半胱氨酸、蛋氨酸对体外培养绒山羊次级毛囊生长及毛乳头细胞增殖的影响

旨在探讨半胱氨酸(Cys)、蛋氨酸(Met)对体外培养燕山绒山羊次级毛囊(SF)生长及毛乳头细胞(DPCs)增殖凋亡的影响。本研究选取1只1周岁左右健康雄性燕山绒山羊皮肤若干,完整分离的次级毛囊随机分成Cys试验组和Met试验组,每组各浓度3个重复,每个重复8根毛囊,Cys试验组添加浓度分别为0、40、80、120、160和200μg·mL^(-1);Met试验组添加浓度分别为0、10、15、20、25和30μg·mL^(-1)。毛囊培养7 d,每隔24 h观察毛囊生长形态并测量毛囊生长长度。从燕山绒山羊次级毛囊中提取、纯化DPCs,细胞计数并绘制DPCs生长曲线,将DPCs随机分为Cys试验组和Met试验组,每组各浓度6个重复,Cys试验组添加浓度分别为0、20、40、60、80、100μg·mL^(-1);Met试验组添加浓度分别为0、2、4、6、8、10μg·mL^(-1)。培养2 h后用CCK-8试剂盒进行细胞增殖活力测定,确定燕山绒山羊DPCs中Cys和Met的最适培养浓度,利用qRT-PCR技术检测不同浓度Cys和Met的DPCs增殖相关基因(PCNA、CCND1、CDC42、CDK 4)、凋亡相关基因(P21、P53、Bax、Caspase-3、Bcl-2)、皮肤细胞分化相关基因(IVL)及角蛋白相关基因(K10、K 14)mRNA表达水平。结果表明,与对照组相比,添加80和120μg·mL^(-1) Cys与10、15、20和25μg·mL^(-1) Met均可显著影响次级毛囊生长速率和累计生长长度(P<0.01),且120μg·mL^(-1) Cys和20μg·mL^(-1) Met促生长效果最好;添加20、40和60μg·mL^(-1) Cys可以显著影响DPCs增殖(P<0.05),添加40μg·mL^(-1) Cys显著上调PCNA、CCND1、CDK4、Bcl-2、K10、K 14和IVL基因mRNA表达量(P<0.05);添加6μg·mL^(-1) Met可以显著影响DPCs增殖(P<0.05),并显著上调PCNA、CCND1、CDK4、P21、Bcl-2、K 10和K 14基因mRNA表达量(P<0.05)。综上,添加Cys和Met可以显著促进长绒期燕山绒山羊次级毛囊生长,最适添加量分别为120μg·mL^(-1)和20μg·mL^(-1);添加Cys和Met可通过上调细胞增殖、分化、角蛋白等基因mRNA、下调细胞凋亡基因mRNA表达,促进乳头细胞增殖、抑制细胞凋亡进而促进燕山绒山羊次级毛囊生长。

L-半胱氨酸对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡和类固醇激素分泌的影响

旨在探讨L-半胱氨酸(L-Cys)对体外培养绵羊卵巢颗粒细胞(GCs)增殖、凋亡和类固醇分泌的影响。本研究采集1~1.5岁龄体重相近饲养条件相同的30只健康性成熟小尾寒羊母羊新鲜卵巢,从优势卵泡(2~8 mm)中收集GCs,随机分为5组,每组6个重复,各组添加L-Cys浓度分别为0、100、300、500和700μmol·L^(-1),培养48 h后用CCK-8试剂盒进行细胞增殖活力测定,Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测GCs的凋亡情况,采用ELISA检测GCs培养液上清中孕酮和雌二醇的分泌水平并采用实时荧光定量PCR和Western blot分析L-Cys对绵羊颗粒细胞增殖相关基因(PCNA、CCND2、CCNB 1)、凋亡相关基因(BAX、Caspase-3、Bcl-2)和类固醇分泌相关基因的(STAR、3β-HSD、CYP 11A1、CYP 19A1)mRNA和蛋白表达的影响。结果显示,100、300和500μmol·L^(-1)组的L-Cys均可显著促进绵羊GCs的增殖活力(P<0.05),并显著抑制其凋亡率(P<0.05)。添加300μmol·L^(-1)的L-Cys显著抑制了孕酮(P 4,P<0.05)的分泌。进一步研究发现,300μmol·L^(-1)和500μmol·L^(-1)组的L-Cys可以上调增殖相关基因(PCNA、CCND2、CCNB 1)mRNA表达水平,其中300μmol·L^(-1)组的增殖蛋白(PCNA、CCND2、CCNB1)表达量显著上升(P<0.05);100μmol·L^(-1)和300μmol·L^(-1)组显著下调凋亡相关基因(BAX、Caspase-3)mRNA(P<0.05)及其蛋白表达水平(P<0.05)。添加300μmol·L^(-1)L-Cys显著降低了类固醇相关基因(STAR、3β-HSD)mRNA及蛋白表达水平(P<0.05),添加100μmol·L^(-1)和300μmol·L^(-1)L-Cys显著升高了类固醇相关基因(CYP 11A1、CYP 19A1)mRNA(P<0.05)及其蛋白表达水平(P<0.05)。综上,L-Cys通过上调基因PCNA、CCNB1、CCND2、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达、下调基因BAX、Caspase-3 mRNA及其蛋白表达,促进绵羊GCs增殖,抑制其凋亡;L-Cys通过下调基因STAR、3β-HSD mRNA及其蛋白表达以及上调基因CYP 11A1 mRNA及其蛋白表达抑制P 4的分泌。

