中药外治组合方案对膝骨关节炎相关炎症因子的影响

目的探究3种中药外治组合疗法对膝骨关节炎(KOA)患者血清中5-HT、IL-6、MMP-13因子的影响。方法选取门诊150例KOA患者,按随机数字表法分为治疗组(A)、对照组1(B)、对照组2(C),各50例。A组予中药涂擦、中药烫熨、五方散贴敷,B组予中药烫熨、五方散贴敷,C组予中药涂擦、五方散贴敷,各组疗程均为1周,分别于治疗前后观察5-HT、IL-6、MMP-13的水平。结果治疗后,3组患者5-HT、IL-6、MMP-13水平较治疗前均降低(P<0.05);A组相关因子水平较B、C组均降低(P<0.05),而B、C组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论与2种外治法组合疗法比较,3种外治组合疗法治疗KOA有效,可降低KOA患者血清中的炎症因子5-HT、IL-6、MMP-13的水平。

N6-甲基腺苷相关调节因子与骨关节炎:生物信息学和实验验证分析

背景:越来越多证据表明N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)调节因子与骨关节炎密切相关,被认为是防治骨关节炎新方向,但具体作用机制不明。目的:通过对骨关节炎基因芯片数据集进行生物信息学分析,探讨m6A对骨关节炎的作用,解析骨关节炎发病机制。方法:首先利用R软件提取GEO数据库中GSE1919数据集中骨关节炎相关m6A调节因子及其表达量,进而对提取结果行基因差异分析及GO、KEGG富集分析;接着对PPI网络拓扑学分析结果和机器学习结果取交集得到m6A关键调节因子,并通过体外细胞实验验证。结果与结论:①提取得到16个骨关节炎相关m6A调节因子表达量,通过差异分析获得ZC3H13、YTHDC1、YTHDF3、HNRNPC等11个m6A差异调节因子;②GO富集分析显示,骨关节炎相关m6A差异调节因子在生物过程中主要于mRNA转运、RNA分解代谢、胰岛素样生长因子受体信号通路调控等发挥作用;③KEGG富集分析显示,差异调节因子主要参与p53、白细胞介素17和AMPK信号通路;④综合PPI网络拓扑学分析和机器学习结果获得m6A关键调节因子——YTHDC1;⑤体外细胞实验结果表明,m6A关键调节因子——YTHDC1在对照组与骨关节炎组中表达存在显著差异(P<0.05);⑥结果显示,YTHDC1与骨关节炎发生发展密切相关,有望成为m6A治疗骨关节炎的分子靶点。

化瘀祛湿方对miR⁃21靶向Skp2介导早期膝骨关节炎软骨细胞自噬的影响

目的:研究miR‑21‑5p介导Skp2对膝OA软骨细胞自噬影响,探讨化瘀祛湿方对膝OA软骨细胞的保护作用。方法:(1)取全膝关节置换术的人体膝OA软骨组织,采用FISH单染试验检测miR‑21‑5p表达和定位,免疫荧光检测Skp2表达,TUNEL染色试验检测膝OA细胞凋亡,Western blot法检测Bax、Bcl‑2、Beclin1、CARM1、LC3Ⅱ/Ⅰ和Skp2相对表达量;(2)取SD大鼠36只,按随机数字法分为正常对照组、假手术组、模型组、模型+空载组、模型+miR‑21‑5p干扰组、模型+化瘀祛湿方组6组,每组6只;采用石蜡切片阿利新蓝染色观察软骨形态结构,qPCR、Western blot法检测各组软骨组织Beclin1、CARM1、LC3Ⅱ/Ⅰ、Skp2相对表达量,免疫组化检测Skp2的IOD/Area值。结果:FISH检测显示miR‑21‑5p在人体膝OA软骨组织中高表达,免疫荧光检测表明Skp2在人体膝OA软骨组织中低表达;TUNEL检测发现,人体膝OA软骨组织凋亡显著增加;Western blot法检测显示,与正常对照组相比,人体膝OA软骨组织中Bax、CARM1相对表达量较正常组显著升高,而Bcl‑2、LC3Ⅱ/Ⅰ、Skp2相对表达量明显降低,Beclin1相对表达量稍降低(P<0.05)。动物实验显示,采用miR‑21‑5p干扰处理后,Beclin1、CARM1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著下降,Skp2稍降低;免疫组化检测发现Skp2 IOD/Area值与正常对照组相比,模型组IOD/Area值显著降低(P<0.05);与模型组相比,模型+化瘀祛湿方组IOD/Area值显著升高(P<0.05);石蜡切片阿利新蓝染色显示与假手术照组相比,模型+空载组、模型+miR‑21‑5p干扰组蓝色变浅,但模型组蓝色变深,模型+化瘀祛湿组蓝色较为明显。结论:miR‑21‑5p可负向调控Skp2,介导膝OA软骨细胞自噬,加速OA发展;化瘀祛湿方可能通过抑制miR‑21‑5p,提高Skp2表达,起到延缓膝OA退变的作用。

