PCV2通过激活NF-κB信号途径调节体外培养仔猪淋巴细胞IL-4和IL-12的分泌

选取8头猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗原、抗体阴性的普通断奶仔猪,无菌取其脾脏制成单细胞悬液后,随机分为4组:对照组、NF-κB抑制剂组(抑制剂组)、PCV2组和NF-κB抑制剂-PCV2组(抑制剂-PCV2组),体外培养24 h后收获淋巴细胞及培养上清液。ELISA方法检测培养上清液中IL-4和IL-12的含量;间接免疫荧光定位检测PCV2感染淋巴细胞的情况和核因子κB(NF-κB)蛋白入核情况,Western blot定量检测细胞浆中髓样分化因子88(MyD88)、磷酸化抑制性核因子кB(p-IкB)及NF-κB/p65和细胞核中NF-κB/p65蛋白含量的变化,电泳迁移率法(EMSA)检测细胞核中NF-κB与DNA的结合活性。结果显示,细胞培养上清液中,PCV2组IL-4含量明显低于对照组及抑制剂-PCV2组(P<0.05),对照组与抑制剂-PCV2组无差异;PCV2组细胞培养上清液中IL-12含量显著高于对照组(P<0.05),抑制剂-PCV2组极显著低于PCV2组(P<0.01)。PCV2感染后可在淋巴细胞内观察到PCV2抗原,并主要存在于细胞浆中。淋巴细胞胞浆内MyD88蛋白含量,PCV2组极显著高于对照组(P<0.01),PCV2组与抑制剂-PCV2组之间无显著差异。PCV2组淋巴细胞胞浆内p-IκBα的蛋白含量,胞核中NF-κB/p65含量及NF-κB与DNA结合活性均显著高于对照组;抑制剂和抑制剂-PCV2组淋巴细胞胞浆内p-IκBα的蛋白含量,胞核中NF-κB/p65含量及NF-κB与DNA结合活性均显著低于对照组。结论:PCV2可感染体外培养的仔猪淋巴细胞,介导MyD88-NF-κB信号途径激活从而调节淋巴细胞IL-4和IL-12的分泌。

基于翻转课堂的兽医病理学案例教学研究

结合案例教学实行翻转课堂引导教学改革应用于兽医病理学理论教学,通过精选动物诊疗病例,精心设计案例教学方案,利用信息技术载体,使兽医病理学基础理论与临床实践紧密联系。在教师指导下,激发学生主动思考,充分发挥学生主体作用。结果表明,经过两年的探索和实践,与传统教学模式进行对比,学生的批判思维能力和自我导向学习能力显著提高,也提高了学生对专业基础课程的学习兴趣。

应用型本科院校教学体系探索与研究

如何重构教学体系以适应我国经济发展新常态、融入产业转型升级发展是应用型本科院校人才培养的重要课题。文章结合龙岩学院教学体系改革实践经验,探索高校应用型发展模式为应用型本科院校培养应用型、复合型专业技术人才寻找新途径。

新农科背景下科研驱动人才培养实施路径探索——以龙岩学院为例

新农科对涉农高校提出了围绕农业产业发展,服务农业农村现代化、推进乡村振兴建设,聚力培养立足知农、爱农、强农、兴农新型人才内涵建设要求。龙岩学院生命科学学院对此进行了探索,坚持科研驱动构建知农爱农、强农兴农教育品牌,以厚植家国情怀、培养强农科技创新能力为核心,通过提高科研实力打造高水平师资队伍、发挥科研优势成果融入案例反哺教学、坚持以赛促创提升创新创业能力、建立协同体系发挥科研平台优势育人等综合改革全面提升学生专业实践和创新能力,着力地方农业区域经济和学生发展方向,最大限度挖掘学生创新潜力,为期新农科背景下人才培养提供借鉴和参考。

应用型地方本科高校动物医学综合实践教学改革

动物医学是一门应用性、实践性很强的学科,然而目前动物医学专业学生实践操作能力普遍较低.依托动物医学研究所和校外实训基地,独立开设动物医学综合实践技能课程,针对动物医学专业实践教学环节进行改革,打破传统以课程为中心的教学实习,开展综合实践教学,将综合诊疗和病例讨论纳入实践课程,制定新的考核机制.通过3年的实施取得了良好的成绩,提高了学生的实习实践能力.

