者的术前黄疸、淋巴结转移、大血管侵犯的比例均显著低于非TO组,肿瘤浸润范围显著小于非TO组(P<0.05)。Logistic回归分析表明,无术前黄疸、肿瘤浸润范围≤3 cm、无大血管侵犯、无淋巴结转移,与pCCA根治性切除术后患者实现TO独立相关(P<0.05)。结论本研究显示,仅有四分之一的pCCA根治性切除术患者能够实现TO。无术前黄疸、肿瘤浸润范围≤3 cm、无大血管侵犯、无淋巴结转移是pCCA患者根治性切除术后实现TO的独立预测因素。

三维可视化技术在肝多房棘球蚴病中的应用进展

肝多房棘球蚴病是由多房棘球绦虫感染所致的寄生虫疾病,在我国传播范围广、危害较大。目前肝多房棘球蚴病的常规影像学检查方法主要为超声、CT及MRI,但其术前诊断及评估均具有一定的局限性。本文主要介绍了新兴的三维可视化技术及其衍生技术在肝多房棘球蚴病的精准诊断和术前评估的指导作用,以期为以后的肝多房棘球蚴病的临床诊治提供帮助。

多房棘球蚴源性外泌体对巨噬细胞极化的影响

目的探究不同时间及浓度多房棘球蚴源性外泌体对巨噬细胞极化的影响。方法从60只造模BALB/c小鼠中随机选取4只,应用7.0T MRI观察腹腔病灶生长情况;解剖造模小鼠,通过腹腔病灶提取原头节进行体外培养,超速离心法从培养上清中提取外泌体,透射电镜及蛋白质免疫印迹法鉴定外泌体表征。将未加外泌体处理的巨噬细胞单独培养组设为对照组,不同浓度多房棘球蚴来源外泌体与巨噬细胞共培养组设为实验组(10μg/mL组、50μg/mL组),分别共培养48 h和72 h,显微镜下观察巨噬细胞形态变化。通过流式细胞术和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测极化状态。符合正态分布的计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果7.0T MRI显示小鼠腹腔内弥漫分布、大小不等的病灶形成;多房棘球蚴源性外泌体直径100 nm左右,呈杯型或茶托型,其表面标志物CD9、TSG101和CD63表达阳性。共培养后,实验组大部分细胞拉长,形态不规则,主要呈多角形;流式细胞术检测发现,共培养48 h,对照组CD16/32、CD206、CD369阳性率分别为(99.53±0.06)%、(90.27±0.21)%、(2.40±0.20)%;与对照组相比,除10μg/mL外泌体组CD369阳性率[(0.80±0.00)%]降低(P<0.05),其余组别CD16/32、CD206、CD369阳性率均明显升高(P值均<0.0001);共培养72 h,对照组CD16/32、CD206、CD369阳性率分别为(99.67±0.06)%、(85.47±0.55)%、(6.60±0.20)%,实验组CD16/32、CD206、CD369阳性率较对照组均明显升高(P值均<0.05)。ELISA结果示:共培养48 h,对照组IL-6及TNFα水平分别为(58.53±15.52)pg/mL、(320.70±5.30)pg/mL,实验组外泌体浓度为50μg/mL时IL-6[(98.81±15.55)pg/mL]较对照组升高(P<0.05);共培养72 h,对照组IL-6及TNFα水平分别为(76.22±9.68)pg/mL、(323.90±87.37)pg/mL,当外泌体浓度为10μg/mL时TNFα水平[(164.20±14.17)pg/mL]较对照组明显下降(P<0.05);当外泌体浓度为50μg/mL时IL-6水平[(99.52±8.35)pg/mL]较对照组升高(P<0.05)。结论多房棘球蚴源性外泌体可调控巨噬细胞极化,且在浓度为10μg/mL,共培养72 h后,可导致巨噬细胞M2样极化,具体方式有待进一步研究。

循环肿瘤细胞与循环肿瘤DNA在肝细胞癌中的研究进展

肝细胞癌(HCC)是我国最常见且致死率非常高的恶性肿瘤之一,在全球癌症致死病因中排名第三位,每年导致超60万人死亡。肝细胞癌复发率高且缺乏有效的检测方式,还受到治疗方式的局限性影响,约有82.4%的患者会在罹患肝细胞癌之后的5年内死亡。液体活检技术的进步给肝癌早期发现、治疗并提高生存率带来了希望;新分子技术的不断发展进步使得HCC循环肿瘤细胞(CTCs)与循环肿瘤DNA(ctDNA)的检测变得更加高效、准确。基于此,本文对CTCs和ctDNA的发现及其在肝细胞癌研究中取得的进展、潜在的临床价值等进行了综述。