机器学习联合生物信息学鉴定骨关节炎细胞衰老关键基因及验证

背景:细胞衰老与骨关节炎的发生、发展密切相关,但具体作用靶点及调控机制尚不清楚。目的:综合生物信息学和机器学习方法挖掘细胞衰老介导骨关节炎的关键基因,并利用实验加以验证,探讨细胞衰老在骨关节炎中的作用。方法:从GEO数据库中获得骨关节炎基因表达谱以及从CellAge数据库中获得细胞衰老相关基因,二者取交集并提取交集基因表达量进行差异分析,然后对差异基因进行GO和KEGG分析,接着通过PPI网络分析和机器学习筛选骨关节炎细胞衰老关键基因,并进行体外细胞实验验证,采用qPCR方法检测关键基因的表达。结果与结论:①获得31个骨关节炎细胞衰老差异基因,GO分析显示主要参与白细胞分化调节、单核细胞分化、T细胞分化调节等生物过程,在DNA转录因子结合、组蛋白去乙酰化酶结合、染色质DNA结合、趋化因子结合中发挥作用;②KEGG分析表明骨关节炎细胞衰老差异基因主要在JAK/STAT信号通路、PI3K/Akt信号通路、FoxO信号通路中被激活;③通过PPI网络拓扑学分析和机器学习方法筛选出骨关节炎细胞衰老关键基因MYC;④体外细胞实验结果表明,实验组骨关节炎软骨细胞中MYC mRNA表达明显低于对照组(正常软骨细胞),差异有显著性意义(P<0.05);⑤结果表明,MYC可作为骨关节炎细胞衰老的关键基因,可能通过介导免疫应答、炎症反应和转录调控等成为骨关节炎防治的新靶标。

WGCNA和机器学习识别骨关节炎铁死亡特征基因及实验验证

背景:铁死亡与骨关节炎发生、发展密切相关,但具体特征基因及调控机制尚不清楚。目的:运用WGCNA及多种机器学习方法识别骨关节炎铁死亡特征基因及免疫浸润分析。方法:从GEO数据库下载骨关节炎相关数据集,同时在FerrDb网站中获取铁死亡相关基因,采用R语言对骨关节炎数据集进行批次校正、提取骨关节炎铁死亡基因并进行差异分析,对差异基因进行GO功能及KEGG信号通路分析;同时运用WGCNA分析及机器学习(随机森林、LASSO回归及SVM-RFE分析)筛选骨关节炎铁死亡特征基因,并进行体外细胞实验,将软骨细胞分为正常组和骨关节炎组,运用数据集及qPCR验证表达并行相关免疫浸润分析。结果与结论:①经批次校正及PCA分析获得骨关节炎基因12548个,同时获得铁死亡基因484个,进而得到24个骨关节炎铁死亡差异基因;②GO分析主要涉及对氧化应激反应、对有机磷反应等生物过程;涉及细胞顶端、顶端质膜等细胞组分;涉及血红素结合、四吡咯结合等分子功能;③KEGG分析显示,骨关节炎铁死亡差异基因与白细胞介素17信号通路、肿瘤坏因子信号通路等信号通路有关;④运用WGCNA分析及机器学习筛选后获得特征基因KLF2;通过基因芯片验证后发现实验组半月板组织中KLF2基因表达高于对照组(P=0.00014);⑤体外细胞实验显示,骨关节炎组软骨细胞中Ⅱ型胶原、KLF2基因表达低于对照组(P<0.05),同时在骨关节炎铁死亡中肥大细胞与树突状细胞密切相关(r=0.99),KLF2与自然杀伤细胞(r=-1,P=0.017)、滤泡辅助性T细胞(r=-1,P=0.017)等密切相关;⑥结果显示,运用WGCNA分析及机器学习方法证实KLF2可作为骨关节炎铁死亡的特征基因,可能通过干预KLF2来改善骨关节炎铁死亡。

