Fas/FasL信号转导通路在DADS诱导K562细胞凋亡中的作用机制研究

本研究旨在探讨二烯丙基二硫化合物(diallyl disulfide,DADS)诱导白血病K562细胞凋亡的作用及Fas/FasL信号转导通路在DADS诱导白血病K562细胞凋亡作用中机制。以K562细胞为研究外培养的细胞分为空白组(2组)及药物处理组(4组),共6小组。空白组包括细胞对照组及溶媒对照组,药物处理组加入不同浓度DADS,DADS终浓度为10、20、40、80mg/L。取对数生长期细胞进行实验。采用Hoechst33258染色法观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术分析不同浓度、不同时间DADS对K562细胞凋亡的诱导作用;RT-PCR法检测Fas、FasLmRNA表达变化。结果表明,DADS在浓度为10、20、40mg/L时,K562细胞以凋亡效应为主。K562细胞出现细胞核缩小,染色质凝集、核膜破裂等凋亡特征;同一时间组(作用细胞24小时),DADS浓度从10mg/L增至40mg/L,K562细胞的凋亡率由(2.10±0.25)%增至(37.94±0.87)%;同一浓度组(40mg/L),DADS作用时间从24小时增至72小时,K562细胞的凋亡率由(37.94±0.87)%增至(47.02±0.66)%,各实验组随时间、浓度增加凋亡率明显增高(p<0.01),呈现K562细胞的凋亡效用与药物浓度、时间明显依赖关系;作用48小时后,FasmRNA表达水平较对照组上调;FasLmRNA较对照组下调,差异具有统计学意义(p<0.05)。当DADS浓度为80mg/L时,K562细胞以坏死效应为主。结论 :DADS能够诱导K562细胞凋亡,其凋亡机制可能与上调Fas,下调FasL,激活Fas/FasL死亡受体通路有关。

二烯丙基二硫诱导K562细胞凋亡及与G_2/M期阻滞关系研究

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对体外培养的人白血病细胞系K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用细胞计数法、形态学观察、MTT分析法、AO/EB染色、流式细胞术探讨DADS对K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果 1.DADS在10～80mg·L^(-1)范围内,对K562细胞的抑制作用呈剂量-时间依赖效应。2.DADS浓度在10～80mg·L^(-1)时作用K562细胞24h后,凋亡率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。3.不同浓度DADS作用于K562细胞24h后,K562细胞阻滞于G_2/M期。结论 DADS有抑制K562细胞增殖和促进K562细胞凋亡的作用,其作用的可能机制与k562细胞阻滞于G_2/M期有关。

p73基因失活在儿童急性淋巴细胞白血病发病和预后中的意义

目的 探讨p73基因mRNA失表达与儿童急性淋巴细胞白血病 (ALL)的发病和预后的关系。方法 采用反转录聚合酶链反应 (RT -PCR )方法检测了 34例ALL患儿骨髓单个核细胞内 p73mRNA的表达情况 ,并分析了 p73mRNA失表达与化疗的反应及复发的关系。结果 儿童ALL患者中 p73mRNA失表达率达 2 6.5 % ( 9/34 ) ,且与诱导缓解治疗的反应和复发显著相关 (P <0 .0 5 )。结论 p73mRNA失表达在小儿ALL的发病过程中起重要作用 ,p73mRNA检测对评估儿童ALL预后 。

儿童骨髓增生异常综合征的诊断与治疗进展

儿童骨髓增生异常综合征(MDS)是儿童造血系统肿瘤的一种少见疾病。目前对成人MDS的诊断分型、预后和疗效判断标准已得到统一认识,但并不适用于儿童MDS,其本质需进一步研究。支持治疗是成人MDS患者的主要治疗手段,但对儿童MDS患者并不重要,造血干细胞移植是儿童MDS的首选治疗。现结合最近根据成人MDSWHO分型标准提出的儿童MDS分型标准,就儿童MDS的诊治进展进行阐述。

