干细胞移植治疗脊髓损伤研究进展

学术背景：目前治疗脊髓损伤应用比较多的方法是细胞移植治疗和神经营养因子的应用。移植的细胞可在损伤部位存活、整合入宿主组织中,分化出神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,并且和宿主细胞之间可形成突触样结构,使中枢神经系统的功能得到部分恢复。目的：总结神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的研究进展。检索策略：应用计算机检索Pubmed数据库1985-01/2007-10期间的相关文献,检索词为“Spinal Cord Injuries,Neural,Stem Cell Transplantation”。并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中文科技期刊数据库1989-01/2007-06期间的相关文章,检索词为“脊髓损伤,神经干细胞,神经元,干细胞移植”,并限定文章语言种类为中文。对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准：文章所述内容应与移植干细胞后脊髓损伤后神经轴突的再生与修复等研究进展中的应用相关。排除标准：重复研究或Meta分析类文章。共收集到66篇相关文献,31篇文献符合纳入标准,排除的35篇为内容陈旧或重复文献。文献评价：符合纳入标准的31篇文献中,23篇涉及移植后损伤脊髓神经元和轴突、髓鞘的再生及功能修复的研究,8篇涉及存在的问题与展望。资料综合：①在脊柱骨折中约有16%~40%并发脊髓损伤。脊髓损伤传统治疗仅限于脊柱骨折脱位的复位固定、解除脊髓压迫、对症及康复治疗,疗效较差。②近年来随着神经病理生理及神经发育学研究的不断深人,神经组织或非神经组织移植逐渐应用于脊髓损伤并取得了肯定的成绩。③干细胞具有自我更新能力,植入受损部位后,其释放的营养因子能促进神经元的再生,且再生轴突能快速穿越移植物与宿主组织的边界,重建轴突的连续性。④关于干细胞及营养因子在损伤脊髓修复方面的研究虽已取得较大进展,但仍存在对神经再生的不利因素,如髓鞘相关抑制分子和胶质瘢痕形成,免疫排斥等。结论：干细胞移植是治疗脊髓损伤的理想方案,可恢复损伤大鼠脊髓的部分功能。

他克莫司促进神经干细胞移植大鼠脊髓损伤的再生与修复

背景:研究证实,他克莫司不仅抑制T细胞的增殖、活化,还能抑制小胶质细胞、巨噬细胞等炎症细胞在损伤局部聚集、活化及相关炎症因子的释放,减轻继发性炎症反应对原发损伤周围正常组织的破坏,从而对损伤局部的神经组织起保护作用。目的:观察他克莫司对神经干细胞移植大鼠脊髓损伤后再生修复的影响。方法:分离培养孕13dSD大鼠神经干细胞。显微镜下动脉瘤夹夹闭SD大鼠T8脊髓,建立压迫型脊髓损伤动物模型。损伤后7d随机数字表分为3组:对照组,于损伤中心定向注射生理盐水;细胞移植组,于损伤中心定向注射神经干细胞;他克莫司组,于损伤中心定向注射神经干细胞同时给予免疫抑制剂他克莫司1mg/(kg?d)腹腔注射连续7d。1,2,4,8周后,通过BDA顺行示踪、苏木精-伊红与免疫组化染色及电镜检测,观察移植后脊髓组织再生和神经元的变化。结果与结论:对照组在损伤中心端远侧无神经纤维通过。细胞移植组与他克莫司组在治疗1周后有部分神经纤维通过,8周均有部分BDA阳性标记的皮质脊髓束再生通过脊髓损伤部位,特别是他克莫司组可延续至距损伤中心1.7cm。苏木精-伊红染色显示,细胞移植组与他克莫司组2周时坏死灶开始缩小,泡沫细胞减少。电镜结果显示,他克莫司组1周时即出现较正常的微丝和微管结构,8周时星形细胞、许旺细胞、髓鞘典型多见,神经轴突的终末有较多的兴奋性递质和不典型的轴树连接,出现较多的结构正常的髓鞘。说明损伤大鼠移植神经干细胞后联合应用他克莫司后可减轻早期的急性炎症反应,保证神经细胞的存活,具有神经保护和神经营养作用,可加快神经功能的恢复。

