胰岛素对大鼠急性脊髓损伤后细胞凋亡及诱导型一氧化氮合酶、环氧化酶-2表达的影响

目的:研究胰岛素对大鼠急性脊髓损伤(SCI)后细胞凋亡及相关炎症因子诱导型一氧化氮合酶(in-duciblenitricoxidesynthase,iNOS)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的影响。方法:60只SD大鼠随机分为损伤对照组和胰岛素治疗组,每组30只,采用改良Allen's法建立SCI模型。SCI后30min内治疗组经腹腔注射普通速效胰岛素1IU/kg·d+50%葡萄糖1g/kg·d,分3次给药,每8h1次,连续给药7d;对照组给予等量生理盐水。伤后8h、1d、3d、7d、14d每组各处死6只动物取材,采用原位末端标记(TUNEL)和免疫组织化学染色方法观察脊髓细胞凋亡及iNOS、COX-2表达的变化。结果:SCI后各时间点胰岛素治疗组TUNEL阳性细胞数明显少于损伤对照组,差异有显著性(P<0.05或P<0.01);胰岛素治疗组iNOS、COX-2的表达率均明显低于对照组,差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论:胰岛素对大鼠急性脊髓损伤有保护作用,抑制炎症因子iNOS、COX-2的表达可能是其作用机制之一。

应用γ钉治疗转子间骨折的并发症

目的 探讨应用γ钉治疗转子间骨折并发症的原因。方法 2000年1月～2004年12月,我院应用γ钉治疗转子间骨折76例,随访1年以上,13例出现并发症,发生率为17.1%（13/76）。参照Evans分型,Ⅲ型6例,Ⅳ型7例。结果 骨折延迟愈合1例,肺部感染2例,泌尿道感染1例,深静脉血栓1例,褥疮1例,拉力螺钉穿透股骨头2例,继发性股骨骨折1例,髋内翻3例,远端螺钉放置失败1例;无主钉或锁钉断裂等并发症发生。经相应处理,均获得骨性愈合。结论 应用γ钉治疗转子间骨折,并发症的出现是由多方面原因所致,但只要早发现、及时正确地处理,一般能获得良好的预后。

骨形态发生蛋白-7基因转染骨髓基质细胞后的表达

为了观察重组人骨形态发生蛋白 - 7(rh BMP- 7)基因转染骨髓基质细胞 (BMSCs)后的表达及表达产物对 BM-SCs增殖的影响 ,用脂质体介导法将 rh BMP- 7基因转染 BMSCs,用逆转录 PCR技术和免疫组化 SABC法分别检测其瞬时表达和稳定表达 ;再用 3H- Td R掺入法检测基因表达产物对正常培养的 BMSCs增殖的影响。结果表明 :转基因细胞能高效表达外源基因 ,且表达时间长达 4周 ;基因表达产物能明显促进 BMSCs的增殖。

胰岛素对大鼠脊髓损伤细胞凋亡及iNOS、COX-2表达的影响(英文)

目的观察胰岛素对急性脊髓损伤后细胞凋亡及相关炎症因子表达的影响,探讨胰岛素对脊髓损伤保护作用的分子机制。方法60只SD大鼠随机分为损伤对照组和胰岛素治疗组,建立SCI模型;术后8h、1d、3d、7d、14d处死动物取材,采用原位末端标记(TUNEL)和免疫组织化学观察脊髓细胞凋亡及iNOS、COX-2表达变化,并进行比较分析。结果术后各时相胰岛素治疗组TUNEL阳性细胞的数目明显少于损伤对照组;胰岛素治疗组iNOS、COX-2的表达率明显比对照组降低,差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论初步研究表明胰岛素对急性脊髓损伤有保护作用,抑制炎症因子iNOS、COX-2的表达是其可能作用机制之一。

前路减压植骨及VentroFix系统固定治疗陈旧性胸腰椎骨折

对7例陈旧性胸腰椎爆裂性骨折合并不同程度截瘫的病例,采取前路椎管减压、椎体间植骨并行VentroF ix系统固定,术后后凸畸形和椎体压缩均有明显改善,植骨均获愈合。