肝棘球蚴病病人营养风险对临床结局的影响

目的:探讨肝棘球蚴病病人营养风险对临床结局的影响及术后感染并发症发生的主要危险因素。方法:收集2020年8月至2021年6月青海大学附属医院肝棘球蚴病106例为对象进行前瞻性非干预观察性研究,于入院后48 h内使用NRS 2002进行营养风险筛查,并收集与感染并发症相关的临床资料,如性别、年龄、文化程度、BMI、生化检验等信息。将病人分为发生感染并发症和未发生感染并发症两组。采用单因素分析和多因素Logistic回归分析,探究危险因素,并分析入院时营养风险与住院时间、住院费用等关系。结果:106例肝棘球蚴病病人有营养风险者26例(24.5%),存在营养风险者总住院时间和ICU时间明显延长(Z=-2.24,-2.986,均P<0.05),医疗总费用也显著增加(Z=-2.482,P<0.05)。术后发生感染并发症21例,发生率19.8%。单因素分析NRS 2002评分、血清白蛋白(ALB)、预后营养指数(PNI)与住院期间术后感染并发症有关,多因素回归分析NRS 2002评分是术后感染并发症发生的独立危险因素(OR=6.762,P<0.001)。结论:NRS 2002评分为肝棘球蚴病病人术后感染并发症发生的独立危险因素,高营养风险病人更容易发生不良临床结局。

多房棘球蚴囊液对沉默DDIT4后小鼠肝细胞生物学功能的影响

目的探讨多房棘球蚴囊液(Hydatid cyst fluid,HCF)对沉默DNA损伤诱导转录因子4(DNA damage-inducible transcript 4,DDIT4)后小鼠肝细胞生物学功能的影响。方法1.采用免疫蛋白印迹法(Western Blot)、实时荧光定量法(RT-qPCR)检测经HCF处理的小鼠肝细胞中DDIT4蛋白的表达量,以检测转染效率;2.选用慢病毒转染小鼠正常肝细胞DDIT4后做HCF处理,采用细胞计数试剂8法(CCK-8)检测各组小鼠肝细胞的细胞活性;3.用Western Blot法检测Beclin-1、Caspase-3、LC3等凋亡自噬相关蛋白水平;4.用透射电镜观察HCF对小鼠肝细胞超微结构的影响。结果1.经HCF作用后慢病毒转染小鼠肝细胞的DDIT4基因及蛋白表达水平检测结果显示,LV-Ddit4-RNAi 1、LV-Ddit4-RNAi 2、LV-Ddit4-RNAi 3组分别与LV-Ddit4-NC组比较,前三组DDIT4蛋白含量显著下降,LV-Ddit4-RNAi 3组尤为显著(P<0.01)。2.LV-Ddit4-RNAi 0.4、0.8 mg/mL组细胞OD值明显大于LV-Ddit4-NC 0.4、0.8 mg/mL组(P<0.01);与HCF共培养48 h后,沉默DDIT4组细胞形态接近正常AML-12细胞的形态,多呈椭圆形或者圆形,且细胞生长密度较LV-Ddit4-NC组明显为高。3.与LV-Ddit4-NC con组比较,LV-Ddit4-NC 0.4 mg/mL HCF组和LV-Ddit4-NC 0.8 mg/mL HCF组的LC3-II、Beclin-1、Caspase-3蛋白表达水平显著增高(P<0.01);分别与LV-Ddit4-NC 0.4、0.8 mg/mL HCF组比较,LV-Ddit4-RNAi 0.4、0.8 mg/mL HCF组的LC3-II、Beclin-1、Caspase-3蛋白表达水平显著降低,均具有统计学意义。4.两对照组细胞胞质未见明显损伤,线粒体基质较均匀,粗面内质网未见明显扩张,自噬水平低;LV-Ddit4-RNAi 0.4、0.8 mg/mL组细胞损伤较轻,未见粗面内质网扩张,胞质内存在较多脂滴,自噬数量增多;LV-Ddit4-NC 0.4、0.8 mg/mL组细胞损伤严重,粗面内质网严重扩张,胞质内存在大量脂滴,可见大量自噬结构。结论HCF对沉默DDIT4后小鼠肝细胞生物学功能的影响:1.AML-12细胞增殖;2.AML-12细胞凋亡、自噬数量减少。

分泌型磷酸蛋白2在肝细胞癌预后中的预测价值和参与免疫调控的潜在机制

目的本研究旨在探究分泌型磷酸蛋白2(SPP2)在肝细胞癌预后中的预测价值和参与免疫调控的潜在机制。方法探究SPP2在肝细胞癌预后中的预测价值的方法:从癌症基因组图谱(TCGA)和基因表达综合数据库(GEO)分别获得了肝细胞癌的RNA-Seq表达数据和临床相关资料。此外,收集2015~2018年间在青海大学附属医院行手术切除治疗的21例肝细胞癌组织和癌旁组织标本进行IHC、Western Blot检测,分析SPP2在肝细胞癌中的表达情况。基于Kaplan-Merier生存分析法、单因素和多因素COX逻辑回归法分析SPP2表达与肝细胞癌患者预后的关系;探究SPP2参与免疫调控的潜在机制的方法:基于TIMER数据库和单样本基因集富集分析(ssGSEA)法评估SPP2与免疫细胞浸润的关系。结果来自TCGA和GEO队列的RNA-Seq数据显示,SPP2在肝细胞癌组织中的表达显著低于癌旁组织,且SPP2高表达的患者有更好的临床预后;单因素和多因素COX回归的分析结果表明,SPP2可以独立于其他临床因素,作为肝细胞癌的独立预后因子;IHC和Western Blot显示,SPP2在肝细胞癌组织中的表达低于癌旁组织,且在高病理分期中的表达更低,与SPP2高表达的患者相比,低表达SPP2的患者总体生存时间更短;免疫浸润分析显示,SPP2表达与肿瘤相关巨噬细胞及Th2细胞的浸润程度具有显著的负相关性。结论SPP2可作为肝细胞癌的潜在不良预后预测生物标志物,并有望成为监测肝细胞癌进展的特异生物标志物和潜在的治疗靶点;SPP2的表达水平与免疫细胞的浸润程度相关。

