表面展示SARS-CoV-2抗原蛋白乳酸乳球菌工程菌的构建

利用乳酸菌表达系统构建表达抗原蛋白的工程菌是探讨抗原应用的重要手段之一。本研究利用融合PCR技术将信号肽-细胞壁锚定蛋白结构域序列(Usp45-3LysM)分别与绿色荧光蛋白(GFP)、Omicron变异株上S1蛋白的受体结合位点结构域(RBD)序列融合,构建表达载体pNZ8149-GFP、pNZ8149-2RBD、pNZ8149-3RBD,转化乳酸乳球菌NZ3900(Lactococcus lactis NZ3900)构建了GFP、2RBD、3RBD表面展示工程菌菌株。结果表明工程菌受Nisin诱导表达GFP的最佳浓度和时间分别为20 ng/mL和20 h。蛋白质免疫印迹法(Western blot)和间接免疫荧光检测结果证明,3种目的蛋白都成功表达并展示于工程菌的细胞壁上,表明表面展示SARS-CoV-2抗原蛋白乳酸乳球菌工程菌已构建成功。本研究为新冠病毒或其他动物病毒的新型乳酸菌口服疫苗的研制及其相关产品的研发打下基础。

跨越式滚环扩增(SRCA)结合金纳米粒子可视化检测食品中的沙门氏菌

沙门氏菌是引起全球人类腹泻病的主要病因,严重危害人畜健康。传统检测方法耗时长,步骤繁琐,因此开展快速简便灵敏的可视化检测方法,具有重要意义。本文设计能与靶序列结合的探针,将其与金纳米粒子(AuNPs)结合。经跨越式滚环等温扩增技术(SRCA)扩增的靶序列,高温变性后成为单链,其与金纳米粒子上的探针结合后,释放出金纳米粒子,在MgSO_(4)的作用下,聚集呈现肉眼可见的蓝色,判定为阳性,阴性为紫色。依此,建立一种简便、快捷、灵敏的可视化检测方法。结果表明:该方法特异性良好,能够区分8株沙门氏菌阳性与8株非沙门氏菌阴性。可视化检测的灵敏度为5.5×10^(0)CFU/mL。将牛奶样品人工污染沙门氏菌,检出限为3.7×10^(0)CFU/mL。在50份实际样品检测中,与GB 4789.4-2016方法进行比较,该方法敏感性为100.00%,特异性为97.87%,符合率达到98.00%。本文建立的SRCA-AuNPs可视化检测方法,具有较高的应用价值,结果肉眼可见,适合于现场可视化检测和基层单位使用。

嗜热毛壳菌甘露聚糖酶Ct Man26的性质及其在甘露寡糖制备中的应用

旨在实现嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum)中的甘露聚糖酶Ct Man26在毕赤酵母(Pichia pastoris)中高效表达,探究重组酶Ct Man26的酶学性质及在甘露寡糖(mannooligosaccharides,MOS)制备中的潜力。甘露聚糖酶Ct Man26共含448个氨基酸,由碳水化合物结合模块CBM35、Linker及GH26家族的催化域模块组成,催化结构域上的Asp-395、Leu-396和CBM35辅助模块上的Leu-100受到多个疏水作用力,并可与Linker上氨基酸形成多个氢键。重组酶Ct Man26经P.pastoris表达后,存在N-糖基化修饰,蛋白表观分子质量约为55 kDa。重组酶Ct Man26的最适温度为55℃,最适pH值为5.0,50、60℃处理1 h后酶活力仍保持在90%以上,在pH 4.0~12.0范围表现出良好的稳定性。以魔芋甘露聚糖为底物时,重组酶Ct Man26的比活力为23.15 U/mg,米氏常数为4.75 mg/mL,最大反应速度为27.17μmol/(min·mg)。重组酶Ct Man26制备的MOS主要为甘露糖(14.2 mg/L)、甘露二糖(20.1 mg/L)、甘露三糖(6.1 mg/L)和甘露四糖(2.5 mg/L)。进一步研究发现,制备的MOS表现出较好的抗氧化能力,当样品质量浓度为2.4 mg/mL时,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除率、羟自由基清除率以及超氧阴离子自由基清除率分别为(90.80±0.65)%、(80.7±1.07)%、(69.10±1.10)%和(76.7±3.14)%。同时,MOS具有明显的益生元特性,能够抑制大肠杆菌(Escherichia coli)的生长,促进有益菌戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)和植物乳杆菌(Lactobacillu plantarum)的生长,且随着MOS添加量增加及培养时间的延长越发明显。综上所述,重组甘露聚糖酶Ct Man26具有较好的酶学特性,在MOS的制备中具有潜在的应用价值。

