川续断皂苷Ⅵ诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化的研究

目的探讨川续断皂苷Ⅵ(akebia saponin D)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的影响。方法用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,选择合适的培养基,传代扩增。采用不同浓度的川续断皂苷Ⅵ对大鼠MSCs定向诱导分化,MTT法观察各组对MSCs的增殖作用并绘制细胞生长曲线;观察MSCs诱导分化过程中成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaliphosphatase,ALP)活性;采用ELISA法检测MSCs诱导分化过程中骨钙素(Osteo-calcin,OC)的含量;RT-PCR方法检测MSCs诱导分化过程中核心结合因子α-1(Cbfα1)mRNA表达。结果细胞生长曲线显示各组MSCs数量均随时间延长而增加,中、高浓度的川续断皂苷Ⅵ能明显提高MSCs分化为成骨细胞的ALP活性和骨钙素的含量,且使Cbfα1 mRNA的表达升高。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进大鼠体外MSCs向成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高Cbfα1 mRNA的表达有关。

淫羊藿苷对去卵巢大鼠骨和下丘脑不同核团ERβ mRNA表达的影响

目的观察淫羊藿苷对去卵巢大鼠骨和下丘脑不同核团ERβmRNA表达的影响,探讨其治疗绝经后骨质疏松的作用机制。方法将10～11月龄SD♀大鼠60只,随机分为假手术组、去卵巢模型组、淫羊藿苷小、中、大剂量组(每组12只)。以双侧卵巢切除法建立大鼠骨质疏松模型。分别用淫羊藿苷小、中、大剂量给药4个月,采用RT-PCR法,观察各组大鼠骨和下丘脑室旁核、视上核、弓状核ERβmRNA表达的变化。结果大鼠卵巢切除后,血清E2水平、椎骨骨密度、子宫湿重、胫骨和下丘脑弓状核ERβmRNA表达明显降低(P<0.01),下丘脑室旁核、视上核ERβmRNA表达均明显升高(P<0.01)。与去卵巢模型组比较,淫羊藿苷50.0和100.0 mg.kg-1组治疗后,血清E2水平、椎骨骨密度、胫骨和下丘脑弓状核ERβmRNA表达明显升高(P<0.01),下丘脑室旁核、视上核ERβmRNA表达均明显降低(P<0.01),子宫湿重无明显改变(P>0.05)。结论淫羊藿苷可以改善切除卵巢所致的骨质疏松大鼠的骨密度,对子宫无不良反应。其机制可能与其选择性调节去卵巢骨质疏松大鼠下丘脑不同核团ERβmRNA表达水平有关,调节下丘脑功能活动是其途径之一。

地黄活性成分梓醇对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响

目的检测地黄活性成分梓醇对成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。方法制备不同浓度地黄活性成分梓醇提取液。以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为药物筛选的细胞模型;用MTT法测定不同浓度的梓醇溶液的促细胞增殖作用;采用ALP活性和骨钙素定量检测分别观察不同浓度的梓醇溶液的促细胞分化作用;以Vonkos-sa钙化染色法了解不同浓度的梓醇溶液的促细胞钙化作用。结果梓醇在1×10-7～1×10-9mol·L-1浓度范围内培养24及48h促进成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-148及72h提高成骨细胞株MC3T3-E1细胞内碱性磷酸酶的活性。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养8及12d时能明显促进成骨细胞MC3T3-E1骨钙素合成和分泌。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养19d时成骨细胞株MC3T3-E1细胞的矿化结节(mineralized bone nodular structure,MBNS)数目增多。结论梓醇可以提高成骨细胞株MC3T3-E1增殖和分化能力,梓醇可能是地黄治疗骨质疏松作用的活性成分之一。

柚皮苷对乳鼠成骨细胞增殖及c-fos、c-jun表达的影响

目的研究柚皮苷(naringin)对体外培养的小鼠成骨细胞增殖及c-fos和c-jun表达的影响。方法取第1代BALB/c小鼠颅盖骨成骨细胞,将柚皮苷以0.1、1、10μmol·L-1 3种浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,MTT法观察各组对成骨细胞的增殖作用并绘制细胞生长曲线,用PNPP法测定成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaliphos-phatase,ALP)活性,RT-PCR法检测成骨细胞c-fos和c-jun的转录水平。结果细胞生长曲线显示各组成骨细胞数量均随时间延长而增加,中、高浓度的柚皮苷能提高成骨细胞的ALP活性,促进c-fos mRNA表达(P<0.01),对成骨细胞c-jun mRNA表达增强作用不明显(P>0.05)。结论低浓度柚皮苷(0.1μmol·L-1)对骨更新作用不明显,而中、高浓度的柚皮苷(1、10μmol·L-1)能通过上调c-fos mRNA表达,促进成骨细胞的生成功能,增强骨更新。柚皮苷不是通过促进c-jun表达来促进成骨细胞增殖与分化的。

