金黄色葡萄球菌蛋白A串联Z结构域的表达、纯化及其亲和填料制备

目的构建金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal Protein A,简称SPA或蛋白A),串联Z结构域的重组表达克隆,并实现在大肠杆菌中诱导表达,随后纯化获得重组蛋白,制备亲和填料.方法对目的基因进行元和表达的密码子优化,利用PCR扩增方法获得SPA的3个串联Z结构域,并在蛋白的N端加入组氨酸标签.将优化后的基因序列克隆到p ET43.1a(+)表达载体上,获得p ET43.1a(+)-SPA-3Z重组质粒;测序正确的重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),IPTG诱导表达,通过亲和层析方法纯化表达的重组蛋白,并使用SDS-PAGE鉴定表达蛋白.将纯化获得的SPA纯品偶联到经环氧氯丙烷活化的Sepharose 6B Fast Flow凝胶上.使用兔多抗和腹水单抗对填料进行验证.结果成功构建p ET43.1a(+)-SPA-3Z克隆,纯化的SPA蛋白纯度高.成功将重组SPA偶联到经环氧氯丙烷活化的Sepharose 6B Fast Flow凝胶上.制备的填料在0.1mol/L的Na OH溶液里浸泡30小时,填料亲和性能未见明显变化,这为填料的长期使用提供了可能.将该填料用于抗体纯化,湿胶的多抗结合量可达22.7mg/ml,纯化的腹水单抗纯度在98%以上.结论本研究为SPA的大规模制备提供了基础.

采用“快速处理机组”技术治理煤矿酸性废水

介绍了湖南省利民煤矿针对煤矿井下酸性废水的性质、浓度、水量变化和中和剂的来源及价格等因素 ,采用“污水快速处理机组”和投药中和方法治理煤矿酸性废水达到GB8978 -1996———《污水综合排放标准》中一级标准的经验。

采用“快速处理机组”技术治理煤矿酸性废水

湖南利民煤矿年产0.6Mt优质无烟煤,是省煤炭生产重点矿区之一。由于煤层含硫较高,外排矿井水为酸性,对生产设备和外排水泵危害很大。为有效治理井下酸性废水,该矿于1997年投资210万元,本着以废治废、综合利用,最大限度地保护环境和实现企业、社会效益的原则,建成一套日处理8000m^3的废水处理站。经6个月的调试运行,取得了较好的效果。