基于单细胞转录组测序分析骨关节炎软骨细胞分化的分子机制

目的深度分析骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞分化的单细胞转录组数据,探究其关键性靶基因及分子机制,为临床靶向治疗骨关节炎提供分子理论依据。方法从GEO数据库下载数据集(GSE104782),包含10个骨关节炎样本及1464个软骨单细胞测序结果,运用R语言分析软骨细胞分化中关键Marker基因,并采用质控和数据过滤、PCA、TSNE、细胞轨迹、GO、KEGG信号通路及蛋白互助网络分析揭示软骨细胞分化机制。结果该数据集共包含基因17380种、20个主成分、9种细胞类型、1886个Marker基因及6种分化途径,其中软骨祖细胞为软骨最早分化细胞。GO分析涉及软骨发育、结缔组织发育等生物过程;涉及含胶原蛋白细胞外基质、内质网内腔等细胞组分;涉及肝素结合、糖胺聚糖结合等分子功能。KEGG通路分析涉及蛋白质消化吸收、ECM受体相互作用、人乳头瘤病毒感染、补体与凝血级联反应、PI3K-Akt信号通路等信号通路。运用Cytoscape 3.7.2软件获得5个关键Marker基因(COL1A1、COL2A1、VEGFA、COL1A2、DCN)。结论运用单细胞转录组测序发现骨关节炎软骨细胞共有6种分化途径及多种Marker基因的潜在特征,进一步从单细胞角度阐述骨关节炎的发病机制。

机器学习鉴定KDELR3作为骨关节炎缺氧特征基因的实验验证

背景:缺氧与骨关节炎软骨细胞损伤的发生、发展密切相关,但具体作用靶点及调控机制尚不清楚。目的:运用机器学习方法鉴定KDEL(Lys-Asp-Glu-Leu)受体3(KDELR3)作为骨关节炎缺氧的特征基因及免疫浸润分析,以期为骨关节炎的治疗提供新的思路与方法。方法:从GEO数据库下载骨关节炎相关的数据集和GSEA网站中获取缺氧相关基因;采用R语言对骨关节炎数据集进行批次校正及免疫浸润分析,并提取骨关节炎缺氧基因进行差异分析,对差异表达基因进行GO功能及KEGG信号通路分析;同时运用加权基因共表达网络分析(Weighted correlation network analysis,WGCNA)及机器学习筛选骨关节炎缺氧的特征基因,并进行体外细胞实验,运用数据集及qPCR验证表达并行相关免疫浸润分析。结果与结论:①经批次校正及主成分分析获得骨关节炎基因8492个,主要与Macrophages M2和Mast cells resting等免疫细胞密切相关;同时获得缺氧基因200个,进而得到41个骨关节炎缺氧差异表达基因。②GO分析主要涉及对营养水平、糖皮质激素反应等生物过程;涉及溶酶体腔、高尔基内腔等细胞组分;涉及14-3-3蛋白结合、DNA结合转录激活剂活性等分子功能。③KEGG分析骨关节炎缺氧差异表达基因与PI3K-Akt、FoxO及癌症中的微小RNA等信号通路有关。④运用WGCNA分析及机器学习筛选后获得特征基因KDELR3。⑤通过基因芯片验证后发现KDELR3基因在滑膜中实验组基因表达高于对照组(P=0.014),而半月板中实验组基因的表达却低于对照组(P=0.024)。⑥体外软骨细胞实验显示KDELR3基因在软骨中实验组表达高于对照组(P=0.005),同时KDELR3基因与Macrophages M0(P=0.014),T cells follicular helper(P=0.014)等密切相关。运用机器学习方法证实KDELR3可作为骨关节炎缺氧特征基因,可能通过改善缺氧来干预骨关节炎发病,期待能为更好地治疗骨关节炎提供新方向。