补骨脂素对成骨细胞核因子-κB受体激活配体和骨保护素表达的影响

目的研究补骨脂素(psoralen,PSO)对体外培养的小鼠成骨细胞(OB)分化及核因子-κB受体激活配体(receptor activator of nuclearfactor-κB ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法取第1代BALB/c小鼠颅盖骨成骨细胞,将PSO以0.1、1、10μmol/L3种浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,MTT法观察各组药物对成骨细胞的增殖作用并绘制细胞生长曲线;用PNPP法测定成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;RT-PCR法检测成骨细胞OPG和RANKL的转录水平。结果细胞生长曲线显示各组成骨细胞数量均随时间延长而增加,中、高浓度PSO能显著提高成骨细胞的ALP活性,促进OPG、RANKL的表达(P<0.05),OPG/RANKL升高(P<0.05)。结论低浓度PSO(0.1μmol/L)对骨更新作用不明显,而中、高浓度PSO(1、10μmol/L)能通过上调OPG、RANKL mRNA表达及OPG/RANKL比例,促进成骨细胞的生成功能,增强骨更新。

抗骨松颗粒对去卵巢大鼠骨质含量和生物力学的影响

目的探讨抗骨松颗粒对去卵巢大鼠骨质疏松模型骨质含量和骨生物力学性能的影响。方法40只10月龄Wistar雌性大鼠随机分为对照组、模型组、抗骨松组和倍美力组,每组10只。正常对照组做假手术,其余3组做卵巢切除术。术后3个月开始给药,连续用药满90d,处死动物,取出第2腰椎和股骨,测定骨密度、钙、磷、锰、镁、羟脯氨酸、碱性磷酸酶和有机质含量;取出第3腰椎,测骨质含量和生物力学性能。结果抗骨松颗粒能明显提高骨质疏松大鼠的骨密度、钙、锰、镁、羟脯氨酸和有机质含量,增强腰椎骨的抗压生物力学性能。结论应用抗骨松颗粒可以明显改善去卵巢大鼠骨质疏松模型骨质含量和骨的生物力学性能。

淫羊藿总黄酮及其含药血清对成骨细胞增殖及功能表达的影响

目的研究淫羊藿总黄酮及其含药血清对体外培养大鼠成骨细胞(ROB)增殖和功能表达的影响。方法将淫羊藿总黄酮(TFE)以0.2、2、20、100、200 mg.L-15种质量浓度、含淫羊藿总黄酮大鼠血清(SRAT)以2%、4%、8%、16%等4种体积浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,研究其对细胞增殖和功能表达的影响。细胞增殖采用MTT法进行分析,细胞功能表达是于培养d 5、10、15、20分别检测碱性磷酸酶活性(比色法)、骨钙素分泌量(放射免疫法)、钙盐沉积量(比色法)和矿化结节(组织化学法)等。结果TFE5种质量浓度均对ROB细胞增殖和分化无影响,2%和4%SRAT则表现出强烈的刺激细胞增殖活性并提高碱性磷酸酶活性、骨钙素分泌量、矿化结节数和钙盐沉积量。结论淫羊藿治疗骨质疏松的直接物质基础可能并非TFE,而与其经口给予后吸收入血的TFE代谢产物及其诱生物有关。血清中的TFE代谢产物可促进细胞的功能表达增殖。