牛磺酸对液压冲击伤后神经细胞内钙超载的保护作用

目的探讨牛磺酸对液压冲击伤模型神经细胞伤后不同时间细胞内游离钙超载的保护作用。方法采用激光扫描共聚焦显微镜观察液压冲击伤模型伤后24 h和48 h神经细胞形态变化,并检测细胞内游离钙表达水平变化。结果损伤后,神经细胞肿胀,体积增大,突起回缩,细胞内游离钙表达水平升高,于伤后24 h达峰值水平,至伤后48 h仍维持在较高水平且高于对照组(均P<0.01)。经牛磺酸治疗后,神经细胞肿胀明显改善,接近正常细胞大小,突起回缩程度减轻,细胞内游离钙表达水平逐渐降低(均P<0.01),且各时间点均低于创伤组(P<0.01),以伤后1 h牛磺酸治疗48 h组效果最佳,细胞内游离钙表达水平接近正常值水平(P>0.05)。结论牛磺酸对液压冲击伤模型神经细胞内钙超载具有较好的保护作用,尤以伤后1 h予以牛磺酸并维持治疗48 h对神经细胞保护作用最佳。

三氧化二砷对人胶质瘤细胞株U251影响的实验研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)抗人胶质瘤细胞株U251的作用及机制.方法采用0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L As2O3诱导人胶质瘤细胞株U251,于培养第1、2、3、4、5、6 d应用倒置相差显微镜、四甲基偶氮唑蓝法、流式细胞仪观察人胶质瘤细胞株U251的存活,形态学改变及细胞DNA含量的变化.结果0.5～4μmol/L的As2O3明显抑制U251的增殖.流式细胞仪分析显示,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰,且G0/G1期细胞减少,诱导细胞凋亡.结论体外三氧化二砷能抑制人胶质瘤细胞U251增殖,提示有希望用于神经胶质瘤患者的治疗.

提高大脑皮质神经元细胞产率以及活性的研究

目的 提高培养大脑皮质神经元的产率以及活性 ,使实验的细胞模型有良好的一致性和可比性。方法 实验分析了大脑皮质神经元培养过程中 ,从选材、取材到分散细胞等一系列步骤中维持细胞活性的内在因素 ,应用细胞形态学指标 ,Trypanblue染色计数分析以及染色观察。结果 每侧大脑皮质得到细胞约 2 .5× 10 6～ 3.0× 10 6个 ,而且种植不同时间 6 ,12 ,48h细胞存活率均在 95 %以上。结论 该法是较好的大脑皮质神经元培养方法。

液压冲击对体外神经细胞钙超载的影响及牛磺酸的作用

目的探讨液压冲击对体外神经细胞钙超载的影响及牛磺酸的作用。方法将体外培养的神经细胞随机分为①正常对照组:将未经任何处置的神经细胞分为24 h组和48 h组;②创伤组:液压冲击致神经细胞创伤24 h和48h组;(3)牛磺酸组:分别于神经细胞创伤后0 h和1 h给予牛磺酸(终浓度为0.50 mmol/L)治疗。观察24 h和48 h,分别为0 h 24 h0、h 48 h1、h 24 h、1 h 48 h组。用激光扫描共聚焦显微镜(Iaser Scanning Confocal Microscope,LSCM)观察各组细胞形态,同时以Fluo-3/AM为钙离子荧光指示剂负载各组细胞,测定24 h和48 h后细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。结果①组织形态学变化:与正常对照组比较,伤后24 h和48 h创伤组神经细胞胞体肿胀、突起回缩;牛磺酸治疗组神经细胞胞体无明显肿胀,突起回缩明显改善。②细胞内[Ca2+]i改变:创伤后即刻细胞内[Ca2+]i水平即开始升高,24 h达峰值水平,48 h仍维持于较高水平,显著高于正常组(P<0.01);牛磺酸治疗0 h或1 h,24 h和48 h均能明显降低细胞内[Ca2+]i,创伤后1 h给药的[Ca2+]i显著低于0 h给药(P<0.01),且随着时间的推移,对神经细胞的保护作用逐渐增强。结论牛磺酸对液压冲击伤后大鼠神经细胞内Ca2+超载有较好的保护作用,创伤后1 h给药并维持48 h,对神经细胞保护作用最佳。