噻虫啉对表达多房棘球绦虫 nAChR 基因HEK293细胞内钙的影响

目的构建多房棘球绦虫nAChR真核表达质粒并在HEK293细胞中表达,探讨噻虫啉(thiacloprid,Thia)对异源表达nAChR-HEK293细胞内游离钙离子的影响,为进一步研究nAChR基因的结构和功能奠定基础。方法对多房棘球绦虫nAChR蛋白进行生物信息学分析。扩增nAChR序列全长,构建真核表达质粒pCMV-EGFP-nAChR并转染HEK293细胞。噻虫啉刺激后检测转染细胞内游离钙离子水平及全细胞膜电流。结果nAChR为四次跨膜蛋白,α螺旋和无规则卷曲是该蛋白的主要组成成分。噻虫啉与nAChR活性位点附近PHE 207、PHE 24、ARG 244形成Pi-Pi相互作用,与LEU 60形成盐桥。PCR扩增在接近2000 bp处观察到明显条带,经过测序证实获得nAChR序列与Wormbase Parasite数据库序列一致。重组质粒pCMV-EGFP-nAChR转染HEK293细胞成功表达nAChR蛋白于细胞膜上。噻虫啉促进nAChR-HEK293细胞内游离钙离子水平增加,并诱发nAChR-HEK293细胞内向型膜电流。结论噻虫啉促进异源表达nAChR-HEK293细胞胞内游离钙离子水平增加并诱发内向型膜电流。

Hoxa1通过MEK/ERK信号通路促进低氧下大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖、迁移和表型转换的研究

背景 低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary arterial hypertension,HPH)是一种以血管阻力持续性升高和血管重塑为特征的进展性疾病。研究表明Hoxa1参与血管生成过程,但Hoxa1在调控肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)中的作用尚不明确。目的 本研究旨在确定Hoxa1对PASMCs增殖、迁移和表型转化的调控作用。方法 使用Ⅱ型胶原酶消化分离培养原代大鼠PASMCs。采用1%低氧处理细胞构建低氧诱导的细胞模型,并检测24 h、48 h、72 h低氧处理的PASMCs中Hoxa1 mRNA和蛋白表达水平。采用干扰或过表达Hoxa1慢病毒下调或上调细胞中Hoxa1表达。慢病毒干扰实验分为常氧组(Normoxia)、低氧组(Hypoxia)、低氧空病毒组(Hypoxia+shRNA-NC)、低氧Hoxa1干扰病毒组(Hypoxia+shRNA-Hoxa1);慢病毒过表达实验分为对照组(Control)、过表达空病毒组(LV-NC)、过表达Hoxa1组(LV-Hoxa1)。采用EdU检测细胞增殖能力;RT-qPCR检测Hoxa1 mRNA表达;Western blot检测Hoxa1、表型转化标志蛋白、MEK/ERK信号通路蛋白表达;免疫荧光检测Hoxa1、α-actin表达;免疫共沉淀实验确定Hoxa1与MEK的相互作用。结果 成功分离培养PASMCs,并鉴定细胞表达α-SMA。低氧诱导下PASMCs中Hoxa1表达上调(P<0.05)。低氧下Hoxa1沉默抑制PASMCs增殖和迁移,而常氧下Hoxa1过表达促进PASMCs增殖和迁移(P均<0.05)。低氧下沉默Hoxa1导致Hypoxia+shRNA-Hoxa1组收缩型标志蛋白表达升高,合成型标蛋白表达降低(P<0.05)。而在常氧下过表达Hoxa1导致LV-Hoxa1组收缩型标志蛋白降低,合成型标志蛋白升高(P均<0.05)。此外,Hoxa1表达增加促进MEK/ERK信号通路激活。免疫共沉淀结果显示,Hoxa1与MEK存在相互作用。结论 Hoxa1可能通过激活MEK/ERK通路促进PASMCs增殖、迁移和表型转化。

肝门部胆管癌的外科治疗策略

肝门部胆管癌是最常见的胆道恶性肿瘤,目前根治性切除仍然是患者获得长期生存最主要的治疗方法,但其疗效至今无法令人满意,整体预后不佳。近年来,随着对该疾病临床认知、诊断和治疗策略的全面综合发展,使患者的生存期有所提高。但在胆道引流、剩余肝脏体积的处理、门静脉栓塞、手术方式的选择、肝移植等方面仍存在诸多争议。现回顾分析国内外相关文献,就以上争议问题进行综述,为改善患者预后提供参考。