基于机器学习筛选骨关节炎坏死性凋亡的特征基因RHOB及实验验证

目的 运用机器学习方法筛选骨关节炎坏死性凋亡的特征基因RHOB并加以验证,以期为OA治疗提供新的思路与方法。方法 从GEO数据库下载GSE55235、GSE1919、GSE82107、GSE98918微阵列数据集及GeneCard网站获取坏死性凋亡相关基因,采用R语言对OA数据进行批次校正,提取OA坏死性凋亡基因及差异分析,并对DEGs进行功能GO分析及KEGG信号通路分析,同时运用机器学习(LASSO回归、SVM-RFE、random Forest)筛选OA坏死性凋亡的特征基因,进一步运用荧光定量PCR试验验证。结果 经批次校正及PCA分析后共获得OA基因8 492个,同时获得坏死性凋亡相关基因657个,经分析后得到48个OA坏死性凋亡DEGs,其中上调基因18个,下调基因30个;主要涉及调节炎症反应、白细胞细胞间黏附等生物过程;涉及膜筏、膜微区等细胞组分;涉及细胞因子活性、整合素结合等分子功能;同时与TNF、IL-17、AGE-RAGE等信号通路有关。运用机器学习(LASSO回归、SVM-RFE、Random Forest)分别筛选出8个基因、11个基因及8个基因。其交集后获得特征基因RHOB,验证后发现RHOB作为OA坏死性凋亡特征基因准确性较高(AUC>0.5),且滑膜组织中试验组RHOB表达高于对照组(P=0.36),而半月板组织中试验组RHOB表达高于对照组(P=0.033)。同时运用体外软骨细胞培养及荧光定量PCR试验进一步证实,试验组RHOB mRNA的表达高于对照组(P=0.001)。结论 运用机器学习方法获得OA坏死性凋亡的特征基因及潜在因素,从新型细胞死亡角度为阐明其发病机制,为临床上更好治疗OA提供新方向。

丹参加玻璃酸钠预防性关节内注射对兔膝关节软骨退行性变的影响

目的通过观察丹参加玻璃酸钠预防性关节内注射对兔膝关节软骨退行性变的影响,探讨其治疗作用机理。方法将80只日本大耳白兔随机分为A组、B组、C组、D组,每组20只。通过切断膝关节前交叉韧带和内侧副韧带造成膝OA模型,每组每只动物分别注入0.3 ml的生理盐水(A组)、玻璃酸钠注射液(B组)、丹参注射液(C组)、丹参加玻璃酸钠混合液(D组),手术当天给药,每周1次。于给药4、8周后分批处死实验兔,每批每组各10只。行关节腔大体观察、光镜下组织学观察、凋亡软骨细胞检测。结果各组术后4、8周组间比较,软骨退变计分、软骨凋亡细胞计数,有无显著性意义;D组与B、C组之间差异无显著性,但D组的均值小于B、C组(P>0.05);各组术后4、8周组内比较,B、C、D组软骨退变计分、软骨凋亡细胞计数相比较,差异无显著性(P>0.05);A组软骨退变计分、软骨凋亡细胞计数相比较,有显著性差异(P<0.05)。结论在OA早期,预防性关节腔注射丹参和HA,能明显延缓关节软骨的蜕变,为早期防治OA提供实验基础。

化淤祛湿法对膝骨关节炎早期诱导型一氧化氮合酶炎症途径影响的实验研究

目的观察化淤祛湿法对膝骨性关节炎早期诱导型一氧化氮合酶(iNOS)炎症途径的影响,探讨其治疗作用机理。方法通过切断膝关节前交叉韧带和内侧副韧带造成膝OA模型。将24只日本雄性大耳白兔随机分为A组(正常组)、B组(模型组)、C组(补肾法)、D组(化淤祛湿法)。给药4周后处死实验兔,行关节腔大体观察,关节液NO含量检测,滑膜、关节软骨组织学观察,滑膜、关节软骨iNOS含量检测。结果D组关节腔大体观察与C组比较,差异无显著性(P>0.05);D组关节液NO含量检测与C组比较,差异显著(P<0.05);D组滑膜、关节软骨组织学观察评分与C组比较,差异显著(P<0.05);D组滑膜组织及软骨中iNOS含量与C组比较有显著性差异(P<0.05)。结论化淤祛湿法通过抑制膝OA早期NO及iNOS的表达,可降低NO及iNOS含量,减少软骨细胞凋亡,促进软骨基质合成及抑制其分解,抑制滑膜炎症,延缓关节软骨退变,促进了关节软骨的修复。

