热毒宁注射液高效液相色谱指纹图谱研究及多成分定量分析

目的:建立热毒宁注射液HPLC-UV指纹图谱测定方法及多指标成分含量测定分析方法。方法:采用高效液相色谱法,以Phenomenex C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱为分析柱,以甲醇-磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,指纹图谱检测波长为225nm、多指标成分含量测定检测波长为237nm、324nm。结果:在同一色谱条件下,采用不同的检测波长,分别进行指纹图谱的测定、多指标成分(栀子苷、绿原酸、咖啡酸、异绿原酸等9个成分)的含量测定;指纹图谱中确定了14个共有峰,10批热毒宁注射液的指纹图谱平均相似度为0.95以上;含量测定结果表明,10批热毒宁注射液中9个成分的含量均一、稳定。结论:通过系统的方法学验证,该方法能够准确、快捷的测定热毒宁注射液的指纹图谱及多成分含量;该方法分别从定性定量的角度全面的反映热毒宁注射液中的主要成分及其变化情况,提高了热毒宁注射液内在质量控制水平。

热毒宁注射液在大鼠体内的药代动力学研究

目的:研究热毒宁注射液中栀子苷、绿原酸在大鼠体内的药代动力学特征。方法:大鼠尾静脉分别注射5.20、10.40、16.00g(生药)·kg^(-1)热毒宁注射液后,收集血浆样本,采用HPLC检测栀子苷与绿原酸的血药浓度,以DAS 2.0软件计算药代动力学参数。结果:不同给药剂量下栀子苷与绿原酸的体内平均半衰期分别为41～52min、37～52min,栀子苷、绿原酸的AUC_(0-t)与剂量成正比。结论:栀子苷和绿原酸在体内的动力学过程均可用二室模型来描述,且二者在大鼠体内呈线性代谢。

银杏二萜内酯葡胺注射液通过下调calpain信号通路抑制脑缺血神经细胞凋亡

研究银杏二萜内酯葡胺注射液(diterpene ginkgolides meglumine injection DGMI)对缺氧缺糖/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡的抑制作用及其机制。采用试剂盒、Fluo-3 AM法、Western blot检测SH-SY5Y细胞氧糖剥离损伤4h后,与药物一起复氧1h细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量、caspase-3/7酶活力、细胞质中核小体含量、胞浆游离钙离子浓度以及calpain、cleaved caspase-12蛋白量的变化。结果显示DGMI能极显著降低OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞LDH的漏出量,抑制caspase-3/7酶活性,减少细胞核核小体的释放量,下调细胞内游离钙离子浓度、calpain和cleaved caspase-12蛋白量,抑制calpain凋亡信号通路保护神经细胞。DGMI对OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有显著的抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞内Ca^(2+)/calpain/caspase-12/capase-3信号通路有关。

银杏二萜内酯葡胺注射液对缺糖缺氧损伤的SH-SY5Y细胞保护作用

目的探讨银杏二萜内酯葡胺注射液(YXETNZ)对缺糖缺氧(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的保护作用及可能的机制。方法 SHSY5Y细胞OGD损伤4 h后,与药物一起复氧1 h,然后测定细胞存活率(CCK-8法)、caspase-3/7酶活力、细胞质中核小体含量;蛋白质免疫印迹检测细胞中p-Akt、p-PKA、p-Bad蛋白量的变化。结果 OGD明显提高SH-SY5Y细胞caspase-3/7酶活力和细胞质中核小体含量,明显降低细胞的存活率。YXETNZ能明显提高OGD损伤的SH-SY5Y细胞的存活率,抑制caspase-3/7酶活性,减少细胞核核小体的释放量,上调p-Akt、p-PKA和p-Bad激酶蛋白量,提高Akt和PKA活性,保护神经细胞。结论 YXETNZ对OGD损伤的SHSY5Y细胞具有明显的保护作用,其保护机制可能与细胞内PI3K/Akt/Bad/caspase-3/7、c AMP/PKA/Bad/caspase-3/7细胞通路的激活有关。

