应用基因芯片技术研究成年男性精子的基因表达

目的:初步研究健康成人精子中基因的表达情况。方法:收集成年男性活力正常的精子,提取总RNA,以健康成人淋巴细胞总RNA作对照。两组RNA逆转录为cDNA之后,cDNA经酶切、加接头后进行RD扩增,在扩增同时分别掺入Cy3(精子)和Cy5(淋巴细胞)荧光染料标记,标记样品与自制的精子基因表达谱芯片杂交。结果:检测发现在560个基因片段中,有72个基因表达上调,321个基因表达下调,另外167个基因表达无差异。其中与基因复制、转录、翻译及调控等相关的基因表达基本属于无差异表达类型或低表达类型,而与精子发生相关的基因、精子本身的特异性抗原等基因显著高表达,精子中糖酵解相关基因表达上调,而与氧化磷酸化相关的基因则表达下调。结论:在健康成人精子中有丰富的基因表达,而且基因的表达与精子自身的功能和特点相一致。

弱精子症相关基因的生物信息学研究

目的:研究弱精子症特异表达基因,加深对弱精子症发生分子机制的认识。方法:采用GATHER、PANTHER以及ToppGene在线生物信息学分析工具,对弱精子症差异表达基因进行生物信息学分析挖掘。结果:通过上述生物信息学软件分析发现,弱精子症差异表达基因在细胞蛋白质及大分子生物代谢过程、蛋白修饰、细胞死亡、细胞凋亡以及凋亡介导中发挥着重要作用。结论:通过生物信息学挖掘发现弱精子症患者精子在活力下降的同时,精子的基本生命活动也下降,同时更易于发生凋亡或死亡。参与细胞骨架构成、微管运动、细胞运动的一些差异表达基因,如KIF3B、MYO15A、KIF6、KIF26B、KIF3A、DNHD2、DMN、DYNC2H1、STARD9、MYOHD1、TPM1等,可能与弱精子症相关,值得进一步深入研究。

应用RD-PCR方法制备K562细胞表达谱芯片基因探针

目的收集K562细胞表达谱芯片的基因片段。方法培养K562细胞,抽提其mRNA,反转录为cDNA,应用限制性显示PCR技术(RD-PCR)分离K562细胞不同组别的产物片段,分别行PCR扩增。结果制备了可用于基因芯片制作的基因探针片段。结论RD-PCR方法适合于基因芯片探针的收集。

精子细胞中基因表达谱的研究

目的研究成熟精子细胞中的基因表达。方法采用限制性显示PCR(RD-PCR)获得大量正常和异常精子细胞中基因表达序列标签(EST)并以表达谱图的方式显示出来。结果通过RD-PCR技术得到大量正常精子细胞和异常精子细胞的EST及部分差异表达EST。结论RD-PCR技术既能针对已知基因又能针对未知基因,快速收集大量长度适宜、大小均一、适于芯片制备的EST,较通过cDNA文库等方法得到靶基因片段具有独特的优势。关键词:精子;基因表达谱;

应用微流路芯片高压凝胶电泳检测精子RNA

目的检测精子的RNA,以保证后续实验有可靠、准确的结果。方法收集成年男性活力正常的精子,提取其RNA,应用微流路芯片高压凝胶电泳检测精子总RNA,以健康成人淋巴细胞总RNA作对照。结果检测发现在人类精子中有大量的基因表达。精子RNA的电泳图出现两个峰,两峰的位置都较正常体细胞提前,先出的峰其形相对尖锐,后出的峰其形较宽,跨越5S,但仍呈典型的倒U形分布,两峰的比值,远远大于2∶1,在其他位置无明显吸收峰。结论应用微流路芯片高压凝胶电泳,可进行精子RNA简单、直观地检测和质量控制。

超声引导下细针穿刺硬化治疗肾囊肿疗效观察(附216例报告)

目的 :探讨超声引导下细针穿刺硬化治疗肾囊肿的疗效。方法 :1991～ 1998年在 B超引导下分别采用无水乙醇、四环素针剂、酸化维生素 C行细针穿刺硬化治疗肾囊肿 2 16例。结果 :术后 3个月随访 ,无水乙醇有效率为 95 .74% (90 / 94) ,四环素针剂有效率为 89.74% (35 / 39) ,酸化维生素 C有效率为 93.98% (78/ 83) ,三者经 χ2检验无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :在超声引导下对肾囊肿行细针穿刺硬化治疗简单易行 ,并发症少 ,疗效确切 。

在DSA下介入性栓塞治疗肾错构瘤9例报告

在数字减影血管造影（DSA）条件下采用Seldinger技术对9例肾错构瘤患者进行超选择性介入治疗，即在明确病变部位供血动脉后，超选择将导管尖端置入靶血管，最后给予无水乙醇及明胶海绵进行介入性栓塞治疗，使错构瘤组织完全灭活坏死。结果疗效良好，无严重并发症发生，仅有患侧肋腹部疼痛、腹胀3～5d。认为在DSA条件下进行超选择性介入治疗，可最大限度地保护正常肾组织，减少肾内靶血管以外正常血管的误栓机率，提高疗效。