腰椎间盘突出症证型分析

目的 :探讨腰椎间盘突出症的证型特点 ,并反推其病机特点。方法 :对 1 2 83例腰椎间盘突出症住院患者的证型进行分类整理与统计分析。结果 :基本证型和复合证型各有 1 5种 ;30种证型中占比例较高的前 5种依次是 :气滞血瘀证、肝肾亏虚证、肝肾亏虚并寒湿阻络证、寒湿阻络证、气滞血瘀并肝肾亏虚证。所统计的4种证类按占比例高低排列依次是 :肝肾亏虚证类、气滞血瘀证类、风寒湿热证类、气血亏虚证类。结论 :气滞血瘀证 (或证类 )与肝肾亏虚证 (或证类 )是腰椎间盘突出症的两种最常见的证型 (或证类 )。腰椎间盘突出症的病机是肝肾亏虚、气滞血瘀以及风寒湿热阻络 。

中药浓缩颗粒辨证分型治疗150例膝骨关节炎的疗效观察

目的观察中药浓缩颗粒治疗150例膝骨关节炎的疗效、药物不良反应,评价其有效性、安全性。方法将150例入选病人按随机双盲法分为治疗组和对照组,治疗组分为3个辨证分型组。每日分别予中药浓缩颗粒剂及非甾体药物口服。治疗第1、2周,治疗结束后第2周的疗效组间比较。结果治疗1周后,对照组与治疗组的VAS评分比较,P<0.05;治疗2周后,两组与治疗前比较,有显著性差异(P<0.01,但是两组间比较,无显著性差异(P>0.05);在Lequene评分上,治疗组与对照组之间差异有统计学意义(P>0.05);在总有效率上对照组为90.7%,治疗组为88.0%;治疗组轻、中度患者与重度患者疗效比较有统计学意义(P<0.01)。结论中药缩颗粒剂和非甾体药物可改善膝骨关节炎,总有效率上效果相当;且无明显不良反应。

丹渗注射液关节内注射预防关节粘连的实验研究(英文)

[目的]探讨预防性关节内注射丹参注射液对关节粘连的影响。[方法]24只日本雄性大耳白兔随机分为3组,每组8只,分别为盐水对照组(A组)、玻璃酸钠对照组(B组)、丹参治疗组(C组)。手术切开右后膝关节,搜刮髌上囊前壁,切除大部分髌上囊后壁滑膜和髌下脂肪垫,术毕用长腿管形石膏固定右后肢膝关节于伸直位。每只动物采用的药物品种及剂量分别是:A组注生理盐水0.3ml、B组注玻璃酸钠0.3ml、C组注丹渗注射液0.3ml,共4次。4周后空气栓塞处死动物,行关节活动度测量、关节腔大体观察、髌上囊滑膜组织的组织学观察和总胶原含量检测。[结果]关节活动度B、C组大于A组(P<0.01),B、C组之间差异无显著性(P>0.05);关节粘连计分B、C组均于小A组(P<0.01),B、C组之间差异无显著性(P>0.05);髌上囊前壁滑膜病变组织学计分B、C、组均小于A组(P<0.01),B、C组之间差异无显著性(P>0.05);髌上囊前壁滑膜组织总胶原含量B、C组小于A组(P<0.01)。[结论]丹参注射液关节内注射能有效预防关节粘连,且与玻璃酸钠的效果类似,这可能与丹参通过多种途径减少组织的胶原含量和/或降低组织损伤修复的病理反应有关。