升麻苷H-1对脑缺血大鼠纹状体氨基酸类神经递质含量的影响

目的:研究脑缺血大鼠脑纹状体区域细胞外液中氨基酸类神经递质的表达变化,以探讨升麻苷H-1神经保护作用的机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血组、升麻苷H-1高、中、低剂量组和金纳多组。用线栓法造成右侧大脑中动脉闭塞(MCAO),建立局灶脑缺血模型,假手术组和脑缺血组分别给予生理盐水腹腔注射,升麻苷H-1高、中、低剂量组和金纳多组分别给予不同剂量的药物腹腔注射,每天1次,连续7 d。采用脑微透析技术在大鼠脑纹状体区域内进行微透析活体采样,将微透析液注入高效液相-电化学检测器,检测样品中谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)和γ-氨基丁酸(GABA)的含量。结果:与假手术组相比,脑缺血组的兴奋性氨基酸Glu和Asp在脑缺血后2 h浓度升高(P<0.05)。升麻苷H-1高剂量组、金纳多组分别与脑缺血组相比,Glu和Asp在脑缺血后2 h显著降低(P<0.05);升麻苷H-1低、中剂量组分别与脑缺血组相比,Glu和Asp在脑缺血后2 h没有显著降低(P>0.05)。与假手术组相比,脑缺血组的抑制性氨基酸神经递质GABA和Gly在脑缺血后3 h浓度降低(P<0.05)。升麻苷H-1高剂量组、金纳多组分别与脑缺血组相比,GABA和Gly在脑缺血后3 h显著升高(P<0.05);升麻苷H-1低、中剂量组分别与脑缺血组相比,GABA和Gly在脑缺血后3 h没有显著升高。结论:升麻苷H-1可以抑制脑缺血时兴奋性氨基酸的过度释放,并增加抑制性氨基酸的浓度。升麻苷H-1不仅能透过血脑屏障,同时可调节脑缺血兴奋性氨基酸神经递质的功能紊乱,可能对缺血脑组织神经元有一定的保护作用。

补肾中药靶向经穴给药对骨质疏松患者的归经调节

目的:通过临床实验观察补肾方药靶向经穴位给药治疗骨质疏松症的疗效,分析靶向给药与药物归经的相关性。方法:①观察对象:选择2004-08/2006-12河北医科大学骨质疏松专科门诊和石家庄市桥东区医院门诊骨质疏松患者180例(患者知情同意,并经单位伦理委员会批准)。②实验分组:采用随机数字表法将180例患者分为6组:补肾方药口服组,外贴肾经组,外贴膀胱经组,依普拉封组,骨疏康组,非经非穴位组,每组30例,平均年龄(60.5±6.0)岁,平均病程(6.32±2.03)年。6组一般资料差异无显著性(P>0.05),具有可比性。补肾方药由地黄、淫羊藿、山药、丹参、骨碎补、独活等药物组成,每5丸含原药材3g;抗骨松贴剂:由地黄、淫羊藿、山药、丹参、骨碎补、独活等药物组成);依普拉封为正大青春宝药业有限公司产品;骨疏康颗粒由熟地黄、淫羊藿、黄芪、丹参、骨碎补、木耳、黄瓜子组成。③实验干预:补肾方药口服组:口服补肾方药10丸/次,3次/d,连续服用6个月。外贴肾经穴位组:选择足少阴肾经原穴太溪和络穴大钟;外贴膀胱经穴位组:选择足太阳膀胱经背部肾俞穴和络穴飞扬;外贴非经非穴位组:选择大腿外侧和后背部较广阔没有经络循行的区域;外贴组每个穴位贴2g生药量,每2天1次,左右交替进行。依普拉封组:口服依普拉封200mg/次,3次/d。骨疏康组:口服骨疏康颗粒10g/次,2次/d,各组均以6个月为1疗程,用药期间不进行任何其他中西医抗骨质疏松治疗。④实验评估:比较6组的骨痛症状与骨密度、血清Ca、P、碱性磷酸酶、尿羟脯氨酸,甲状旁腺素、降钙素、雌二醇、睾酮等指标的变化情况。进行综合疗效评价,评估标准分为显效、有效、无效。结果:180例患者全部进入结果分析。①补肾方药口服组、外贴肾经组、外贴膀胱经组、依普拉封组、骨疏康组治疗后,升高骨密度、雌二醇、睾酮、降钙素;降低甲状旁腺素;总有效率分别为90.0%,83.33%,83.33%,83.33%,83.33%。②非经非穴位组治疗后,骨密度、雌二醇、睾酮、降钙素、甲状旁腺素与治疗前比较差异无显著性(P>0.05);总有效率为46.67%。结论:靶向经穴给药可明显提高补肾方药的归经调节作用,至少在骨和性腺两个靶点起作用。