精子基因表达谱研究初探

目的应用限制性显示技术,收集正常成年男性的精子基因表达谱探针,制备相应的精子表达谱芯片,以对成年男性正常精子的基因表达情况有一全面、系统的了解。方法提取成年男性正常精子的总RNA,逆转录为cDNA,经限制性内切酶酶切、加接头、PCR扩增、转化、克隆、鉴定等操作,收集成年男性正常精子的基因表达谱探针,制备相应的精子表达谱芯片,并进行初步的杂交分析。结果收集了1 859个基因片段,取其中368个基因探针制备芯片,进行了小量初试。结论证实在精子中有大量基因表达;提示我们自行制备的精子基因表达谱探针也具有较好的特异性和可信性。

自制输尿管镜拉钩拔取回缩异位D-J管的经验

对自制输尿管拉钩拔取回缩异位Ｄ－Ｊ的３７例经验进行回顾性分析，并提出了使用此拉钩的注意事项。

建构主义理论在临床医学教学中的应用

以抛锚式教学为代表的建构主义教学模式在当今医学教育领域得到了广泛的重视与应用,其基本内涵是以学生为中心,在教师的引导下,通过情境创设和协作学习由学生自主完成对所学知识的意义建构,并对学习效果进行有效评价。这一教学模式充分调动了学生的学习能动性,很好地切合了现代医学教育培养医学生自主创新能力的迫切要求。

前列腺摘除术后膀胱颈狭窄的防治

膀胱前列腺摘除术后采用改良荷包缝合活结法，治疗了３０例前列腺增生患者，经过３个月－１年的随访，尚未见发生膀胱颈狭窄者。经膀胱前列腺摘除术的关键不仅在于避免和减少术中、术后出血，而且要防止术后膀胱颈部狭窄。我们采用改良式荷包缝合活结法取得了较好的疗效。

中国男性不育显微外科15年发展历程及展望

男性不育症是泌尿男科常见而复杂的疾病,长期以来缺少有效的外科治疗方法。随着男性不育显微外科和辅助生殖技术的出现,男性不育症的治疗得到飞速发展。美国康奈尔大学医学院(Weill Cornell Medical College of Cornell University)引领了男性不育显微外科发展的方向和进程。男性不育显微外科从系统地引入中国到今天被大家普遍接受,经历了漫长的过程。男性不育显微外科在中国近15年经历了引入、兴起和繁荣3个阶段,目前中国多家医院相继开展男科显微外科手术,初步建立了男性不育显微外科治疗体系。然而,在中国,男性不育显微外科医生仍然缺乏严格规范的显微外科技术培训,缺乏统一的男性不育评估标准和手术效果的评估,缺乏详细的患者术后随访数据。本综述回顾了男性不育显微外科在中国的发展历程,肯定了男性不育显微外科在中国的发展,也指出了不足,建议今后在显微外科医生的正规培训、建立标准化的男性不育显微手术前后评估和随访流程、在国内开展大规模男性不育显微手术协作临床科学研究等方面加强工作,促进男性不育显微外科在中国发展。

精索静脉曲张手术教学分析(附130例)

目的 探讨精索内静脉结扎不同术式的教学要点。方法 回顾分析130例精索静脉曲张不同术式的操作要点和带教经验。结果 129例治愈,1例复发,取得了满意的治疗和教学效果。结论 精索静脉曲张手术教学应先了解精索及切口局部解剖结构,再分析指导两种不同术式手术步骤及技巧,以达到巩固解剖知识、学习临床手术、提高教学效果。

精子质量与形态学分析及其关系

目的:探讨精子质量与形态学的临床应用价值及其关系。方法:248份精液标本按WHO标准进行精液常规分析,应用计算机辅助精液分析(CASA)分析精子密度、活力、活率以及动态参数;采用WHO推荐的Diff-Quik快速染色方法对精子形态进行染色;采用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果:248份精子质量分析中,精子活力不足占74.6%,精子活力正常占25.4%,少精症占5.6%,少弱精症占4.8%,正常精液占24.6%;248份精子形态学分析中,形态正常精液占73.4%,畸形精子症占26.6%。精子活力和活率与形态正常精子百分率呈显著性正相关(r=0.52,r=0.53,P<0.01);各运动参数和精子密度也与形态正常精子百分率呈显著性正相关(P<0.01)。精子活力正常组形态正常精子百分率明显高于精子活力低下组(P<0.01)。结论:精子活力不足和畸形精子症是导致男性不育的主要原因,精子形态与精子活力、活率、密度和运动参数有密切关系,精子质量和形态学分析在临床男性不育的诊断中具有重要作用。