疏风定喘颗粒辅料的筛选

目的筛选疏风定喘颗粒(炙麻黄、黄芩、前胡等)的辅料。方法分别以糊精、乳糖、微晶纤维素、甘露醇、山梨醇为辅料进行制粒,混料设计进行优化;以成型性、吸湿性、溶化性、流动性、颗粒性状为指标,评价不同辅料所制颗粒的性状,响应面法进行优化;以颗粒成型率和溶化率为指标,单因素试验优化辅料用量。结果以糊精为辅料制粒时效果最佳,根据干膏得率及服药量,其适宜用量为20%~30%。结论糊精是制备疏风定喘颗粒的理想辅料。

响应面法优化降脂胶囊干法制粒工艺

目的:研究降脂胶囊干法制粒工艺的影响因素,确定降脂胶囊干法制粒的最佳工艺。方法:以颗粒一次成型率、吸湿率及流动性为指标确定了降脂胶囊辅料种类及用量,在单因素试验的基础上,以颗粒一次成型率为指标,对轧轮压力、轧轮转速、送料速度3个因素进行响应面试验研究,从而得到最佳干法制粒工艺参数。结果:降脂胶囊原料(浸膏粉+葡萄籽提取物)与辅料最佳配比为原料∶微晶纤维素∶磷酸氢钙=100∶4∶6,干法制粒最佳工艺参数为轧轮压力5.8 MPa,轧轮转速22 r/min,送料速度20 r/min。按照优选的工艺进行3批干法制粒工艺验证,制成的颗粒具有堆密度高、吸湿率低、流动性较好的优点。结论:该实验结果可靠,优选的干法制粒工艺合理、可行,为产业化应用提供了依据。

液相色谱-质谱联用法对桂枝茯苓胶囊指纹图谱中特征峰的鉴定

目的对桂枝茯苓胶囊指纹图谱特征峰进行指认鉴定。方法应用二极管阵列(DAD)和电喷雾质谱(ESI-MS)2种在线检测方法。结果经过分析对照品与样品峰谱特征及与文献的对比研究,鉴定了指纹图谱中的8个成分,并推测了一个萜类化合物。结论HPLC/DAD/ESI-MS方法所得谱图易于解析,且重现性和特征性较好,可以用于桂枝茯苓胶囊的指纹图谱鉴别。

热毒宁注射液的GC/MS指纹图谱

目的:建立热毒宁注射液GC指纹图谱,比较注射液与药材之间指纹图谱的相关性,为该中药注射剂生产工艺过程及成品质量控制提供有效的方法。方法:毛细管气相色谱法,采用氢火焰检测器及质谱进行检测分析。结果:测定热毒宁注射液挥发性成分,标出其中8个共有峰,说明了其药材归属,并采用GC/MS对主要色谱峰进行了初步定性。结论:建立了GC法测定热毒宁注射液挥发性成分指纹图谱的方法,该方法准确、重现性好,为热毒宁注射液挥发性成分的质量控制提供了依据。

海英菜籽油与山茶油、橄榄油不饱和脂肪酸含量比较研究

采用高效液相色谱法，比较研究了海英菜籽油和山茶油、橄榄油中不饱和脂肪酸亚油酸、亚麻酸和油酸含量的差异。结果表明：海英菜籽油中亚油酸含量最高，占亚麻酸、亚油酸和油酸三者总量的80．15％，含量为68．574～69．012g／100g，约是山茶油和橄榄油中亚油酸含量的10倍；海英菜籽油中亚麻酸含量为5．269～5．401g／100g，约是山茶油中亚麻酸含量的20倍，是橄榄油中亚麻酸含量的7倍；海英菜籽油中油酸含量为11．629～11．779g／100g，低于山茶油和橄榄油中油酸含量。

