9.1C3分子对人NK细胞和T细胞细胞毒作用的抑制效应

目的探讨9.1C3分子是否作为抑制型受体调节NK细胞和T细胞的杀伤功能。方法用抗CD56抗体和羊抗鼠IgG免疫磁珠分离混合淋巴细胞培养中活化的淋巴细胞 ,分选CD56 +细胞和CD56 -细胞分别作为效应细胞。采用重导向杀伤实验(redirectedkillingassay,RKA)观察抗9.1C3抗体对效应细胞杀伤小鼠肥大细胞瘤细胞P815作用的影响。结果发现人NK细胞和T细胞对P815细胞均有一定的杀伤作用 ,在效靶比为4∶1 ,2∶1和1∶1时 ,NK细胞和T细胞的杀伤率分别为:6.4% ,3.4% ,1.1%和21.2 % ,16.7 % ,6.5 %。用抗CD16和抗CD3抗体分别刺激NK细胞和T细胞时 ,它们对P815细胞的细胞毒作用显著增强 ;在相同的效靶比例 ,它们对P815的杀伤率分别为:47.1 % ,32.2% ,19.1 %和64.4 % ,50.3% ,39.5 %。但用抗9.1C3抗体刺激效应细胞时 ,不仅NK细胞的杀伤作用完全被抑制 ,CD16介导的NK细胞的杀伤作用也被明显下调 ,其杀伤率仅为18.5 % ,9.7 %和7.0 % ;但对CD3介导的T细胞的杀伤作用只轻度被抑制。结论9.1C3分子可能是一种新的抑制型杀伤细胞受体 ,对NK细胞和T细胞细胞毒作用的负调节可能有所不同。

9.1C3分子抑制杀伤性细胞的细胞毒作用及其机制

探讨 9 1C3分子对杀伤细胞功能的影响。方法 :以新鲜分离的PBMC或混合淋巴细胞培养活化的淋巴细胞为效应细胞 ,采用重导向杀伤实验 (Redirectedkillingassay ,RKA)观察 9 1C3抗体对效应细胞杀伤P815细胞作用及其杀伤过程中TNF 浕分泌的影响?峁?:9 1C3抗体能显著抑制杀伤细胞对靶细胞的细胞毒作用 ,并使效应细胞分泌TNF 浕水平降低。结论 :9 1C3分子是一种抑制型杀伤细胞受体。

9.1C3对CD2和CD3诱导的杀伤作用的影响及其机制探讨

目的 探讨９．１Ｃ３分子对ＣＤ２和ＣＤ３诱导的ＰＢＭＣ杀伤作用的影响及其作用机制。方法以活化ＰＢＭＣ为效应细胞，采用重导向杀伤实验（ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙ，ＲＣＡ），观察９．１Ｃ３对ＣＤ２、ＣＤ３介导效应细胞杀伤Ｐ８１５细胞作用的影响。以Ｊｕｒｋａｔ细胞为模型，用相应的抗体刺激细胞，通过荧光分光光度计，测定９．１Ｃ３对ＣＤ２、ＣＤ３诱导［Ｃａ２＋］ｉ升高的影响。结果９．１Ｃ３ ｍＡｂ能显著抑制ＣＤ２ ｍＡｂ介导活化ＰＢＭＣ对Ｐ８１５细胞的杀伤作用，但对ＣＤ３ ｍＡｂ介导杀伤的抑制作用较弱。以Ｊｕｒｋａｔ细胞为模型，发现ＣＤ２ ｍＡｂ经羊抗鼠Ｉｇ（ｇｏａｔ ａｎｔｉ ｍｏｕｓｅ Ｉｇ， ＧＡＭ Ｉｇ）交联后能诱导［Ｃａ２＋］ｉ的升高，当同时加入９．１Ｃ３ ｍＡｂ时，［Ｃａ２＋］ｉ的升高受到抑制；ＣＤ３ ｍＡｂ在没有ＧＡＭ Ｉｇ交联时即能引起［Ｃａ２＋］ｉ的升高，而９．１Ｃ３ ｍＡｂ对ＣＤ３ ｍＡｂ诱导［Ｃａ２＋］ｉ的升高有赖于ＧＡＭ Ｉｇ的交联。结论９．１Ｃ３分子对ＣＤ２和ＣＤ３介导的杀伤的抑制程度不同。抑制杀伤细胞脱颗粒依赖的［Ｃａ２＋］ｉ升高可能是９．１Ｃ３分子抑制活?