荞麦源性成分实时荧光PCR检测方法的建立

为检测荞麦类食品及原料中的荞麦源性成分,根据荞麦品种DW-1核酸序列信息(KY945277.1)设计了荞麦品种特异性引物;以苦荞和甜荞品种基因组为模板,建立了荞麦源性成分的实时荧光PCR(qPCR)的检测方法,并对购自市场的多个粮食产品进行检测,检测结果与商品标识相符方法特异性强、灵敏度高,为食品中荞麦源性成分的检测提供了新思路。

吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶突变体的构建和酶学性质表征

根据茂源链霉菌谷氨酰胺转氨酶点突变的结果,用重叠延伸PCR法构建了3个吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶突变体Tyr81ValGly82Asn、Tyr133Phe、Tyr360Ala,在巴斯德毕赤酵母GS115中表达并对其酶学特性进行了表征。结果表明,野生型和3个突变体的最适温度为40℃,最适pH 7;除了甘油外,其他有机试剂都降低了TGase的酶活力;与野生型相比,突变体Tyr81ValGly82Asn、Tyr133Phe和Tyr360Ala的比活力分别提高了9%、85%和30%;3个突变体与野生型相比,K_(m)、K_(cat)和K_(cat)/K_(m)值有所升高,表明突变可能降低了TGase与底物的亲和力,却加速了其催化效率。上述结果为通过点突变提高吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶酶活力提供了试验依据和途径。

桑椹葡萄复合果酒发酵工艺响应面法优化及其风味特征

以黑珍珠桑椹和赤霞珠葡萄为原料,进行桑椹葡萄复合果酒的研制,采用单因素试验及响应面试验对其发酵工艺进行优化,并通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析其挥发性风味物质特征。结果表明,桑椹与葡萄混合发酵的最佳质量比为1∶4,最佳发酵工艺为:酵母接种量2.0%、发酵温度24℃和发酵时间9 d。在此最佳条件下,桑椹葡萄复合果酒酒精度为13.6%vol,感官评分为90分。GC-MS共鉴定出50种挥发性香气成分,包括醇类20种、酯类9种、酸类10种、醛类3种、酚类3种、酮类1种、醚类2种、烯烃类2种。桑椹葡萄复合果酒色泽暗紫、幽深沉稳,果香与酒香协调,是一款兼具桑椹和葡萄果酒特有风味和营养功能的美酒。

G-四链体与As-PCR联用可视化检测沙门氏菌

沙门氏菌是食源性病原菌,常在食品媒介中传播,因此快速检测是控制该病原菌的关键。本研究用沙门氏菌基因组DNA作模板,通过对不对称PCR(As-PCR)扩增条件的优化,证明当非限制性引物HF终浓度0.4μmol/L,与限制性引物GR终浓度比10∶1、退火温度58℃,扩增40个循环时可获得最大浓度的单链DNA(ssDNA)产物。带有G-四链体序列的ssDNA与40μmol/L氯化血红素作用60 min时,G-四链体显示出最高的过氧化物酶活性。在此基础上,将As-PCR和G-四链体联用,实现了可视化检测沙门氏菌invH基因,在2 pg/μL~258 ng/μL的质量浓度区间,质量浓度对数与吸光值A421nm呈线性关系(y=0.0691x+0.3085,R2=0.9729)。对污染的牛奶样品检测,检出灵敏度高,为35 CFU/mL,且操作便捷,为病原微生物检测提供了新技术支撑。