ICP-MS测定盐地碱蓬籽油中必需微量元素含量

盐地碱蓬籽油为卫生部批准的新资源食品，富含人体必需的多种微量元素。采用电感耦合等离子体质谱法（ICP—MS），建立盐地碱蓬籽油中人体所必需的13种微量元素锂（Li）、硼（B）、钒（V）、铬（Cr）、锰（Mn）、铁（Fe）、钴（Co）、镍（Ni）、铜（Cu）、锌（Zn）、砷（As）、锶（Sr）和锡（Sn）的测定方法。结果表明：该方法快速、简便、准确，各元素的检出限在0．009～0．871μg/L之间，回收率在93．29％～104．28％之间；盐地碱蓬籽油中元素硼、铁和锌含量较其他元素高，其中铁含量最高，为7．0957～7．3021mg／kg。

应用响应面法优化玛咖咀嚼片配方

采用单因素试验和响应面分析试验对玛咖咀嚼片配方进行筛选。实验结果表明:最优配方为全脂奶粉23.00%,甜菊糖苷0.84%,淀粉20.58%。此配方制得的成品具有玛咖特有的风味,表面完整光滑、色泽均匀,口感好,硬度适当。

玛咖总生物碱检测方法的建立及提取优化

建立玛咖总生物碱含量的测定方法,对不同产地的玛咖总生物碱含量进行比较研究。以氧化苦参碱作为对照品,筛选酸性染料比色法条件,并利用响应面分析法优化样品处理方法,建立测定方法。结果酸性染料比色法的条件为缓冲液(p H=3.5)加入量3 m L,溴甲酚绿加入量3 m L,测定波长为412 nm;最佳样品处理条件为液料比23∶1(m L/g)、提取温度82℃、提取时间2.1 h。此条件下,云南黄色玛咖的总生物碱含量为1.3 mg/g,在五种玛咖中,西藏黑玛咖的总生物碱含量最高为8.4 mg/g。此法操作简便、精密度高、稳定性好、具良好的可重复性,可用于玛咖中总生物碱的含量测定。

“一测多评”法测定腰痹通胶囊中5种皂苷类成分的含量

目的:建立"一测多评"法测定腰痹通胶囊中皂苷类成分含量的分析方法。方法:以腰痹通胶囊为研究对象,建立参照物人参皂苷Rg1与三七皂苷R1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd的相对校正因子,分别采用外标法和"一测多评"法测定腰痹通胶囊中5种皂苷类成分的含量,并将两种测定方法的结果进行对比分析,以验证"一测多评"法的合理性、可行性和可重复性。结果:腰痹通胶囊中皂苷类成分间的相对校正因子分别为:f人参皂苷Rg1/三七皂苷R1=0.999、f人参皂苷Rg1/人参皂苷Re=1.228、f人参皂苷Rg1/人参皂苷Rb1=0.990、f人参皂苷Rg1/人参皂苷Re=1.094。"一测多评"法的计算结果与外标法的实测值之间无显著性差异,实验所得的相对校正因子可信。结论:本实验建立的"一测多评"法可行准确,可以更合理、快速地实现腰痹通胶囊中多种皂苷类成分的质量控制。

补骨咀嚼片的制备及其处方工艺研究

目的:制备补骨咀嚼片并优化其处方工艺。方法:采用单因素试验对填充剂、矫味剂、润湿剂和润滑剂进行筛选;以外观、口感、风味为指标,采用模糊数学评价法和响应面法进一步优化填充剂和矫味剂用量,并对最优处方所制制剂进行验证。结果:最优处方(1 000片)为:杜仲333.3 g,骨碎补166.7 g,D-氨基葡萄糖盐酸盐250.0g,硫酸软骨素33.3 g,柠檬酸钙250.0 g,甘露醇204.2 g,木糖醇58.3 g,乳糖52.5 g,阿斯巴甜2.9 g,硬脂酸镁9.1g,制粒润湿剂为95%乙醇。所制咀嚼片表面光滑,色泽均匀,口感良好,片重差异、硬度、脆碎度等各项指标均符合咀嚼片相关质量要求。结论:优选的处方工艺稳定、可行,可用于制备补骨咀嚼片。