P^(73)mRNA在急性淋巴细胞白血病细胞的表达及临床意义

目的 探讨P73mRNA失表达在小儿急性淋巴细胞白血病 (ALL)中的临床意义。方法 RT PCR法检测 40例ALL患儿骨髓单个核细胞内P73mRNA表达 ,并分析P73mRNA失表达与影响ALL预后因素的关系。结果 ALL中存在较高频率的P73mRNA失表达 ,且与高白细胞数、高肿瘤负荷、髓外浸润、高危临床分型显著相关。结论 P73mRNA失表达在小儿ALL发病过程中起重要作用 ,P73mRNA失表达与预后不良因素相关 ,P73mRNA检测可能对评估小儿ALL预后。

小儿血液病患者骨髓病态巨核细胞检查临床意义

目的 了解骨髓涂片病态巨核细胞在小儿血液病中的临床意义。方法 观察多种小儿血液病患者骨髓涂片的病态巨核细胞数量与类型分布。结果 IDA、HA和AA均未见病态巨核细胞 ,ITP少数病例可见少量病态巨核细胞 ,但未见分化极差的淋巴细胞样小巨核细胞。MDS及ANLL、恶性肿瘤都有病态巨核细胞 ,亦可见淋巴细胞样小巨核细胞 ,以MDS最为明显。结论 检查骨髓涂片中的小巨核细胞有助于某些小儿血液疾病的临床诊断。

哮喘患儿血清IL-18水平测定的临床意义

目的探讨IL-18水平在婴幼儿哮喘中的变化和意义。方法采用双抗体夹心ELISA法检测30例哮喘患儿和20例健康对照组患儿血清中IL-18、IL-4和INF-γ的含量,并对检验结果进行统计学处理。结果与对照组相比,哮喘患儿血清中IL-18和INF-γ的含量明显增高(IL-18:202.61±72.30与154.49±48.50 ng/L,P<0.01;INF-γ:64.36±25.72与43.29±22.24 ng/L,P<0.01),IL-4的含量降低(206.20±88.66与228.38±81.79 ng/L),但差异无显著性(P>0.05)。结论婴幼儿中哮喘患儿血清IL-18表达增高,可能参与了哮喘的病理过程。

先天性主动脉缩窄(附1例尸解报告)

目的 通过总结少见的先天性主动脉缩窄病例 ,以提高对该病临床特点及诊疗方法的认识。方法 报道 1例罕见的新生儿主动脉缩窄病例 ,并对相关文献进行分析。结果 本病临床症状无特异性 ,但一般有较明显的体征 ,包括可在胸骨左缘第 2至 4肋间闻及收缩期杂音及特殊的血压变化 ,MRI作为辅助检查优于超声心动图 ,治疗往往通过外科手术或心导管介入治疗。结论 通过特有体征及MRI等辅助检查可进行临床诊断 。

黄芪甲甙对大鼠骨髓间充质干细胞多种造血相关因子表达的影响

背景:黄芪甲甙是中药黄芪的主要有效成分,能促进骨髓间充质干细胞的增殖及诱导分化,但涉及具体作用机制的报道较少。目的:探讨中药黄芪甲甙对大鼠骨髓间充质干细胞造血相关因子表达的影响。方法:全骨髓贴壁法和单克隆培养法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,接种于96孔板中,加药组分别用25,50,100,200g/L黄芪甲甙100μL孵育72h,对照组仅加等量DMEM-LG培养液。间接免疫荧光法鉴定其生物学特性,MTT法检测黄芪甲甙对骨髓间充质干细胞增殖的影响,RT-PCR法检测黄芪甲甙干预后骨髓间充质干细胞造血相关因子的表达。结果与结论:第3代骨髓间充质干细胞高表达CD44,低表达造血细胞表面标志CD45。与对照组比较,黄芪甲甙呈时间及剂量依赖性促进骨髓间充质干细胞的增殖,以200g/L黄芪甲甙干预72h促增殖作用最强(P<0.05)。与对照组比较,加药组骨髓间充质干细胞SCF的表达显著增加(P<0.01),TPO,GM-CSF,TGF-β1等细胞因子的表达无明显变化(P>0.05),不表达白细胞介素3。黄芪甲甙可促进骨髓间充质干细胞的体外增殖,可能与其诱导骨髓间充质干细胞分泌SCF有关。