麒麟丸治疗少弱精子症的多中心临床疗效观察

目的:观察麒麟丸治疗少弱精子症患者的疗效。方法:采用多中心、开放性、阳性药物对照的临床研究方法,试验组患者口服麒麟丸,每次6 g,3次/d,对照组患者采用五子衍宗丸,每次6 g,每天2次,两组均12周为1个疗程。治疗1个疗程,以精子浓度、a级精子百分率、(a+b)级精子百分率以及精子活动率为主要疗效指标,以配偶妊娠率为次要疗效指标,评价麒麟丸治疗效果。结果:有310例患者完成了临床研究,与治疗前相比,除对照组治疗后第4周的精子浓度和a级精子百分率这两个指标外,两组其他各精液参数在治疗4、8和12周后具有显著改善(P均<0.01),与对照组相同的时段相比,试验组在精液各参数均有显著改善(P均<0.01)。结论:麒麟丸可明显提高少弱精子症患者精液质量,未见明显不良反应。

hIGF-1基因治疗老龄大鼠勃起功能障碍的剂量及时效研究

目的:探讨阴茎海绵体内注射胰岛素样生长因子1(hIGF-1)基因提高老年性大鼠阴茎勃起功能的最佳剂量和作用实效。方法:4月龄SD雄性大鼠10只(青年组);24月龄SD雄性大鼠40只,随机分为5组,每组10只:PBS对照组、hIGF-1基因10μg注射组、100μg注射组和1000μg注射组,注射后在不同时间段4周和8周行电刺激检测大鼠阴茎海绵体内压(ICP)和平均动脉压(MAP)的测定,分析比较不同剂量和不同时间hIGF-1基因治疗的效果;RT-PCR检测hIGF-1基因mRNA的表达。结果:电刺激发现老年组较青年组ICP/MAP和总ICP明显降低(P<0.05)。4和8周的治疗之后,10μg注射组、100μg注射组和1000μg注射组较PBS对照组ICP/MAP和总ICP均明显提高(P<0.05);100μg注射组和1000μg注射组在4和8周时ICP/MAP和总ICP值和青年组相仿;10μg注射组虽然不能达到和青年组相仿的治疗效果,但仍然有治疗意义;所有hIGF-1基因治疗组均可检测到hIGF-1 mRNA的表达。结论:hIGF-1基因治疗能够提高老龄大鼠的勃起功能,100μg即可达到有效的治疗,hIGF-1基因治疗至少能够维持8周时间。

精索血管的显微组织解剖及临床应用

目的:外环下切口和腹股沟管切口精索静脉曲张显微外科结扎术均被推荐于治疗精索静脉曲张,但手术复杂度不同。本研究旨在了解两种手术切口的精索血管显微解剖结构。方法:选择外环下切口80例,腹股沟管切口20例,术中记录精索动脉、静脉及淋巴管数量;并从10例成人尸体取材精索,经组织染色,记录两种切口水平精索动静脉数量。结果:术中中静脉(2～5 mm)在腹股沟管切口有(1.80±0.83)条,外环下切口有(3.98±1.99)条,两者差异有显著性(t=-7.536,P<0.01);静脉总数腹股沟管切口为(6.40±1.67)条,外环下切口为(9.01±2.70)条,两者差异有显著性(t=-4.071,P<0.01)。两种手术切口的小静脉(≤2 mm)、大静脉(≥5 mm)、动脉和淋巴管数量差异无显著性。尸体研究数据:在外环下水平和腹股沟水平动静脉数量差异均无显著性。结论:虽然外环下水平精索静脉总数及中静脉数量均多于腹股沟管水平,但中静脉并不会加大手术难度,外环下切口不会较腹股沟切口操作更复杂。

不同生精功能障碍无精子症患者行ICSI后胚胎发育潜能的研究

目的:分析不同生精功能障碍的无精子症患者行ICSI后其胚胎发育潜能。方法:149例患者分为生精功能正常组,轻度、中度和重度生精功能障碍组,采用经皮附睾精子抽吸术(PESA)或经皮睾丸精子抽吸术(TESA)抽取不同生精功能障碍患者的精子行ICSI,记录和分析胚胎的正常受精率、卵裂率、优良胚胎形成率以及妊娠率。结果:PESA与TESA组比较,正常受精率(%)为74.9±19.6 vs 66.3±22.7(P>0.05),卵裂率(%)为96.7±8.6 vs 92.8±19.8(P>0.05),优良胚胎率(%)为43.5±26.2 vs 35.0±29.4(P>0.05)以及妊娠率(%)为44.0 vs 52.0(P>0.05),均无统计学差异。生精功能障碍从正常组到重度组的正常受精率(%)变化依次为77.8±18.4、68.4±18.5、73.5±19.8、51.4±27.9,其中轻度生精功能障碍与正常生精组有差异(P<0.05),重度生精功能障碍组与其他各组有统计学差异(P<0.05);胚胎卵裂率(%)变化依次为96.7±9.2、96.5±15.0、93.9±12.1、93.7±11.1,各组无统计学差异;优良胚胎率(%)变化依次为47.1±25.8、40.3±27.6、36.2±23.1、15.0±24.6,重度生精障碍组与其他各组有统计学差异(P<0.05);妊娠率(%)依次为54.8%、50.0%、13.6%、10.0%,有统计学差异(P<0.05)。结论:采用PESA或TESA行ICSI在正常受精率,卵裂率,优良胚胎率以及妊娠率上较均无明显差异。随着患者生精障碍程度的加重,受精率、优良胚胎率以及妊娠率均显著下降,而卵裂率却无明显区别。