成骨蛋白-1应用于关节软骨的研究现状

成骨蛋白-1具有多种生物功能,并对成骨蛋白关节软骨的缺损具有良好的修复作用。本文就此方面的内容进行了综述。

TRAIL联合多柔比星作用于骨肉瘤的实验研究

背景与目的肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNFrelatedapoptosisinducingligand,TRAIL)是近年发现的肿瘤坏死因子家族新成员,显著特点是它仅诱导肿瘤细胞凋亡,对正常细胞无毒性作用。TRAIL可作为骨肉瘤靶向治疗的潜在有效药物,但单独使用时已被证明作用有限。而多柔比星可对肿瘤细胞产生广泛的生化效应,为细胞周期非特异性药物,有强烈的细胞毒性作用,可嵌入DNA而抑制核酸的合成导致细胞死亡。本研究旨在探讨TRAIL联合低剂量化疗药物多柔比星对骨肉瘤MG-63细胞的凋亡诱导效应。方法MTT法测定TRAIL和多柔比星对MG-63细胞单独及联合作用的细胞凋亡率,DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果1000ng/ml的TRAIL与4.3μmol/mL多柔比星合用于MG63细胞24h时后,测细胞抑制率为36.65%,明显高于单用TRAIL(1000ng/ml)时的21.67%及单用多柔比星(4.3μmol/ml)时的10.25%(P<0.01)。细胞超微结构观察及凋亡率测定均显示,合用比单用有更多的骨肉瘤细胞凋亡。TRAIL联合应用多柔比星能显著增强对MG-63的杀伤、抑制增殖及诱导凋亡作用,明显高于单独应用TRAIL组或多柔比星组(P<0.05),并且这种作用随培养时间延长及药物浓度增加而增强。结论TRAIL是一种有望应用于临床的新型生物制剂。TRAIL与多柔比星对诱导骨肉瘤细胞凋亡具有协同作用,能高效杀灭骨肉瘤细胞。

转化生长因子β1基因修饰成骨细胞复合仿生基质材料治疗骨缺损(英文)

背景:通过分子生物学技术与组织工程技术相结合以修复骨缺损,是骨科当前重要的研究方向之一。转化生长因子β1作为重要的骨形成因子,在骨代谢和骨损伤修复中发挥着极为重要的作用。目的:观察转化生长因子β1基因修饰的成骨细胞复合仿生基质材料修复鼠胫骨骨缺损的治疗效果。设计:随机对照实验。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科。材料:实验于2003-03/08在华中科技大学同济医学院附属协和医院完成。选用健康SD大鼠20只,雌雄不限,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。方法:将转化生长因子β1基因转染的成骨细胞与涂覆多聚赖氨酸的聚DL乳酸仿生基质材料复合,植入鼠胫骨骨缺损模型,术后摄X射线片和组织学检查观察修复情况。主要观察指标:术后4,8周X线摄片和组织学检查情况。结果:20只SD大鼠均进如结果分析,无脱失。①实验组:4周时X线片可见骨痂形成,组织学观察有类骨组织和新骨形成,成骨细胞贴附于基质材料表面。8周时缺损基本修复,新骨密度与自体骨接近。②对照组:4周时X线片未见骨痂形成,组织学观察没有类骨组织形成,基质材料表面成骨细胞贴附较少,材料腔隙中有大量淋巴细胞浸润。8周时植入材料基本吸收,为纤维组织替代。结论:将分子生物学和组织工程学结合修复骨缺损,获得理想的治疗效果。

关节镜有限清理术治疗不同分级膝关节骨性关节炎疗效的Meta分析

目的关节镜辅助下关节清理术是治疗膝关节骨性关节炎的一种微创治疗方法,该研究通过循证医学的方法评价关节有限清理术治疗膝关节骨性关节炎的疗效。方法通过计算机检索中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库(WANFANG DATA)、中国生物医学文献数据库(CBM)和Medline(检索年限2002年8月-2012年8月),纳入比较分析关节镜下有限清理术治疗膝关节骨性关节炎的各类临床研究,以Graphpad Prism 5统计软件包及Rev Man5分析软件对数据进行Meta分析,并计算95%可信区间(CI)。结果该研究最终纳入18篇文献,其中,12篇英文文献、6篇中文文献,共包括2 502个膝关节。Meta分析从总体上显示,关节镜下有限清理术可改善各级骨性关节炎患者的症状,术后患者的关节功能评分较术前均明显改善,手术优良率大于60%;术前关节炎越严重,术后再次手术率也就越高。结论关节镜下有限清理术是治疗膝关节骨性关节炎的一中有效的、微创的治疗方法,对轻中度骨性关节炎患者可获得满意的疗效,对重度患者也可以在一定程度上缓解症状;严格掌握手术适应证,分型而治,可提高手术满意率。