MicroRNA-21对肺成纤维细胞增殖和分化的影响

目的探讨小鼠肺成纤维化细胞模型中microRNA（miR）-21对肺成纤维细胞增殖和分化的影响。方法24只SPF级C57BIJ6小鼠随机分为假手术组和肺纤维化模型组，各12只。经气管内注入博莱霉素建立小鼠肺纤维化模型，采用荧光定量PCR检测各组肺组织miR-21的表达。提取小鼠成纤维细胞，胰酶消化，接种于6孔板，使细胞浓度达到30％～50％。设随机对照组、空白对照组和miR-21mimic组。各组分别在50μL Opti-MEM加入2．5μLPBS、阴性对照储存液和miR-21mimic储存液（20μmol／L）。采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测细胞增殖活性，蛋白质印迹法检测成纤维细胞含I型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶（ADAMTS-1）和转化生长因子（TGF）-β1的表达。结果与假手术组比较，肺纤维化模型组小鼠肺组织中miR-21的表达量明显上调。与随机对照组和空白对照组比较，miR-21mimic组成纤维细胞miR-21基因表达显著上调，成纤维细胞增殖率增加，ADAMTS-1蛋白表达明显下降，而TGF-β1表达显著上调；空白对照组与随机对照组ADAMTS-1及TGF-β1蛋白表达无明显差异。结论在小鼠肺成纤维化细胞模型中上调的miR-21可通过ADAMTS-1／TGF-β1信号通路促进肺纤维化。

三氧化二砷诱导K562细胞线粒体跨膜电位的变化及其机制研究

目的 了解三氧化二砷 (As2 O3)诱导慢粒细胞系K562细胞株凋亡是否与线粒体跨膜电位 (△Ψm)改变有关及其可能机制。方法 联合应用As2 O3和巯基还原剂———二巯基苏糖醇 (DTT)、谷胱甘肽 (GSH)耗竭剂———丁硫堇 (BSO)处理K562细胞株 ,通过测定细胞内荧光染料碘化丙啶 (PI) /Rhodamine1 2 3(Rh1 2 3)的色强度分析线粒体跨膜电位 (△Ψm) ,通过测定细胞活力、亚G1期细胞含量及形态学观察等鉴定细胞凋亡。结果 As2 O3砷可明显诱导K562细胞线粒体△Ψm下降。BSO可加强As2 O3砷诱导的K562细胞凋亡和线粒体△Ψm下降 ,而DTT则有部分拮抗作用。在 2× 1 0 - 6 mol/LAs2 O3处理 72h的K562细胞 ,细胞膜完整但线粒体△Ψm下降的凋亡细胞 (PI- Rh1 2 3- )达 (2 6 .0± 2 .5) % ,当 1× 1 0 - 3mol/LBSO同时处理时 ,PI- Rh1 2 3- 细胞和凋亡细胞数上升达 (37.2± 5 .7) %和 (39.1± 4 .5) % ;而当 2× 1 0 - 4mol/LDTT同时处理时 ,PT- Rh1 2 3- 细胞和凋亡细胞数分别降至 (1 1 .5± 1 .3) %和 (1 5 .4± 3 .5) %。结论 线粒体跨膜电位下降是As2 O3砷诱导K562细胞凋亡的关键环节 ,其机制可能与巯基氧化有关 ,巯基可能是As2 O3诱导细胞凋亡的重要分子靶子。

三氧化二砷诱导慢性粒细胞系K562细胞凋亡及细胞周期变化研究

目的 研究三氧化二砷 (AS2 O3 )体外对K5 6 2细胞凋亡的诱导作用 ,探讨AS2 O3 促进慢性粒细胞系K5 6 2细胞凋亡机制。方法 采用不同浓度AS2 O3 处理慢性粒细胞系K5 6 2细胞 ,观察细胞形态改变 ,细胞生长抑制检测 (MTT)分析方法检测AS2 O3 对K5 6 2细胞增殖抑制作用 ;流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 (1～8)× 10 -6mol/LAS2 O3 能明显诱导K5 6 2细胞凋亡。流式细胞检测表明 ,随AS2 O3 浓度增加和处理时间延长 ,S期细胞比例渐下降 ,细胞凋亡率上升 ,其作用呈浓度 时间依赖性 (P <0 .0 1)。结论 AS2 O3 可诱导K5 6 2细胞凋亡 ,其作用机制可能是使细胞受阻于S期前的某个时期 ,从而诱导细胞凋亡 ,其作用呈剂量