传统发酵馒头工艺及改良剂添加优化

该文以传统风味馒头为研究对象,在单因素试验基础上,采用正交试验探究传统风味馒头最佳工艺以及各因素对馒头质构的影响,同时探究谷朊粉、单甘酯、瓜尔豆胶3种品质改良剂对馒头品质的影响,并在品质改良剂最佳添加量的基础上进行保质期试验。结果表明,最佳工艺为加水量44%、加水温度34℃、压面次数14次、碱添加量1.0%(与酸面团质量比)。正交试验结果表明,影响馒头感官评分的因素大小排序为加水量>碱添加量>加水温度>压面次数;谷朊粉添加量为2%(与面粉质量比)、单甘酯添加量为1.2%(与面粉质量比)、瓜尔豆胶添加量为0.5%(与面粉质量比)时,馒头感官评分最高。瓜尔豆胶和单甘酯能够有效降低储存期间馒头硬化速率,谷朊粉在馒头储存的前18 h对其硬度变化有改善效果;单甘酯的添加在一定程度上抑制馒头在储存期间霉菌的生长,瓜尔豆胶和谷朊粉抑制霉菌生长能力较差。

新型微生物菌肥对水稻产量构成的影响

与有机肥、牛粪和羊粪3种肥料作比较,设置施肥量4.50、7.50、11.25、12.00、15.00 t/hm^(2),以不施肥为对照,共21个处理,探讨新型微生物菌肥在冀北地区水稻种植的适用性及应用效果。结果表明,水稻产量表现为微生物菌肥>有机肥>羊粪>牛粪,施用11.25 t/hm^(2)微生物菌肥的水稻结实率达98.68%,产量为7740.15 kg/hm^(2),对水稻生长性状和产量构成有提升作用。综合分析,施用11.25 t/hm^(2)微生物菌肥为基底肥,能够促进水稻生长、增加产量,适宜在北方水稻高产栽培中推广应用。

微生物菌肥对水稻产量及土壤成分的影响研究

为探讨微生物菌肥在冀北地区水稻种植上的适用性及应用效果,比较微生物菌肥、有机肥、牛粪和羊粪4种肥料,设置施肥量300 kg/667m^(2),500 kg/667m^(2),750 kg/667m^(2),800 kg/667m^(2),1000 kg/667m^(2),以不施肥为对照,共21个处理,研究了不同肥料和施肥量对水稻产量的影响,并对未施肥和施用微生物菌肥的土壤进行了取样分析。结果表明:经相关性分析水稻产量依次表现为微生物菌肥>有机肥>羊粪>牛粪,亩施用750kg微生物菌肥的水稻产量是516.01 kg/667m^(2),高于未施肥128.63%,高于亩施750kg有机肥8.70%。与未施肥相比,施用微生物菌肥后的土壤全氮、全磷、全钾含量分别增加40.4%、25.00%和4.60%;重金属砷、镉、铜、铅和汞含量下降19.84%、38.8%、2.20%、45.75%和82.40%。综合分析表明:施用750 kg/667m^(2)微生物菌肥作为基底肥,能有效增加水稻产量,提升土壤养分,降低土壤中重金属含量,适宜在北方半湿润单季稻作区水稻高产栽培中推广应用。

产几丁质酶菌的分离鉴定及其抑菌作用的初步研究

从北京地区的土样、砂样和水样中分离并纯化了产生几丁质酶的菌株 ,其中CT14含几丁质酶活性最高 ,经对其细胞形态、菌落特征的观察和生化特性检测 ,证明该菌株是环状芽孢杆菌 (Bacilluscirculans)。其几丁质酶粗提液能抑制多种植物病原真菌的生长 ,表明它对植物病原真菌的拮抗作用具有广谱性。

镉对小麦、玉米幼苗生长和生理生化反应的影响

重金属镉对小麦、玉米的发芽率，幼苗生长，根的伸长都有抑制作用．但发现发芽初期，低浓度镉刺激种子萌发．随镉浓度提高，幼苗体内含镉量增加，幼苗叶片内叶绿素含量下降，质膜相对透性增高，丙二醛（ＭＤＡ）含量上升，表明幼苗受到了伤害；同时幼苗的保护酶（ＰＯＤ、ＳＯＤ）活性随镉处理浓度提高而增加，随处理时间延长出现先升后降的变化规律，表明幼苗能在一定程度上通过调节自身的代谢来适应和抵御外部伤害．

钙对渗透胁迫下玉米幼苗内源激素和多胺含量的影响(简报)

渗透胁迫下，玉米幼苗叶片中内源ABA含量增加，乙烯在较短时间内出现峰值，叶中腐胺（Put）、亚精胺（Spd）和精胺（Spm）先降后升。喷施CaCl2水溶液后叶中ABA增加的起始时间延迟，乙烯释放量减少，Put、Spd、Spm含量均增高。