正交试验结合Box-Behnken响应面法优化靓靓胶囊水提取工艺

目的采用正交试验法结合Box-Behnken响应面法优化靓靓胶囊水提取工艺。方法以没食子酸、葛根素、芍药苷提取率以及水提物出膏率为指标,以液料比、提取时间、提取次数为因素,正交试验初步筛选工艺参数,BoxBehnken响应面法作进一步优化。结果最佳条件为液料比12∶1,提取两次,每次90 min,各指标相对误差均小于2%。结论正交试验结合Box-Behnken响应面法可减少靓靓胶囊水提取次数,降低生产成本。

金银花种质资源遗传多样性的ISSR分析

目的:探讨金银花种质资源的遗传多样性,为其育种提供参考。方法:对采自金银花主产区的18个农家品种及野生忍冬和近缘种灰毡毛忍冬共计36个样品进行ISSR-PCR分析,采用NTSYS-pc软件计算金银花不同农家品种及近缘种间的Jaccard遗传相似系数,按非加权配对算术平均法(UPGMA)建立所研究类群的系统聚类图。结果:12条引物共扩增出129个条带,其中多态带为114条,占总扩增条带数的88.37%,金银花种质资源具有较丰富的遗传多样性。从聚类分析图可以看出,金银花不同样本首先聚在一起,表明是一自然类群;野生忍冬与栽培品种具有明显的遗传差异;主产区传统品系毛花系列遗传相对较稳定,而鸡爪花系列品种繁杂,遗传变异大;新品种九丰一号已独立成一稳定品种。结论:ISSR标记可以为金银花的种质资源鉴定、遗传关系分析及栽培育种提供分子生物学依据。

HPLC法同时测定苁蓉总苷胶囊中松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的含量

目的:建立同时测定苁蓉总苷胶囊中松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷三种成分含量的HPLC法。方法:Waters C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相:甲醇-0.1%甲酸溶液梯度洗脱;流速:1.0 m L·min-1;检测波长:330 nm;柱温30℃。结果:松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷分别在27.792-277.92μg·m L-1(r=0.999 6,n=6),2.418 4-24.184μg·m L-1(r=0.999 6,n=6),5.106-51.06μg·m L-1(r=0.999 8,n=6)范围内呈良好的线性关系,加样回收率均符合含量测定要求。结论:该方法简便、准确,可以用于苁蓉总苷胶囊中松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷三个成分的含量测定。

刺玫果片干法制粒工艺研究

目的:研究刺玫果片干法制粒的工艺条件。方法:考察轧轮压力、轧轮转速、送料速度,以颗粒一次得率和颗粒脆碎度为评价指标,采用Box-Behnken响应面法预测、分析、选取最佳工艺。结果:最佳制粒工艺条件为:轧轮压力3 MPa,轧轮转速13 r/min,送料速度19 r/min。结论:所优选的工艺稳定,重现性好,可用于刺玫果片的干法制粒。

穿心莲总内酯的NO抑制活性研究

目的:考察穿心莲总内酯对巨噬细胞释放一氧化氮的抑制作用。方法:以脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7建立体外炎症模型,采用Griess Reagent法检测细胞培养上清一氧化氮(NO)含量并计算抑制率,通过MTT法评价细胞毒性。结果:穿心莲总内酯在5-50μmol·L-1浓度范围内对LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7释放的NO具有明显的抑制作用,并呈现良好的剂量依赖关系,IC50分别为8.58μmol·L-1,11.52μmol·L-1,8.94μmol·L-1;其主要活性成分穿心莲内酯(5-60μmol·L-1)、脱水穿心莲内酯(5-100μmol·L-1)、新穿心莲内酯(5-100μmol·L-1)对LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW 264.7释放的NO亦表现出抑制作用,并呈现良好的剂量依赖关系,其IC50分别为17.54μmol·L-1,49.54μmol·L-1,41.80μmol·L-1。结论:穿心莲总内酯的NO抑制作用优于三个单体,以上结果可为穿心莲总内酯的制剂开发及临床应用提供一定的理论基础及科学依据。