补肾方药归经与实验性骨质疏松靶器官信号转导分子Smad2的表达

目的:观察补肾方药归经与实验性骨质疏松靶器官信号转导分子Smad2的基因表达,从基因水平研究中医归经理论,为靶向给药提供依据。方法:实验于2004-06/2006-11在河北医科大学中西医结合基础实验室完成。实验分组:选择3个月龄健康雌性SD大鼠(未曾交配)90只,体质量(300±20)g。常规喂养1周后,随机数字表法分成7组:正常对照组、骨质疏松模型组、补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组、依普拉封口服组、非经非穴位外贴组,其中正常对照组和骨质疏松模型组每组20只,其余每组各10只。实验处理:除正常对照组喂正常饲料,自由饮水外,其余各组均喂食低钙饲料,饮用蒸馏水,每周2次在大鼠大腿内侧肌肉注射地塞米松1mg/kg体质量,5周后建立骨质疏松模型。实验评估:造模后,用抗骨松穴位贴剂分别外贴肾经和膀胱经穴位、非经非穴位、并与口服补肾方药比较治疗骨质疏松,以双能X线骨密度仪检测连续给药16周后大鼠离体股骨骨密度,采用逆转录-聚合酶链反应、蛋白免疫印迹杂交方法分别检测Smad2的mRNA、蛋白表达,观察其治疗效果。结果:纳入90只大鼠,在实验第5周时,正常对照组、骨质疏松模型组分别取10只,用于验证造模成功,70只进入结果分析。①给药16周后,与骨质疏松模型组比较,补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组、依普拉封口服组的股骨骨密度明显增加[(0.161±0.016),(0.206±0.028),(0.196±0.023),(0.202±0.015),(0.205±0.023)g/cm2,P均<0.01]。②应用补肾中药防治16周后,与骨质疏松模型组比较,补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组、依普拉封口服组Smad2mRNA的表达明显上调(0.517±0.031,0.524±0.033,0.596±0.033,0.592±0.021,0.583±0.032,P<0.01);Smad2蛋白表达亦明显增强,差异显著(50.901±2.205,71.802±2.100,72.352±2.306,74.012±2.145,73.802±2.203,P<0.01)。结论:①补肾方药通过口服和外贴穴位两种不同途径均发挥“归经”作用,引起靶器官骨组织上调Smad2的表达而有效改善骨密度。②Smad2mRNA表达及蛋白水平的下调可能是原发性骨质疏松症发生的重要机制之一。

补肾方药对实验性骨质疏松症大鼠垂体-甲状腺轴及其骨密度的影响(英文)

背景:将补肾方药分别制成“外贴剂”和“口服剂”,根据“体表穴位-经络-内脏-靶器官”相关,分别用外贴穴位和口服两种不同的给药途径治疗骨质疏松,按照中医传统理论推测均会归入肾经”而发挥调节作“用,但实际上是否会有“靶向给药”的特异性?检测“下丘脑-垂体-靶腺”系统的激素,进一步分析肾、骨、子宫、甲状腺、睾丸等靶器官的雌激素受体和雄激素受体,观察归经与受体的相关性。“”设计:以骨质疏松大鼠为研究对象的完全随机设计,补肾方药不同给药途径对照实验研究。目的:探讨补肾方药对实验性骨质疏松垂体-甲状腺轴的影响。单位:河北医科大学中医学院。材料:实验于2000-01/2004-12在河北医科大学中西医结合基础实验室完成。选择3月龄健康SD雌性大鼠60只,体重(300±20)g。实验动物由河北省实验动物中心提供。大鼠在实验室常规喂养1周后,随机分成6组:正常对照组(10只);病理模型组(10只);补肾方药总成分按0.8g/100g体质量灌喂组10只;穴位贴剂外贴膀胱经穴位组10()(只);穴位贴剂外贴肾经穴位组(10只);穴位贴剂外贴非经非穴位组(10只)。方法:采用注射地塞米松建立骨质疏松模型,用抗骨松穴位贴剂(antagonismosteoporosisacupointpaste,AOAP)外贴穴位、非经非穴位、并与口服补肾方药比较治疗骨质疏松(OP)。