人胚中脑神经干细胞的分离、增殖及分化的研究

目的 探讨人胚中脑腹侧神经干细胞的分离、增殖条件及分化方向。方法 应用表皮生长因子（EGF）和成纤维细胞生长因子-2（FGF-2）使人胚中脑腹侧幼稚细胞维持在未分化状态并促进其增殖;通过克隆分析、细胞增殖曲线及流式细胞仪检测培养细胞的增殖能力;应用免疫组织化学方法鉴定这些细胞的分化方向。结果 该细胞群具有一定的增殖能力,在撤除生长因子后至少能分化为神经元和星形胶质细胞,但未检测到多巴胺能神经元。结论 从人胚中脑腹侧分离出的幼稚细胞具有一定的增殖和自我更新能力,有多向分化潜能,具备中枢神经系统干细胞的一般特征。

颅脑损伤患者生活质量量表中文版本效度和信度的初步评价

目的评价颅脑损伤患者生活质量量表(quality of life after traumatic injury,QOLIBRI)中文版本的效度和信度。方法选取符合纳入标准的20例患者为调查对象,用调查-再调查(test-retest)方法实施调查。通过重测信度和内部一致性Cronbach sα系数评价其信度;进行SF-36、GOSE、HADS、MMSE量表评分,通过与QOLIBRI量表相关分析考察其效度。结果量表各亚组的重测信度系数为0.915-0.995,具有稳定的重测信度。各亚组内部一致性系数(Cronbach sα)为0.505-0.965,内部一致性尚可。QOLIBRI各亚组与SF-36总分显著相关,QOLIBRI(除人际关系领域外)绝大多数亚组与GOSE相关。多数亚组与HADS相关,仅少数条目与MMSE相关。结论QOLIBRI具有较好的信度和效度。

脑活素对液压冲击伤后原代神经细胞内游离钙的影响

目的探讨脑活素对液压冲击伤后神经细胞内游离钙的作用。方法原代培养的神经细胞分(1)正常组,(2)创伤组:液压冲击致神经细胞创伤后24h和48h组,(3)脑活素治疗组:分别于神经细胞创伤后0、1h给予1.25ml.L-1脑活素治疗(0h给药和1h给药组)。用激光扫描共聚焦显微镜和Ca2+荧光探针Fluo-3/AM观察细胞创伤后24h和48h细胞内游离钙[Ca2+]i的变化。结果神经元细胞创伤后,伤后24h神经元胞质内钙离子浓度达高峰,48h仍维持在较高水平;脑活素0或1h治疗后,在24h均能明显减轻创伤神经元细胞内的钙超载,48h后只有1h给予脑活素的细胞钙离子强度降低。结论脑活素对创伤的神经细胞有保护作用,且具有治疗时间窗。