兽医类省级重点实验室建设与服务地方区域发展

结合福建省家畜传染病防治与生物技术重点实验室服务地方区域发展的实际情况,对兽医类省级重点实验室建设特色进行分析,指出重点实验室建设服务地方畜牧产业区域发展的重要意义,提出利用重点实验室资源发展应用型基础研究、培养应用型人才,开展行业科研合作等方面取得的效果以及存在的问题,对兽医类省级重点实验室建设提供一定借鉴。

猪圆环病毒2型感染PK-15细胞中外泌体的鉴定及其对细胞增殖和凋亡的影响

旨在分离感染PCV2的PK-15细胞分泌的外泌体,探讨其在PCV2感染淋巴细胞中的作用。提取PCV2感染PK-15细胞上清液中的外泌体,利用透射电镜观察外泌体形态、纳米颗粒跟踪分析测定外泌体粒径、Western blot检测外泌体标记蛋白分子(CD81、TSG101);PKH67标记外泌体后检测细胞对外泌体的摄取;提取PCV2-外泌体基因组,检测PCV2 Rep和Cap基因;利用间接免疫荧光试验检测PCV2-外泌体感染PK-15细胞后PCV2病毒定位;通过绝对定量PCR检测PCV2-外泌体对淋巴细胞的感染率;利用CCK-8法检测淋巴细胞增殖;利用Annexin V-FITC/PI检测淋巴细胞凋亡率。透射电镜和外泌体粒径分析结果显示,PK-15细胞分泌的外泌体为双层膜的囊泡,直径30~200 nm;Western blot结果显示PK-15细胞分泌的外泌体存在特异性标记蛋白CD81和TSG101;外泌体摄取试验结果显示PCV2-外泌体能够被细胞摄取;PCR结果表明PCV2-外泌体基因组中含有PCV2 Rep和Cap基因;间接免疫荧光结果显示,与PCV2直接感染相比,PCV2-外泌体感染的淋巴细胞中,PCV2病毒拷贝显著升高,差异明显(P<0.01),外泌体裂解后感染淋巴细胞能力与PCV2病毒无显著差异;PCV2-外泌体可显著抑制淋巴细胞增殖(P<0.01或P<0.05);PCV2-外泌体显著提高淋巴细胞凋亡率。PCV2感染PK-15细胞的外泌体中携带病毒基因,感染淋巴细胞后使细胞增殖降低和细胞凋亡增加。

猪圆环病毒2型感染仔猪肺泡巨噬细胞Toll样受体mRNA转录的变化

选用6头经ELISA和荧光定量PCR方法检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体和抗原均为阴性的普通断奶仔猪,无菌分离肺泡巨噬细胞(AMs),分为对照组和PCV2感染组(PCV2组)进行体外培养,分别在培养0、6、12、24和48h收集AMs。间接免疫荧光法定位检测PCV2感染AMs情况;荧光定量PCR方法检测TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9 mRNA转录量的变化。结果表明,TLR2mRNA的转录量在感染后6h迅速升高,12h后又迅速下降,但仍显著高于对照组(P<0.01或P<0.05),到48h时恢复;TLR3mRNA的转录量,攻毒后6和12h显著高于对照组(P<0.05),24和48h时恢复到对照组水平;PCV2明显升高感染后12hAMs中TLR4mRNA的转录(P<0.05),而明显抑制感染后24和48h的转录(P<0.05);PCV2引起感染后6和12h的AMs中TLR7、TLR8和TLR9mRNA转录量显著升高(P<0.01或P<0.05),而到感染后24和48h又恢复到对照组水平。结果表明,PCV2可显著影响体外培养仔猪AMs TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9mRNA的转录。

PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞TLRs的影响

选取6头猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原及抗体均为阴性的普通断奶仔猪,无菌取脾脏,制成单个细胞悬液进行体外培养,并分为PCV2组和对照组,PCV2组用PCV2与脾细胞共同培养,对照组加等量RPMI-1640培养液。分别于培养0、6、12、24和48 h后收取悬浮的淋巴细胞,用间接免疫荧光法检测PCV2感染淋巴细胞的情况,相对定量RT-PCR法检测淋巴细胞中TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9 mRNA的表达量,Western blot检测TLR3和TLR4的蛋白表达情况。结果显示:PCV2感染后,TLR2和TLR9 mRNA的表达量在12、24和48 h时均极显著高于对照组(P<0.01),TLR3和TLR4 mRNA的表达量在24 h时极显著高于对照组(P<0.01)。TLR3蛋白在6和12 h显著高于对照组(P<0.05),TLR4蛋白在6、12、24和48 h均显著高于对照组(P<0.05)。结果表明:PCV2感染能显著上调体外培养的仔猪淋巴细胞TLR2、TLR3、TLR4和TLR9 mRNA水平,并进一步显著上调仔猪淋巴细胞TLR3和TLR4蛋白的表达,从而导致机体炎性细胞因子的分泌紊乱。

热应激致Hsc70出入核与细胞凋亡的关系

旨在探讨热应激对H9c2心肌细胞构成型HSP70(constitutive or cognate HSPs,Hsc70)出入核及细胞凋亡的影响。以42℃作为热应激模型温度,通过转染Hsc70siRNA抑制Hsc70表达,Western blot检测细胞质和细胞核内Hsc70表达,ELISA检测细胞培养液LDH浓度,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。结果表明,正常H9c2心肌细胞质Hsc70表达量较高,细胞核中表达量很低,细胞质和细胞核Hsp72表达量非常低。热应激后细胞质Hsc70表达量无显著差异,而细胞核Hsc70热应激30和100min后极显著升高(P<0.01),热应激240min后开始降低;细胞质和细胞核Hsp72热应激后显著升高(P<0.05或P<0.01)。Hsc70抑制表达后,细胞质Hsc70水平显著降低,热应激后Hsc70入核明显减少,但仍然有入核现象;Hsc70抑制表达对细胞质和细胞核Hsp72表达无显著影响。与热应激组相比,热应激+Hsc70siRNA组LDH表达量呈升高趋势,热应激100min两组出现显著差异(P<0.05);Hsc70抑制表达后H9c2细胞在热应激后更容易发生凋亡,而且在热应激30和100min内,两组之间存在显著差异(P<0.05)。结果提示,热应激可诱使Hsc70出入细胞核,Hsc70抑制表达后热应激诱导Hsc70入核显著降低,细胞损伤加重,细胞凋亡升高。

银杏叶提取物对热应激致鸡心肌细胞氧化损伤的保护作用研究

本试验旨在研究银杏叶提取物(Ginko biloba extract,GBE)对热应激致鸡心肌细胞氧化损伤的保护作用。取12日龄AA肉鸡心脏制备鸡原代心肌细胞,向原代心肌细胞培养板中分别加入0、5、10、50、100、150 mg/mL GBE,CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率;将原代心肌细胞以1×104个/孔接种于96孔板,培养48h,分别加入0、5、10、50、100、200、500、1 000μg/mL GBE,Hoechst 33258检测心肌细胞凋亡率,确定最适GBE浓度。42℃热应激处理(0、0.5、1、2和4h)建立心肌细胞损伤模型,ELISA试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、细胞丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blotting检测Hsp72蛋白表达。结果显示,高浓度GBE具有细胞毒性,50、100、150mg/mL GBE能极显著抑制细胞生长(P<0.01),50μg/mL GBE能够极显著提高细胞增殖率(P<0.01)。热应激后细胞发生凋亡,细胞内MDA、LDH含量增加,SOD活性、GSHPx含量减少,产生氧化损伤;GBE可以降低热应激时细胞LDH和MDA的含量,增加SOD活性和GSH-Px的含量,热应激2、4h,GBE处理效果明显。此外,GBE可增加心肌细胞中Hsp72蛋白的表达。综上所述,GBE能降低热应激状态下心肌细胞的氧化损伤,其机制可能与提高抗氧化酶活性及提高Hsp72的表达有关。