γ-氨基丁酸对绵羊卵巢颗粒细胞凋亡及类固醇激素分泌的影响

【目的】该文章旨在探究γ-氨基丁酸(GABA)对绵羊卵巢颗粒细胞(GCs)凋亡及类固醇激素分泌的影响。【方法】卵巢GCs培养液中分别添加0、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6)和10^(-5)mol/L的GABA处理24 h后,采用CCK-8法和流式细胞术分别检测GCs增殖及凋亡情况,筛选出GABA适宜培养浓度用于后续试验,采用ELISA检测GABA对GCs雌激素(E_(2))及孕酮(P_(4))分泌的影响,RT-q PCR及Western blot技术检测促GCs增殖(PCNA、CCNB1、CCND1)、促凋亡(Caspase-3、Bax)、抗凋亡(Bcl-2)和类固醇激素合成相关基因(CYP11A1、St AR、3β-HSD、CYP19A1)m RNA及蛋白的表达。【结果】添加GABA处理绵羊卵巢GCs 24 h,各组均可显著促进GCs增殖(P<0.05),抑制其凋亡(P<0.05)。GABA可显著上调PCNA、CCNB1、CCND1、Bcl-2 m RNA及蛋白表达量(P<0.05),显著下调Bax、Caspase-3 m RNA及蛋白表达量(P<0.05)和Bax/Bcl-2比值(P<0.05)。GABA可显著促进P_(4)的分泌(P<0.05),显著抑制E_(2)的分泌(P<0.05)。显著上调St AR、3β-HSD、CYP11A1的m RNA及蛋白表达水平(P<0.05),显著下调CYP19A1的m RNA及蛋白水平(P<0.05)。【结论】GABA通过调节CCNB1、CCND1、PCNA、Caspase-3、Bcl-2、Bax基因表达促进GCs的增殖,抑制其凋亡;通过调节St AR、3β-HSD、CYP11A1、CYP19A1基因表达促进GCs的P_(4)分泌,抑制E_(2)生成。

羔羊日粮中添加缓释尿素对体外发酵参数及主要营养物质消化率的影响

试验旨在探究羔羊日粮中添加不同比例缓释尿素(SU)对瘤胃体外发酵参数和主要营养物质消化率的影响。采用体外发酵法,设置6个试验组,分别在羔羊育肥期日粮中添加0%、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%SU,每组4个重复。结果表明:1.0%SU组和1.5%SU组2、4、8h累积产气量高于对照组、2.0%SU组和2.5%SU组(P<0.05),1.0%SU组和1.5%SU组10、12、24 h累积产气量高于2.5%SU组(P<0.05);2.5%SU组6、8、10、12 h累积产气量低于对照组(P<0.05),各试验组48 h累积产气量无显著变化;1.0%SU组干物质消化率高于对照组、0.5%SU组、2.0%SU组、2.5%SU组(P<0.05),1.0%SU组、1.5%SU组、2.0%SU组、2.5%SU组总能、粗蛋白质消化率均低于对照组(P<0.05),0.5%SU组总能消化率高于对照组(P<0.05),1.5%SU组、2.0%SU组和2.5%SU组中性洗涤纤维消化率低于对照组(P<0.05),1.0%SU组酸性洗涤纤维消化率最高(P<0.05);2.0%和2.5%SU组体外发酵液pH高于对照组(P<0.05);1.5%SU组、2.0%SU组和2.5%SU组乙酸/丙酸值低于对照组(P<0.05)。由此可见,羔羊育肥日粮中添加1.0%和1.5%SU可以提高瘤胃产气量,提高干物质、粗蛋白质消化率,稳定瘤胃液pH,并利于丙酸发酵,但1.5%SU组中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维消化率较1.0%SU组有所下降,添加1.0%SU效果最佳。