淫羊藿总黄酮对去卵巢大鼠下丘脑和海马雌激素受体α及β mRNA表达的影响(英文)

目的:观察淫羊藿总黄酮对去卵巢大鼠下丘脑和海马雌激素受体α及βmRNA表达的影响,探讨其治疗绝经后骨质疏松的作用机制。方法:将10～11月龄SD雌性大鼠48只,随机分为假手术组、去卵巢模型组、淫羊藿总黄酮组和雌二醇(E2)组。以双侧卵巢切除法建立大鼠骨质疏松模型。淫羊藿总黄酮组、E2组分别用淫羊藿总黄酮、E2给药4个月,采用RT-PCR法检测各组下丘脑和海马ERα,ERβmRNA的表达。结果:大鼠卵巢切除后,血E2水平、椎骨骨密度、子宫湿重、下丘脑和海马ERα,ERβmRNA的表达均明显下降。E2治疗后血E2水平、椎骨骨密度、子宫湿重升高,下丘脑和海马ERβmRNA的表达均明显下降,下丘脑和海马ERβmRNA的表达无明显改变。淫羊藿总黄酮治疗后,血E2水平、椎骨骨密度、下丘脑和海马ERα,ERβmRNA的表达均明显升高,子宫湿重无明显改变。结论:淫羊藿总黄酮对切除卵巢所致的骨质疏松大鼠有防治作用,对子宫无不良反应;其机制可能与其选择性上调下丘脑和海马ERα,ERβmRNA的表达有关。

密骨打老儿丸对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎和肾脏维生素D受体mRNA表达的影响

目的探讨密骨打老儿丸(打老儿丸加淫羊藿、骨碎补、补骨脂、菟丝子等)对去卵巢骨质疏松大鼠生化指标的影响。方法 72只SD雌性大鼠,随机分为6组:假手术组、模型组、维生素D3(2 mg/kg)组和密骨打老儿丸小、中、大剂量组。假手术组仅行假手术,其余5组分别行卵巢切除术。术后1周分别灌胃给予密骨打老儿丸和维生素D33个月。采用酶联免疫吸附法检测血清1,25-二羟基维生素D3(1,25(OH)2D3)水平。测定股骨骨密度,采用实时荧光RT-PCR测定第2腰椎和肾脏组织维生素D受体(VDR)mRNA表达。结果与假手术组相比,模型组股骨骨密度、血清和肾脏1,25(OH)2D3、腰椎和肾脏组织VDR mRNA表达均下降。与模型组比较,密骨打老儿丸中、大剂量组和维生素D3组均可使股骨骨密度、血清和肾脏1,25(OH)2D3、腰椎和肾脏组织VDR mRNA表达增加。结论密骨打老儿丸和维生素D3显著提高去卵巢大鼠腰椎和肾脏组织VDR mRNA表达,促进肠钙吸收与成骨细胞活性,增强骨质量。

补肾方药归经与实验性骨质疏松靶器官信号转导分子Smad4的表达

目的:观察补肾方药归经与实验性骨质疏松靶器官信号转导分子Smad4的基因表达,从基因水平研究中医归经理论,为靶向给药提供依据。方法:实验于2004-06/2007-05在河北医科大学中西医结合基础实验室完成。①实验分组:选择3月龄健康雌性SD大鼠(未曾交配)70只,体质量(300±20)g。常规喂养1周后,随机数字表法分成7组:正常对照组、病理模型组、补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组、依普拉封口服组、非经非穴位外贴组,每组10只。②实验处理:除正常对照组喂正常饲料,自由饮水外,其余各组均喂食低钙饲料,饮用蒸馏水,每周2次在大鼠大腿内侧肌肉注射地塞米松1mg/kg体质量,5周后建立骨质疏松模型。造模后,补肾方药口服组将补肾方药总成分按8g/kg体质量灌喂给药;依普拉封口服组按10mg/kg体质量灌喂给药;正常对照组、模型组每天灌胃等体积的生理盐水,每天上午给药;膀胱经外贴组大鼠在膀胱经取肾俞、飞扬穴;肾经外贴组大鼠在肾经选太溪、大钟穴;非经非穴位外贴组大鼠在大腿内侧肌肉丰厚处选非经非穴位;于脱毛区贴上相应的膏剂,左右交替进行,1次/d。③实验评估:检测连续给药16周后的血清钙、磷、碱性磷酸酶、雌二醇、睾酮,以双能X线骨密度仪检测腰椎骨密度,采用反转录-聚合酶链反应、蛋白免疫印迹杂交方法分别检测Smad4的mRNA、蛋白表达。结果:70只大鼠均进入结果分析。①血清碱性磷酸酶、雌二醇、睾酮、骨密度:给药16周后,与病理模型组比较,补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组、依普拉封口服组的血清碱性磷酸酶、雌二醇、睾酮、骨密度明显增加(P均<0.01)。②Smad4mRNA和Smad4蛋白的表达:应用补肾中药防治16周后,与病理模型组比较,补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组、依普拉封口服组Smad4mRNA的表达明显上调(P<0.01);Smad4蛋白表达亦明显增强,差异有显著性(P<0.01)。结论:①补肾方药通过口服和外贴穴位两种不同途径给药均发挥"归经"作用,使靶器官骨组织上调Smad4的表达而有效改善骨密度。②Smad4mRNA表达及蛋白水平的下调可能是原发性骨质疏松症发生的重要机制之一。