冷诱导RNA结合蛋白在亚低温下的神经保护作用研究

目的研究亚低温下冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)对受损海马神经元的保护作用机制。方法将原代培养的海马神经元分为3组:对照组、损伤组和治疗组。氧糖剥夺55min制作海马神经元损伤模型,损伤组和治疗组在氧糖剥夺55min后分别置于37℃和32℃培养24h。收集各组细胞,MTT检测各组细胞的存活率,荧光定量PCR和Western blot检测CIRP的mRNA和蛋白的表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,损伤组细胞生存率明显下降[(43.3±8.1)%vs(100.0±12.7)%,P<0.05],治疗组细胞生存率明显升高[(71.8±13.6)%vs(43.3±8.1)%,P<0.05],与损伤组比较,治疗组细胞凋亡率下降[(19.5±0.6)%vs(30.7±2.5)%],CIRP的mRNA蛋白表达明显升高,Caspase-3蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论亚低温下CIRP表达水平升高,通过抑制细胞凋亡发挥神经元保护作用,是亚低温脑保护作用途径之一。

脑脊液引流对颅脑创伤后免疫损伤的影响

目的:探讨脑脊液引流对颅脑创伤后血清抗脑抗体及白细胞介素(IL)-1β水平的影响。方法:32只大白兔随机分为对照组和脑脊液引流组(引流组),每组16只。脑损伤后0～7d每天取患兔脑脊液1mL,对照组将脑脊液回注入脑池;引流组弃去脑脊液。2组均于创伤后第1、3、7、14、21天取血2mL,分离血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-1β和抗脑抗体(ABAb)水平。结果:创伤后对照组ABAb水平逐渐增高,第14天达高峰,之后下降;引流组伤后第1天ABAb水平最高,之后逐渐降低。除第1天外,其他各时点的ABAb水平引流组均低于对照组(P<0.01)。2组创伤后IL-1β水平第1天均最高,之后逐渐降低。除第1天外,其他各时点的IL-1β水平引流组均低于对照组(P<0.05)。引流组好转率高于对照组,病死率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:脑脊液引流可以减少脑组织周围的炎性因子,从而减轻颅脑创伤后的免疫损伤。

亚砷酸体外对人肝癌细胞株BEL-7402影响的初步研究

目的 体外培养人肝癌细胞株BEL 740 2 ,从多个角度探讨三氧化二砷 (As2 O3 )的抗肿瘤作用及其机制。方法 应用倒置相差显微镜、电子显微镜、透射电镜、流式细胞仪 ,分别对不同浓度加药组及对照组BEL 740 2细胞的存活 ,形态学改变 ,细胞DNA含量的分布进行了观察和测定。结果 0 5、1、2 μmol/LAs2 O3 均能抑制人肝癌细胞株BEL 740 2细胞的生长增殖。流式细胞仪分析显示 ,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰 ,且G0 /G1期细胞减少 ,S期细胞增多 ;电镜下 ,对照组细胞核质比大、核大、核膜有明显切迹 ,0 .5 μmol/LAs2 O3 组细胞核质比减少、核变圆、胞浆内出现分化良好的细胞器 ,0 5、1、2 μmol/LAs2 O3 组均可见细胞膜完整、核固缩、凋亡小体形成。结论 三氧化二砷不仅抑制人肝癌细胞增殖 ,而且诱导细胞凋亡。

脑蛋白水解液对大鼠神经胶质细胞间缝隙连接通讯的研究

目的探讨脑蛋白水解液对大鼠神经胶质细胞间缝隙连接通讯功能的影响。方法由大鼠神经干细胞诱导培养神经胶质细胞至致密单层,分为脑蛋白水解液组、对照组及佛波酯阴性对照组继续培养,利用划痕标记染料示踪技术,以荧光黄染料在细胞间的扩散距离作为评价缝隙连接通讯的指标,测定脑蛋白水解液对大鼠胶质细胞间缝隙连接通讯的影响;采用逆转录-聚合酶链反应法检测脑蛋白水解液组和对照组细胞Cx43 mRNA表达的变化。结果脑蛋白水解液组荧光黄染料5 min扩散距离为(189．80±6．56)μm,对照组扩散距离为(154．70±6．02)μm,组间差异有统计学意义(P<0．01);逆转录-聚合酶链反应检测显示脑蛋白水解液组细胞中Cx43 mRNA相对表达量为0．89±0．13,高于对照组细胞的0．67±0．10,两组比较差异有统计学意义(P<0．01)。结论脑蛋白水解液可通过上调胶质细胞Cx43基因的表达水平,增强大鼠胶质细胞间缝隙连接通讯,这可能是其在机体损伤修复过程中对胶质细胞起保护作用的重要机制。