转录因子对B细胞发育的调控作用

B细胞同其他血细胞一样，也是由多能造血干细胞发育为祖细胞。再发育成终未成熟细胞的。发育过程中，向B细胞发育的前体细胞逐渐失去向其他谱系发育的潜能，B细胞谱系特征性基因开始表达。近来的研究表明；B细胞发育过程中有多种转录因子参与，它们调节多种重要基因的转录，保证B细胞的正常发育。本文综述了与B细胞发育相关转录因子的最新研究进展。

CD226和9.1C3特异性抗体对NK-92细胞杀伤作用的影响

目的 :探讨NK细胞活化型受体CD2 2 6和NK细胞抑制型受体 9 1C3分子特异性抗体对活化NK细胞系NK 92杀伤的调节作用。方法 :通过间接免疫荧光染色和FCM分析 ,鉴定CD2 2 6和 9 1C3分子在NK 92细胞的表达 ,采用51 Cr释放实验和重导向杀伤实验观察CD2 2 6mAb和 9 1C3mAb对NK 92杀伤作用的影响。结果 :NK 92细胞为CD2 2 6阳性 ,9 1C3弱阳性。CD2 2 6mAb和 9 1C3mAb对NK 92自然杀伤作用没有明显的调节作用。在重导向杀伤实验中 ,CD2 2 6mAb能增强NK 92对P815细胞的杀伤作用 ,而 9 1C3mAb对NK 92的自然杀伤以及CD2 2 6mAb诱导的杀伤均没有抑制作用。结论 :NK细胞活化型受体CD2 2 6分子可能参与NK 92细胞杀伤作用的正向调节 ,而NK细胞抑制受体 9 1C3分子对NK 92细胞杀伤功能的影响不大。

IFN-γ对IL-2基因转染B16细胞治疗肿瘤的增强作用

本实验在完成ＩＬ－２基因转染瘤苗的基础上，探索了重组ＩＦＮ－γ对其效果的增强作用。结果表明，ＩＬ－２基因转染使Ｂ１６细胞成瘤性显著降低；小鼠经ＩＬ－２基因修饰的Ｂ１６细胞免疫后，对接种的亲代Ｂ１６细胞有保护作用；ＩＬ－２基因转染的Ｂ１６细胞对接种亲代Ｂ１６细胞的小鼠有一定的治疗作用，与重组ＩＦＮ－γ联合应用后，治疗作用加强。上述结果表明，佐以合适的重组细胞因子，有可能提高单基因转染瘤苗的作用。

TLSF_(JM)对同种异体抗原诱导的小鼠杀伤性T细胞分化及效应功能的影响

本文以小鼠混合淋巴细胞反应为模型，研究了ＪＭ 急性Ｔ 淋巴细胞白血病细胞分泌的抑制因子（ ＴＬＳＦＪＭ）在体外对同种异体抗原诱导小鼠Ｔ 细胞增殖和杀伤性Ｔ 细胞分化的影响。结果表明：（１） ＴＬＳＦＪＭ 可明显抑制同种异体抗原刺激的Ｔ 细胞增殖， 且具有剂量依赖性；（２） ＴＬＳＦＪＭ 能有效地抑制同种异体抗原诱导的小鼠ＣＴＬ 分化；（３）ＴＬＳＦＪＭ 对杀伤相ＣＴＬ 的杀伤活性没有抑制作用。

HFRS患者血浆中TNF、sIL-2R、IL-6、IL-4和IFN-γ水平的变化及其意义

目的 :探讨肾综合征出血热 (HFRS)患者血浆中的TNF、sIL 2R、IL 6、IL 4和IFN γ水平的变化及其与血清中丙氨酸转氨酶ALT活性水平的相关性。方法 :利用双mAb夹心ELISA法检测HFRS患者血浆中细胞因子的水平 ,应用美国RA 10 0 0全自动生化仪检测患者血清中ALT的水平。结果 :HFRS患者血浆中TNF、IL 6、IL 4、IFN γ和sIL 2R水平分别为 (95 .82± 12 .0 4 )、(36 2 .4 6± 14 1.2 6 )、(17.76± 3.5 2 )、(116 .18± 19.80 )ng/L及 (89882 0± 12 72 0 0 )U/L ,健康对照组依次为 (17.89± 1.6 8)、(4 3.81± 18.0 8)、(4 .86± 1.14 )、(7.5 7± 2 .4 1)ng/L及(6 6 730± 2 96 90 )U/L、(P <0 .0 1) ;患者血清中ALT的水平也显著升高 ,为正常对照的 4 .4倍。通过相关性分析 ,发现TNF、sIL 2R、IL 6和IFN γ水平与患者血清中ALT的水平高度相关 (P <0 .0 1)。结论 :HFRS患者体内TNF、sIL 2R、IL 6和IFN γ水平显著升高 ,且与患者体内ALT水平的升高高度相关 。