转化生长因子β_1基因修饰的间充质干细胞/仿生基质材料的体外复合培养

目的 探讨转化生长因子β_1(TGF-β_1)基因转染对间充质干细胞(MSCs)增殖分化的影响，评价涂覆多聚赖氨酸(PLYS)的聚DL乳酸(PDLLA) 仿生基质材料能否作为关节软骨组织工程学研究的支架材料。方法 将组织工程学与分子生物学有机结合，体外将具有多重生物学效应的TGF-β_1基因转入关节软骨组织工程首选种子细胞--间充质干细胞（MSCs），并与表面涂覆PLYS的PDLLA可降解三维多孔基质材料体外复合培养。以单纯空载体转染MSCs为对照，通过扫描电镜等方法观察种子细胞的粘附、增殖及分化等情况。结果 基质材料孔隙率为88%，其中孔径为150～200μm的有效孔占80%。所有细胞均能很好地粘附于基质材料上，其中TGF-β_1基因修饰的MSCs增殖分化活性明显优于对照组。结论 利用分子组织工程学原理可使TGF-β_1持续高效发挥作用，使提高关节软骨缺损的修复质量和远期疗效成为可能。涂覆PLYS的PDLLA仿生基质材料不仅具有良好的生物相容性和结构相容性，而且具有更好的表面相容性和生物学活性，在一定程度上解决了细胞-基质材料之间存在的界面不相容问题，是关节软骨缺损修复的良好基质材料。

bFGF基因修饰的间充质干细胞/多孔β-TCP陶瓷复合移植修复兔节段性骨缺损

目的 :探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)基因转染间充质干细胞 (MSCs)能否构建出具有良好生物学活性的组织工程化人工骨 ,提高骨缺损修复质量。方法 :体外将具有促进MSCs增殖分化及刺激毛细血管增殖等多重生物学效应的bFGF基因转入骨组织工程首选种子细胞MSCs,并与具有良好力学强度及生物活性的可降解β磷酸三钙 (β TCP)多孔基质材料复合移植 ,修复同种异体兔桡骨 15mm长节段性骨缺损。以单纯空载体转染MSCs为对照 ,通过扫描电镜、X线、组织学及免疫组化等方法检测。结果 :转基因细胞 /基质材料体外复合培养扫描电镜观察证实bFGF基因修饰的MSCs增殖分化活性明显优于对照组。体内实验X线及组织学检测结果显示实验组骨缺损正常修复 ,有大量活跃的新骨及丰富的毛细血管生成 ;对照组各时间点则以纤维结缔组织为主 ,未见明显的新骨及血管生成。免疫组化结果显示转基因细胞可持续表达bFGF至少 4周以上。结论 :把组织工程学与分子生物学有机结合 ,使bFGF持续高效发挥作用 ,研制出具有良好生物学活性的组织工程化人工骨 ,为高质量地修复骨缺损 ,特别是治疗骨折不愈合、股骨头缺血性坏死等疾病奠定了良好的基础。

TGF-β_1基因修饰的间充质干细胞/仿生基质材料复合移植修复兔关节软骨缺损

目的 :探讨转化生长因子 β1(TGF β1)基因转染间充质干细胞 (MSCs)能否提高关节软骨缺损的修复质量和远期疗效。方法 :把组织工程学与分子生物学有机结合 ,体外将具有促进MSCs增殖分化、抑制多种炎性介质活性及免疫排斥反应等多重生物学效应的TGF β1基因转入关节软骨组织工程首选种子细胞MSCs,并与涂覆多聚赖氨酸的聚DL乳酸可降解多孔仿生基质材料复合移植 ,修复同种异体兔关节软骨缺损。以单纯空载体转染MSCs为对照 ,通过组织学、电镜及免疫组化等方法检测。结果 :转基因细胞 /仿生基质材料体外复合培养扫描电镜观察证实TGF β1基因修饰的MSCs增殖分化活性明显优于对照组。体内实验组织学及透射电镜结果显示实验组新生组织为透明样软骨 ,关节面平整 ,软骨下骨完全再生 ,与宿主骨软骨结合紧密 ,未见免疫排斥反应 ;对照组则新生软骨质量欠佳 ,与宿主骨整合欠佳 ,有不同程度的免疫排斥反应。免疫组化结果显示转基因细胞可继续表达TGF β1至少 4周以上。结论 :利用分子组织工程学 ,使TGF β1持续高效发挥作用 ,使提高关节软骨缺损、特别是创伤和骨关节炎关节软骨缺损的修复质量和远期疗效成为可能。