PCV2通过激活MyD88调控体外培养PAMs分泌IL-1β、IL-6和IL-10

试验选取6头猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原、抗体均为阴性的30日龄断奶仔猪,无菌分离肺泡巨噬细胞(AMs),分4组进行体外培养:对照组、髓样分化因子88(MyD88)干扰组(干扰组)、PCV2感染组(PCV2组)、PCV2感染-MyD88干扰组(PCV2-干扰组)。采用小干扰RNA(siRNA)方法使MyD88基因沉默,并分别于培养后0、6、12、24和48h收集细胞及培养上清液。用荧光定量PCR法检测干扰效率,Western Blot方法检测细胞内MyD88蛋白的表达变化,ELISA方法检测培养上清液中IL-1β、IL-6和IL-10的动态变化。结果显示,siRNA能使78%的MyD88基因沉默,并显著影响其蛋白表达;AMs中MyD88表达量,PCV2组从6h开始显著升高(P<0.05),PCV2-干扰组与PCV2组相比在12、24、48h差异极显著(P<0.01)。培养后各时间点,PCV2均能明显促进AMs分泌IL-1β(P<0.01或P<0.05),PCV2-干扰组和PCV2组相比,IL-1β的分泌量均显著降低(P<0.05)。PCV2能显著增加感染后6和12hIL-6的分泌量(P<0.01),PCV2-干扰组和PCV2组相比,IL-6的分泌量在6和12h显著降低(P<0.05)。PCV2明显促进感染后12、24和48hAMs分泌IL-10的能力(P<0.01),PCV2-干扰组和PCV2组相比,IL-10的含量在24和48h均极显著的降低(P<0.01)。结果表明,PCV2可引起体外培养的PAMs分泌IL-1β、IL-6和IL-10发生不同的变化,而MyD88是引起这些变化的重要调节因子。

应用型本科院校《动物病理学》课程教学改革探索与实践

以应用型人才培养的实施为切入点,构建产教融合、注重实践的动物病理学教学课程改革方案,利用"产学研"基地、新媒体辅助技术等手段,采取"以赛促学"、"双师同课"等方式,从课程目标、教学模式、教学方法、实践教学、考核评价方面进行探索和实践,为应用型地方本科院校动物医学专业课程改革提供参考。

一例犬埃里希氏体病的诊断与治疗

为了对一例犬的埃里希氏体病进行诊断与治疗,采用临床检查、血常规检查、血液生化检查、IDEXX 4Dx测试板检查、电解质检查和血涂片检查等方法对犬埃里希氏体进行确诊。结果表明：在患犬的耳廓、背部皮肤发现蜱虫,四肢等多处皮肤糜烂,有出血倾向;红细胞、白细胞数量降低,碱性磷酸酶活性升高,球蛋白含量升高;IDEXX 4Dx测试板检测犬埃里希氏体呈阳性;血涂片检测在单核细胞中发现包涵体。说明该犬所患疾病为犬埃里希氏体病,经驱虫、输血、消炎、保肝等治疗后该患犬康复出院。

新时代背景下兽医硕士教育综合改革的思考与探索

兽医专业硕士研究生教育是我国兽医教育适应畜牧业现代化发展需求,提高兽医高质量应用型、复合型人才水平的重要举措,但兽医硕士培养还存在教育体系与培养目标匹配度不够、实训平台基地不够健全、实践教学与职业职格缺乏有机结合、强农兴农就业观念不够牢固等诸多问题。在新时代背景下,通过教师队伍、思想教育、实践教学、管理制度、资源保障等方面加快推进兽医硕士研究生教育综合改革,以强化知农爱农意识和实践能力培养为核心,全面落实立德树人根本任务,推动兽医硕士教育高质量发展。