用于构建抗人TNF嵌合抗体的鼠单克隆抗体中和活性的鉴定

目的:筛选构建抗人TNF嵌合抗体所需高质量的鼠源性mAb。方法:从一组分泌抗人TNF mAb杂交瘤细胞中,挑取3株D2、E6和F6,按常规方法制备腹水。用饱和硫酸铵盐析后,分别用蛋白A亲和层析和QFF阴离子交换层析法,纯化D2株分泌的mAb(IgG2b)和E6和F6株分泌的mAb(均为IgGl)。纯化前后,3株mAb的效价,采用间接ELISA法测定。纯化的3株mAb的中和活性,通过它们对TNF诱导的L929细胞死亡和上调ECV304细胞上ICAM-1表达的抑制作用来进行鉴定。结果:间接ELISA检测表明,3株mAb D2、E6和F6纯化前的效价分别为1×10-6、1×10-7和1×10-7,纯化后效价分别为0.01、0.002和0.002 mg/L。mAb中和活性的检测表明,浓度为0.16、0.40和0.50 mg/L的D2、E6和F6,可保护2×104U/L TNF诱导的L929细胞半数不发生死亡。1.0 mg/L的mAb D2、E6和F6,对2×105U/L TNF使ECV304细胞上ICAM-1表达上调的抑制率,分别为70.1％、60.1％和60.1％;3株mAb的浓度降到0.1 mg/L时,抑制率仍可达到60.1％、53.7％和59.0％。结论:所选3株mAb的效价及中和活性均较高,可作为抗人TNF嵌合抗体的候选mAb。

CD226(PTA1)单抗诱导NK细胞克隆杀伤靶细胞的研究

目的 :研究CD2 2 6分子在NK细胞克隆上的表达及功能。方法 :用有限稀释法建立NK细胞克隆并鉴定。采用重导向杀伤实验 (redirectedcytotoxicityassay ,RCA)观察CD2 2 6单克隆抗体对NK细胞克隆杀伤作用的影响 ,并用ELISA方法检测杀伤相培养上清中细胞因子水平的动态变化。结果 :获得 1株NK细胞克隆。在重导向杀伤实验中 ,CD2 2 6单克隆抗体能明显提高NK细胞克隆的杀伤水平 ;促进NK细胞克隆IFN γ和GM CSF的分泌。结论 :CD2 2 6是一种新的NK细胞活化性受体 ,IFN γ和GM CSF水平升高可能与NK细胞克隆功能有关。

人CD226基因SNP和启动子序列分析

目的 研究人CD2 2 6 (PTA1)启动子及其 5’上游调控序列。方法 应用计算机软件预测启动子序列 ,并分析人CD2 2 6基因 5’上游调控序列以及通过RT -PCR的方法研究开放读框中的单核苷酸多态性。结果 CD2 2 6基因在 -375bp处和 - 130bp处可能有两个启动子 ,含有AP - 1、Ets- 1、Sp1、P30 0、PU .1、PEA3等转录因子结合序列 ,在编码胞浆区的序列中存在一个单核苷酸多态性位点。结论 CD2 2 6基因表达受到多种转录因子和 5’端上游调控序列的调控。

抗人TNF单克隆抗体对TNF诱导的NF-κB核转位的抑制作用

目的 :鉴定 3株抗人TNF单克隆抗体 (mAb)D2、E6和F6对TNF诱导的NF κB核转位的抑制作用。方法 :将不同浓度的 3株mAb及无关mAb分别与TNF溶液孵育后 ,加入到ECV30 4细胞培养液中。孵育 1h后收获细胞 ,从中提取核蛋白并测定其含量 ,用电泳迁移率变动分析 (EMSA)检测核提取液中NF κB的核转位。结果 :3株抗TNFmAb均可抑制TNF诱导的ECV30 4细胞中NF κB的核转位。其中mAbD2的抑制作用最强 ,其次为mAbF6和E6 ,无关对照抗体也有一定的非特异性反应。抑制作用与加入的mAb呈良好的剂量依赖关系 ,在 10mg/L和 0 .1mg/L条件下 ,mAbD2的抑制率分别为 94 .2 %和75 .1% ,mAbE6分别为 6 4 .9%和 2 8.6 % ,mAbF6分别为 70 .3%和 4 9.5 % ,无关对照抗体分别为 2 0 .0 %和 11.1%。结论 :mAbD2、E6和F6可特异性地抑制TNF诱导的NF κB核转位 。