苏云金芽孢杆菌cry1Ab13基因的克隆及表达研究

BtC0 0 5是我国自行分离的对多种害虫具有毒杀作用的苏云金芽孢杆菌 ,经PCR RFLP系统鉴定 ,它含有cry1Ab基因。Southernblot结果显示 :PstI酶切C0 0 5质粒所得的 8 5kb长的DNA片段为cry1Ab基因的阳性杂交带。以pUCP1 9为载体 ,克隆了该片段并证明其含有cry1Ab基因。对其进行亚克隆和测序 ,结果表明该基因编码区为 3 4 6 8bp ,其编码的蛋白含1 1 5 5个氨基酸 ,分子量为 1 3 0 6kD ,等电点为pH4 845。该基因已在GenBank基因库中注册 ,Accessionnumber为AF2 5 4 6 4 0 ,并为国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为cry1Ab1 3。将cry1Ab1 3基因在Bt无晶体突变株cryB- 中表达 ,蛋白质电泳结果表明在 1 3 0kD处有表达带 ,并证明CryAb对小菜蛾有较高的杀虫活性。

草莓褐变过程中主要氧化酶的活性变化

室温下草毒酚类物质逐渐减少，总的多酚氧化酶和游离多酚氧化酶活性则持续升高，SOD活性先降后升，POD活性先升后降，丙二醛含量呈上升趋势。低温处理可抑制多酚氧化酶活性的增加，使酚类物质保持较高水平，SOD、POD活性高于室温处理，丙二醛含量增加受阻。表明低温通过调节氧化酶活性而抑制褐变进程。

亚精胺对水分胁迫下玉米幼苗内源乙烯和多胺含量的影响(简报)

同正常供水相比，水分胁迫引起五米幼苗叶和报中乙烯在短时间内出现峰值，随后下降且保持较低水平。叶中腐胺、亚精胺和精胺均先降后升，喷施外源亚精胜俊叶中乙烯释放减少、亚精胺和精胺含量降低。根中腐胺、亚精胺含量在回升后又略有下降，精胺则呈下降趋势。

对鞘翅目害虫高毒力Bt基因cry3Aa7的分离克隆及表达研究

从国内分离的对鞘翅目叶甲科害虫高毒力的Bt菌株中克隆了 3.0kbcry3Aa基因大片段 ,完成了该片段的亚克隆和全序列测定。该基因编码区为 1932bps,编码的蛋白质由 6 4 4个氨基酸残基组成 ,分子量 73.1ku ,等电点为 pH5 .16 5 ,为弱酸性蛋白。该蛋白中Ser、Leu、Thr含量最高 ,分别为 8.2 2 %、8.0 7%和 7.76 %。通过穿梭载体将该基因导入Bt无晶体突变株中 ,获得工程菌Biot2 0 5。cry3Aa7基因在其中能正常表达 ,并形成扁方形晶体。工程菌Biot2 0 5对榆蓝叶甲 (Pyrrhaltaaenescens)校正死亡率为 86 .2 1%。该基因序列已在EMBL、GenBank中登记 ,并被国际Bt δ 内毒素基因命名委员会正式命名为cry3Aa7。

竹叶对食品致病菌的抑菌作用

竹叶的乙醇醋酸提取液A和乙醇提取液B对食品致病菌伤寒沙门氏菌、痢疾志贺氏菌、小肠结炎耶尔森氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、魏氏梭菌、肉毒梭菌均有不同程度的抑制作用。在相同时间内，竹叶提取液浓度越高，抑菌率就越高。同一浓度的提取液，作用时间越长，抑菌率也就越高。

乳糖酶的应用及发展现状

对水解酶 β 半乳糖苷酶的酶源、特性、体内代谢作简要介绍 ,同时讨论了固定化技术、基因工程技术生产乳糖酶的发展现状。

高产酒精酵母的筛选及鉴定

试验采用含有高浓度酒精选择性培养基从自然界中分离得到 1 1 5株耐高酒精酵母 ,经过初筛、复筛 ,得到 1株高产酒精酵母菌株SP 48,在料水比 1∶2 ,发酵 72h的条件下 ,静止发酵 ,成熟醪酒精的体积分数可达 1 6 2。经鉴定该酵母为酵母属 (Saccharomyces)的酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)。