橄榄油渣作为非牧草纤维对羔羊生长性能、养分摄入及胴体产量的影响

本研究旨在探讨晒干或酸处理橄榄油渣部分替代小麦秸秆对羔羊营养摄入和生长性能的影响,同时对比酸处理对橄榄油渣化学成分和营养价值的影响。将54只公羔羊[(17.6±0.75)kg]单独圈养在围栏中,随机分为3组,每组6个重复,每个重复3只羊,对照组饲喂基础日粮,T1组用50%晒干橄榄油渣替代小麦秸秆,T2组用酸处理的晒干橄榄油渣替代小麦秸秆,试验日粮为等能量和等氮量,以满足所有营养需求。结论:在干物质基础上,自然晒干橄榄油渣中粗蛋白质、中性洗涤纤维、粗脂肪和总能含量与新鲜橄榄油渣无显著差异(P>0.05),但用磷酸处理自然晒干的橄榄油渣显著降低了中性洗涤纤维含量(P<0.05)。自然干燥和酸处理橄榄油渣组粗脂肪摄入量较对照组分别提高了191.67%和108.33%(P<0.05)。自然干燥橄榄油脂组羔羊的末重、总增重和平均日增重较对照组分别提高了12.05%、28.24%和28.65%(P<0.05),但自然干燥橄榄油渣组热/冷胴体重较酸处理组分别显著提高12.78%和12.21%(P<0.05)。各处理对羔羊养分表观消化率及氮平衡无显著影响(P>0.05)。结论:在本研究条件下,晒干的橄榄油渣可作为一种廉价的非饲料纤维来源用于羔羊饲料中,营养价值优于小麦秸秆,但用酸处理的晒干橄榄油渣并没有进一步改善羔羊的屠宰性能。

益生菌及制剂在畜禽方面的应用

益生菌是一类能对宿主产生有益作用的生物制剂，具有安全可靠、无残留、无抗药性、不污染环境等特点。在我国，益生菌及制剂在医学食品等方面应用较为广泛，养殖方面也有涉及但内容不够全面、丰富。综述益生菌及制剂的概念、机制，并总结其在畜禽方面的发展与应用，旨在为益生菌及制剂作为绿色饲料添加剂的安全、科学、有效性提供依据。

花生壳发酵饲料制备方法与技术

为提高花生农产品副产物综合利用,减少环境污染,利用菌酶协同发酵花生壳,制备反刍动物饲料,有效提高花生壳的纤维降解率,降低粗纤维含量和硬度,提高适口性,同时也提高了粗蛋白、粗灰分和氨基酸含量,复合益生菌种中含有乳酸菌等,既能大大改善花生壳资源浪费,又提高发酵花生壳的适口性和酸香味,为反刍动物提供菌体蛋白质等营养物质,有利于提高动物资源利用。

案例教学法在《小动物内科学》课程中的应用

为强化兽医理论教学内容,使其与实践能力培养有机融合,以小动物内科学重点知识点为基础,结合实践案例引导教学改革,归纳案例教学在小动物内科学具体实施、应用和思考体会,激发学生思考,发挥学生主体作用,使课堂贴近生产与实践。经过两年的探索和实践,学生的批判思维能力和自我导向学习能力,与对照组相比显著提高。

热休克蛋白70在热应激鸡原代心肌细胞中的表达与定位

为研究热应激后鸡原代心肌细胞中热休克蛋白70(HSP70)的表达量及其定位的变化,试验将体外培养的鸡原代心肌细胞分为6组,其中1组作为对照(未进行热应激处理),其余5组于42℃热应激处理0.5,1,2,4,8 h,Western-blot检测HSP70在6组鸡原代心肌细胞中的相对表达量,间接免疫荧光法测定热应激处理1 h后HSP70在鸡原代心肌细胞中的定位。结果表明:热应激后HSP70在鸡原代心肌细胞中的表达量呈先上升后下降趋势;与对照相比,热应激8 h后鸡原代心肌细胞的HSP70表达量显著降低(P<0.05);HSP70在对照与热应激1小时时的心肌细胞中均有表达,且在细胞浆与细胞核中均有分布,但主要分布于细胞浆中。说明热应激对HSP70在鸡原代细胞中的表达产生影响,但对其在细胞中的分布无明显影响。