三氧化二砷对人肝癌细胞株的影响

三氧化二砷是中药砒石的主要成分,治疗急性早幼粒细胞白血病已获得满意疗效,其完全缓解率在初治患者达73%,复发患者也达52%,最长缓解期超过10 a.本药静脉给药为宜,不产生明显毒副作用,并且在治疗白血病时与其他化疗药之间无交叉耐药性.为进一步拓展药用价值,扩大其肿瘤谱及临床治疗应用谱,我们探讨三氧化二砷对人肝癌细胞株生长的抑制作用及其机制,为其用于肝癌治疗提供理论依据.1 材料和方法1.1 材料人肝癌细胞株 BEL-7402由哈尔滨医科大学公卫学院李洪源老师惠赠.

重型颅脑创伤大鼠后期脑水肿研究及牛磺酸转运体的作用

目的研究牛磺酸转运体(Tau T)在牛磺酸调节重型颅脑创伤大鼠后期脑水肿中的作用。方法将40只大鼠按随机数字表法分为4组:假手术组(Sham组)、脑外伤组(TBI组)、牛磺酸预防组(Pre-Tau组)和牛磺酸治疗组(Tau组)。液压冲击法制作重型颅脑创伤大鼠模型。Pre-Tau组和Tau组分别在造模前或后给予120 g/L的牛磺酸溶液,其他两组给予等量的等渗生理盐水。7 d后用干湿重法检测脑组织中脑水含量,实时荧光定量PCR和West-ern Blot方法检测Tau T和水通道蛋白(AQP4)的m RNA表达及蛋白含量。结果与Sham组相比,TBI组脑水含量、AQP4的m RNA和蛋白表达水平均显著升高,Tau T的m RNA和蛋白表达水平显著降低。与TBI组比较,Pre-Tau组和Tau组脑水含量、AQP4的m RNA和蛋白表达水平显著降低、Tau T的m RNA表达明显升高;Tau组Tau T的蛋白表达明显升高;Pre-Tau组Tau T的蛋白表达有所升高,但差异无统计学意义。AQP4的m RNA和蛋白表达水平与脑水含量呈正相关(r分别为0.621和0.457),AQP4的m RNA与蛋白表达亦呈正相关(r=0.459)。结论牛磺酸通过提高重型颅脑创伤大鼠后期Tau T的表达水平,降低脑水含量和AQP4的表达,发挥神经元保护作用。

神经外科手术中预防性应用抗生素的研究进展

感染是神经外科手术术后常见的并发症,预防性应用抗生素是长期以来多数神经外科医生采取的预防术后感染的方法。预防性抗生素的应用经历了早期的探索阶段、随机双盲实验及指南形成阶段。但随机双盲实验多数是在上世纪八九十年代进行的,近期研究较少。随着抗生素的长期、广泛应用,细菌耐药谱已经发生很大变化,对预防性应用抗生素的种类再次产生争论,甚至在清洁的神经外科手术中预防性应用抗生素的合理性也受到质疑。本文对神经外科预防性应用抗生素的历史及现状做一综述。

大鼠脊髓损伤的感觉及运动传导通路的电生理学检测

脊髓损伤后再生修复的研究一直是神经科学领域的前沿课题之一，而脊髓损伤程度的评价对指导治疗、判断预后具有重要参考价值。我们利用体感诱发电位（SEP）和运动诱发电位（MEP）连续监测脊髓损伤的发生、发展过程，拟为脊髓损伤后的神经功能修复研究提供理论依据。