关节镜下自体腘绳肌和异体胫前肌单束重建前交叉韧带的1年随访比较

背景:由于人工韧带存在慢性疲劳,越来越多的人采用异体肌腱重建前后交叉韧带损伤。目的:比较关节镜下自体腘绳肌和异体胫前肌单束重建前交叉韧带的疗效。方法:收集关节镜下用自体腘绳肌和异体胫前肌单束重建前交叉韧带随访满1年的病例。自体腘绳肌重建前交叉韧带组28例;异体胫前肌重建前交叉韧带组18例。采用股骨端Endobutten、胫骨端可吸收螺钉固定。采用支具固定并进行功能训练。结果与结论:前交叉韧带重建后6个月,异体肌腱组lysholm评分高于自体肌腱组(P<0.05);重建后12个月两组lysholm评分差异无显著性意义。两组重建后6,12个月与重建前比较差异均有显著性意义(P<0.05),重建后12个月与6个月比较差异有显著性意义(P<0.05)。结果表明,自体和异体肌腱重建前交叉韧带随访1年疗效相当。

关节镜辅助下钢板内固定治疗关节内跟骨骨折

[目的]探讨分析关节镜辅助下钢板内固定治疗关节内跟骨骨折的方法和疗效;[方法]对78位患者，86例累及关节面的跟骨骨折在关节镜辅助下行切开复位钢板内固定术，术后平均随访18个月（12～30个月），通过比较术前术后X线片和踝足功能的AOFAS评分对治疗效果作分析评价．[结果]86例关节内跟骨骨折术后X线示复位满意．与术前存在显著性差异（P〈0．01），AOFAS评分优良率91．86％．[结论]对于关节内跟骨骨折，采用关节镜辅助钢板内固定更加接近解剖复位。

TGF-β_1基因转染间充质干细胞的量效关系及安全性研究

为探讨能获得最佳转染效率和促增殖分化效应的 TGF-β1 基因转染条件、剂量及基因治疗的安全性 ,体外将TGF-β1 基因转入骨膜源间充质干细胞 ( MSCs) ,用水貂肺上皮细胞生长抑制法、透射电镜及软琼脂培养等方法检测。结果发现 :转基因 MSCs表达的 TGF-β1 具有生物学活性。当 3μl脂质体介导 1μg TGF-β1 基因转染时 ,能获得最佳转染效率和促 MSCs增殖及向成软骨方向定向分化效应 ;转基因细胞无恶性转化倾向。从而把组织工程学与分子生物学有机结合成为分子组织工程学 ,为高质量地修复关节软骨缺损奠定了良好的基础。

碱性成纤维细胞生长因子基因转染对间充质干细胞生物学行为的调控

为探讨碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)基因转染对间充质干细胞 (MSCs)增殖、定向分化等生物学行为的调控作用 ,本文将体外具有促进 MSCs增殖分化及毛细血管增殖等多重生物学效应的 b FGF基因转入骨组织工程首选种子细胞—— MSCs,通过免疫组化 SABC法检测其瞬时与稳定表达 ,并检测转基因细胞增殖活力及碱性磷酸酶 (AL P)与骨钙素 (OC)合成情况。结果表明 ,b FGF基因能被转入 MSCs并得到稳定表达 ,转基因细胞增殖与OC合成明显增强 ,AL P活性无明显变化。因此 ,转基因 MSCs可使 b FGF持续高效发挥作用 ,克服了使用外源性b FGF半衰期短 ,需反复大剂量给药的缺点 ;b FGF基因转染可促进 MSCs增殖并调控其定向分化 ,使其获得良好的生物学活性 ;从而为把组织工程学与分子生物学有机结合 ,用分子组织工程学技术高质量地修复骨缺损奠定了良好的基础。

关节镜下骺板近侧缝线固定治疗儿童胫骨髁间棘骨折的疗效观察

目的总结经骺板近侧缝线固定,治疗儿童胫骨髁间棘骨折的手术效果。方法 2005年5月～2009年5月武汉协和医院骨科收治的儿童胫骨髁间棘骨折病例34例,按Meyers-Mckeever骨折分型:Ⅱ型23例,Ⅲ型11例。在关节镜监视下,用硬膜外穿刺针引导,穿Ⅱ号普迪丝缝线(PDS-Ⅱ),复位并固定骨折块。结果随访12～24个月(平均18个月)。术前Lyshlom评分30～57分(42.6±2.2),1年后评分96～100分(98.6±2.9),手术前后评分差异有统计学意义(P<0.01)。术后所有患膝活动度恢复正常。结论关节镜下骺板近侧缝线固定治疗儿童胫骨髁间棘骨折具有手术创伤小、术后恢复快、无需二次手术取出内固定等优点,同时避免了损伤骺板可能引起的并发症。