补肾方药归经与实验性骨质疏松骨组织转化生长因子βmRNA的表达

背景:祖国医学中"肾主骨"的理论符合现代医学骨代谢调节机制,依此理论研制的补肾复方中药在骨质疏松症的治疗中虽取得较好的效果,但其归经作用途径需进行相关分子生物学方面的深入探讨。目的:观察补肾方药归经与实验性骨质疏松骨组织转化生长因子β 1mRNA表达的关系。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2004-01/2007-12在河北医科大学中西医结合基础实验室完成。材料:清洁级3个月龄健康雌性SD大鼠(未曾交配)70只,体质量(300±20)g,喂食低钙饲料,肌肉注射地塞米松建立骨质疏松模型。补肾方药由地黄、淫羊藿、山药、丹参、骨碎补、独活等药物组成。方法:将SD大鼠随机分成7组:正常对照组、病理模型组、补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组、依普拉封口服组、非经非穴位外贴组,每组10只。正常对照组不造模,补肾方药口服组造模大鼠按8g/kg补肾方药灌胃给药;依普拉封口服组造模大鼠按10mg/kg灌胃给药;正常对照组及模型组大鼠每天灌胃等体积的生理盐水;膀胱经外贴组造模大鼠取肾俞、飞扬穴,肾经外贴组选太溪、大钟穴,非经非穴位外贴组选非经非穴位,于脱毛区贴上相应的膏剂,左右交替进行,1次/d。主要观察指标:检测连续给药16周后,造模各组和不造模正常对照组大鼠血清卵泡刺激素、黄体生成激素、促甲状腺素、孕酮水平,以双能X线骨密度仪检测腰椎骨密度,以反转录-聚合酶链反应检测骨组织转化生长因子β1mRNA的表达。结果:70只大鼠均进入结果分析。给药16周后,与模型组比较,补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组、依普拉封口服组的血清卵泡刺激素、黄体生成激素、促甲状腺素、孕酮、骨密度明显增加(P均<0.01),转化生长因子β1mRNA的表达明显上调(P均<0.01)。结论:①补肾方药通过口服和外贴穴位两种不同途径给药均有效改善骨密度,发挥"归经"作用,该作用可能与靶器官骨组织上调转化生长因子β1mRNA的表达有关。

密骨打老儿丸对去卵巢大鼠骨质疏松的影响

目的探讨密骨打老儿丸(淫羊藿、骨碎补、菟丝子、补骨脂等)防治去卵巢大鼠骨丢失和骨质量降低的作用。方法 60只雌性大鼠,随机分为5组:假手术组、模型组、雌二醇组和密骨打老儿丸低、高剂量组。假手术组仅行假手术,其余4组行卵巢切除术。术后1周分别灌胃给予17β-雌二醇和密骨打老儿丸低、高剂量,连续给药3个月。测定血钙、血磷和血清碱性磷酸酶(ALP)以及尿钙(u-Ca)、尿磷、尿脱氧吡啶酚(D-Pyr)和尿肌酐(Cr)。之后处死动物,取出股骨、腰椎和胫骨,分别测定股骨密度,骨钙、骨磷,腰椎生物力学性能,胫骨组织形态计量学参数。结果与假手术组相比,模型组血清ALP、u-Ca、D-Pyr/Cr显著增加,股骨密度、腰椎生物力学参数(弹性载荷、最大载荷、断裂载荷、刚度)、胫骨上段静态参数(包括骨组织总面积、骨小梁面积、骨小梁周长)、动态参数(标记周长百分数、骨形成率)均降低。与模型组比较,密骨打老儿丸低、高剂量和雌二醇组均可使血清ALP、u-Ca、D-Pyr/Cr排出量降低,股骨密度、腰椎生物力学参数、胫骨上段静态参数、动态参数均增加。结论密骨打老儿丸能抑制由于去卵巢雌激素缺乏引发的骨转换增强,提高骨密度,增强腰椎抗压生物力学性能。