机械通气后早产儿支气管肺发育不良的临床特点分析

目的探讨早产儿支气管肺发育不良(BPD)发生率、预后、危险因素及防治措施。方法回顾性分析并对比近年来我院收治的早产BPD及非BPD患儿的临床资料。结果BPD与非BPD患儿比较,男女比率、窒息史及呼气末正压(PEEP)、平均气道压力(MAP)参数、应用肺表面活性物质(PS)等方面差异均无统计学意义;而BPD组平均胎龄、平均出生体重、胎膜早破史比例、新生儿呼吸窘迫综合征(RDS)率、合并感染率、合并动脉导管未闭(PDA)率、静脉营养使用时间及住院时间均明显高于非BPD组(P<0.05)。Logistic回归分析显示合并PDA、产后感染、通气时间及最高氧浓度为BPD发生的主要危险因素(P<0.05)。非BPD组各项随访项目均显著好于BPD组(P<0.05)。结论避免早产及低出生体重儿、尽量缩短机械通气时间及氧气吸入时间、防止及减少反复肺部感染,积极早期综合治疗是预防早产儿支气管肺发育不良的有效措施。

三氧化二砷诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的了解三氧化二砷(As2O3)诱导慢粒细胞系K562细胞株凋亡是否与线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrane potentials,△ψm)改变有关及其可能机制。方法联合应用As2O3、DTT和BSO处理K562细胞株,通过细胞内荧光染料PI/Rh123的色强度分析(△ψm),测定细胞活力、亚G1期细胞含量及形态学观察等鉴定细胞凋亡。结果As2O3可明显诱导K562细胞线粒体△ψm下降。BSO可加强As2O3诱导的K562细胞凋亡和线粒体△ψm下降,而DTT则有部分拮抗作用。在2×10-6mol/L As2O3处理72h的K562细胞,PI-Rh123-细胞达(26.0±2.5)%,当1×10-3mol/LBSO同时处理时,PI-Rh123-细胞和凋亡细胞数上升达(37.2±5.7)%和(39.1±4.5)%;而当2×10-4mol/L DTT同时处理时,PI-Rh123-细胞和凋亡细胞数分别降至(11.5±1.3)%和(15.4±3.5)%。结论线粒体跨膜电位下降是As2O3诱导K562细胞凋亡的关键环节,其机制可能与巯基氧化有关,巯基可能是As2O3凋亡细胞的重要靶分子。

RNA干扰沉默CXCR4基因对Jurkat细胞周期和凋亡的影响

本文研究探讨下调CXCR4的表达对人T-ALL Jurkat细胞周期和凋亡的影响。设计合成CXCR4的特异性siRNA,采用脂质体转染Jurkat细胞株。用RT-PCR检测siRNA对细胞内CXCR4基因表达的影响,用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞的凋亡情况。结果表明:成功构建了CXCR4的特异性siRNA;与空白对照组相比,转染CXCR4 siRNA的Jurkat细胞的CXCR4 mRNA表达水平明显下降(56.9%±1.4% vs 68.3%±2.4%),G0/G1期细胞比例增加(35.8%±1.9% vs 18.1%±1.2%),G2/M期和S期细胞比例相应下降(19.8%±1.7% vs 27.2%±1.5%;44.4%±2.1% vs 54.7%±2.8%),凋亡细胞率明显增高(20.9%±2.0% vs 3.13%±0.9%)。结论:CXCR4的特异性siRNA能够有效下调CXCR4基因表达,诱导Jurkat细胞凋亡和细胞周期阻滞,从而抑制细胞的增殖。