LAIR基因的克隆、原核表达及免疫反应性鉴定

目的 :克隆和表达淋巴细胞相关免疫球蛋白样受体 (leuko cyte associatedimmunoglobulin likereceptor ,LAIR ) ,鉴定抗LAIR 1单克隆抗体 (mAb)与LAIR 2分子的免疫反应性。方法 :利用RT PCR ,从人外周血单个核细胞 (PBMC)及白血病细胞系Jurkat和HL 6 0中克隆了LAIRcDNA。将LAIR 1的胞膜外区基因及LAIR 2cDNA ,克隆入GST融合蛋白表达载体pGEX 4T 3中。以其转化E .coliBL2 1菌株后 ,在IPTG诱导下进行表达 ,表达产物用谷胱甘肽交联的Sepharose 4B纯化。用间接ELISA法 ,鉴定抗LAIR 1mAb对表达蛋白的免疫反应性。结果 :克隆并表达了LAIR 1和LAIR 2cDNA。同时克隆了 5种新的LAIR 1异型 ,其中从HL 6 0细胞克隆的 2种包含LAIR 1开放读框 (ORF) ,从Ju rkat细胞中克隆的 3种为LAIR 1cDNA片段。mAb鉴定表明LAIR 1与LAIR 2的免疫反应性不同。结论 :LAIR基因的转录、转录后的加工及表达 ,可能与个体和疾病状态有关。LAIR 1和LAIR

LAIR-2单克隆抗体的制备、鉴定和夹心ELISA方法的建立

为了制备LAIR 2单克隆抗体并建立夹心ELISA方法。应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗LAIR 2单克隆抗体 (mAb )。采用间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定LAIR 2的细胞分布。辣根过氧化物酶 (HRP )标记LAIR 2mAb ,并建立检测LAIR 2的夹心ELISA方法。用重导向杀伤实验 (RCA )鉴定LAIR分子参与调节杀伤功能的关系。结果成功地制备了 3株特异识别LAIR 2的mAb ,1株mAb (3G4 )能够识别LAIR 1和LAIR 2的共同表位 ,但不能在重导向杀伤实验中抑制CD16诱导的杀伤功能。夹心ELISA方法检测LAIR 2的敏感性为 5ng/ml,为LAIR

小鼠CD226(PTA1)的基因克隆及其异型

目的 :克隆小鼠CD2 2 6 (PTA1)分子。方法 :从GenBank中检索出与人CD2 2 6分子在氨基酸水平上有 5 1%同源性的EST序列 ,设计并合成特异性引物 ,采用快速扩增cDNA末端的RACE方法 ,从 4周龄BALB c小鼠的胸腺中扩增小鼠CD2 2 6cDNA序列。结果 :克隆出完整的小鼠CD2 2 6cDNA ,长 2 2 2 3bp ,其中开放读框为 10 0 2bp ,编码含信号肽在内的 333个氨基酸 ,属免疫球蛋白超家族分子 ,较人CD2 2 6分子少了 3个氨基酸 ,在氨基酸水平上有 5 3%的同源性。此外 ,还克隆了小鼠CD2 2 6分子的 3种异型。结论 :成功克隆出小鼠CD2 2 6 (PTA1)cDNA ,并发现 3种异型 ,全面探讨该分子生物学特性 ,进行体内功能实验 ,基因敲除小鼠和转基因小鼠的研究提供了坚实的基础。

一种新的人活化T细胞抗原p140的分布及其功能的研究

目的观察一种新的活化T细胞膜分子p140的分布、相对分子质量(Mr)和功能。方法用免疫荧光染色和流式细胞术观察p140分子的分布;采用重导向杀伤实验观察其对杀伤功能的调节;应用生物素标记细胞膜分子、免疫沉淀及化学发光测定p140的Mr。结果p140分子可选择性地表达于混合淋巴细胞培养(MLC)所产生的活化T细胞表面,而在抗CD3mAb、PHA、PMA或PMA+A23187几种刺激剂活化的人外周血单个核细胞(PBMC)上未见表达。p140还分布于一些人急性T细胞性白血病细胞系。在重导向杀伤实验中,p140与CD3分子有协同作用。p140Mr为140000。结论p140可能为一种新的移植抗原诱导的T细胞活化分子,同CD3分子具有协同刺激作用。

Notch信号途径效应分子HES1的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定

目的 原核表达HES1分子 ,并制备其特异性多克隆抗体 ,以研究该分子在肿瘤细胞中的表达情况。方法 诱导表达GST HES1融合蛋白和GST ,经谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和纯化后 ,用GST偶联预激活的Sepharose 4B ,以GST HES1为免疫原制备兔抗血清。得到的抗血清经GST Sepharose 4B吸收抗GST成分 ,以间接ELISA和Westernblot鉴定抗体特异性 ,以Westernblot分析胃癌、结肠癌及其相应非癌变组织中HES1的表达水平。结果 成功地表达并纯化了GST HES1融合蛋白。制备的抗HES1多克隆抗体具有很高的特异性 ,与GST或大肠杆菌成分无交叉反应 ,用于进行天然HES1分子的Westernblot检测时效果良好。初步检测发现 ,胃癌和结肠癌中HES1的表达水平明显高于相应的正常组织。结论 通过原核表达并纯化HES1,成功地制备了该分子的特异性多克隆抗体 。