密骨打老儿丸含药血清对共育体系中成骨细胞和破骨细胞功能的影响

目的:观察密骨打老儿丸(Migu-Dalaoer pill,MDP)含药血清在成骨-破骨细胞共同培养体系中对成骨细胞(osteoblasts,OB)增殖和破骨细胞(osteoclasts,OC)骨吸收功能的影响。方法:利用分段酶消化法从胎鼠颅骨中分离出OB,取1日龄SD大鼠四肢股骨和胫骨分离培养OC,建立培养上清相通但2种细胞间互不接触的成骨-破骨细胞共育模型。实验分为不同浓度(低、中、高)的MDP含药血清组和对照组进行比较,以细胞增殖(MTT法)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性代表OB的成骨活性,以抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistantacid phosphatase,TRAP)活性和骨吸收陷窝数目代表OC的破骨能力进行测定。结果:与对照组相比,中、高浓度MDP含药血清在成骨-破骨细胞共同培养体系中6和7 d能显著提高OB数目和ALP活性(P<0.01)。与对照组相比,中、高浓度MDP含药血清在成骨-破骨细胞共同培养体系中6和7 d能显著降低OC骨吸收陷窝的数目和分泌TRAP的活性(P<0.01)。结论:密骨打老儿丸含药血清在共育体系中能够促进OB增殖和骨形成,同时抑制OC骨吸收功能。

补肾方药归经与靶器官雌激素受体的相关性

目的:分析补肾方药对实验性骨质疏松的归经与靶器官雌激素受体的相关性。方法:实验于2004-06/2006-04在河北医科大学中西医结合基础实验室完成。选择3月龄健康SD雌性和雄性大鼠各70只。常规喂养1周后,随机分成7组:正常对照组、模型组、补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组、依普拉封口服组、非经非穴位外贴组,每组雌雄各10只。除正常对照组喂正常饲料,自由饮水外,其余各组均喂饲低钙饲料,饮用蒸馏水,每周2次在大鼠大腿内侧肌肉注射地塞米松0.1mg/100g体质量,5周后建立骨质疏松模型。造模后,正常对照组和模型组喂养条件不变;补肾中药组将补肾方药总成分按0.8g/100g体质量灌喂给药,补肾方药由地黄、淫羊藿、山药、丹参、骨碎补、独活等药物组成;膀胱经外贴组在膀胱经选肾俞、飞扬;肾经外贴组在肾经选太溪、大钟;非经非穴位外贴组在大腿内侧肌肉丰厚处选非经非穴位,具体的穴位选择参照《实验针灸学实验指导》和《大鼠穴位图谱的研制》。大鼠背部、下肢脱毛,清洗穴位,于脱毛区贴上相应的膏剂,左右交替进行。观察16周后,各组大鼠处死,股动脉放血,与口服补肾方药比较治疗骨质疏松。以血清雌二醇、睾酮、骨密度、降钙素、甲状旁腺素、降钙素/甲状旁腺素比值,Ca、P、碱性磷酸酶,各组大鼠骨组织中Ⅰ型胶原和LMP-1mRNA表达,各组雌性大鼠骨组织中雌激素受体α和雌激素受体βmRNA表达为衡量指标,观察其治疗效果。结果:140只大鼠均进入结果分析。①与正常对照组相比,模型组雌二醇、睾酮、骨密度均降低(P均<0.01);与模型组相比,补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组、依普拉封口服组雌二醇、睾酮、骨密度均明显升高(P均<0.01)。②与正常对照组相比,模型组甲状旁腺素升高,降钙素、降钙素/甲状旁腺素均降低(P均<0.01);与模型组相比,补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组、依普拉封口服组甲状旁腺素下降,降钙素、降钙素/甲状旁腺素均明显升高(P均<0.01)。③与正常对照组相比,模型组碱性磷酸酶升高(P<0.05),Ca、P差异均不显著;与模型组相比,补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组碱性磷酸酶下降(P<0.05),Ca、P差异均不显著。④与正常对照组相比,模型组Ⅰ型胶原/β-actin和骨矿化相关蛋白/β-actin的表达均降低(P均<0.05);与模型组相比,补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组Ⅰ型胶原/β-actin和骨矿化相关蛋/β-actin的表达均上调(P均<0.05)。⑤与正常对照组相比,模型组雌激素受体α和雌激素受体βmRNA的表达均降低(P均<0.05);与模型组相比,补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组雌激素受体α和雌激素受体βmRNA的表达均上调(P均<0.05)。结论:补肾方药通过两种不同途径给药后发挥“归经”作用,至少在骨和性腺两个靶点起作用,使骨组织中Ⅰ型胶原和骨矿化相关蛋白表达上调,雌激素受体α和雌激素受体βmRNA表达上调,促进雌二醇、睾酮、降钙素/甲状旁腺素升高,结果抑制骨吸收,促进骨形成,逆转骨质疏松,增加骨密度。