急性脑梗死患者外周血微小RNA-155和CD4^+CD25^+Treg细胞表达的关系

目的:探讨微小RNA-155(mi R-155)对急性脑梗死患者外周CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg)的调节作用,从而了解mi R-155在急性脑梗死发病中的作用机制。方法:选取南华大学附属南华医院神经内科和重症监护室急性脑梗死患者60例(轻度20例、中度20例、重度20例)及20例正常对照组。分别采集各组的外周静脉血,采用流式细胞术检测CD4+CD25+Treg细胞的表达;实时荧光定量聚合酶联反应(RT-PCR)检测mi R-155、Foxp3 m RNA的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-10(IL-10)的水平。结果 :急性脑梗死组患者外周血Treg表达率和mi R-155、Foxp3 m RNA的表达以及IL-10水平均高于正常对照组(P<0.01);并且随着临床神经功能缺损程度评分增加而升高,重中轻度组之间两两比较差异均有统计学意义(均P<0.01);死亡组各项指标显著高于生存组(均P<0.01)。mi R-155的表达与Treg和Foxp3 m RNA的表达水平均呈正相关。结论:mi R-155参与对Treg细胞增殖的调节,在急性脑梗死免疫失衡中发挥一定的作用。

三氧化二砷诱导慢性髓细胞性白血病K562细胞株凋亡与c-myc的表达

目的:观察三氧化二砷(As2O3)诱导慢性髓细胞性白血病K562细胞株凋亡和c -mycmRNA表达的作用, 并探讨其作用机制。方法:应用MTT法、苔盼蓝拒染法、DNA凝胶电泳和细胞周期凋亡检测,观察0μmol/L、0.5 μmol/L、1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/LAs2O3分别作用24h、48h、72h后,对K562细胞增殖及活力的影响。 应用RT -PCR和免疫组织化学法检测As2O3处理后K562细胞c -mycmRNA和蛋白表达的变化。结果:As2O3诱导后 K562细胞核DNA凝缩,核片段化,最后形成凋亡小体。在一定范围内,随着As2O3浓度的增加和As2O3处理时间的 延长,细胞存活率明显下降;流式细胞仪检测可见As2O3诱导K562细胞凋亡,影响细胞周期,细胞阻滞于G2/M期; As2O3处理后c- mycmRNA和C myc蛋白表达均有先上调后回落的趋势。结论:As2O3可以抑制K562细胞增殖并诱 导凋亡,其作用机制可能是使细胞受阻于G2/M期而进入凋亡程序,c- myc基因参与了As2O3诱导细胞凋亡的基因 调控。

317例儿童不明原因发热的临床分析

目的 探讨儿童不明原因发热 (FUO)的病因 ,诊断方法和思维方式。方法 回顾性地总结分析1996年 1月至 2 0 0 0年 12月符合FUO诊断标准的住院患儿 317例。结果 317例中明确诊断有 2 98例 ,确诊率为94.0 %。感染性疾病 16 0例 (5 3 .7% ) ,非感染性疾病 138例 (4 6 .3 % ) ,两者之比为 1.15∶1。最终确定诊断的方法分别为 :临床综合诊断 140例 (4 7.0 % ) ;血清和骨髓细菌培养检查 6 4例 (2 1.5 % ) ;组织活检 37例 (12 .4% ) ;影像学检查 35例 (11.7% ) ;尸体解剖 11例 (3 .7% ) ;骨髓形态学确诊 6例 (1.9% ) ;回顾性诊断 5例 (1.7% )。结论 根据临床经过和必要的实验室检查大部分FUO病例可以明确病因诊断 ,病理学检查对疑难病例的诊断提供重要依据 ,极少数病人最终只能依赖尸检明确诊断。感染性疾病。

噬血细胞综合征患儿外周血辅助T细胞17与调节性T细胞的变化

目的探讨外周血调节性T细胞与辅助T细胞17(Th17)在噬血细胞综合征(HPS)患儿中的动态演变。方法选择32例HPS患儿为HPS组及30例健康儿童为健康对照组。采用实时荧光RT-PCR和流式细胞术分别从mRNA与蛋白水平检测外周血CD4+T细胞IL-17和Foxp3的表达。结果 HPS组外周血CD4+T细胞IL-17蛋白及mRNA表达水平显著高于健康对照组(P<0.05,P<0.01);HPS组外周血CD4+T细胞Foxp3蛋白及mRNA表达水平显著低于健康对照组(P<0.05,P<0.01)。结论 Th17及调节性T细胞的失衡与HPS的发生发展密切相关。