转化生长因子-β_1基因转染鼠成骨细胞的研究

目的 研究转化生长因子 - β1 (TGF- β1 )基因转染鼠成骨细胞对其生物学特性的影响。方法 将TGF- β1 基因导入成骨细胞 ,通过原位杂交检测和成骨细胞培养上清液 TGF- β1 活性测定 (水貂肺上皮细胞生长抑制试验 ) ,了解转染细胞 TGF- β1 的表达。检测基因转染及转染细胞上清对成骨细胞增殖和碱性磷酸酶 (AL P)活性的影响 ,观察 TGF- β1 基因转染成骨细胞生物学活性的变化。结果 原位杂交检测基因转染成骨细胞可明显表达TGF- β1 。上清液 TGF- β1 活性检测结果显示 1∶ 1、1∶ 2、1∶ 4复合培养基对 Mv1抑制率分别为 16 .3%、2 2 .7%和2 8.2 % ,上清中 TGF- β1 含量越高 ,活化后对 Mv1抑制作用越明显。 TGF- β1 基因转染对成骨细胞生物学活性无明显影响 ,而转染细胞上清活化后可促进成骨细胞增殖 ,抑制 AL P活性。结论 TGF- β1 基因转染鼠成骨细胞可显著促进 TGF- β1 表达 ,转染细胞生物学特性保持稳定 。

单螺旋和3股螺旋蚕丝纤维支架的力学性能及其细胞黏附性能比较

目的:经蚕茧缫丝脱胶而成的丝状纤维是一种无生理活性的天然结构性蛋白,这种结构使丝状支架具有良好的力学性质和生物相容性。观察采用单螺旋和3股螺旋蚕丝两种不同编织方法制备的丝状支架力学性能和细胞黏附性能的差异。方法:实验于2005-10/2006-05在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成。将蚕丝用不同的编织方法制备单螺旋、3股螺旋两种丝状支架,直径4.5mm。实验方法:①丝状支架的力学检测:两种丝状支架各取10cm置于AGS-H多功能材料力学实验机的夹具中,固定后以10mm/min的速度行拉断试验。②对SD大鼠骨髓基质干细胞分离培养。实验评估:①通过拉断实验测定最大载荷、最大拉伸长度及弹性模量。②对骨髓基质干细胞进行苏木精-伊红染色。③扫描电镜观测骨髓基质干细胞与丝状支架的黏附情况。结果:①力学性能检测结果:单螺旋、3股螺旋两种丝状支架的最大载荷、最大拉伸长度、弹性模量[分别为(870±32),(846±20)N;(14.60±0.85),(13.90±0.64)mm;(6519±287),(6373±375)MPa]差异无显著性意义(P>0.05)。②免疫组织化学鉴定结果:骨髓间充质干细胞的细胞膜抗原CD44有阳性表达,CD34均为阴性表达。③骨髓基质干细胞与丝状支架的黏附情况:两种编织方法的丝状支架的丝状纤维表面均光滑,有较多的骨髓间充质干细胞黏附在丝状纤维上。结论:单螺旋和3股螺旋两种丝状支架的力学性能和细胞黏附性能相近。

关节镜下可吸收螺钉固定腘绳肌重建膝后交叉韧带的疗效评价

目的探讨关节镜下可吸收螺钉固定腘绳肌腱单束重建膝后交叉韧带（posterior erueiate ligament，PCL）的效果。方法2004年4月-2005年4月，我院25例（25膝）经关节镜检查证实为PCL断裂，在关节镜下行自体腘绳肌腱单束PCL重建术，生物可吸收挤压螺钉解剖位固定重建韧带。结果手术时间平均90min（80—100min）。25例膝术毕PCL重建后后抽屉试验均为阴性。术后住院时间7—14d，平均10．4d。25例术后随访12—24个月，平均18个月，23例膝后抽屉试验阴性，2例后抽屉试验1级。术后12个月Lysholm膝关节功能评分由术前（44．8±8．1）分提高至（77．8±6．4）分（t=-15．999，P=0．000）。按国际膝关节文件编制委员会膝关节标准评价膝关节功能分级，术前异常（C级）10例、显著异常（D级）15例，随访时正常（A级）8例、接近正常（B级）15例、异常（C级）2例（Z=一4．394，P=0．000）。结论关节镜下可吸收螺钉固定自体腘绳肌腱单束重建膝PCL创伤小，固定可靠，手术操作简单，术后膝关节功能恢复效果好。