丹参加玻璃酸钠关节内注射对家兔实验性膝骨性关节炎软骨退变的影响

为探讨预防性关节内注射丹参加玻璃酸钠时骨关节炎软骨退变和细胞凋亡的影响，将成年健康日本大耳白兔37只随机分为4组。A组9只，B组9只。C组10只，D组9只。手术切开右后肢膝关节，搜刮髌上囊前壁，推开髌上囊后壁，切除髌下脂肪垫，缝合关节囊厦皮肤后关节穿刺。每组每只动物分别注入0．3ml的生理盐水（A组）、玻璃酸钠注射液（B组）、丹参注射液（C组）、丹参加玻璃酸钠混合液（各0、15ml，D组），管形石膏固定患肢于屈膝70—90°位；4周后处死动物，行关节腔大体观察，股骨髁下面关节软骨组织学观察和细胞凋亡检测。结果显示，关节软骨退变计分B、C、D组均小于A组（（P〈0.01）。D组的均值小于B、C组（P〉0．05）；关节软骨凋亡细胞计数B、C、D组均小于A组（P〈0．01），D组的均值小于B、C组（P〉0．05）。表明丹参能减轻软骨退变程度、减少软骨凋亡细胞数目。有效预防骨关节炎；丹参加玻璃酸钠与二药单独使用比较，有减轻软骨退变程度、减少软骨凋亡细胞数目的趋势，可以提高预防骨关节炎。

丹参注射液关节内注射预防关节粘连的实验研究

目的为探讨预防性关节内注射丹参注射液对关节粘连的影响。方法将24只日本雄性大耳白兔随机分为3组,每组8只,分别为盐水对照组(A组)、玻璃酸钠对照组(B组)、丹参治疗组(C组)。手术切开右后膝关节,搔刮髌上囊前壁,切除大部分髌上囊后壁滑膜和髌下脂肪垫,术毕用长腿管形石膏固定右后肢膝关节于伸直位。每只动物采用的药物品种及剂量分别是:A组注生理盐水0.3ml、B组注玻璃酸钠0.3ml、C组注丹参注射液0.3ml,共4次。4周后空气栓塞处死动物,行关节活动度测量、关节腔行大体观察、髌上囊滑膜组织的组织学观察和总胶原含量检测。结果关节活动度B、C组大于A组(P<0.01),B、C组之间差异无显著性(P>0.05);关节粘连计分B、C组均于小A组(P<0.01),B、C组之间差异无显著性(P>0.05);髌上囊前壁滑膜病变组织学计分B、C组均小于A组(P<0.01),B、C组之间差异无显著性(P>0.05);髌上囊前壁滑膜组织总胶原含量B、C组小于A组(P<0.01),C组小于B组(P<0.01)。结论丹参注射液关节内注射能有效预防关节粘连,且与玻璃酸钠的效果类似。

丹参及其结合玻璃酸钠预防兔膝关节粘连的作用

为探讨预防性关节内注射丹参及丹参加玻璃酸钠对关节粘连的影响，将成年健康日本大耳白兔37只随机分为4组：A组9只，B组9只，C组10只，D组9只。手术切开右后膝关节，搜刮髌上囊前壁，推开髌上囊后壁在股骨上的附着，切除髌下脂肪垫，缝合关节囊及皮肤后关节穿刺，A组每只动物注生理盐水0．3ml、B组注玻璃酸钠0．3ml、C组注丹参注射液0．3ml、D组注丹参0．15ml加玻璃酸钠0．15ml，同时用管形石膏固定患肢于屈膝70—90°位；4周后处死动物，行关节活动度测量、关节腔行大体观察和髌上囊前壁、髌韧带后粘连组织的组织学观察和细胞凋亡检测。结果显示，关节活动度B、C组大于A组（P〈0．01），D组大于B、C组（P〈0．05）；关节粘连计分B、C、D组均于小A组（P〈0，01）；髌上囊前壁滑膜病变组织学计分B、C、D组均小于A组（P〈0．01）；髌韧带后粘连组织成纤维细胞计数B、C、D组均小于A组（P〈0．01）；髌上囊前壁滑膜凋亡细胞计数B、C组大于A组（P〈0．01），D组大于B、C组（P〈0．05）；髌韧带后粘连组织凋亡细胞计数D组大于B、C组（P〈0．01），B、C组大于A组（P〈0．01）。说明丹参能有效顸防关节粘连，与玻璃酸钠的效果类似；丹参能加强玻璃酸钠预防关节粘连的效果。

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胫骨平台骨折是一种常见骨折,文章对手术治疗胫骨平台骨折进展的研究进行综述,主要包括:手术治疗的适应症与原则、切开复位内固定、骨外固定架固定、内固定结合骨外固定架治疗、经皮复位内固定技术。