阴中求阳法治疗去卵巢骨质疏松大鼠骨组织作用的对比研究

背景:祖国医学中"肾主骨"的理论符合现代医学骨代谢调节机制,依此"阴中求阳法"和"阳中求阴法"理论研制的补肾复方在治疗骨质疏松症虽取得较好效果,但是滋补肾阴药与温补肾阳药配伍比例需要进行骨形成机制的深入探讨。目的:对比观察依照阴中求阳法组成的补肾方药中滋补肾阴药与温补肾阳药不同配伍比例对卵巢切除所致骨质疏松大鼠的治疗作用,以探讨它们之间的疗效是否存在差异。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-01/2009-01在河北医科大学中西医结合基础实验室完成。材料:清洁级3个月龄健康雌性SD大鼠(未曾交配)90只,只随机分成9组:正常对照组、假手术组、卵巢切除组、91组、82组、73组、64组、55组、补肾复方组,每组10只。补肾方药由地黄、淫羊藿、山药、丹参、骨碎补、独活等药物组成。方法:正常组和假手术组不造模,其余各组均切除卵巢造成骨质疏松症模型。91组、82组、73组、64组、55组分别按补肾阴药地黄∶补肾阳药淫羊藿为9∶1,8∶2,7∶3,6∶4及5∶5的比例配伍;生药含量均为960g/L,每天灌服7μL/g。补肾复方组按照地黄∶淫羊藿∶淮山药∶丹参∶骨碎补:独活等于8∶4∶4∶3∶3∶3的配伍比例制成的口服剂,生药含量约为1010g/L,每天灌服7μL/g,以上给药,1次/d,连续6d,休息1d后,再连续灌服6d,如此至3个月止;假手术组和正常对照组大鼠灌服等容积的蒸馏水。于卵巢切除1周后给药。主要观察指标:3个月后处死大鼠。普通光镜下观察骨小梁体积百分比、骨小梁吸收表面百分比及骨小梁形成表面百分比。荧光镜下观察活性生成表面百分比、骨小梁矿化率及骨小梁骨生成率。结果:90只大鼠均进入结果分析。切除卵巢3个月后,大鼠胫骨骨小梁体积百分比显著降低,骨小梁吸收表面百分比以及骨小梁形成表面百分比、活性生成表面百分比、骨小梁矿化率、骨小梁骨生成率皆显著增高。给药3个月后,与切除卵巢模型组比较,给大鼠灌服不同配伍比例滋阴药和温阳药组成的补肾方药3个月后,均能使上述指标发生逆转,但程度有所不同,补肾阴药地黄和补肾阳药淫羊藿配伍比例之中以7∶3比例为最明显。结论:根据"阴中求阳法"理论组成的补肾方剂,滋补肾阴药与温补肾阳药不同配伍比例对卵巢切除所致的骨质疏松均有明显的治疗作用,补肾阴药和补肾阳药配伍比例应该是"补阴药"大于"补阳药"疗效更好。