颅脑创伤后期大鼠代谢型谷氨酸受体5表达变化及牛磺酸治疗作用

目的探讨颅脑创伤后期(第7天)大鼠脑组织代谢型谷氨酸受体5(m Glu R5)表达变化,以及牛磺酸治疗作用。方法液压脑损伤打击仪制备液压打击颅脑创伤大鼠模型,采用随机数字表法将30只无特定病原体级Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、颅脑创伤组和牛磺酸治疗组(各10只),干湿重法检测大鼠脑组织含水量,实时荧光定量聚合酶链反应和Western blotting法检测水通道蛋白4(AQP4)和m Glu R5 m RNA和蛋白表达变化。结果与对照组相比,颅脑创伤组大鼠脑组织含水量(t=4.893,P=0.002)、AQP4 m RNA(t=6.523,P=0.000)和蛋白(t=4.366,P=0.008)表达水平升高,m Glu R5m RNA(t=5.776,P=0.001)和蛋白(t=3.945,P=0.014)表达水平降低;经牛磺酸治疗后,大鼠脑组织含水量(t=2.151,P=0.140)、AQP4 m RNA(t=1.144,P=0.432)和蛋白(t=0.367,P=0.804)降至正常水平,m Glu R5 m RNA(t=1.824,P=0.216)和蛋白(t=1.185,P=0.414)升至正常水平。相关分析显示,脑组织含水量与m Glu R5 m RNA(r=-0.617,P=0.014)和蛋白(r=-0.665,P=0.007)呈负相关,与AQP4蛋白呈正相关(r=0.658,P=0.008)。结论牛磺酸可以升高颅脑创伤后期(第7天)大鼠脑组织m Glu R5表达水平,降低脑水肿和脑组织含水量,具有抑制性神经递质作用。

牛磺酸对重度颅脑创伤大鼠脑组织AQP4/牛磺酸转运体基因的影响

目的研究牛磺酸(Tau)对重度颅脑创伤(TBI)大鼠脑组织的脑组织含水量、水通道蛋白-4(AQP-4)/Tau转运体(TAUT)基因表达的影响。方法按随机数字表法将84只雄性SD大鼠分为7组:假手术组(Sham组)、脑外伤组(TBI组)、Tau治疗组(Tau组),Tau预防组(Pre-Tau组)、β-丙氨酸组(β-Ala组)、维生素C组(Vc组)、叶酸组(Fa组),每组12只。后6组均采用液压打击制作重度TBI模型。造模成功后即刻尾静脉给药200 mg/kg。Sham组和TBI组给予相同量等渗盐水,24 h后取脑。采用HE染色法观察TBI后各组脑组织形态学变化、测定脑组织含水量,用荧光定量RT-PCR方法检测AQP-4/TAUT基因表达。结果形态学检查:TBI 24 h后,神经细胞肿胀,细胞丢失,细胞核固缩,突起短小消失,坏死灶边缘可见炎性细胞浸润,β-Ala组同TBI组。但与TBI组比较,Tau组、Vc组、Fa组、Pre-Tau组形态上无显著改善;脑组织含水量:与Sham组相比,TBI组、β-Ala组伤后24 h显著升高(P<0.05)。而Tau组、Vc组、Fa组明显降低,与Sham组无统计学差异;Pre-Tau组显著低于Sham组(P<0.05)。基因表达:与Sham组相比,TBI组脑组织AQP-4 mRNA表达量显著升高(P<0.05),Fa组TAUT mRNA表达量显著升高(P<0.05)。结论 Tau、Vc、Fa及Tau预防性治疗均可以显著降低脑水肿和AQP-4基因表达,对TBI后脑水肿有较好的治疗作用,但Tau、Vc对TBI早期的TAUT无调节作用,其对脑组织含水量的有效性并不是通过调节TAUT实现的。